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柔嫩艾美耳球虫SSADH基因的克隆原核表达与序列分析 被引量:1
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作者 霍晨阳 廖申权 +7 位作者 戚南山 李娟 吴彩艳 吕敏娜 林栩慧 胡俊菁 孙铭飞 李国清 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第9期1131-1138,共8页
为研究柔嫩艾美耳球虫琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)的生物学功能,参考已公布的柔嫩艾美耳球虫SSADH(EtSSADH)的基因序列设计特异性引物,运用RT—PCR方法扩增EtSSADH基因序列,将扩增产物克隆入pGEX-4T-1载体进行诱导表达。同时,利用... 为研究柔嫩艾美耳球虫琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)的生物学功能,参考已公布的柔嫩艾美耳球虫SSADH(EtSSADH)的基因序列设计特异性引物,运用RT—PCR方法扩增EtSSADH基因序列,将扩增产物克隆入pGEX-4T-1载体进行诱导表达。同时,利用在线软件对该基因编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,EtSSADH基因的ORF序列长1896bp,编码631个氨基酸;该编码蛋白主要定位于线粒体,不含信号肽,无跨膜结构域;将EtSSADH与不同物种SSADH氨基酸序列进行比对,发现该蛋白的氨基酸序列之间具有较强的保守性。诱导表达后获得分子质量约91.18ku的重组蛋白。EtSSADH基因的成功克隆与表达为该酶的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 琥珀酸半醛脱氢酶 基因克隆 原核表达 序列分析
母源抗体对不同猪圆环病毒2型疫苗的免疫效果影响 预览
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作者 庄汝柏 李洪 +4 位作者 黄元 陈晶 陈锦良 赵翠玲 黄忠 《广东畜牧兽医科技》 2018年第6期32-34,共3页
为了田间评估母源抗体对猪圆环病毒2型疫苗的影响,将14日龄仔猪分成8组分别进行试验,接种四种不同类型的市售猪圆环病毒2型疫苗,应用ELISA检测血清抗体等方法评价免疫效果。结果为:14日龄仔猪猪圆环疫苗抗体的S/P值为1.98~2.08,经F检验... 为了田间评估母源抗体对猪圆环病毒2型疫苗的影响,将14日龄仔猪分成8组分别进行试验,接种四种不同类型的市售猪圆环病毒2型疫苗,应用ELISA检测血清抗体等方法评价免疫效果。结果为:14日龄仔猪猪圆环疫苗抗体的S/P值为1.98~2.08,经F检验各组间无显著性差异;38和68日龄为1.67~1.8和0.99~1.24;134日龄为1.4~2.0,经检验各疫苗免疫组间无显著差异。试验表明仔猪在较高圆环母源抗体下免疫不同类型猪圆环病毒2型疫苗后至120日龄内均能保持较高的抗体水平。但不同疫苗的成活率和增重效果则有所差异。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 疫苗 抗体
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鸭坦布苏病毒JM株E蛋白的截断表达及间接ELISA方法的建立 预览 被引量:1
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作者 董嘉文 李林林 +4 位作者 孙敏华 张建峰 邝瑞欢 胡奇林 张春红 《中国动物传染病学报》 北大核心 2017年第1期12-18,共7页
本研究利用RT-PCR扩增鸭坦布苏病毒(DuckTembusuvirus,DTMUV)JM株E基因截断片段(822bp),并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),成功构建了重组质粒pET32a-E。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达。Westernblot... 本研究利用RT-PCR扩增鸭坦布苏病毒(DuckTembusuvirus,DTMUV)JM株E基因截断片段(822bp),并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),成功构建了重组质粒pET32a-E。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达。Westernblot分析表明,重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。将纯化好的DTMUVE蛋白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53%和9.73%。用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,两者的阳性符合率为86.67%,阴性符合率为100%。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 JM株 E蛋白 截断表达 ELISA
