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甲胎蛋白特异性CD8+T淋巴细胞肝癌疫苗杀伤肝细胞癌的分子机制 被引量:5
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作者 刘扬 王跃如 +5 位作者 丁光辉 杨庭松 王龙 张柏和 吴孟超 Lisa H.Butterfield 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期101-104,共4页
目的 制备、检测甲胎蛋白(AFP)特异性CD8+T淋巴细胞肝癌疫苗的抗肿瘤免疫活性,探讨肝癌疫苗作用的分子机制.方法 采用经过AFP抗原决定簇肽(AFP542-550)刺激或转染AFP慢病毒刺激的树突状细胞(AFP542-550/Lenti-AFP-DC),体外活化AF... 目的 制备、检测甲胎蛋白(AFP)特异性CD8+T淋巴细胞肝癌疫苗的抗肿瘤免疫活性,探讨肝癌疫苗作用的分子机制.方法 采用经过AFP抗原决定簇肽(AFP542-550)刺激或转染AFP慢病毒刺激的树突状细胞(AFP542-550/Lenti-AFP-DC),体外活化AFP特异性CD8+T细胞,并应用抗人CD134单克隆抗体体外封闭AFP-CD8+-CTL.通过观察AFP-CD8+-CTL体外杀伤HepG2细胞后IFN-γ、IL-2、穿孔素(Perforin)、颗粒酶B(Granzyme B)等细胞因子的释放,间接推测穿孔素-颗粒酶B机制的作用.结果 抗人CD134单克隆抗体封闭AFP-CD8+-CTL后,AFP-CD8+-CTL体外杀伤HepG2细胞产生的IFN-γ、IL-2、穿孔素(Perforin)、颗粒酶B(Granzyme B)等细胞因子明显减少(P<0.05).结论 AFP特异性CD8+T淋巴细胞肝癌疫苗杀伤HepG2可通过穿孔素-颗粒酶B分子机制发挥作用. 展开更多
关键词 肝细胞癌 甲胎蛋白(AFP) 肿瘤疫苗 分子机制
甲胎蛋白腺病毒载体诱导的树突状细胞对人肝癌细胞HepG2的免疫治疗作用 被引量:4
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作者 刘扬 王跃如 +6 位作者 丁光辉 杨庭松 姚乐 钱明平 张柏和 吴孟超 LisaH.Butterfield 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期486-489,共4页
目的研究重组甲胎蛋白(AFP)特异性T细胞的体外抗肝细胞癌免疫活性及其机制。方法实验分为:空白对照HepG2组;CD8+T+AFP空载组;CD8+T+AFP过表达组;CD8+T+AFP空载+JAK2抑制剂组;CD8+T4-AFP过表达+JAI(2抑制剂组。分离、鉴... 目的研究重组甲胎蛋白(AFP)特异性T细胞的体外抗肝细胞癌免疫活性及其机制。方法实验分为:空白对照HepG2组;CD8+T+AFP空载组;CD8+T+AFP过表达组;CD8+T+AFP空载+JAK2抑制剂组;CD8+T4-AFP过表达+JAI(2抑制剂组。分离、鉴定DC细胞,构建AFP腺病毒并转染树突状细胞(dendriticcells,DC),活化AFP特异性的CD8+T细胞,检测CD8+T细胞对人肝癌细胞HepG2的影响。采用CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;ELISA法检测IL-2、IL-6、IL-6、IL-10、IFN-1(人干扰素1)、TNF—d、PFP(穿孔素)、granzymeB(颗粒酶)表达情况;蛋白印迹检测p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2、Bax/Bcl-2、Fas/Fasl表达情况。结果实验显示,AFP特异性CD8+T细胞体外能有效抑制HepG2细胞增殖,上调1L-2、IFN-γ、TNF-α、PFP、granzymeB、Bax/Bcl-2的表达水平,显著抑制T细胞活化的负调控因子IL-10及p-STAT3/STAT3、P.JAK2/JAK2表达。结论活化的AFP特异性T细胞能显著抑制肝细胞癌增殖。其抗肿瘤机制可能是重组AFP腺病毒活化、促进T细胞增殖,通过升高Bax/bcl-2和促进穿孔素/颗粒酶通路并特异性杀伤HepG2。JAK2抑制剂在该机制中起到一定调控作用。 展开更多
