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国内外微生物肥料研究进展及展望 预览
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作者 李涛 张朝辉 +3 位作者 郭雅雯 田香 许晓莞 邱立友 《江苏农业科学》 2019年第10期37-41,共5页
化肥施用在保障粮食作物高产过程中始终发挥着重要作用,但也带来严重的环境及土地污染问题,阻碍了粮食生产的可持续发展。因此,如何减少化肥用量,寻找环境友好型的化肥替代品是当前科学研究的重要课题。微生物肥料具有绿色健康无污染的... 化肥施用在保障粮食作物高产过程中始终发挥着重要作用,但也带来严重的环境及土地污染问题,阻碍了粮食生产的可持续发展。因此,如何减少化肥用量,寻找环境友好型的化肥替代品是当前科学研究的重要课题。微生物肥料具有绿色健康无污染的特点,是化学肥料最优质的替代品,许多研究表明其能够有效改善土壤中氮、磷、钾等元素的利用率,可提升作物抗逆能力,提高农产品质量及产量,并显著抑制土壤中植物病原菌的毒害作用等。从微生物肥料国内外发展现状、作用机制、当前存在问题及发展前景几个方面来介绍当前微生物肥料的研究进展,并对其未来发展策略进行展望。一方面为微生物肥料在农业生产中的深入开发和应用提供了理论依据,另一方面为微生物肥料未来的研发指明了方向。 展开更多
关键词 微生物肥料 固氮 溶磷 解钾 植物激素 抗逆性 抗病性 未来研发方向
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极端嗜热菌Thermosipho melanesiensis普鲁兰酶基因的异源表达与酶学性质分析 预览
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作者 王明道 邢岩 +3 位作者 邱爽 王红阳 孙利鹏 邱立友 《信阳师范学院学报:自然科学版》 北大核心 2018年第2期197-202,共6页
择来源于极端嗜热菌Thermosipho melanesiensis(DSM12029)的普鲁兰酶基因,以购自德国菌种保藏中心的基因组为模板,扩增出普鲁兰酶基因TM-pulA;利用酶切酶连构建了重组质粒pET21a-TM-pulA;转入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中诱导表达并经纯... 择来源于极端嗜热菌Thermosipho melanesiensis(DSM12029)的普鲁兰酶基因,以购自德国菌种保藏中心的基因组为模板,扩增出普鲁兰酶基因TM-pulA;利用酶切酶连构建了重组质粒pET21a-TM-pulA;转入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中诱导表达并经纯化后,进行了水解产物分析和酶学性质测定.结果显示:TM-pulA为Ⅰ型普鲁兰酶,最适pH为5.8;最适温度是80℃;70℃下半衰期为4.75 h;Mn 2+、Co 2+、AL 3+、Fe 3+、SDS及EDTA对其酶活有不同程度的抑制作用;该酶的K m、V max、K cat及K cat/K m值分别为4.68 g·L-1、0.0085 mmol·L-1·s-1、71.18 s-1、15.21 L·g-1·s-1. 展开更多
关键词 普鲁兰酶 Thermosipho melanesiensis 异源表达 酶学性质
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恶臭假单胞菌UW4中趋化受体蛋白的克隆、表达及鉴定 预览
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作者 李涛 《天津农业科学》 CAS 2018年第5期1-4,共4页
