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5-酮基-D-葡萄糖酸发酵生产的工艺条件优化 被引量:1
1
作者 李博义 潘海峰 +3 位作者 孙伟荣 程永青 谢志鹏 张建国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1486-1490,共5页
葡萄糖酸氧化杆菌可将葡萄糖转化为5-酮基-D-葡萄糖酸(5-KGA),而5-KGA是重要食品添加剂L(+)-酒石酸的合成前体。为提高5-KGA产量及其对葡萄糖的转化率,对5-KGA发酵生产的工艺条件进行优化。在摇瓶水平最适的培养基和培养条件下,5-... 葡萄糖酸氧化杆菌可将葡萄糖转化为5-酮基-D-葡萄糖酸(5-KGA),而5-KGA是重要食品添加剂L(+)-酒石酸的合成前体。为提高5-KGA产量及其对葡萄糖的转化率,对5-KGA发酵生产的工艺条件进行优化。在摇瓶水平最适的培养基和培养条件下,5-KGA最高产量为19.7 g/L,较优化前提高43.8%。在5 L发酵罐上控制恒定pH值5.5、溶氧浓度15%条件下,5-KGA产量达到46.0 g/L,较摇瓶最高产量提高1.3倍,应用葡萄糖流加工艺,5-KGA最高产量达到75.5 g/L,转化率超过70%,与已见报道的最高水平相比提高了32.0%,为实现微生物发酵生产5-KGA、进而合成L(+)-酒石酸的工业化提供了切实有效的途径。 展开更多
关键词 5-酮基-D-葡萄糖酸 L(+)-酒石酸 条件优化 工艺调控 补糖发酵
葡萄糖酸氧化杆菌木糖醇脱氢酶基因的克隆与表达 被引量:1
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作者 林燕清 谢志鹏 +3 位作者 张建国 鲍文娜 潘海峰 李博义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 726-735,共10页
【目的】获得葡萄糖酸氧化杆菌(Gluconobacter oxydans CGMCC 1.637)的木糖醇脱氢酶基因,研究其酶学性质及碳源特别是D-阿拉伯醇和木糖醇对该酶活性的影响。【方法】通过已报道序列的木糖醇脱氢酶的保守区设计引物,用聚合酶链式反应(... 【目的】获得葡萄糖酸氧化杆菌(Gluconobacter oxydans CGMCC 1.637)的木糖醇脱氢酶基因,研究其酶学性质及碳源特别是D-阿拉伯醇和木糖醇对该酶活性的影响。【方法】通过已报道序列的木糖醇脱氢酶的保守区设计引物,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增获得目的基因片段。根据获得的片段序列设计引物克隆目的基因的5'和3'片段,将所获得的片段拼接,获得完整的木糖醇脱氢酶基因。通过构建工程菌获得重组蛋白,并利用氧化还原反应测定重组酶的活性。用含不同碳源的培养基培养G.oxydans CGMCC 1.637,并测定其破胞上清液木糖醇脱氢酶氧化木糖醇的活性;用不同碳源培养的G.oxydans CGMCC 1.637转化木酮糖,用高效液相色谱法测定木糖醇的产量。【结果】获得一个新的798bp的木糖醇脱氢酶基因,所编码的木糖醇脱氢酶含265个氨基酸,属于短链脱氢酶家族。酶学性质研究发现,该木糖醇脱氢酶催化木糖醇氧化的最适合条件为35℃、pH 10.0,最高活性为23.27 U/mg,催化木酮糖还原为木糖醇的最适条件为30℃、pH 6.0。最高活性为255.55 U/mg;该木糖醇脱氢酶的对木糖醇的Km和Vmax分别为78.97 mmol/L和40.17 U/mg。碳源诱导实验表明,d-山梨醇对G.oxydans CGMCC 1.637木糖醇脱氢酶的活性有明显的促进作用,而葡萄糖、果糖、木糖、木糖醇、D-阿拉伯醇对木糖醇脱氢酶活性有明显的抑制作用。而在转化实验中,用d-甘露糖培养的G.oxydans CGMCC 1.637的转化能力明显高于其他碳源培养的G.oxydans CGMCC 1.637的转化能力,其中,用阿拉伯醇培养的G.oxydans CGMCC 1.637的转化能力最低,仅为对照的35%。【结论】克隆自G.oxydans CGMCC 1.637的木糖醇脱氢酶基因是一个新的基因,用阿拉伯醇培养的G.oxydans CGMCC 1.637破胞液木糖醇脱氢酶活性低;且阿拉伯醇对G.oxydans CGMCC 1.637木酮糖的还原能力具有抑制作用。 展开更多
关键词 葡萄糖酸氧化杆菌(Gluconobacter oxydans) 短链脱氢酶/还原酶家族 木糖醇脱氢酶 D-木酮糖 木糖醇 克隆
