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鸡细小病毒和鸡新城疫病毒双重PCR检测方法的建立 预览
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作者 奉彬 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 范晴 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 王盛 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期1-5,共5页
旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PC... 旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法。结果表明,建立的双重PCR同时扩增出687 bp ChPV和453 bp NDV片段,对ChPV与NDV的敏感性分别达到64 fg和25 fg,但对其他对照组病原体均无扩增,对ChPV与NDV混合感染的临床病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果相符。说明建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法可用于临床上两种病毒混合感染的快速诊断。 展开更多
关键词 鸡细小病毒 鸡新城疫病毒 双重PCR 特异性 敏感性
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牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立 预览
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作者 谢志勤 谢芝勋 +10 位作者 范晴 张民秀 罗思思 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 王盛 谢丽基 邓显文 刘加波 庞耀珊 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期20-25,共6页
为建立基于TaqMan探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的TaqMan探针,1对BVDV的特... 为建立基于TaqMan探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的TaqMan探针,1对BVDV的特异性引物和1条ROX标记的TaqMan探针,建立双重荧光定量PCR检测IBRV和BVDV的方法。对建立的检测方法进行特异性和敏感性测定,并用临床样品进行检测验证。特异性试验结果显示,该方法检测参试的IBRV毒株,在波长530μm(FAM)时收集到特异性荧光信号曲线,检测参试的BVDV毒株,在610μm(ROX)时收集到特异性荧光信号曲线,无交叉信号出现,对照的毒株无论是在530μm(FAM),还是610μm(ROX)处,均无荧光信号曲线出现,方法的特异性好;敏感性试验结果显示,该双重荧光定量PCR可检测到100个拷贝的IBRV和BVDV质粒DNA模板;临床样品检测结果表明,对保存在-70℃的127份牛病料样品核酸进行检测,IBRV阳性12份,BVDV阳性26份,IBRV和BVDV同为阳性2份,为混合感染,检测的拷贝数分别为6.24×105和6.32×104拷贝/μL。阳性样品经序列比对分析,分别与IBRV和BVDV的序列100%同源。建立的双重实时荧光定量PCR方法检测IBRV和BVDV具有特异、敏感等优点,可用于临床样品的鉴别检测。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 双重荧光定量PCR TAQMAN探针 检测
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2016—2018年广西猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查和PRRSV ORF5基因的遗传变异分析
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作者 刘磊 卢冰霞 +12 位作者 段群棚 何颖 秦毅斌 李斌 陈忠伟 周英宁 梁家幸 苏乾莲 蒋冬福 闭炳芬 卢敬专 杨思仪 赵武 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第20期90-94,97共6页
