黄连ISSR反应条件优化的研究

摘　　要:

以黄连（味连，Coptis Chinensis Franch．）基因组DNA为模板，通过单因子、双因子实验研究了ISSR反应体系中主要成分（Mg^2＋、dNTP、引物、模板、TaqDNA聚合酶）以及热循环参数（退火温度、循环数、变性时间、退火时间、延伸时间）对扩增结果的影响，并找出各自的最适条件，建立了适合黄连ISSR分析的反应体系和扩增程序，即在25灿反应体系中，内含1×PCR buffer、1．5mmol·L^-1 Mg^2＋、200μmol·L^-1 dNTP、0．3μmol·L^-1引物、40ng模板、1 U TaqDNA聚合酶。扩增程序为94℃预变性5min，然后进行35个循环：94℃变性30s，（据不同引物的退火温度）复性1min，72℃延伸1．5min，循环结束后72℃延伸7min，-4℃保存。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术进行黄连鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序。 (共5页)