沙雷氏菌Serratia sp.BK-98发酵生产2-酮基-D-葡萄糖酸的工艺优化及动力学研究 预览 被引量:4
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作者 张炜 谢志鹏 +1 位作者 罗玮 张建国 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 1371-1376,共6页
引言 2-酮基-D-葡萄糖酸(2-KDG)有着广泛的用途,它能被用作食品添加剂、水泥增塑剂、洗涤剂,是照片显影剂的重要成分;同时它也是除草剂、D-核酮糖、D-阿拉伯糖,特别是D-异抗坏血酸合成过程中的重要前体。
关键词 2-酮基-D-葡萄糖酸 发酵工艺 优化 动力学模型 SERRATIA sp.BK-98
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产D-阿拉伯醇菌株的筛选、鉴定及其产D-阿拉伯醇条件的优化
4
作者 宋卫斌 林燕青 +2 位作者 胡海燕 谢志鹏 张建国 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期332-339,共8页
【目的】产D-阿拉伯醇的耐高渗酵母的筛选、鉴定和产D-阿拉伯醇条件的优化。【方法】通过电镜、Biolog GN、(G+C)含量和26S rDNA D1/D2区序列分析法对所获得的菌株进行了描述。通过红外光谱、核磁共振氢谱和碳谱、质谱以及旋光度实... 【目的】产D-阿拉伯醇的耐高渗酵母的筛选、鉴定和产D-阿拉伯醇条件的优化。【方法】通过电镜、Biolog GN、(G+C)含量和26S rDNA D1/D2区序列分析法对所获得的菌株进行了描述。通过红外光谱、核磁共振氢谱和碳谱、质谱以及旋光度实验鉴定纯化产物的结构。通过单因素实验优化产D-阿拉伯醇的发酵条件。【结果】本文筛选得到一株产D-阿拉伯醇的新型菌株,经鉴定属于假丝酵母属并命名为Candida sp.H2。200 mL摇瓶发酵生产D-阿拉伯醇的单因素优化实验表明,最适发酵条件为:葡萄糖250 g/L、酵母抽提物10 g/L、起始pH 6.0、培养温度35℃、摇床转速200 rpm、装液量200 mL/1000 mL摇瓶、接种量1%(v/v)、发酵时间96 h,在该条件下,D-阿拉伯醇对葡萄糖的质量转化率达35%,较优化前提高了10%。【结论】Candida sp.H2是一株有应用前景的新型产D-阿拉伯醇菌株。 展开更多
关键词 多羟基醇 D-阿拉伯醇 木糖醇 耐高渗酵母 假丝酵母
产2-酮基-D-葡萄糖酸菌Serratiasp.BK-98的分离及其培养条件优化 预览
5
作者 张炜 谢志鹏 张建国 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期264-267,372共5页
从土壤中分离得到一株2-酮基-D-葡萄糖酸(2-KDG)产生菌,综合16SrDNA序列和系统进化分析确定该菌属于沙雷氏菌属(Serratia),命名为Serratiasp.BK-98。采用PIackett—Burman(PB)实验设计,从影响2-酮基-D-葡萄糖酸生物合成条件... 从土壤中分离得到一株2-酮基-D-葡萄糖酸(2-KDG)产生菌,综合16SrDNA序列和系统进化分析确定该菌属于沙雷氏菌属(Serratia),命名为Serratiasp.BK-98。采用PIackett—Burman(PB)实验设计,从影响2-酮基-D-葡萄糖酸生物合成条件的14个因素中筛选出具有显著效应的3个因子:装液量、发酵时间和初始pH。在此基础上通过中心组合设计实验(central composite design,CCD)和响应面分析(response surface methodology,RSM)确定了装液量、发酵时间和初始DH的最适值分别为6.6mL、57.9h和5.0。在优化条件下.2-KDG的100mL摇瓶发酵产量达到了187.8g/L,100L发酵罐产量达到了192.2g/L.分别较优化前提高了142.6%和148.3%.这两个实验结果均与模型的预测值191.4g/L非常接近。 展开更多
关键词 培养条件 2-酮基-D-葡萄糖酸 优化 响应面法 SERRATIA sp.BK-98
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油茶籽仁中油脂的水酶法提取研究 预览 被引量:9
6
作者 方学智 王开良 +1 位作者 姚小华 王亚萍 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2010年第5期 778-781,共4页
