酵母双杂交技术筛选克隆HCV核心蛋白结构蛋白基因1

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李克[1] 王琳[2] 等

[1]中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心，北京市100039 [2]中国人民解放军第302医院传染病研究所

国际标准刊号：ISSN 1009-3079

国内统一刊号：CN 14-1260

摘　　要:

目的克隆与丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法应用酵母双杂交系统3构建HCV核心蛋白诱饵质粒，转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合，在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选，筛选出30个阳性克隆，对既能在4缺营养缺陷培养基上生长（SD／－Trp-Leu-Ade-His）又能在涂有X－α半乳糖（X－α－gal）的四缺培养平面上长出蓝色菌落，提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后进行测序，进行生物信息学分析，将HCV核心蛋白基因分为大、中、小三段，与所克隆的未知功能基因回交，以证实其相互作用的部位。结果分析的结果显示，其中1号克隆的测序结果与GenBank中的1个未知功能序列有99％的同源性，初步证明了此基因与HCV核心蛋白有结合活性（GenBank号：AY032593），HCV核心蛋白的全长、2／3，1／3三段，回交显示三段均能在酵母中与此未知基因具有结合作用。结论 HCV核心蛋白结合蛋白肝细胞基因克隆成功，核心蛋白与此未知基因的作用部位应是氨基端，此项研究结果，为以后研究此基因在HCV致病机制以及在肝细胞中的生理功能提供了线索。