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长期高强度间歇训练对中年大鼠骨骼肌蛋白合成和降解的影响 认领
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作者 崔新雯 张一民 +3 位作者 汪赞 孔振兴 苏浩 于晶晶 《中国体育科技》 北大核心 2021年第2期12-19,共8页
目的:探索长期高强度间歇训练(HIIT)对中年大鼠比目鱼肌蛋白合成和蛋白降解的影响,为其在骨骼肌健康促进中的作用提供机制性的解释。方法:24只9月龄Wistar大鼠随机分为安静组(C)、中等强度持续训练组(M)和HIIT组(H),每组各8只。C组大鼠... 目的:探索长期高强度间歇训练(HIIT)对中年大鼠比目鱼肌蛋白合成和蛋白降解的影响,为其在骨骼肌健康促进中的作用提供机制性的解释。方法:24只9月龄Wistar大鼠随机分为安静组(C)、中等强度持续训练组(M)和HIIT组(H),每组各8只。C组大鼠正常饮食生活,无运动训练;M组进行60%·VO2max强度的持续运动,共50 min;H组进行80%·VO2max和40%V·O2max的高低强度间歇运动,各3 min,重复6次,热身和恢复以60%V·O2max的强度进行,各7 min。运动组每周训练5次,共12周。运动干预结束后取比目鱼肌,称湿重,western blot检测比目鱼肌蛋白合成、泛素蛋白酶体关键组分和细胞自噬相关蛋白的表达,电镜观察自噬体结构。结果:相比C组:M和H组的比目鱼肌湿重均有所提高(P<0.05);H组mTORSer2448、P70 S6KThr389磷酸化水平提高(P<0.05),M组P70 S6KThr389磷酸化水平提高(P<0.05),两个运动组的AktSer473磷酸化表达均无显著变化(P>0.05);H组MAFbx蛋白含量有降低的趋势(P=0.052),自噬体生成增加,且LC3II和COXIV蛋白表达提高(P<0.01,P<0.05),M组LC3II蛋白表达提高(P<0.001),但运动组泛素化蛋白、MuRF-1、LC3II/LC3I、P62、ULK1Ser757磷酸化水平、Beclin-1、PGC-1α的蛋白表达均无变化(P>0.05)。结论:HIIT可促进中年大鼠比目鱼肌质量的提高,可能是蛋白合成提高,MAFbx蛋白表达降低及基础自噬水平激活共同作用的结果。 展开更多
关键词 高强度间歇训练 蛋白合成 蛋白降解 细胞自噬
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文章速递蛋白降解靶向嵌合体药物的非临床评价策略分析 认领
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作者 韩俊源 李亚娟 +1 位作者 王海学 王全军 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期65-71,共7页
蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)将靶向蛋白募集到E3泛素连接酶进行泛素化标记,然后通过泛素-蛋白酶体途径将其降解,从而将过表达和突变的致病蛋白清除。本文基于已有的文献报道,总结PROTAC药物研发进展,针对其存在的相对分子质量较大、生... 蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)将靶向蛋白募集到E3泛素连接酶进行泛素化标记,然后通过泛素-蛋白酶体途径将其降解,从而将过表达和突变的致病蛋白清除。本文基于已有的文献报道,总结PROTAC药物研发进展,针对其存在的相对分子质量较大、生物利用度低、稳定性和血管穿透能力差等问题提出应对策略,并从药理药效、代谢和安全性评价等方面对该类药物的非临床评价研究需要考虑的问题进行分析,为制定PROTAC药物非临床评价研究方案提供参考。 展开更多
关键词 蛋白降解 靶向嵌合体 非临床评价
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含有WW结构域的泛素蛋白连接酶1降解依托泊苷诱导蛋白24并促进肝癌细胞增殖 认领
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作者 张勤 黄安中 +2 位作者 沈冯佳 俞建平 秦春枝 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期203-209,共7页
目的筛选含有WW结构域的泛素蛋白连接酶1(WWP1)相互作用蛋白,探讨WWP1和依托泊苷诱导蛋白24(EI24)对肝癌细胞增殖的影响。方法利用酵母双杂交的方法筛选与WWP1相互作用的蛋白,并利用免疫共沉淀来进行相互作用验证。通过体内泛素化实验... 目的筛选含有WW结构域的泛素蛋白连接酶1(WWP1)相互作用蛋白,探讨WWP1和依托泊苷诱导蛋白24(EI24)对肝癌细胞增殖的影响。方法利用酵母双杂交的方法筛选与WWP1相互作用的蛋白,并利用免疫共沉淀来进行相互作用验证。通过体内泛素化实验验证泛素连接酶WWP1与EI24酶和底物的关系。以慢病毒感染的方法建立WWP1和EI24稳定过表达或敲低表达的肝癌细胞系。通过细胞增殖实验、平板克隆实验和裸鼠成瘤实验检测WWP1和EI24对肝癌细胞增殖的影响。结果WWP1可以与底物EI24相互作用,并能够在体内将EI24泛素化降解。