植物根际促生菌因其能够促进植物生长、防治病害的优势日益受到广泛关注,其研究主要集中在假单胞菌类,假单胞菌类在植物根际的定殖主要与趋化作用相关。本研究通过生物信息学软件对恶臭假单胞菌UW4的甲基趋化受体蛋白(MCPs)进行筛选,... 植物根际促生菌因其能够促进植物生长、防治病害的优势日益受到广泛关注,其研究主要集中在假单胞菌类,假单胞菌类在植物根际的定殖主要与趋化作用相关。本研究通过生物信息学软件对恶臭假单胞菌UW4的甲基趋化受体蛋白(MCPs)进行筛选,然后对其进行克隆和表达,结果表明:克隆得到的MCP1可稳定表达,通过对恶臭假单胞菌UW4的甲基趋化受体蛋白的纯化及分析其与不同配体物质的热力学作用强弱,以期找出恶臭假单胞菌特异性的趋化受体,进一步阐明其趋化机理,为恶臭假单胞菌对植物的促生效应提供理论支撑。 展开更多
关键词 植物根际促生菌 趋化 ACC脱氨酶 MCP SDS-PAGE
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梓醇转化菌株筛选及其转化产物的分离鉴定 预览
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作者 王红阳 王明道 +3 位作者 邢岩 聂慧慧 洪冲 陈红歌 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第4期128-136,共9页
【目的】筛选对梓醇具有转化能力的真菌菌株,并对转化产物进行生物学活性测定及分离鉴定。【方法】用PDA固体培养基从地黄重茬土壤样品中分离纯化具梓醇转化能力的真菌菌株,对目标菌株进行形态学观察和分子生物学鉴定;以白菜、萝卜和芝... 【目的】筛选对梓醇具有转化能力的真菌菌株,并对转化产物进行生物学活性测定及分离鉴定。【方法】用PDA固体培养基从地黄重茬土壤样品中分离纯化具梓醇转化能力的真菌菌株,对目标菌株进行形态学观察和分子生物学鉴定;以白菜、萝卜和芝麻种子为材料,蒸馏水为对照,测定在发酵液体积分数为25%,50%,75%和100%时,3种种子的发率和幼苗根长、苗高及鲜质量等指标,分析梓醇的真菌转化产物对植物生长发育的影响;利用薄层层析法和GC-MS法对转化产物进行分离、纯化及鉴定。【结果】从地黄重茬土壤样品中筛选出1株对梓醇转化能力强的菌株(33号菌株),经形态学和分子生物学鉴定,确定该菌为日本曲霉棘孢变种(Aspergillus japonicus Saito var.aculeatus)。该菌转化梓醇发酵液产物对白菜、萝卜种子发芽率影响不大,但发酵液体积分数为100%时芝麻种子发芽率由92%降至12%,抑制作用显著。与空白对照相比,随发酵液体积分数增加,3种作物幼苗的根长、苗高和鲜质量均受到不同程度的抑制作用;当发酵液体积分数为100%时,白菜种子的根长、苗高和鲜质量分别降低了82.8%,30.0%,22.7%,萝卜种子分别降低了31.2%,90.9%,54.5%,芝麻种子分别降低了75.6%,71.4%,64.7%。梓醇转化产物中发挥抑制作用的物质最终被确定为2-癸烯酸甲酯。【结论】从地黄重茬土壤中筛选获得1株具梓醇转化能力的菌株,其转化产物具有抑制植物幼苗生长的作用,发挥抑制作用的物质为2-癸烯酸甲酯。 展开更多
关键词 地黄 梓醇 真菌转化 生物活性 抑制作用
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假单胞菌趋化性研究概述 预览
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作者 李涛 《天津农业科学》 CAS 2017年第8期5-9,共5页
趋化是生物体朝向或远离化学物质的一种运动形式。假单胞菌可感受周围化学物质浓度变化,通过极性鞭毛、菌毛驱动表现其群体趋化行为。已知假单胞菌趋化主要是由鞭毛介导和假定菌毛介导两种,本文主要阐述这两种趋化信号转导途径,总结... 趋化是生物体朝向或远离化学物质的一种运动形式。假单胞菌可感受周围化学物质浓度变化,通过极性鞭毛、菌毛驱动表现其群体趋化行为。已知假单胞菌趋化主要是由鞭毛介导和假定菌毛介导两种,本文主要阐述这两种趋化信号转导途径,总结了研究趋化行为的各种定性和定量的常规方法及新方法,以期为假单胞菌趋化性研究提供参考。 展开更多
关键词 趋化 假单胞菌 信号转导
