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利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Spag6基因敲除模型 预览
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作者 张世阳 张志兵 +5 位作者 镇景开 Megan Hept 李为 JamesA.Lister 张玲 曾婧 《华中科技大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第2期198-202,共5页
目的 采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9对斑马鱼的精子相关抗原6(Spag6)基因进行编辑,建立Spag6基因敲除斑马鱼模型。方法 针对斑马鱼Spag6基因,利用生物信息学选取靶位点,构建向导RNA(gRNA)表达载体并体外转录,将gRNA和Cas9 mRNA混合... 目的 采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9对斑马鱼的精子相关抗原6(Spag6)基因进行编辑,建立Spag6基因敲除斑马鱼模型。方法 针对斑马鱼Spag6基因,利用生物信息学选取靶位点,构建向导RNA(gRNA)表达载体并体外转录,将gRNA和Cas9 mRNA混合物显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中,24~48 h提取基因组DNA,PCR扩增出目的片段,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定编辑效果。结果 取3个靶位点(S1、S2、S3)进行实验,选择gRNA浓度较高的S1和S3进行注射。限制性酶切及测序的结果显示S3已产生编辑效应。结论 通过CRISPR/Cas9系统成功地获得Spag6基因编辑的突变体,为进一步探讨斑马鱼Spag6基因的体内功能奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 Spag6 斑马鱼 基因编辑
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石英粉尘对小鼠气道结构及黏蛋白Muc5b表达的影响 预览 被引量:1
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作者 邹晓雪 周婷 +5 位作者 李妍 李周洲 付国庆 刘跃伟 叶方立 张志兵 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期633-638,660共7页
目的探讨石英粉尘对小鼠肺组织内气道结构及黏蛋白Muc5b表达的影响。方法将54只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、生理盐水组、石英染尘组,每组18只。空白对照组不作任何处理,生理盐水组和石英染尘组分别给予一次性气管灌注50μL无... 目的探讨石英粉尘对小鼠肺组织内气道结构及黏蛋白Muc5b表达的影响。方法将54只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、生理盐水组、石英染尘组,每组18只。空白对照组不作任何处理,生理盐水组和石英染尘组分别给予一次性气管灌注50μL无菌生理盐水和50mg/mL石英粉尘悬液,于灌注后第1、7、28天每组分别处死6只。取小鼠右肺中叶置于4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋,进行苏木精-伊红、AB-PAS和Masson染色,观察小鼠肺组织内支气管结构的改变,采用免疫组织化学法分析肺组织内黏蛋白Muc5b的表达。结果在各个时间点,空白对照组和生理盐水组小鼠肺组织内支气管结构正常,表面分布有极少量黏蛋白;石英染尘组在灌注后第1天小鼠肺组织内支气管结构基本正常,周围炎性细胞浸润,分泌少量黏蛋白;灌注后第7天肺组织内支气管壁增厚,管腔变窄,肺泡间隔增厚,内有大量炎性细胞浸润,黏蛋白分泌量较多;灌注后第28天小鼠支气管壁、肺泡间隔明显增厚,部分支气管完整性被破坏,周围可见少量胶原沉积,偶见小块状纤维化,黏蛋白分泌量增多。石英染尘组小鼠肺组织内黏蛋白Muc5b主要定位于支气管黏膜层表面及肺泡间隔,其表达水平随染毒时间的延长而逐渐升高,且均高于同期空白对照组和生理盐水组,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。结论石英粉尘可导致小鼠肺组织内支气管壁增厚,管腔变窄,炎性反应明显,出现不同程度的纤维化改变,黏蛋白Muc5b表达量显著增加。 展开更多
关键词 石英粉尘 气道结构 黏蛋白 Muc5b
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