成功构建稳定过表达或敲低表达的WWP1和EI24的肝癌细胞系HepG2。在HepG2细胞中,过表达WWP1可以降低内源EI24的蛋白水平,而敲低WWP1可以使EI24蛋白水平增加。细胞计数盒8(CCK-8)法检测结果表明,在36 h时,WWP1过表达组和shWWP1组细胞的相对增殖活性分别为(347.00±8.15)%和(187.08±4.86)%,与对照组(270.33±15.01)%比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在36 h时,EI24过表达组和shEI24组细胞的增殖活性分别为(183.75±8.11)%和(317.33±9.60)%,与对照组(270.33±15.01)%比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。克隆形成实验结果显示,对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的克隆形成数分别为(52±7)个/视野、(76±4)个/视野和(19±3)个/视野,WWP1过表达组细胞克隆形成明显增多(P<0.05),而敲低WWP1后细胞克隆形成较对照组减少(P<0.05)。对照组、EI24过表达组和shEI24组的克隆形成数分别为(38±4)个/视野、(10±3)个/视野和(69±7)个/视野。与对照组比较,过表达EI24使细胞克隆形成明显减少(P<0.05),敲低EI24的表达使细胞克隆形成明显增多(P<0.05)。裸鼠体内实验结果显示,经过4周同等条件喂养后,对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的裸鼠移植肿瘤体积分别为(1400.00±43.71)mm3、(2636.67±290.45)mm3和(642.17±36.00)mm3,差异均有统计学意义(P<0.05)。� 展开更多
关键词 WW结构域的泛素蛋白连接酶1 依托泊苷诱导蛋白24 肝肿瘤 泛素连接酶 蛋白降解
rBTI对鲈鱼鱼糜凝胶特性的影响 认领
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作者 胡倩楠 韩宇航 李晨 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第21期22-28,共7页
内源酶活性对食品的安全及品质有重要影响,抑制及灭活酶技术是食品研究的一个热点。为了探究蛋白酶抑制剂对鱼糜凝胶特性的影响,该研究以重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,rBTI)为材料,测定不同添加量rB... 内源酶活性对食品的安全及品质有重要影响,抑制及灭活酶技术是食品研究的一个热点。为了探究蛋白酶抑制剂对鱼糜凝胶特性的影响,该研究以重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,rBTI)为材料,测定不同添加量rBTI(0.02‰~0.12‰)对鲈鱼鱼糜凝胶蒸煮损失率、色泽、强度等的影响,以明确rBTI对鱼糜凝胶的改善作用,并进一步研究rBTI对鱼糜凝胶蛋白含量及组成的影响,解析rBTI促进鱼糜凝胶稳定的分子机制。结果表明,与对照组相比,r BTI的添加对鱼糜凝胶白度无显著影响(P>0.05);随着r BTI添加量的增加,鱼糜凝胶的蒸煮损失率显著降低(P<0.05),凝胶穿刺力和凝胶强度显著升高(P<0.05)。鱼糜凝胶的黏附性随rBTI添加量的增加呈先降低后升高趋势,在r BTI添加量为0.04‰时达到最低值。随着rBTI添加量的增多,鱼糜凝胶中三氯乙酸-溶解肽含量显著下降(P<0.05)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示,与对照组相比,添加rBTI后鱼糜凝胶中肌球蛋白重链及肌动蛋白等重要凝胶蛋白组分含量明显增加。研究表明rBTI可以抑制内源酶对鱼糜凝胶中蛋白分子的降解,有利于维持凝胶分子结构的稳定,进而改善鱼糜凝胶的质构性能,为rBTI的应用及肉制品的开发提供了理论依据。 展开更多
关键词 荞麦胰蛋白酶抑制剂 鲈鱼鱼糜 凝胶特性 蛋白 蛋白降解
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索拉非尼通过抑制细胞外调解蛋白激酶下游作用底物磷酸化ets样基因-1诱导肿瘤细胞凋亡的研究 认领
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作者 王倩青 郭祥翠 +4 位作者 李力 郜智慧 李君 陈贝贝 刘娟 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1115-1118,共4页