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木聚糖酶的纯化、鉴定及酶学性质研究
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作者 朱东东 刘新育 +2 位作者 冀倩 张红利 陈红歌 《饲料研究》 CAS 2017年第15期14-17,共4页
试验对市售的固体木聚糖酶进行Sephadex G-100葡聚糖凝胶过滤层析纯化试验,SDS-PAGE显示获得约20 kDa木聚糖酶条带,割胶回收后通过质谱鉴定木聚糖酶为来自哈茨木霉的木聚糖酶,然后对木聚糖酶的酶促反应时间、最适反应pH、最适反应温度... 试验对市售的固体木聚糖酶进行Sephadex G-100葡聚糖凝胶过滤层析纯化试验,SDS-PAGE显示获得约20 kDa木聚糖酶条带,割胶回收后通过质谱鉴定木聚糖酶为来自哈茨木霉的木聚糖酶,然后对木聚糖酶的酶促反应时间、最适反应pH、最适反应温度、pH稳定性和温度稳定性进行研究。结果表明,木聚糖酶的最适反应时间为6 min、最适反应pH为5.0、最适反应温度为55℃及半失活温度为55℃。 展开更多
关键词 木聚糖酶 纯化 鉴定 酶学性质
普鲁兰酶氮端氨基酸的截短对其酶学性质的影响 被引量:1
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作者 王明道 聂慧慧 +3 位作者 王红阳 邢岩 焦国宝 邱立友 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1101-1108,共8页
淀粉是丰富的生物质资源,已被广泛地应用到食品、酿酒、医药等各个相关的领域。普鲁兰酶(pullulanase,pul A,EC 3.2.1.41)作为淀粉脱支酶,可以水解淀粉中的α^(-1),6糖苷键,最大限度地降解淀粉原料,提高淀粉利用率。因此,寻找一条... 淀粉是丰富的生物质资源,已被广泛地应用到食品、酿酒、医药等各个相关的领域。普鲁兰酶(pullulanase,pul A,EC 3.2.1.41)作为淀粉脱支酶,可以水解淀粉中的α^(-1),6糖苷键,最大限度地降解淀粉原料,提高淀粉利用率。因此,寻找一条国产化的道路开发我国自己的普鲁兰酶,具有长远的意义。课题组前期从淀粉厂附近的土壤中筛到一株普鲁兰酶的高产菌株变栖克雷伯氏菌(Klebiella variicola)strain 7,克隆获得pul A基因(Gen Bank登录号:KJ146839.1)后在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中异源表达。为提高该蛋白的表达量和分泌效率,同时改善普鲁兰酶的性质,本研究利用基因工程的手段构建了普鲁兰酶去信号肽突变体M1和氮端31个氨基酸的截短突变体M2,结果显示M1和M2最适温度均为45℃,二者的最适p H分别是6.0和5.6;M2的半衰期是37 min,是M1的6.17倍;M2的比酶活是582.204 U/mg,是M1的1.6倍。动力学分析显示,以普鲁兰糖为底物时,M2的V_(max)、K_(cat)、K_m和K_(cat)/K_m分别为0.001 3μmo L/(m L·s)^(-1)、191.80 s(-1)、0.30 mg/m L、693.30,与M1相比,M2的底物亲和能力增加,同时催化效率是M1的2倍。本研究通过普鲁兰酶氮端氨基酸的截短,为提高酶的比酶活和半衰期提供了新的方法和思路。 展开更多
关键词 普鲁兰酶 信号肽 N端氨基酸 酶学性质 截短
克雷伯氏菌菌株Z-13普鲁兰酶基因的克隆及酶学性质研究 被引量:1
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作者 张雨杭 聂慧慧 +2 位作者 焦国宝 邱立友 王明道 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1632-1638,共7页