为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异情况,试验应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对2016—2018年广西14个地区规模化猪场的1564份主要脏器进行了PRRSV检测,选取部分阳性样品进行ORF5基因的扩增并进行序列... 为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异情况,试验应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对2016—2018年广西14个地区规模化猪场的1564份主要脏器进行了PRRSV检测,选取部分阳性样品进行ORF5基因的扩增并进行序列分析。结果表明:共检测出PRRSV阳性样品467份,阳性率为29.9%。在广西14个地区规模化猪场送检的样品中均能检测到PRRSV。从年份上看,2016年的PRRSV阳性率最高,为43.9%;2017年为26.9%;2018年最低,为23.7%。获得的25条PRRSV ORF5基因序列中有1株与NADC30株同源性较高,1株与GM2株同源性较高,其余23株均与高致病性PRRSV同源性较高。在25株PRRSV中有21株与TJM、JXA1、HuN等高致病毒株亲缘关系较近,并位于同1个分支;2株处于经典株和变异株之间,分别形成2个分支;1株与NADC30株亲缘关系较近,位于同1个分支;1株与GM2株亲缘关系较近,位于同1个分支。PRRSV ORF5基因编码氨基酸序列分析结果表明,25个毒株均为毒力较强的野毒株。说明广西地区仍以高致病性PRRSV为主要流行毒株,但2018年新发现类NADC30毒株和类GM2毒株的流行。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 流行病学调查 ORF5 序列分析 遗传变异
H9亚型禽流感病毒HA蛋白B细胞抗原表位的预测 预览
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作者 张民秀 谢芝勋 +5 位作者 罗思思 谢丽基 谢志勤 刘加波 邓显文 曾婷婷 《养殖与饲料》 2019年第12期33-34,共2页
试验运用Clustalx 1.8进行多序列比对,运用Kolaskar&Tongaonkar antigenicity和Bepipred linear Epitope Prediction算法对模板毒株HA蛋白的线性抗原表位进行预测。综合参数预测结果得到4个抗原表位,分别是位于HA蛋白的第26-39aa、1... 试验运用Clustalx 1.8进行多序列比对,运用Kolaskar&Tongaonkar antigenicity和Bepipred linear Epitope Prediction算法对模板毒株HA蛋白的线性抗原表位进行预测。综合参数预测结果得到4个抗原表位,分别是位于HA蛋白的第26-39aa、166-179aa、225-238aa和490-499aa,为H9-AIV表位疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 H9亚型AIV HA蛋白 B细胞抗原表位
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巴马小型猪内源性反转录病毒感染对HEK293细胞周期调控相关基因mRNA表达的影响 被引量:1
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作者 刘金凤 唐海波 +5 位作者 马玲 钟华 白安斌 陈凤莲 覃绍敏 吴健敏 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期433-441,共9页
以巴马小型猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)感染HEK293细胞模型(PERV-BMHEK293)为研究对象,分析PERV整合对HEK293细胞活性的影响,同时建立7种与人细胞增殖和周期调控密切相关基因的实时荧光定量PCR(q-PCR... 以巴马小型猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)感染HEK293细胞模型(PERV-BMHEK293)为研究对象,分析PERV整合对HEK293细胞活性的影响,同时建立7种与人细胞增殖和周期调控密切相关基因的实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法,并对细胞感染模型中7个基因的mRNA表达情况进行分析。细胞活力分析结果显示,随着培养代次及培养时间增加,相对于母源HEK293细胞PERV感染模型的细胞活力下降;qPCR检测方法建立结果显示,所构建的cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、c-myc、p53、p16基因检测方法检测各基因在1.0×10^1-1.0×10^9 copies/μL反应范围内有很好的线性关系,扩增产物熔解曲线只出现特异性单峰,各组内变异系数在0.31%-2.01%之间,组间变异系数在0.46%-2.19%之间,重复性好,可稳定地用于相关基因mRNA的定量检测。用建立的q-PCR检测方法对PERV感染模型进行细胞周期调控相关基因mRNA表达分析,结果显示,与母源细胞相比,模型细胞cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、p53和p16基因的mRNA表达无明显变化,原癌基因c-myc基因表达下调,提示PERV感染可能抑制c-myc基因表达。该研究结果可为评价巴马小型猪来源PERV在人-猪异种移植中生物安全性提供参考。 展开更多