油茶(Camellia oleifera Abel.)作为我国特有的木本油料树种,在我国南方地区有广泛的分布。油茶与油棕(Elaeis guineensis Jacq.)、油橄榄(Olea europaea L.)、椰子(Cocos nucifera L.)并称为世界四大木本油料作物,其果... 油茶(Camellia oleifera Abel.)作为我国特有的木本油料树种,在我国南方地区有广泛的分布。油茶与油棕(Elaeis guineensis Jacq.)、油橄榄(Olea europaea L.)、椰子(Cocos nucifera L.)并称为世界四大木本油料作物,其果仁含油率高达40%以上,茶油不饱和脂肪酸含量可高达91.5%以上,其中油酸含量可达50%~83%。 展开更多
关键词 油茶 水酶法提取 油茶籽
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HPLC法测定四制香附丸中芍药苷含量 预览 被引量:4
7
作者 吴薇 谢志鹏 《中国药品标准》 CAS 2010年第5期386-390,共5页
目的:建立四制香附丸中芍药苷的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,以Kromasil KR100-5 C18为色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-水(14:86)为流动相,柱温35℃,检测波长230nm,流速1.0mL·min^-1。结果... 目的:建立四制香附丸中芍药苷的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,以Kromasil KR100-5 C18为色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-水(14:86)为流动相,柱温35℃,检测波长230nm,流速1.0mL·min^-1。结果:芍药苷在41.98~1049.5ng范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率(n=6)97.9%,RSD1.0%。结论:本方法简单、稳定易行,灵敏度高,可控性强,重复性好,可用于四制香附丸中芍药苷的含量测定。 展开更多
关键词 四制香附丸 芍药苷 高效液相色谱法
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不同制油方法对油茶籽油品质的影响 预览 被引量:58
8
作者 方学智 姚小华 +1 位作者 王开良 王亚萍 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期 23-26,共4页
研究了水酶法、压榨法和浸出法3种制油方法对油茶籽油酸值、过氧化值以及Vε、β-胡萝卜素、多酚、磷脂含量的影响。结果表明,在3种制油方法中,水酶法制取的油脂(水酶油)酸值显著高于其他两种制油方法(P〈0.05)。3种制油方法所... 研究了水酶法、压榨法和浸出法3种制油方法对油茶籽油酸值、过氧化值以及Vε、β-胡萝卜素、多酚、磷脂含量的影响。结果表明,在3种制油方法中,水酶法制取的油脂(水酶油)酸值显著高于其他两种制油方法(P〈0.05)。3种制油方法所得油脂过氧化值均存在显著性差异(P〈0.05),其中以压榨法制取的油脂(压榨油)为最高,水酶油最低。Vε、β-胡萝卜素含量以水酶油中含量最高,且显著高于压榨油和浸出油(P〈0.05)。多酚及磷脂含量以压榨油最高,水酶油最低,仅为4.12μg/g和2.87μg/g,显著低于压榨油和浸出油(P〈0.05)。 展开更多
关键词 油茶籽油 水酶法 压榨法 浸出法 品质
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产顺式环氧琥珀酸水解酶的博德特氏菌BK-52的筛选、鉴定及其产酶条件优化 预览 被引量:3
9
作者 潘海峰 谢志鹏 +1 位作者 鲍文娜 张建国 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期 1075-1081,共7页