目的探讨索拉非尼对肿瘤细胞凋亡的影响以及涉及髓样细胞白血病-1(Mcl-1)下调的作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测索拉非尼对肠嗜铬细胞(EC细胞,购自美国典型菌种保藏中心)增殖的影响,以确定索拉非尼的作用浓度和作用时间。将EC细胞... 目的探讨索拉非尼对肿瘤细胞凋亡的影响以及涉及髓样细胞白血病-1(Mcl-1)下调的作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测索拉非尼对肠嗜铬细胞(EC细胞,购自美国典型菌种保藏中心)增殖的影响,以确定索拉非尼的作用浓度和作用时间。将EC细胞分为4组:对照组、索拉非尼组、索拉非尼+短发夹RNA以下调荧光素酶的质粒(shLuc)组和索拉非尼+细胞外调解蛋白激酶下游作用底物磷酸化ets样基因-1(Elk-1)短发夹RNA(shElk-1)组。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、Elk-1、Mcl-1、蛋白激酶B(Akt)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的蛋白及mRNA的相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析。结果1、5和10 mol/L的索拉非尼作用后EC细胞的存活率分别为(67.42±5.08)%、(50.81±6.11)%和(38.49±5.41)%,显著低于0 mol/作用浓度(99.98±0.25)%(t1=5.148,t5=2.142,t10=1.764,P值均<0.05),差异有统计学意义。索拉非尼作用12、24和48 h后EC细胞的存活率分别为(65.41±4.61)%、(49.64±4.73)%和(42.49±5.02)%,显著低于0 h作用时间(99.99±0.18)%(t12=4.624,t24=1.856,t48=1.751,P值均<0.05);而与作用6 h比较,EC细胞的存活率差异无统计学意义(t6=1.266,P>0.05)。与对照组比较,索拉非尼组细胞凋亡率显著增加(t=12.235,P<0.05);与索拉非尼组比较,索拉非尼+shElk-1组细胞凋亡率显著增加(t=9.271,P<0.05);各组间bcl-2相对表达量、bax相对表达量和bcl-2/bax比值比较,差异无统计学意义(Fbcl-2=0.198,Fbax=0.541,Fbcl-2/bax=2.679,P值均>0.05)。与对照组比较,索拉非尼组细胞Elk-1蛋白的相对表达量差异无统计学意义(tElk-1蛋白=1.426,P>0.05),而Elk-1 mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tElk-1 mRNA=2.266,tElk-1 mRNA=0.045,tMcl-1蛋白=2.774,tMcl-1 mRNA=2.987,P值均<0.05),差异均有统计学意义。与索拉� 展开更多
关键词 索拉非尼 蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β 蛋白降解 肿瘤 凋亡
泛素化修饰调控植物非生物逆境响应 认领
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作者 曹孝强 于菲菲 谢旗 《中国基础科学》 2020年第1期7-10,共4页
高等植物必须固着在土壤中生长,因此其生长发育与环境密切相关。在长期进化过程中,植物演化出一套非生物逆境的适应机制。而蛋白泛素化修饰作为真核生物特有的蛋白翻译后修饰,能够直接调节生命活动中有关时空特异变化的生物学功能,其在... 高等植物必须固着在土壤中生长,因此其生长发育与环境密切相关。在长期进化过程中,植物演化出一套非生物逆境的适应机制。而蛋白泛素化修饰作为真核生物特有的蛋白翻译后修饰,能够直接调节生命活动中有关时空特异变化的生物学功能,其在植物应对逆境胁迫过程中意义重大。本实验室长期致力于蛋白泛素化修饰参与植物抗逆作用的机制研究。本文将从内质网相关性降解(ER-Associated Protein Degradation,ERAD)介导的植物非生物逆境响应、泛素蛋白酶体系统调控植物逆境胁迫响应以及内膜系统参与植物逆境信号转导等方向,多角度系统地综述过去5年内,本实验室在植物非生物逆境领域的研究进展,旨在为该领域的后续发展提供借鉴。 展开更多
关键词 非生物逆境 蛋白泛素化修饰 ERAD 蛋白降解 内膜系统
高氧气调包装对宰后牛半膜肌成熟过程中品质的影响 认领
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作者 扶庆权 王海鸥 +3 位作者 李坤 杨平 陈全战 王婷婷 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第23期236-242,共7页
为研究高氧气调包装对宰后牛肉品质的影响,选取4头‘西门塔尔’黄牛为实验材料,选取宰后排酸24 h后的半膜肌分别进行高氧气调包装(体积分数80%O2+体积分数20%CO2)和真空包装后于4℃冰箱冷藏成熟,在0、4、7 d和10 d分别取样测定嫩度、色... 为研究高氧气调包装对宰后牛肉品质的影响,选取4头‘西门塔尔’黄牛为实验材料,选取宰后排酸24 h后的半膜肌分别进行高氧气调包装(体积分数80%O2+体积分数20%CO2)和真空包装后于4℃冰箱冷藏成熟,在0、4、7 d和10 d分别取样测定嫩度、色泽、蛋白溶解度、硫代巴比妥酸反应物(thiobarbituric acid reactive substances,TBARS)值和肌钙蛋白-T降解率,并用激光共聚焦显微镜观察蛋白羰基在肌细胞中的分布。结果表明:样品在宰后成熟过程中,与相对于真空包装相比,高氧气调包装的牛肉嫩度、成熟7 d后的肌浆蛋白溶解度和总蛋白溶解度显著降低(P<0.05),TBARS值显著增加(P<0.05),蛋白羰基荧光信号明显增强,且荧光信号随着成熟时间的延长从细胞外向细胞内渗透,肌钙蛋白-T降解率也显著降低(P<0.05),但能保持较高的表面红度(P<0.05)。综上,高氧气调包装显著增加了蛋白质和脂肪的氧化水平,从而抑制了钙蛋白酶(μ-钙激活酶)对肌钙蛋白-T的降解,最终降低了牛肉的嫩度。 展开更多