关键词 肝细胞癌 甲胎蛋白 树突状细胞 腺病毒 转染
AFP特异性CD8^+ T/CD4^+ T肝癌疫苗体外杀伤肝癌细胞的实验研究 预览 被引量:6
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作者 刘扬 宋振顺 +3 位作者 周波 傅晓辉 吴孟超 Butterfield LH 《同济大学学报:医学版》 CAS 2011年第1期 18-23,共6页
目的甲胎蛋白作为一种肿瘤特异性抗原,是临床上诊断肝癌的重要指标。本研究中,检测AFP特异性T细胞的体外抗肿瘤免疫活性。方法采用经过AFP抗原决定簇肽刺激或慢病毒转染的的树突状细胞(dendriticcells,DC),活化AFP特异性的CD4+T细胞... 目的甲胎蛋白作为一种肿瘤特异性抗原,是临床上诊断肝癌的重要指标。本研究中,检测AFP特异性T细胞的体外抗肿瘤免疫活性。方法采用经过AFP抗原决定簇肽刺激或慢病毒转染的的树突状细胞(dendriticcells,DC),活化AFP特异性的CD4+T细胞和CD8+T细胞,并在体外检测这群T细胞对人肝癌细胞HepG2的杀伤活性。结果本研究结果显示,AFP特异性的CD4+T细胞和CD8+T细胞体外能有效杀伤HepG2细胞,上调培养体系中IL-2、IFN-γ、TNF-α、穿孔素、颗粒酶的水平,对于T细胞活化的负调控因子IL-10,具有显著的抑制作用。结论经DC活化后的AFP特异性T细胞具有显著的体外抗肿瘤免疫活性,有望成为肝细胞癌的免疫治疗新方法。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 树突状细胞 细胞因子 AFP特异性 T细胞
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HLA-A^*0201限制性AFP抗原决定簇肽特异性肝癌疫苗的制备 预览 被引量:5
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作者 刘扬 陆崇德 +1 位作者 吴孟超 Lisa H. Butterfield 《同济大学学报:医学版》 2009年第6期 30-33,共4页
目的探讨人HLA-A^*0201限制性AFP抗原决定簇肽(含MHC—I类分子HLA-A^*0201)作为原发性肝癌特异性抗原制备肝癌肿瘤疫苗的可行性。方法应用14佃AFP抗原决定簇肽片段分别体外脉冲刺激健康人血液树突状细胞(DC),将DC与自体T淋巴细... 目的探讨人HLA-A^*0201限制性AFP抗原决定簇肽(含MHC—I类分子HLA-A^*0201)作为原发性肝癌特异性抗原制备肝癌肿瘤疫苗的可行性。方法应用14佃AFP抗原决定簇肽片段分别体外脉冲刺激健康人血液树突状细胞(DC),将DC与自体T淋巴细胞共同培养并扩增其数量,使AFP抗原决定簇肽导入CD8’阳性T淋巴细胞(CD8^+-CTL)并对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A2.1细胞(人慢性髓原性白血病细胞株K562转染人HLA-A^*0201基因)产生特异性杀伤并释放gamma-干扰素(ELISPOT测定)。结果有4个AFP抗原决定簇肽对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A2.1细胞杀伤能力较强,称之为免疫决定簇肽(Immunodominant);另有10个AFP抗原决定簇肽对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A2.1细胞杀伤能力较弱,称之为亚免疫决定簇肽(Subdominant)。结论AFP抗原决定簇肽可以作为肝癌特异性抗原制备肝癌肿瘤疫苗,K562/A2.1细胞可以作为有效的抗原提呈细胞(APC)用于实验研究。 展开更多
关键词 肿瘤 肝细胞 肝癌疫苗 甲胎蛋白类
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