【目的】产顺式环氧琥珀酸水解酶(CESH)新型菌株的筛选、鉴定及其产酶条件优化。【方法】通过电镜、Biolog GN、(G+C)含量和16S rDNA序列研究,对筛选菌株进行分类鉴定。通过红外光谱、核磁共振氢谱和碳谱、质谱以及旋光度实验,鉴... 【目的】产顺式环氧琥珀酸水解酶(CESH)新型菌株的筛选、鉴定及其产酶条件优化。【方法】通过电镜、Biolog GN、(G+C)含量和16S rDNA序列研究,对筛选菌株进行分类鉴定。通过红外光谱、核磁共振氢谱和碳谱、质谱以及旋光度实验,鉴定纯化产物的结构并优化CESH产酶条件。【结果】本文筛选出一株产CESH的新型菌株,该菌株可将顺式琥珀酸盐转化为D(-)-酒石酸,属于博德特氏菌属,并将其命名为博德特氏菌BK-52。最佳发酵条件为:最佳温度30°C,最佳pH7.0,最佳发酵时间36h,最佳碳源蔗糖,最佳无机氮源硫酸铵,最佳酶诱导剂顺式环氧琥珀酸二钠。在此最佳条件下,CESH酶活最高达764U/g生物量。【结论】本文筛选的新菌株博德特氏菌BK-52为D(-)-酒石酸的生产提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 博德特氏菌 顺式环氧琥珀酸水解酶 D(-)-酒石酸 筛选 鉴定
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人乙醛脱氢酶2基因^*1/^*2多态性与酒精性疾病 预览 被引量:14
10
作者 裘丽珍 钟文涛 龚兴国 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期164-167,184共5页
人乙醛脱氢酶2(ALDH2)是乙醇代谢途径中最重要的酶之一,其编码基因aldh2具有高度的多态性。在亚洲的黄种人群中,aldh2^*2是频率最高且最重要的突变型。最近的研究显示,aldh2^*2能在一定程度上抑制其携带者对酒精的依赖,并与酗... 人乙醛脱氢酶2(ALDH2)是乙醇代谢途径中最重要的酶之一,其编码基因aldh2具有高度的多态性。在亚洲的黄种人群中,aldh2^*2是频率最高且最重要的突变型。最近的研究显示,aldh2^*2能在一定程度上抑制其携带者对酒精的依赖,并与酗酒导致的酒精性中毒、酒精性肝病、上消化道癌及胃癌等疾病之间存在深刻的联系。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶2^*2 酒精依赖 酒精性肝病 上消化道癌 胃癌
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一个新的家蚕转录相关锌带蛋白基因的克隆及序列分析 预览
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作者 冯姗 张耀洲 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期 726-732,共7页
锌带蛋13(zinc ribbon protein)是锌指类蛋白的一种,它的Cys4Zn(2+)结合位点由3个β2片层折叠而成,而不是α螺旋结构。锌带结构与锌指结构同为转录因子结合核酸的结构域,锌带蛋白作为转录相关因子在调节基因表达活性等方面具有... 锌带蛋13(zinc ribbon protein)是锌指类蛋白的一种,它的Cys4Zn(2+)结合位点由3个β2片层折叠而成,而不是α螺旋结构。锌带结构与锌指结构同为转录因子结合核酸的结构域,锌带蛋白作为转录相关因子在调节基因表达活性等方面具有重要作用。在对家蚕Bombyx mori蛹cDNA文库测序中,发现一个新的编码家蚕锌带蛋白基因的EST序列(GenBank登录号DY230964),以此序列为信息探针检索家蚕EST数据库,通过同源筛选,获得一个新的家蚕锌带蛋白基因cDNA全序列并经RT-PCR检测和克隆、测序验证,结果表明与电子克隆序列完全一致。我们将其命名为BmZNRD1(Zinc Ribbon Domain Containing 1)(GenBank登录号DQ432055)。该基因全长为675bp,由363bp的开放阅读框序列(ORF)、10bp的5’端非翻译区序列(5’UTR)和302bp的3’端非编码区序列(3’UTR)组成,其编码的120个氨基酸序列与其他真核生物间具有较高的同源性(达60%左右),预测分子量为13.54kD,等电点为6.8。BmZNRD1编码的氨基酸序列是一种锌带蛋白,推测有2个功能结构域,分别是位于N-端的Cx2Cx14Cx2C和C-端的Cx2Cx24Cx2C,其中C-端保守氨基酸序列Cx2Cx6Yx3QxRSADEx2TxFx2Cx2C在生物进化中保守性很高,从酵母、果蝇、线虫到两栖类、哺乳类都有发现该结构域的存在,与酵母RNA聚合酶A亚单位9和转录相关蛋白有很高的相似性,推测其具有相同的功能。将BmZNRD1基因cDNA序列与家蚕基因组序列进行比对,结果表明该基因具有3个外显子,2个内含子,外显子/内含子边界符合经典的GT-AG规则。 展开更多
关键词 家蚕 锌带蛋白基因 电子克隆 基因克隆 序列分析