关键词 高氧气调包装 牛肉 品质 氧化 蛋白降解
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不同品种和刈割时间对苜蓿青贮发酵品质及蛋白质降解的影响 认领
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作者 李荣荣 江迪 +2 位作者 田朋姣 郑猛虎 徐春城 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期94-101,共8页
为探究不同品种以及同日内不同刈割时间对苜蓿青贮发酵品质及蛋白质降解的影响,采用4个苜蓿品种,分别于同日6∶00、12∶00、18∶00刈割,室温发酵56d后开封,分析发酵品质、微生物组成和蛋白组分。结果表明,不同品种苜蓿的粗蛋白、中性洗... 为探究不同品种以及同日内不同刈割时间对苜蓿青贮发酵品质及蛋白质降解的影响,采用4个苜蓿品种,分别于同日6∶00、12∶00、18∶00刈割,室温发酵56d后开封,分析发酵品质、微生物组成和蛋白组分。结果表明,不同品种苜蓿的粗蛋白、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和可溶性糖(WSC)含量以及附着微生物的数量存在显著性差异(P<0.05);推迟刈割时间,苜蓿原料的干物质,WSC含量以及附着微生物数量显著增加(P<0.05)。品种A与C的发酵品质显著优于品种B与D(P<0.05),其乳酸含量较高而pH值、乙酸与氨态氮含量较低(P<0.05)。随着刈割时间的推迟,所有苜蓿青贮的乳酸含量及乳乙比显著增加(P<0.05),pH值、乙酸、丁酸、非蛋白氮与氨态氮含量显著降低(P<0.05),显著抑制蛋白降解。综上所述,不同品种的原料特性显著影响苜蓿青贮发酵品质,推迟刈割时间可以有效改善青贮发酵品质,减少蛋白质的降解。 展开更多
关键词 苜蓿 品种 刈割时间 发酵品质 蛋白降解
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补肾健脾方调节Myostatin/Atrogin-1通路拮抗大鼠骨骼肌蛋白降解的研究 认领
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作者 韩子秋 肖益添 +3 位作者 吴谦 常岑 金晔华 龚张斌 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1598-1600,共3页
目的从蛋白质降解角度探析补肾健脾方对地塞米松诱导骨骼肌萎缩的保护作用及其分子机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、美雄酮组,每组6只。大鼠腹腔注射地塞米松(1 mg/kg·day)进行造模,同时实验组给予中药或美雄酮... 目的从蛋白质降解角度探析补肾健脾方对地塞米松诱导骨骼肌萎缩的保护作用及其分子机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、美雄酮组,每组6只。大鼠腹腔注射地塞米松(1 mg/kg·day)进行造模,同时实验组给予中药或美雄酮干预,共14 d。称量各组大鼠体重;测算腓肠肌湿重/体质量比值;q RT PCR、Western blot方法检测组织Myostatin,Atrogin-1,FoxO1,Myosin基因的表达水平;HPLC技术检测尿液3-甲基组氨酸(3-MH)含量。结果模型组大鼠体重逐日下降,与正常组比较,同一时间点体重有显著统计学差异(P<0.01),腓肠肌湿重/体质量比值显著下降(P<0.05);myostatin,atrogin-1,foxo1基因相对表达升高(P<0.05);myosin基因相对表达量下降(P<0.05),7 d,10 d时尿液3-MH含量升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,中药组和美雄酮组大鼠体重无明显变化,腓肠肌湿重/体质量比值显著升高,有统计学差异(P<0.05);myostatin,atrogin-1基因相对表达下降(P<0.05);myosin基因相对表达量升高(P<0.05),7 d,10 d时尿液3-MH含量下降(P<0.05,P<0.01)。结论补肾健脾方能下调Myostatin/Atrogin-1信号通路相关因子表达,抑制骨骼肌蛋白质降解,是其拮抗DXMS诱导骨骼肌萎缩的重要机制。 展开更多
关键词 补肾健脾 糖皮质激素 肌抑素 蛋白降解 骨骼肌萎缩
不同发酵剂菌种对Mozzarella干酪成熟过程中蛋白降解及风味形成的影响 认领
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作者 白建 赵建英 +2 位作者 薛建娥 刘奥强 王亚捷 《中国调味品》 CAS 北大核心 2020年第12期68-72,共5页