普鲁兰酶(pullulanase,EC 3.2.1.41)作为淀粉脱支酶,广泛应用于食品工业、制药业等领域。不断开发普鲁兰酶资源,对我国农产品深加工及淀粉工业节省成本十分必要。实验室前期已从淀粉加工厂附近土壤中筛选出一株普鲁兰酶高效降解菌株Z... 普鲁兰酶(pullulanase,EC 3.2.1.41)作为淀粉脱支酶,广泛应用于食品工业、制药业等领域。不断开发普鲁兰酶资源,对我国农产品深加工及淀粉工业节省成本十分必要。实验室前期已从淀粉加工厂附近土壤中筛选出一株普鲁兰酶高效降解菌株Z-13。本研究对其发酵液中的普鲁兰酶进行了纯化及酶学性质研究,并成功克隆出克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)strain Z-13的普鲁兰酶基因(登录号:KJ146839)。纯化后蛋白分子量约为120 k D,比活力达到51.15 U/mg。薄层层析(thin layer chromatography,TLC)结果表明,该酶水解普鲁兰糖的产物为麦芽三糖。该酶最适温度45℃,最适pH值为5.6,稳定性较好。将终浓度为5 mmol/L的金属离子加入酶活测定体系,测定酶活力,结果显示,Na^+、Ca^2+,和Zn^2+可促进该酶酶活,而Al^3+、Co^2+、Cu^2+、Mg^2+、K^+、Mn^2+和Fe^2+对其有抑制作用,其中Cu^2+存在的情况下,该酶的活性被完全抑制。序列比对结果表明,该普鲁兰酶基因所编码蛋白为Ⅰ型普鲁兰酶,属GH13家族。本研究通过对该普鲁兰酶进行纯化、酶学性质研究及基因克隆,为该酶进一步的异源表达、分子改造提供基础,且具有一定的工业应用价值。 展开更多
关键词 普鲁兰酶 克雷伯氏菌 蛋白纯化 基因克隆
XIP木聚糖酶抑制蛋白对不同家族木聚糖酶的抑制作用 预览
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作者 刘新育 王梦迪 +2 位作者 焦雪苗 郜艳敏 陈红歌 《饲料工业》 北大核心 2015年第8期43-46,共4页
研究利用毕赤酵母GS115表达的小麦木聚糖酶抑制蛋白,探索了该XIP抑制蛋白对GH10和GH11家族木聚糖酶的抑制作用。结果显示,该抑制蛋白分子量约为37 k Da,高于氨基酸序列计算所得分子量30.2 k Da,可能是由于该蛋白发生了糖基化作用。该蛋... 研究利用毕赤酵母GS115表达的小麦木聚糖酶抑制蛋白,探索了该XIP抑制蛋白对GH10和GH11家族木聚糖酶的抑制作用。结果显示,该抑制蛋白分子量约为37 k Da,高于氨基酸序列计算所得分子量30.2 k Da,可能是由于该蛋白发生了糖基化作用。该蛋白分别作用于黑曲霉GH10木聚糖酶和哈茨木霉GH11木聚糖酶,得到最适抑制比例分别为1.2??1和8??1,最适抑制时间分别是50 min和30 min,最适抑制p H值均为6.0,最适作用温度均是40℃。 展开更多
关键词 XIP木聚糖酶抑制蛋白 木聚糖酶 抑制性质
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一株产普鲁兰酶细菌的分离鉴定及其发酵条件优化 预览 被引量:1
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作者 王明道 郭双 +3 位作者 张雨杭 孙利鹏 时延光 邱立友 《信阳师范学院学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2014年第4期569-573,共5页
从淀粉加工厂附近土壤中筛选得到一株普鲁兰酶高产菌株,编号为Z-13,其初始酶活达到5.7 U/mL.通过对此菌株的16S rDNA比对,以及生理生化鉴定,鉴定此菌株为克雷伯氏菌(Klebsiella variicola),通过发酵条件优化,确定最佳发酵产... 从淀粉加工厂附近土壤中筛选得到一株普鲁兰酶高产菌株,编号为Z-13,其初始酶活达到5.7 U/mL.通过对此菌株的16S rDNA比对,以及生理生化鉴定,鉴定此菌株为克雷伯氏菌(Klebsiella variicola),通过发酵条件优化,确定最佳发酵产酶条件为:玉米淀粉1.5%,蛋白胨2.0%,KH2 PO40.05%,MgSO4·7H2 O 0.01%.装液量为70 L/250 L,培养基最初pH为6.0,发酵温度30℃,摇床转速200 r/min,发酵时间48 h,优化后菌株产普鲁兰酶的酶活高达67.8 U/mL,是优化前菌株产普鲁兰酶活性的11.89倍. 展开更多