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不同方法加工杭白芍的芍药苷含量和FTIR光谱特征 预览 被引量:5
12
作者 童富淡 胡家恕 宋勤 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第16期 1262-1264,共3页
目的检测不同方法加工杭白芍的芍药苷含量及其FTIR光谱,为杭白芍的科学加工提供资料。方法用HPLC测定芍药苷含量,傅里叶变换红外光谱仪分析FTIR光谱。结果不同方法加32杭白芍样品的芍药苷含量:传统去皮煮制为1.150%;连皮煮制后去... 目的检测不同方法加工杭白芍的芍药苷含量及其FTIR光谱,为杭白芍的科学加工提供资料。方法用HPLC测定芍药苷含量,傅里叶变换红外光谱仪分析FTIR光谱。结果不同方法加32杭白芍样品的芍药苷含量:传统去皮煮制为1.150%;连皮煮制后去皮和有皮分别为1.544%和1.439%;连皮蒸制后去皮和有皮分别为2.078%和1.689%;先去皮和有皮再蒸制分别为1.912%和1.750%;生晒后去皮和有皮分别为1.492%和1.233%。煮制、蒸制、去皮和不去皮等不同方法组合加工杭白芍的FTIR光谱基本相似,但各种特征吸收峰的波数略有不同。结论蒸制加工有利于提高杭白芍的芍药苷含量,而加32方法不影响杭白芍的FTIR光谱。 展开更多
关键词 杭白芍 芍药苷 加工方法 傅里叶变换红外光谱 高效液相色谱法
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人白细胞介素-4基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达 预览
13
作者 陈蔚青 史锋 +1 位作者 朱成钢 申屠超 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期 512-516,共5页
采用RT-PCR法从经LPS诱导刺激的人外周血淋巴细胞中克隆了人白细胞介素-4(human interleukin-4,hIL-4)基因。为高效表达hIL-4,促进其临床应用,将hIL-4插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,构建重组载体pBacPAK-hIL-4,并与线性化... 采用RT-PCR法从经LPS诱导刺激的人外周血淋巴细胞中克隆了人白细胞介素-4(human interleukin-4,hIL-4)基因。为高效表达hIL-4,促进其临床应用,将hIL-4插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,构建重组载体pBacPAK-hIL-4,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒BacPAK-hIL-4。将重组病毒感染家蚕5龄幼虫和蚕蛹(1×10^5PFU/头),表达产物以ELISA、SDS-PAGE和Western blotting方法检测。用活化的人外周血T淋巴细胞测定表达产物体外生物活性。ELISA法结果表明hIL-4在感染病毒后96h的蚕血淋巴和120h的蚕蛹中表达量最高,分别达到2.3μg/mL蚕血淋巴和10.2μg/mL体液;SDS-PAGE、Western blotting分析表明表达产物分子量约20kD;表达产物对活化的T淋巴细胞增殖具有明显促进作用。 展开更多
关键词 人白细胞介素-4基因 克隆 表达 家蚕杆状病毒表达载体系统
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融合6个组氨酸的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在家蚕幼虫中的表达 预览 被引量:1
14
作者 朱立成 陈健 +2 位作者 林蓉 金勇丰 张耀洲 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 613-616,共4页