为研究不同发酵剂菌种对Mozzarella干酪成熟过程中蛋白降解及风味形成的影响,对4种发酵剂菌种制作Mozzarella干酪成熟过程中蛋白降解、风味物质含量进行检测。结果表明:不同菌种制作干酪的水分含量、S/M差异不显著(P>0.05),而脂肪含... 为研究不同发酵剂菌种对Mozzarella干酪成熟过程中蛋白降解及风味形成的影响,对4种发酵剂菌种制作Mozzarella干酪成熟过程中蛋白降解、风味物质含量进行检测。结果表明:不同菌种制作干酪的水分含量、S/M差异不显著(P>0.05),而脂肪含量、蛋白质含量、出品率和pH差异显著(P<0.05)。BI干酪在成熟过程中WSN/TN、PTA-N/TN含量显著高于其他组干酪(P<0.05),成熟120 d时BI和LPC组干酪TCA-N/TN高于SL组和LA组(P<0.05),整个成熟期间BI、LA、LPC组干酪FAA含量都显著高于SL干酪(P<0.05)。成熟120 d的LPC、LA、BI干酪中烷烃类、酮类、部分醇类(乙醇、己醇、辛醇)和苯乙醛、2-甲基丁醛的含量低于SL干酪,而酸类和酯类(除十八醇酸丁酯和十六烷酸丁酯)外的含量高于SL干酪。 展开更多
关键词 MOZZARELLA干酪 发酵剂 蛋白降解 风味
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添加剂对柱花草青贮过程中蛋白降解及营养成分影响 认领
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作者 王坚 李雪枫 +1 位作者 王学梅 郇树乾 《饲料研究》 CAS 北大核心 2020年第10期84-89,共6页
试验旨在研究不同添加剂对柱花草青贮过程中蛋白的降解作用及营养成分的影响。试验设对照组(无添加剂)、0.003%抑二肽素A组、0.4%乙二胺四乙酸组和1%丙酸钙组(均为鲜重比)4个处理。在青贮第1、2、3、5、7、14和30 d测定青贮饲料发酵品... 试验旨在研究不同添加剂对柱花草青贮过程中蛋白的降解作用及营养成分的影响。试验设对照组(无添加剂)、0.003%抑二肽素A组、0.4%乙二胺四乙酸组和1%丙酸钙组(均为鲜重比)4个处理。在青贮第1、2、3、5、7、14和30 d测定青贮饲料发酵品质、蛋白组分和主要营养成分含量。结果表明:与对照组相比,0.003%抑二肽素A对柱花草青贮发酵品质、蛋白降解和营养成分无显著影响(P>0.05);0.4%乙二胺四乙酸和1%丙酸钙显著降低柱花草青贮饲料的pH值、丁酸、非蛋白氮、游离氨氮、氨态氮、肽氮、中性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量(P<0.05),显著提高乳酸含量、粗蛋白质含量和饲料相对值(P<0.05)。综上所述,0.4%乙二胺四乙酸或1%丙酸钙可抑制柱花草青贮饲料蛋白降解,提高青贮发酵品质和营养价值。 展开更多
关键词 柱花草青贮 蛋白降解 发酵品质 营养价值
低氧调控EIMD后calpain活性与肌细胞膜损伤机制的探索研究 认领 被引量:1
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作者 徐飞 覃丽凤 +3 位作者 黄巧婷 曹建民 王平 徐玉明 《中国体育科技》 CSSCI 北大核心 2019年第2期54-63,共10页
目的:观察低氧对运动性肌损伤(exercise-induced muscle damage,EIMD)后肌细胞膜损伤、钙激活中性蛋白酶(calpain)和肌细胞膜骨架蛋白(dystrophin、utrophin和dysferlin)的影响,探索低氧调控EIMD后肌细胞膜损伤的可能机制。方法:110只雄... 目的:观察低氧对运动性肌损伤(exercise-induced muscle damage,EIMD)后肌细胞膜损伤、钙激活中性蛋白酶(calpain)和肌细胞膜骨架蛋白(dystrophin、utrophin和dysferlin)的影响,探索低氧调控EIMD后肌细胞膜损伤的可能机制。方法:110只雄性SD健康大鼠分两批进行实验。研究Ⅰ:70只大鼠随机均分为安静对照组、常氧24 h、48 h和72 h组以及低氧24 h、48 h和72 h组,每组10只。大鼠在-16°跑台上以26.8 m/min速度持续运动5 min,运动10次,组间休息1 min。低氧和常氧各组大鼠运动后注射伊文氏蓝荧光染色剂观察膜损伤情况,用RT-q PCR和Western blot测定腓肠肌calpain和膜骨架蛋白的mRNA表达和蛋白含量。研究Ⅱ:40只大鼠随机均分为空白对照组、安慰剂24 h、48 h组和calpain抑制剂24 h、48 h组,每组8只。测定calpain抑制剂对其蛋白含量的影响,观察膜损伤情况,并验证calpain在EIMD后低氧损伤肌细胞膜中所起的作用。结果:大鼠EIMD后,1)低氧各组膜的通透性增加、完整性被破坏,阳性细胞率(positive ratio of cell,PRC)与对照组和常氧对应组相比有显著差异(P<0.01);2)低氧72 h组calpain1、calpain2的mRNA表达显著高于常氧72 h组(P<0.05),低氧各组calpain1、calpain2和calpain3的蛋白含量与常氧对应组相比无显著差异(P>0.05);3)低氧24 h组dystrophin、utrophin的m RNA表达显著低于常氧24 h组(P<0.01),但两组的蛋白含量无显著差异(P>0.05)。低氧各组dys-ferlin的mRNA表达和蛋白含量与常氧各组相比无显著差异(P>0.05)。4)抑制calpain1、calpain2活性后,低氧24 h组calpain蛋白含量显著降低(P<0.05),低氧各组阳性细胞率显著低于安慰剂各组(P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.05)。结论:1)calpain1、calpain2被激活与低氧加剧大鼠EIMD后的肌细胞膜损伤有关,但calpain并非通过降解膜骨架蛋白dystrophin、utrophin和dysferlin的途径而导致膜损伤。2)抑制calpain1、calpain2活性能有效减轻但不能避 展开更多
