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紫杉烷13α-羟基化酶基因的克隆及其转化烟草的研究

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滕文静[1,2] 胡新玲[1,2] 王伟[3] 程克棣[3] 邱德有[1,2]

[1]中国林业科学研究院林业研究所,北京100091 [2]国家林业局林木培育重点实验室,北京100091 [3]中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所,北京100050

《中国生物工程杂志》

2008年第28卷第2期

摘　　要:

利用东北红豆杉（Taxus cuspidata）cDNA文库作为模版，通过PCR技术扩增得到我国东北红豆杉紫杉烷13α-羟基化酶（Taxane 13α-hydroxylase，简称130H）的全长cDNA，将PCR产物克隆到pGM-T载体后测序结果表明该序列长度为1458bp。同源性比较分析结果表明：其碱基序列与已经报道的东北红豆杉（Taxus cuspidata）的130H基因的一致性为99．38％，其氨基酸序列同与已经报道的东北红豆杉的130H氨基酸序列的一致性为99．18％。将获得的cDNA全长序列正向插入到含有GUS报告基因的pCambia1305．1后成功地构建出东北红豆杉130H植物表达载体pCl30H，通过电击法把pC130H转入根癌农杆菌GV3101中。利用该工程菌株对普通烟草进行了转化，在潮霉素选择压力下获得了完整的再生植株。利用130H基因特异引物，通过PCR技术筛选到4株阳性再生植株。在这4株再生植株中，有3株植株GUS报告基因的组织化学染色呈现阳性反应，表明该植物载体表达载体中与130H相融合的GUS基因成功地得到了表达。为今后深入研究130H基因在烟草中的表达和开展紫杉烷13α-羟基化酶基因对红豆杉细胞的转化以及研究作用于该基因的小RNA调节子打下了基础。 (共6页)