关键词 猪内源性反转录病毒 细胞模型 荧光定量PCR 基因表达分析
禽呼肠病毒在鸡胚成纤维细胞系中的增殖规律 预览
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作者 沈文康 谢芝勋 +10 位作者 王盛 黄莉 谢丽基 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 张民秀 罗思思 范晴 谢志勤 邓显文 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期30-33,共4页
为研究禽呼肠病毒(ARV)在鸡胚成纤维细胞(DF1)上的增殖规律,将ARV S1133株接种至DF1细胞,连续传代3次后观察细胞病变(CPE),RT-PCR检测病毒核酸。结果显示,ARV S1133株对DF1细胞有很好的亲嗜性,并出现典型的CPE。按照Reed-Meunch方法测量... 为研究禽呼肠病毒(ARV)在鸡胚成纤维细胞(DF1)上的增殖规律,将ARV S1133株接种至DF1细胞,连续传代3次后观察细胞病变(CPE),RT-PCR检测病毒核酸。结果显示,ARV S1133株对DF1细胞有很好的亲嗜性,并出现典型的CPE。按照Reed-Meunch方法测量7个时间点的TCID 50,并绘制生长曲线。结果显示,ARV感染DF1细胞后的0 h~12 h为静止期,12 h~48 h为快速增长期,并在48 h达到最大的病毒效价,TCID 50为10-8.9/0.1 mL,为进一步研究ARV的致病机理,以及在DF1上研制禽呼肠病毒细胞灭活苗提供参考。 展开更多
关键词 禽呼肠病毒 鸡胚成纤维细胞 病毒效价 一步生长曲线
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鸡滑液囊支原体和禽呼肠病毒的实时荧光定量PCR快速检测 预览 被引量:1
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作者 黄莉 谢芝勋 +6 位作者 王盛 邓显文 谢志勤 谢丽基 曾婷婷 黄娇玲 张艳芳 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期1-6,共6页
根据禽呼肠病毒aC和鸡滑液囊支原体vlhA基因的保守序列,分别设计了特异性引物和不同荧光基团标记的TaqMan探针,优化反应条件,建立能同时鉴别诊断鸡滑液囊支原体和禽呼肠病毒(ARV)的检测方法。结果表明,该方法能够特异地鉴别检测AR... 根据禽呼肠病毒aC和鸡滑液囊支原体vlhA基因的保守序列,分别设计了特异性引物和不同荧光基团标记的TaqMan探针,优化反应条件,建立能同时鉴别诊断鸡滑液囊支原体和禽呼肠病毒(ARV)的检测方法。结果表明,该方法能够特异地鉴别检测ARV和Ms,与其他病原体无交叉反应,检测敏感性均可达到2×10拷贝数。此外,该方法抗干扰能力强,具有良好而稳定的准确性,临床样品检出率与传统检测方法相符。因此,该基于TaqMan探针建立的荧光定量PCR具有特异、灵敏、准确、实时、重复性好等优点,不仅可用于鸡群中这两种病原体的鉴别检测和疫病监测,也有利于这两种病原体感染的有效防控。 展开更多
关键词 荧光定量PCR TAQMAN 鸡滑液囊支原体 禽呼肠病毒
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竹鼠细小病毒PCR检测方法的建立
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作者 唐海波 姜佳佳 +3 位作者 陈凤莲 白安斌 刘金凤 吴健敏 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第8期184-186,共3页
为了建立竹鼠细小病毒PCR检测方法,试验通过对竹鼠细小病毒及其同属各病毒基因序列进行比对分析,设计了针对竹鼠细小病毒NS1基因片段的一对特异性引物,经优化建立了竹鼠细小病毒PCR检测方法。结果表明:在56℃退火温度条件下,能得到理... 为了建立竹鼠细小病毒PCR检测方法,试验通过对竹鼠细小病毒及其同属各病毒基因序列进行比对分析,设计了针对竹鼠细小病毒NS1基因片段的一对特异性引物,经优化建立了竹鼠细小病毒PCR检测方法。结果表明:在56℃退火温度条件下,能得到理想的目的片段。经琼脂糖凝胶电泳,该方法能特异性地扩增竹鼠细小病毒,不能扩增竹鼠圆环病毒、竹鼠内源性反转录病毒、竹鼠乳酸脱氢酶增高病毒;检验敏感性高,灵敏度可达125 pg/μL。 展开更多
