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禽流感病毒、新城疫病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒多联RT-PCR诊断技术的建立

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刘维全[1] 刘海鹏[2] 江禹[3] 王本旭[3] 王吉贵[1] 杨淑艳[3] 孙绍光[3] 涂长春[3] 刘芃芃[1]

[1]中国农业大学生物学院,北京100094 [2]沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110161 [3]解放军军需大学军事兽医研究所,长春130062

《农业生物技术学报》

2005年第13卷第1期

摘　　要:

选择禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒（NDV)、猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列高保守区，按照多联PCR引物的设计要求，利用DNAsis计算机软件设计并合成了4对特异性扩增引物，扩增片段大小分别为470、320、200和140bp。以AIV、NDV、CSFV和FMDV的培养物提取RNA并反转录，进行RT-PCR特异性扩增。结果表明，各单项RT-PCR扩增产物与设计的4对引物之间的序列大小一致。在分别建立了各病毒单项RT-PCR及AIV与NDV、CSFV与FMDV二联RT-PCR的基础上，进一步优化各种多联PCR扩增条件，成功建立了上述4种病毒的四联RT-PCR技术。经特异性和灵敏度实验证明，本方法具有高度的特异性和灵敏性，其灵敏度为10pg总RNA。在3h内即可完成样品的检测。 (共4页)