关键词 运动性肌损伤 低氧 钙激活中性蛋白 肌细胞膜损伤 膜骨架蛋白 蛋白降解
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人乳头瘤病毒16E7和CulL2依赖蛋白对APOBEC3A蛋白表达及子宫颈细胞迁徙能力的影响 认领 被引量:1
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作者 程娟 卢永丽 杨文君 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期402-407,共6页
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16 E7基因编码多功能磷酸蛋白,其功能和结构均类似腺病毒,HPV 16 E7可与激活的致癌基因结合,促进肿瘤进展。但是HPV 16 E7对子宫颈细胞迁移的影响和机制尚不清楚。因此本研究探究了HPV16 E7和Cu... 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16 E7基因编码多功能磷酸蛋白,其功能和结构均类似腺病毒,HPV 16 E7可与激活的致癌基因结合,促进肿瘤进展。但是HPV 16 E7对子宫颈细胞迁移的影响和机制尚不清楚。因此本研究探究了HPV16 E7和CulL2依赖蛋白对APOBEC3A蛋白表达及子宫颈细胞迁徙能力的影响。随机选择60名年龄在21~55岁间的妇女,分别设置空白对照组(B组)、患有人乳头瘤细胞组(P组)、添加CulL2依赖蛋白组(C组),采用流式荧光杂交法和第二代杂交捕获实验(hc2)检测其子宫颈脱落细胞,进行细胞培养,采用Transwell法检测细胞数,重组质粒DNA分析基因克隆的完整性,代谢标记细胞,进行过氧化氢酶(catalase,CAT)分析。采用实时荧光定量PCR法对CulL2和APOBEC3A基因水平进行评估测定,免疫印迹(Western Blot,WB)检测相关蛋白表达。与B组相比,P组细胞穿透基质胶的细胞数增多,即迁徙能力提高,重组质粒转染后,C组细胞穿透基质胶的细胞数亦明显增多,但增多幅度不如P组,即迁徙能力有所增强(P<0.05)。高风险HPV蛋白E7可上调细胞中APOBEC3A蛋白的表达。APOBEC3A和HPV16 E7与CulL2相互作用,表明在HPV感染期间形成的E7可调节细胞中的APOBEC3A蛋白的水平。反转录PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)结果显示,与B组比较,P组细胞基因表达增加,C组细胞中CulL2和APOBEC3A基因的mRNA表达水平明显减少(P<0.05)。本研究发现HPV16 E7和CulL2依赖蛋白可影响APOBEC3A蛋白表达,并且促进子宫颈细胞的迁徙能力。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒(HPV) CulL2依赖蛋白 APOBEC3A蛋白 蛋白降解
半胱氨酸组织蛋白酶与动脉粥样硬化心血管疾病的关系 认领 被引量:2
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作者 刘亚坤 胡盼盼 罗善顺 《中国循证心血管医学杂志》 2019年第2期246-247,256共3页
动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)是一种以广泛的动脉壁基质蛋白降解为特征的炎症性疾病,持续的炎症和重塑过程将最终破坏动脉壁。来自人类组织和临床前动物模型已经明确了半胱氨酸组织蛋白酶在细胞外基质(ECM)的重塑与动脉粥样硬化性... 动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)是一种以广泛的动脉壁基质蛋白降解为特征的炎症性疾病,持续的炎症和重塑过程将最终破坏动脉壁。来自人类组织和临床前动物模型已经明确了半胱氨酸组织蛋白酶在细胞外基质(ECM)的重塑与动脉粥样硬化性心血管病变的发展密切相关。本文综述了近年来这一领域的研究进展,着重介绍半胱氨酸组织蛋白酶参与几种心脏和血管疾病的发病机制以及ASCVD发展的预测。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化性心血管疾病 组织蛋白 半胱氨酸 炎症性疾病 ASCVD 细胞外基质 心血管病变 蛋白降解
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植物乳杆菌对牦牛肌肉蛋白提取物的降解能力研究 认领
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作者 刘保 丁捷 +4 位作者 白婷 周智威 李洋 何江红 孙群 《中国测试》 CAS 北大核心 2019年第10期71-77,共7页