关键词 竹鼠 特种动物 细小病毒 检测方法 PCR
H9N2亚型禽流感病毒M2e和HA2串联蛋白在原核系统中的表达
9
作者 张民秀 谢芝勋 +6 位作者 黄莉 谢志勤 刘加波 谢丽基 邓显文 罗思思 黄娇玲 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第3期1203-1209,共7页
构建H9N2亚型禽流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)和HA蛋白颈部区(HA2)串联体,并在原核系统中进行该重组蛋白的表达,以便研究重组蛋白的反应原性。以含有全长H9N2亚型AIVHA基因的质粒为模板,经过PCR扩增得到HA2基因;利用BglⅡ和BamHⅠ... 构建H9N2亚型禽流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)和HA蛋白颈部区(HA2)串联体,并在原核系统中进行该重组蛋白的表达,以便研究重组蛋白的反应原性。以含有全长H9N2亚型AIVHA基因的质粒为模板,经过PCR扩增得到HA2基因;利用BglⅡ和BamHⅠ互为同尾酶的链接方法,构建3个拷贝M2e和HA2基因的串联体,并将串联体连接入原核表达载体pGEX-4T-1构成3M2e+HA2-pGEX重组质粒;同时构建单独表达HA2蛋白的原核表达重组质粒HA2-pGEX;DNA测序鉴定这两种重组质粒正确后,转化至表达宿主菌中;重组蛋白经不同IPTG浓度进行诱导;SDS—PAGE电泳鉴定重组蛋白大小,并进行可溶性分析和纯化;采用Western blotting法对两种重组蛋白的反应原性进行分析。结果显示,3M2e+HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白分别经终浓度为0.5mmol/L和0.25mmol/L的IPTG诱导,37℃培养4h时,表达量最高;3M2e+HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白大小分别为59.4ku和49.8ku;对重组蛋白进行可溶性分析显示,两种重组蛋白均以包涵体形式存在;Western blotting分析显示,3M2e+HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白与免疫H9N2禽流感病毒后获得的阳性血清具有良好的特异性反应,这些结果为进一步研究HA2、3M2e+HA2蛋白的免疫原性和开发广谱H9N2亚型禽流感疫苗提供了理论依据。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 HA蛋白颈部区蛋白(HA2) 3M2e+HA2串联蛋白
H5亚型和N6亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立 预览 被引量:2
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作者 何莹 谢芝勋 +8 位作者 罗思思 李孟 谢志勤 谢丽基 黄莉 邓显文 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 《动物医学进展》 北大核心 2017年第3期1-4,共4页
为了建立一种快速、简便的H5亚型、N6亚型禽流感病毒(AIV)的检测方法,根据GenBank中H5亚型、N6亚型AIV的HA和NA基因保守序列,分别设计了2对特异性引物,通过优化条件,建立了H5亚型和N6亚型AIV二重RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,... 为了建立一种快速、简便的H5亚型、N6亚型禽流感病毒(AIV)的检测方法,根据GenBank中H5亚型、N6亚型AIV的HA和NA基因保守序列,分别设计了2对特异性引物,通过优化条件,建立了H5亚型和N6亚型AIV二重RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法对H5N6亚型AIV特异性扩增出418bp和251bp目的片段,对H5Ny(y≠6)亚型AIV扩增出418bp目的片段,对HxN6(x≠5)亚型AIV扩增出251bp目的片段,对其他亚型和常见的禽病病原体均未扩增出目的片段;敏感性结果显示,该方法对H5亚型和N6亚型最低检测限为1.59×10^-5ng/μL。本研究建立的H5亚型和N6亚型AIV检测方法,具有特异性强,灵敏度高的特点,为H5亚型和N6亚型AIV临床检测以及防控提供了有效方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5亚型 N6亚型 二重逆转录-聚合酶链反应