关键词 普鲁兰酶 筛选 鉴定 产酶条件优化
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不同作物茬口微生物数量的变化对烟草品质的影响 预览 被引量:5
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作者 王明道 刘红记 +2 位作者 时延光 贾新成 刘国顺 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第18期4419-4422,共4页
对不同作物茬口烟草的不同生长期根际土壤微生物数量进行分析,研究其对烟草品质的影响。结果表明,不同作物茬口处理的烟草根际土壤中细菌、放线菌、真菌的数量均在烟叶旺长期和成熟期有大幅度升高,而后下降。白菜茬、红薯茬和芝麻茬为... 对不同作物茬口烟草的不同生长期根际土壤微生物数量进行分析,研究其对烟草品质的影响。结果表明,不同作物茬口处理的烟草根际土壤中细菌、放线菌、真菌的数量均在烟叶旺长期和成熟期有大幅度升高,而后下降。白菜茬、红薯茬和芝麻茬为细菌性土壤,而玉米茬偏向于真菌性土壤。真菌性土壤的玉米茬处理的烟叶品质相对较差,细菌性土壤的红薯茬和芝麻茬处理的烟叶品质相对较好,细菌性土壤有利于栽培出良好品质的烟草。 展开更多
关键词 烟草 作物茬口 微生物 品质
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城市剩余污泥对平菇菌丝生长的影响 预览
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作者 高玉千 赵鹏娟 +4 位作者 李凤娟 张世敏 赵继红 吴坤 徐淑霞 《北方园艺》 CAS 北大核心 2012年第12期 180-181,共2页
采取平板培养法,研究了城市剩余污泥对平菇菌丝生长的影响。结果表明:100 mL培养液中含有20 g污泥和40 mL PDL有利于平菇菌丝的生长;城市剩余污泥可以为平菇菌丝生长提供所需的碳源和/或氮源,为实现污泥的资源化利用提供一条新的路径。
关键词 城市剩余污泥 平菇 菌丝
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黄孢原毛平革菌在城市剩余污泥中的培养条件优化研究 被引量:2
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作者 高玉千 续钊 +4 位作者 李凤娟 徐淑霞 张世敏 赵继红 吴坤 《安全与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 84-87,共4页
城市剩余污泥中含有一定的营养物质,可作为微生物的培养基。以黄孢原毛平革菌为对象,从剩余污泥和马铃薯葡萄糖液体培养基(PDL)配比、接种量、摇床转速、培养温度和时间等方面进行试验研究。结果表明:在100mL培养体系中含30g剩余污泥... 城市剩余污泥中含有一定的营养物质,可作为微生物的培养基。以黄孢原毛平革菌为对象,从剩余污泥和马铃薯葡萄糖液体培养基(PDL)配比、接种量、摇床转速、培养温度和时间等方面进行试验研究。结果表明:在100mL培养体系中含30g剩余污泥、40mLPDL或3g葡萄糖(pH=6.5),接种1 mL含107mL-1黄孢原毛平革菌的孢子悬液,温度为28℃,转速为150 r/min,培养84 h,得到黄孢原毛平革菌生物量可达3.3 g,剩余活性污泥的生物学转化率为30%~50%。城市剩余污泥可以作为黄孢原毛平革菌生长的培养基,从而实现污泥的无害化和资源化的最终目标。 展开更多
关键词 微生物学 黄孢原毛平革菌 城市剩余污泥
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