为探究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对牦牛肌肉蛋白提取物的降解能力,以自然发酵牦牛酸醡肉中分离的4株植物乳杆菌为发酵菌株,分别构建肌浆蛋白和肌原纤维发酵模拟体系。结果表明,在发酵过程中,接种4株植物乳杆菌均能使肌浆蛋... 为探究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对牦牛肌肉蛋白提取物的降解能力,以自然发酵牦牛酸醡肉中分离的4株植物乳杆菌为发酵菌株,分别构建肌浆蛋白和肌原纤维发酵模拟体系。结果表明,在发酵过程中,接种4株植物乳杆菌均能使肌浆蛋白的磷酸化酶和肌红蛋白以及肌原纤维蛋白的肌球蛋白重链和肌动蛋白在内的多个条带降解消失,其中植物乳杆菌M2降解肌原纤维蛋白效果最好。两种发酵模拟体系中接种组的游离氨基氮含量均显著大于对照组(P<0.05),以肌原纤维发酵模拟体系中M2处理组最高。综上,植物乳杆菌M2具有较强降解牦牛肌肉蛋白,特别是肌原纤维蛋白的能力,有望用于后续牦牛酸醡肉功能发酵剂的开发。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 牦牛肉 肌肉蛋白 蛋白降解
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降解致病亨廷顿蛋白的新策略 认领 被引量:1
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作者 李朝阳 朱成钢 +2 位作者 丁澦 费义艳 鲁伯埙 《生命的化学》 CAS CSCD 2019年第6期1049-1054,共6页
靶向"不可成药靶点"已成为近年原创性药物开发的一个新方向,其中,通过降解致病蛋白是最具前景的方向,目前已有方法主要是PROTAC(proteolysis targeting chimera)等技术。复旦大学鲁伯埙、费义艳及丁澦合作研究团队的最新研究... 靶向"不可成药靶点"已成为近年原创性药物开发的一个新方向,其中,通过降解致病蛋白是最具前景的方向,目前已有方法主要是PROTAC(proteolysis targeting chimera)等技术。复旦大学鲁伯埙、费义艳及丁澦合作研究团队的最新研究通过基于化合物芯片和前沿光学方法的筛选发现了特异性靶向自噬降低亨廷顿病致病蛋白的小分子化合物,并在小鼠神经元、亨廷顿病病人细胞以及亨廷顿病果蝇模型中得到验证。以上基于自噬小体绑定化合物(autophagosome tethering compounds,ATTEC)的药物研发原创概念有望为亨廷顿病和其他多种疾病的临床治疗提供了切入点。 展开更多
关键词 靶向药物 神经退行性疾病 亨廷顿病 蛋白降解 自噬
推拿对失神经骨骼肌萎缩大鼠的治疗作用及其机制 认领 被引量:2
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作者 万小凤 唐成林 +3 位作者 赵丹丹 安荟羽 马翔 谯童茜 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期223-227,267,I0001共7页
目的:探讨推拿对失神经骨骼肌萎缩大鼠的治疗作用及其机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为模型组(n=24)和推拿组(n=24),通过切断右侧胫神经制备腓肠肌萎缩大鼠模型。术后第2日开始给推拿组大鼠手术侧腓肠肌给予手法干预,模型组不予干预... 目的:探讨推拿对失神经骨骼肌萎缩大鼠的治疗作用及其机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为模型组(n=24)和推拿组(n=24),通过切断右侧胫神经制备腓肠肌萎缩大鼠模型。术后第2日开始给推拿组大鼠手术侧腓肠肌给予手法干预,模型组不予干预。两组分别在0d、7d、14d、21d四个时间点各处死6只大鼠,取大鼠双侧腓肠肌,称重后计算各组大鼠腓肠肌湿重比;HE染色测定肌纤维截面积和直径,实时荧光定量PCR检测腓肠肌中miR-23a、Akt、MuRF1、MAFbx基因相对表达量。结果:与0d比较,模型组和推拿组大鼠腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径呈现进行性下降的趋势,其中7d、14d、21d推拿组腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径均显著高于模型组(P<0.05,P<0.01);与0d比较,模型组和推拿组MuRF1、MAFbx、AktmRNA表达均呈现先升后降的趋势,其中7d、21d推拿组MuRF1mRNA表达均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01),7d、14d、21d推拿组MAFbxmRNA表达均显著低于模型组(P<0.01,P<0.05,P<0.01),7d、14d、21d推拿组AktmRNA表达均显著高于模型组(P<0.05,P<0.01);与0d比较,模型组和推拿组21d时miR-23amRNA表达升高,推拿组miR-23amRNA表达显著高于模型组(P<0.05)。结论:推拿能延缓失神经骨骼肌的萎缩,其机制可能与上调miR-23a、Akt基因的表达,下调MuRF1、MAFbx基因的表达,使蛋白降解速度受到抑制,从而减轻骨骼肌蛋白的降解程度有关。 展开更多
关键词 失神经 骨骼肌萎缩 推拿 蛋白降解 大鼠
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煮制过程中食盐引起猪肉汤成分含量变化的研究 认领 被引量:1