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小鼠精子透明质酸酶SPAM1在受精过程中的功能研究 预览
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作者 周崇 黄莉 +2 位作者 石德顺 蒋建荣 马场忠 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期652-659,共8页
旨在研究小鼠精子透明质酸酶SPAM1(Sperm adhesion molecule 1)对受精过程中精子/卵丘互作的影响,并初步探讨其可能的作用机制。本研究抽提小鼠尾尖基因组,利用PCR法检测小鼠Spam基因型;筛选的野生型(WT)和Spam1敲除(KO)小鼠,提... 旨在研究小鼠精子透明质酸酶SPAM1(Sperm adhesion molecule 1)对受精过程中精子/卵丘互作的影响,并初步探讨其可能的作用机制。本研究抽提小鼠尾尖基因组,利用PCR法检测小鼠Spam基因型;筛选的野生型(WT)和Spam1敲除(KO)小鼠,提取附睾尾部精子蛋白进行Western blot和酶活性检测;经TYH培养液2h获能后,分别对精子的运动性、穿透和分散卵丘细胞能力及体外受精(IVF)进行统计分析。结果表明,KO小鼠精子中未检测到SPAM1蛋白,透明质酸酶活性也极显著低于WT小鼠(P〈0.01);而获能后精子运动性,在KO和WT小鼠之间差异不显著(P〉0.05);与WT相比,KO小鼠精子缺失Spam1后,极显著地影响卵丘细胞层基质中精子顶体反应的发生比率(P〈0.01),导致精子穿透卵丘细胞层的能力极显著降低(P〈0.01),仅有少数精子能够到达卵子透明带表面,大量精子极易黏附于卵丘细胞层表面或外部边缘(P〈0.01);此外,KO小鼠精子IVF 2h的卵丘细胞分散和受精率均呈现显著延迟(P〈0.05)。综上表明,小鼠精子透明质酸酶SPAM1与顶体反应相关联并影响精子/卵丘互作。揭示SPAM1在穿卵过程中除了具有降解透明质酸的作用外,还存在其他的非酶活性功能。 展开更多
关键词 SPAM1 精子/卵丘互作 顶体反应 精子 小鼠
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1例红颊竹鼠化脓性肺炎病原菌的分离鉴定
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作者 唐海波 陈凤莲 +5 位作者 白安斌 杨磊 刘金凤 霍孔林 陆晨阳 吴健敏 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第8期107-110,共4页
为确定南宁金陵镇某竹鼠养殖场发生竹鼠化脓性肺炎的原因,从发病竹鼠肺中分离得到可疑细菌,经形态观察、生理生化特性测定及16S rRNA序列分析,鉴定该分离菌为大肠杆菌,经小鼠回归试验证实该分离菌可致死小鼠。该菌16S rRNA与大肠杆菌(D... 为确定南宁金陵镇某竹鼠养殖场发生竹鼠化脓性肺炎的原因,从发病竹鼠肺中分离得到可疑细菌,经形态观察、生理生化特性测定及16S rRNA序列分析,鉴定该分离菌为大肠杆菌,经小鼠回归试验证实该分离菌可致死小鼠。该菌16S rRNA与大肠杆菌(DQ337503,FJ418574,KR189581)同源性高达100%。药敏试验显示对头孢克肟、卡那霉素、大观霉素、奈替米星、氟苯尼考和米诺环素等药物高度敏感,对氨苄西林、阿莫西林、亚胺培南、头孢唑啉、头孢氨苄、四环素、红霉素和克拉霉素等药物有抗性。结果表明:大肠杆菌是南宁金陵镇某竹鼠养殖竹鼠致死的病原菌。该菌的分离鉴定为其感染引起的传染病防治提供了试验依据。 展开更多
关键词 红颊竹鼠 化脓性肺炎 大肠杆菌 分离 鉴定
应用正交试验优化猪细小病毒N株在IBRS-2细胞转瓶培养(英文) 预览
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作者 卢冰霞 何颖 +10 位作者 赵武 梁家幸 段群棚 蒋冬福 卢敬专 闭炳芬 周英宁 秦毅斌 李斌 苏乾莲 陈忠伟 《农业科学与技术:英文版》 CAS 2017年第5期839-842,共4页
利用正交试验对猪细小病毒(PPV)N株在IBRS-2细胞转瓶培养中的培养条件进行优化,为PPV N株弱毒疫苗的大量培养工艺提供参考。设细胞培养液p H值(7.0、7.2和7.4)、接毒时间(0、24和48 h)、接毒剂量(0.10%、1.00%和10.00%)、收毒... 利用正交试验对猪细小病毒(PPV)N株在IBRS-2细胞转瓶培养中的培养条件进行优化,为PPV N株弱毒疫苗的大量培养工艺提供参考。设细胞培养液p H值(7.0、7.2和7.4)、接毒时间(0、24和48 h)、接毒剂量(0.10%、1.00%和10.00%)、收毒时间(48、72和96 h)等因子和水平。结果表明,PPV N株转瓶培养的最佳培养条件组合为细胞培养液p H值7.2,采用同步接毒,接毒剂量为0.10%,收毒时间为接毒后96 h。其中收毒时间是影响PPV N株毒价的最主要因素。 展开更多