将融合6个组氨酸(6×his)序列的hGM-CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis-GM-CSF,pBacPAKHis-GM-CSF DNA与线性化病毒BmBacPAK6 DNA共转染BmN细胞,获得了表达rhGM-CSF融合蛋白的重组病毒vBacP... 将融合6个组氨酸(6×his)序列的hGM-CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis-GM-CSF,pBacPAKHis-GM-CSF DNA与线性化病毒BmBacPAK6 DNA共转染BmN细胞,获得了表达rhGM-CSF融合蛋白的重组病毒vBacPAKHis-GMCSF.用重组病毒感染家蚕五龄起蚕,分别在24、48、72、96、120 h和144 h剪腹足取蚕血淋巴,ELISA法测得rhGM-CSF融合蛋白在120 h的蚕血淋巴中表达量最高,约为15μg/mL蚕血淋巴.融合蛋白通过Poly-His Protein Purification Kit纯化.SDS-PAGE和Western blotting分析表明,表达产物是3种糖基化程度不同的,分子量分别约为18、20、31 kD的蛋白质. 展开更多
关键词 hGM—CSF 家蚕杆状病毒表达系统 融合表达
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人乳铁蛋白cDNA的克隆及在家蚕细胞中的表达 预览 被引量:2
15
作者 刘涛 张耀洲 吴祥甫 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期 280-285,共6页
从人的乳腺组织中克隆了人乳铁蛋白(hLF)cDNA,其DNA序列与GenBank中另外4个hLF cDNA序列具有高度的同源性(同源性达到99%).将人乳铁蛋白cDNA克隆在质粒pBacPAK8的BamHⅠ位点和XhoⅠ位点,构建成重组转移质粒pBacPAK-hLF.该质粒DNA与已线... 从人的乳腺组织中克隆了人乳铁蛋白(hLF)cDNA,其DNA序列与GenBank中另外4个hLF cDNA序列具有高度的同源性(同源性达到99%).将人乳铁蛋白cDNA克隆在质粒pBacPAK8的BamHⅠ位点和XhoⅠ位点,构建成重组转移质粒pBacPAK-hLF.该质粒DNA与已线性化BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞BmN,在培养的贴壁细胞中挑出空斑,经过3轮纯化,获得重组病毒BmNPV-hLF.蛋白质免疫印迹法检测到在重组病毒感染的家蚕细胞中存在人乳铁蛋白基因的表达产物,分子量约78 kD,ELISA法测定结果表明家蚕细胞中重组人乳铁蛋白(rhLF)相对表达量在表达120 h达到最高值,约为13.5 mg/L.体外生物活性试验表明重组hLF对大肠杆菌JM109具有抑菌活性. 展开更多
关键词 人乳铁蛋白cDNA 家蚕细胞 重组杆状病毒
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家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂基因SCI-SB的原核表达、纯化及活性检测 预览
16
作者 张苗 张耀洲 +2 位作者 张文波 金勇丰 蓝航莲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期 268-272,共5页
为进一步研究家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂基因SCI-SB的功能和作用机理,利用RT-PCR技术,从家蚕总RNA中扩增到家蚕SCI-SB基因片段,构建了含有GST标签的融合表达质粒pGEX4T-1-SCI-SB.采用pGEX融合蛋白表达系统,在大肠杆菌BL21中得到以包涵体形... 为进一步研究家蚕胰凝乳蛋白酶抑制剂基因SCI-SB的功能和作用机理,利用RT-PCR技术,从家蚕总RNA中扩增到家蚕SCI-SB基因片段,构建了含有GST标签的融合表达质粒pGEX4T-1-SCI-SB.采用pGEX融合蛋白表达系统,在大肠杆菌BL21中得到以包涵体形式存在的重组GST融合蛋白质,表达量可占菌体蛋白的 15%.将包涵体变性、复性处理以后,进一步利用GSTTrapFF 亲合层析一步获得了重组蛋白.将该重组蛋白免疫新西兰纯种大白兔,获得效价高的多克隆抗体.胰凝乳蛋白酶活性抑制实验结果表明该重组蛋白具有一定的酶活抑制作用. 展开更多
关键词 家蚕 胰凝乳蛋白酶抑制剂 原核表达
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dsRNA对家蚕核多角体病毒(BmNPV)复制的抑制作用 被引量:15
17
作者 徐颖 朱成钢 +1 位作者 金勇丰 张耀洲 《科学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1073-1078,共6页