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作者 诸琼妞 祝超智 +2 位作者 赵改名 张秋会 崔文明 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第22期7-12,共6页
本文以煮制30、60、90、120 min猪肉汤为研究对象,通过测定加盐与无盐猪肉汤煮制过程中的蛋白质降解产物含量、性质、分子量分布范围、氨基酸组成、脂肪和脂肪酸含量等变化,分析食盐对猪肉汤成分含量差异性的影响。结果表明,在不同煮制... 本文以煮制30、60、90、120 min猪肉汤为研究对象,通过测定加盐与无盐猪肉汤煮制过程中的蛋白质降解产物含量、性质、分子量分布范围、氨基酸组成、脂肪和脂肪酸含量等变化,分析食盐对猪肉汤成分含量差异性的影响。结果表明,在不同煮制时间下,加盐肉汤中的粗蛋白含量、非蛋白总氮含量、可溶性蛋白氮含量、盐溶性蛋白含量、氨基酸总含量、脂肪含量及脂肪酸总含量等均高于无盐肉汤。加盐肉汤中水解氨基酸总含量为5.897 mg/mL,与肉汤中粗蛋白含量的测定结果趋势一致,每煮制30 min,其盐溶性蛋白含量约增加0.6 mg/mL,且在煮制90 min后,其游离氨基酸含量显著(P<0.05)高于无盐肉汤。根据凝胶电泳图谱分析,食盐的添加使大分子蛋白降解为小分子蛋白,分子量由135~245 kDa向35~48 kDa转移。加盐肉汤中单不饱和脂肪酸含量显著(P<0.05)高于无盐肉汤,其中C18∶1含量最高,并在煮制120 min时高达3.763 mg/mL。综上,食盐的添加促进肉汤中蛋白质的溶解、渗出及降解,提高了必需氨基酸占比,并在一定程度上防止不饱和脂肪酸被氧化,有利于被人体吸收和利用。 展开更多
关键词 食盐 猪肉汤 蛋白降解 脂肪酸组成 成分含量
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拟南芥隐花色素CRY2调控因子PRP8基因的功能分析 认领
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作者 郭亚蓉 王艳艳 +1 位作者 刘军 裴雁曦 《生物技术进展》 2019年第2期169-177,共9页
植物通过光受体感受外界环境的光信号来调节自身的生长发育。隐花色素CRY1和CRY2是拟南芥(Arabidopsis)中主要的蓝光受体,其中CRY2在蓝光条件下发生降解,但其分子机制尚不清楚。通过筛选EMS诱变的突变体库,获得了一个早花突变体。该突... 植物通过光受体感受外界环境的光信号来调节自身的生长发育。隐花色素CRY1和CRY2是拟南芥(Arabidopsis)中主要的蓝光受体,其中CRY2在蓝光条件下发生降解,但其分子机制尚不清楚。通过筛选EMS诱变的突变体库,获得了一个早花突变体。该突变体中CRY2蛋白大量积累但CRY1蛋白水平不受影响,因此将它命名为mac1(more abundant of cry2 1)。图位克隆与CRISPR-Cas9敲除实验表明,MAC1是PRP8基因的等位基因,该突变体被命名为prp8-11。定量PCR结果显示,CRY2 mRNA表达量在prp8-11突变体中低于野生型中的表达量。这说明CRY2蛋白降解变慢不是由于基因表达增多引起的。研究结果为进一步了解PRP8基因的功能及其在光信号网络系统中的作用提供了依据。 展开更多
关键词 蓝光受体 蛋白降解 开花时间 下胚轴 PRP8
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托芬那酸影响结肠癌细胞β-catenin蛋白表达的作用及机制研究 认领
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作者 陶然 张小博 郭青龙 《世界最新医学信息文摘》 2019年第64期145-146,148共3页
目的研究托芬那酸(TA)对结肠癌细胞中β-catenin蛋白表达影响机制。方法培养结肠癌细胞HCT116和SW480,按浓度梯度给予TA,检测β-catenin以及其下游Cyclin D1的转录水平以及蛋白表达。采用核浆分离检测β-catenin蛋白表达并瞬时转染β-ca... 目的研究托芬那酸(TA)对结肠癌细胞中β-catenin蛋白表达影响机制。方法培养结肠癌细胞HCT116和SW480,按浓度梯度给予TA,检测β-catenin以及其下游Cyclin D1的转录水平以及蛋白表达。采用核浆分离检测β-catenin蛋白表达并瞬时转染β-catenin蛋白入核转录活性报告基因以及下游靶基因cyclin D1(CCND1)启动子荧光素酶报告基因质粒,检测其核转录活性。设计MG132组对比并瞬时转染β-catenin蛋白过表达载体及其磷酸化位点的突变形式。结果 TA对细胞中mRNA水平影响并不明显,TA降低了细胞质和细胞核中β-catenin蛋白表达,荧光素酶报告基因结果显示TA抑制了其核共转录激活能力以及下游基因(cyclin D1)表达。给予蛋白酶体抑制剂(MG-132)和N端磷酸化突变均可阻断TA介导的β-catenin下调。结论 TA可能通过引起β-catenin蛋白磷酸化促进蛋白降解,从而影响下游与癌症发生发展密切相关的基因表达,最终抑制直结肠癌细胞生长。 展开更多
关键词 托芬那酸TA 结肠癌细胞 Β-CATENIN 蛋白降解
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