关键词 猪细小病毒 转瓶培养 优化 正交试验
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应用正交试验优化猪细小病毒N株在IBRS-2细胞转瓶培养 预览 被引量:1
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作者 卢冰霞 何颖 +10 位作者 赵武 梁家幸 段群棚 蒋冬福 卢敬专 闭炳芬 周英宁 秦毅斌 李斌 苏乾莲 陈忠伟 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期470-473,共4页
利用正交试验对猪细小病毒(PPV)N株在IBRS-2细胞转瓶培养中的培养条件进行优化,为PPVN株弱毒疫苗的大量培养工艺提供参考。设细胞培养液pH值(7.0、7.2和7.4)、接毒时间(0、24和48h)、接毒剂量(0.10%、1.00%和10.oo%)... 利用正交试验对猪细小病毒(PPV)N株在IBRS-2细胞转瓶培养中的培养条件进行优化,为PPVN株弱毒疫苗的大量培养工艺提供参考。设细胞培养液pH值(7.0、7.2和7.4)、接毒时间(0、24和48h)、接毒剂量(0.10%、1.00%和10.oo%)、收毒时间(48、72和96h)等因子和水平。结果表明,PPVN株转瓶培养的最佳培养条件组合为细胞培养液pH值7.2,采用同步接毒,接毒剂量为0.10%,收毒时间为接毒后96h。其中收毒时间是影响PPVN株毒价的最主要因素。 展开更多
关键词 猪细小病毒 转瓶培养 优化 正交试验
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母猪饲料中分别添加酸化剂、益生菌、矿物质、中药的效果研究
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作者 蒋家霞 李晓玉 +5 位作者 陈忠伟 邬海蓉 覃珍珍 韩定角 林昌华 何颖 《饲料研究》 CAS 北大核心 2019年第2期26-31,共6页
试验旨在研究酸化剂、益生菌、矿物质和中草药4种添加剂对母猪的生产指标、血液生理生化指标和免疫指标的影响。随机选取150头临产母猪(产前30 d),分成5组,A组为空白对照组,B组为酸化剂组,C组为益生菌组,D组为矿物质组,E组为中药组,从... 试验旨在研究酸化剂、益生菌、矿物质和中草药4种添加剂对母猪的生产指标、血液生理生化指标和免疫指标的影响。随机选取150头临产母猪(产前30 d),分成5组,A组为空白对照组,B组为酸化剂组,C组为益生菌组,D组为矿物质组,E组为中药组,从母猪临产前30 d开始饲喂,试验期60 d,结合猪场常规生产指标测定结果来分析4种添加剂对母猪的作用效果。试验结果表明:对生产指标的影响,A组母猪平均掉膘厚极显著低于各添加组(P<0.01),与A组相比,E组有提高仔猪窝重的趋势,并提高了合格仔数,但差异不显著(P>0.05)。对血清生化指标的影响,B组TG含量极显著低于A组(P<0.01),A组TBIL含量极显著高于其他各组(P<0.01),C组AST活性极显著低于其他组(P<0.01),B、C组ALT活性极显著低于A组(P<0.01)。对免疫指标的影响,A组IgG含量极显著高于其他各组(P<0.01),A组IgM含量极显著高于B组(P<0.01)。4种添加剂对母猪血液生理生化指标和免疫指标无不良影响,均能显著降低TG含量,具有一定的利肝作用,但对提高母猪繁殖性能作用不明显。在妊娠和泌乳母猪饲粮中添加黄芪等中药饲料添加剂能够提高仔猪生长性能,建议阶段性添加。 展开更多
关键词 母猪 添加剂 生产性能 生理指标 生化指标 免疫指标
桃金娘根总多酚的超声提取及抗氧化活性研究 预览
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作者 银慧慧 刘伟 +5 位作者 赵武 杨武宁 孟菲 姜源明 覃振华 孙建华 《中国医药导报》 CAS 2019年第10期33-36,共4页
目的探讨桃金娘根总多酚的超声提取工艺条件及其抗氧化活性。方法采用单因素和正交实验,对桃金娘根总多酚的提取工艺进行优化;采用福林酚试剂法在紫外-可见分光光度计下对桃金娘根总多酚的吸光度进行测定,计算其提取得率。采用1,1-二苯... 目的探讨桃金娘根总多酚的超声提取工艺条件及其抗氧化活性。方法采用单因素和正交实验,对桃金娘根总多酚的提取工艺进行优化;采用福林酚试剂法在紫外-可见分光光度计下对桃金娘根总多酚的吸光度进行测定,计算其提取得率。采用1,1-二苯-2-苦基肼自由基(DPPH·)清除率和总抗氧化活性能力对桃金娘根总多酚的抗氧化活性进行评价。结果最佳提取工艺条件为乙醇浓度60%,料液比1∶40(g/mL),提取温度60℃,提取时间50 min,在此条件下提取得率达78.03 mg/g;桃金娘根总多酚的总抗氧化活性和DPPH·清除率均高于抗坏血酸。结论超声提取适用于桃金娘根总多酚的提取;桃金娘根总多酚为一种天然的抗氧化活性剂和自由基清除剂。 展开更多