以BmNPV复制必需的DNA解旋酶基因和DNA聚合酶基因为靶序列,人工设计并合成了长度分别为435(Ap1),300(Ap2)和399bp(AH)的dsRNAs,利用TransMessenger^TM Transfection Reagent转染家蚕细胞,研究其对BmNPV复制的抑制效果.结果表明,... 以BmNPV复制必需的DNA解旋酶基因和DNA聚合酶基因为靶序列,人工设计并合成了长度分别为435(Ap1),300(Ap2)和399bp(AH)的dsRNAs,利用TransMessenger^TM Transfection Reagent转染家蚕细胞,研究其对BmNPV复制的抑制效果.结果表明,在野生型病毒BmNPV感染家蚕细胞实验中,Ap2和AH这2个dsRNA能够有效地抑制病毒DNA的复制,并且在转染dsRNA后第4天抑制效果最佳,它们使病毒滴度(PFU/mL值)降低了10^3~10^4,而另外的dsRNA(Ap1)没有明显的抑制效果.RT—PCR和DNA斑点杂交也证实了2种目的基因的表达水平和病毒DNA的量发生了明显的下调.此外,用荧光显微镜观察dsRNA在细胞内的定位,发现在转染24h后dsRNA开始在细胞核的周围呈不连续的聚集状态。 展开更多
关键词 BMNPV RNAI DSRNA 复制 抑制 家蚕核多角体病毒
PCR一步法构建融合蛋白基因fPg 预览 被引量:9
18
作者 刘和 陈英旭 +1 位作者 张文波 金勇丰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期 525-528,共4页
采用一种不需要限制核酸酶和连接酶的新方法--"PCR一步法"将芳香烃化合物降解的关键基因pheB和绿色荧光蛋白编码基因gfp融合,构建得到融合蛋白基因fpg.该方法在一个PCR反应体系中通过3个引物、两个模板扩增得到一个含有中间... 采用一种不需要限制核酸酶和连接酶的新方法--"PCR一步法"将芳香烃化合物降解的关键基因pheB和绿色荧光蛋白编码基因gfp融合,构建得到融合蛋白基因fpg.该方法在一个PCR反应体系中通过3个引物、两个模板扩增得到一个含有中间柔性肽段-Gly4Ser-的融合基因fpg.研究结果表明,PCR一步法是一种快速方便的构建融合基因的方法. 展开更多
关键词 PCR一步法 邻苯二酚双加氧酶 绿色荧光蛋白 融合基因
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RNA为基础的基因疗法在HIV感染治疗的研究进展 预览 被引量:1
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作者 毛励罡 朱成钢 张耀洲 《浙江预防医学》 2004年第2期 62-64,共3页
艾滋病(AIDS),是由艾滋病病毒(HIV)引起的传染病.
关键词 基因疗法 HIV感染 研究进展 艾滋病 反义RNA技术 核酶技术
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治疗性抗体的基础研究进展 预览
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作者 王雷杰 袁谦 +1 位作者 施利敏 朱成钢 《畜禽业》 2003年第8期 54-55,共2页
单克隆抗体作为一种具有靶向性的生物大分子,始终是基础医学工作者研究的热点之一.临床上,已被用于治疗肿瘤、病毒感染、自身免疫病、中毒性休克、RH溶血症和抗移植排斥等.但单克隆抗体的临床应用受到一定限制,主要障碍是诱导产生人抗... 单克隆抗体作为一种具有靶向性的生物大分子,始终是基础医学工作者研究的热点之一.临床上,已被用于治疗肿瘤、病毒感染、自身免疫病、中毒性休克、RH溶血症和抗移植排斥等.但单克隆抗体的临床应用受到一定限制,主要障碍是诱导产生人抗鼠抗体(HAHA反应)、肿瘤渗入量低、亲和力低和半衰期短等.然而,近年来分子生物学技术的发展和向各学科的渗透,人们已经可以通过基因操作技术对抗体进行改造,使其适用于疾病的治疗.如近年来应用噬菌体抗体库技术(phage display antibodylibrary techniques),筛选具有特异治疗作用的人源性单克隆抗体.另外,通过与基因敲除(knockout)和置换(knockin)技术结合筛选获得完全人源化的单克隆抗体也备受人们的普遍关注.本文就这些技术的基本原理、特点和治疗性抗体的研究进展进行了介绍. 展开更多
关键词 治疗性抗体 单克隆抗体 生物大分子 临床应用 噬菌体技术 治疗机理 分子生物学技术
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