关键词 桃金娘根 总多酚 超声提取 正交试验 抗氧化活性
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禽呼肠孤病毒σA蛋白在HEK293T细胞中的表达
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作者 任红玉 谢芝勋 +9 位作者 谢丽基 王盛 黄娇玲 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 张明秀 谢志勤 邓显文 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第14期59-62,共4页
为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARVS2基因序列(登录号为KF741763.1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA... 为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARVS2基因序列(登录号为KF741763.1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA基因的特异性序列,并将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组pMD18-T-σA表达质粒,再用限制性内切酶KpnⅠ和NotⅠ同时双酶切pMD18-T-σA和真核表达质粒pEF1α-HA,将胶回收的σA基因和pEF1α-HA进行连接,构建真核表达质粒pEF1α-HA-σA。真核表达质粒经菌落PCR、双酶切和测序验证正确后,将其转染HEK293T细胞,于24h后收取蛋白质,通过WesteRn-blot验证目的蛋白。结果表明:本试验成功克隆了ARVσA基因,构建了其真核表达质粒pEF1α-HA-σA,并在HEK293T细胞中表达。说明该蛋白可以在HEK293T细胞中准确表达。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σA基因 克隆 σA蛋白 真核表达质粒
禽呼肠孤病毒σA基因对鸡胚成纤维细胞天然免疫相关基因转录水平的调控影响
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作者 黄莉 谢芝勋 +9 位作者 谢丽基 王盛 黄娇玲 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 张民秀 邓显文 谢志勤 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期611-618,共8页
为了明确禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σA基因对宿主天然免疫应答的影响,本研究利用实时荧光定量PCR方法检测pCAGEN-σA转染鸡胚成纤维细胞(DF1)后,不同时间点(转染后第3、6、12、24和36小时)DF1细胞中天然免疫相关基因,包括Toll... 为了明确禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σA基因对宿主天然免疫应答的影响,本研究利用实时荧光定量PCR方法检测pCAGEN-σA转染鸡胚成纤维细胞(DF1)后,不同时间点(转染后第3、6、12、24和36小时)DF1细胞中天然免疫相关基因,包括Toll样受体(TLRs)、MDA5、MAVS、My D88、TRIF、IRF-3、IRF7、NF-κB、IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-8、IFITM3、Mx1和OASL等基因的转录水平变化。结果,与空载体转染细胞相比,pCAGEN-σA转染细胞中上述这些天然免疫基因的m RNA水平出现不同程度变化(P<0.05或P<0.01)。TLR3应对最快速,其m RNA水平在转染后第3小时和第6小时迅速上升,但9 h后逐渐下降;MDA5和TLR7的m RNA水平,则分别在转染后第6小时和第12小时开始显著升高,并分别在转染后第12小时和第36小时达到峰值(P<0.05或P<0.01);TLR15的m RNA水平整体变化不明显。My D88和MAVS的m RNA水平呈表达上调趋势;TRIF在转染后第6小时表达量迅速达到峰值(2.83倍),随后急速下降。NF-κB呈表达上调趋势;而IRF3/7的表达则被抑制。I型干扰素(IFN-α和IFN-β)呈现相似的表达模式,在转染后第6小时和第24小时表达量增加,其他时间点均为表达量下降;IL-6和IL-8则表达上调,分别在转染后第9小时和第6小时达到峰值(P<0.01)。IFITM3、Mx1、OASL的m RNA水平也显著升高,均在转染后第12小时达到峰值(P<0.01)。上述试验结果表明,在DF-1细胞中过表达σA基因,能显著引起天然免疫相关基因的表达的变化,为进一步阐释ARV的分子致病机制和免疫应答机理奠定了基础。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σA基因 天然免疫相关基因 鸡胚成纤维细胞
广西某健康鸡群Ⅰ群禽腺病毒的hexon蛋白loop 1基因遗传进化分析 预览
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作者 张民秀 谢芝勋 +7 位作者 谢志勤 高约 谢丽基 刘加波 邓显文 罗思思 张艳芳 曾婷婷 《中国兽药杂志》 2019年第8期8-14,共7页
为调查广西某规模化鸡场健康鸡群Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)的感染情况,于2017年11月-2018年12月采集不同日龄鸡群咽喉拭子和泄殖腔拭子样品4700份,对样品进行FAdV-Ⅰ检测和hexon蛋白loop 1基因扩增,应用LaserGene7.1和MEGA4.1软件对loop1... 为调查广西某规模化鸡场健康鸡群Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)的感染情况,于2017年11月-2018年12月采集不同日龄鸡群咽喉拭子和泄殖腔拭子样品4700份,对样品进行FAdV-Ⅰ检测和hexon蛋白loop 1基因扩增,应用LaserGene7.1和MEGA4.1软件对loop1基因序列进行核苷酸和遗传进化分析。结果显示,FAdV-Ⅰ的阳性检出率为8.72%;40~70日龄和71~99日龄鸡群阳性FAdV-Ⅰ的检出率分别为28.17%和22.91%;测序获得的38条loop 1基因序列分析表明该鸡场健康鸡群感染了5个不同种的FAdV-Ⅰ,其中26.32%的序列为A种(FAdV-A)、2.63%为B种(FAdV-B)、10.53%为C种(FAdV-C)、39.47%为D种(FAdV-D)和21.05%为E种(FAdV-E);遗传进化分析表明该鸡场健康鸡群主要感染的种为FAdV-D,血清2型(FAdV-2)为优势血清型,其次为A种的血清1型(FAdV-1)和E种的血清8a型(FAdV-8a)和8b型(FAdV-8b)。结果表明,40~70日龄健康鸡群的FAdV-Ⅰ的检出率最高,在健康鸡群中感染的FAdV-Ⅰ主要为FAdV-D种中的FAdV-2。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 loop1基因 遗传进化
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猫细小病毒广西分离株FPV-GX01全基因的克隆及遗传进化分析 被引量:1
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作者 张振江 唐海波 +4 位作者 刘金凤 王浩 秦树英 何怡柳 吴健敏 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第10期1250-1257,共8页
为了解广西地区猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征。笔者采集经胶体金检测FPV阳性的粪便样品接种FK81细胞,进行病毒分离及理化特性鉴定,同时利用PCR分段扩增病毒基因组DNA,并与国内外分离... 为了解广西地区猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征。笔者采集经胶体金检测FPV阳性的粪便样品接种FK81细胞,进行病毒分离及理化特性鉴定,同时利用PCR分段扩增病毒基因组DNA,并与国内外分离株进行同源性及遗传进化比较分析。结果显示,分离株在FK81细胞上盲传3代后出现CPE,猪红细胞血凝价达1∶1 024,第5代病毒TCID50测定为10-5.2/0.1 m L,该毒株对热、酸、氯仿及乙醚有较强的抵抗力,将分离株命名为FPV-GX01。全基因测序结果表明,分离株基因组为4 901 bp,与2007年我国猫源细小病毒株FPV-XJ1同源性高达99.0%,属同一分支。氨基酸位点分析显示,FPV-GX01株VP2蛋白功能较少发生突变,与犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)氨基酸位点存在宿主差异;FPV-GX01 NS1蛋白序列上没有VP2蛋白稳定,第619位异亮氨酸突变成苯丙氨酸。广西地区分离的猫细小病毒也在不断发生遗传变异进化,本研究对该地区猫细小病毒的进化特征提供了一定的参考。 展开更多
关键词 猫细小病毒 分离鉴定 全基因组 生物学特性
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