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蓝舌病病毒7型毒株的分离与分子鉴定 预览 被引量:4
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作者 吕敏娜 杨恒 +8 位作者 孙铭飞 李娟 林栩慧 张健騑 廖申权 戚南山 吴彩艳 李华春 陈琴苓 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1281-1287,共7页
为监测广东省蓝舌病流行状况,2014年从广东省某一奶牛场采集血液样品,检测虫媒病病原,对经RTPCR检测蓝舌病病毒核酸阳性的样品进行病毒分离并鉴定。经鸡胚静脉接种后取肝,研磨后离心取上清转接C6/36细胞和BHK-21细胞,出现CPE,RT-PCR检... 为监测广东省蓝舌病流行状况,2014年从广东省某一奶牛场采集血液样品,检测虫媒病病原,对经RTPCR检测蓝舌病病毒核酸阳性的样品进行病毒分离并鉴定。经鸡胚静脉接种后取肝,研磨后离心取上清转接C6/36细胞和BHK-21细胞,出现CPE,RT-PCR检测蓝舌病病毒的VP7基因并进行序列比对,电镜观察病毒粒子,证实分离到蓝舌病病毒,命名为GD/ST2014。进一步扩增VP2基因,进行系统发育树分析,以及血清中和试验,表明此分离株为血清型7型。这是国内首次报道牛源蓝舌病病毒血清型7型的分离鉴定。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 分离 鉴定 血清型 序列分析
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鸡球虫入侵HCT-8细胞影响因素的探讨 被引量:1
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作者 王祯 吴彩艳 +6 位作者 李娟 林栩慧 廖申权 戚南山 吕敏娜 孙铭飞 李国清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期507-511,共5页
采用HCT-8细胞培养柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella),在24孔细胞培养板上,以Real-time PCR方法评价子孢子最适接种剂量、培养基种类、培养基p H值及血清浓度对鸡球虫子孢子入侵率的影响。结果显示,鸡球虫在体外培养条件下,子孢子接种... 采用HCT-8细胞培养柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella),在24孔细胞培养板上,以Real-time PCR方法评价子孢子最适接种剂量、培养基种类、培养基p H值及血清浓度对鸡球虫子孢子入侵率的影响。结果显示,鸡球虫在体外培养条件下,子孢子接种剂量为3×10^5/孔时入侵达到饱和,当培养基为RPMI 1640且pH值为6.5时子孢子的入侵率最高,血清浓度为10 m L/L时最有利于子孢子入侵。本试验优化了鸡球虫入侵HCT-8细胞的条件,为鸡球虫入侵机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人结肠癌细胞 柔嫩艾美耳球虫 实时定量PCR 入侵
短肽型肠内营养制剂对肠黏膜炎大鼠炎症反应和免疫功能的影响 被引量:6
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作者 涂杜 徐志宏 +2 位作者 邓媛元 张名位 张瑞芬 《中华临床营养杂志》 CAS CSCD 2015年第1期41-47,共7页
目的探讨短肽型肠内营养制剂(PBEN)对肠黏膜炎大鼠机体炎症反应和免疫功能的影响。方法将48只SD雄性大鼠随机分为6组,每组8只:基础饲料组(BFG)、短肽型肠内营养制剂组(PBENG)、整蛋白型肠内营养制剂组(IPENG)、甲氨蝶呤(MTX... 目的探讨短肽型肠内营养制剂(PBEN)对肠黏膜炎大鼠机体炎症反应和免疫功能的影响。方法将48只SD雄性大鼠随机分为6组,每组8只:基础饲料组(BFG)、短肽型肠内营养制剂组(PBENG)、整蛋白型肠内营养制剂组(IPENG)、甲氨蝶呤(MTX)+基础饲料组(MTX+BFG)、MTX+短肽型肠内营养制剂组(MTX+PBENG)和MTX+整蛋白型肠内营养制剂组(MTX+IPENG)。在第0天和第6天,MTX+BFG、MTX+PBENG和MTX+IPENG分别腹腔注射10mg/kgMTX,造成大鼠肠道持续损伤。从第1天开始,BFG和MTX+BFG饲喂基础饲料,PBENG和MTX+PBENG饲喂PBEN,IPENG和MTX+IPENG饲喂整蛋白型肠内营养制剂(IPEN),每组大鼠每天按1.80kJ/g给予膳食。在第11天处死全部大鼠,HE染色观察小肠组织病理学变化,比色法测定小肠组织中髓过氧化物酶(MPO)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活力以及一氧化氮(NO)含量、胸腺指数和脾腺指数,ELISA方法检测血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM。结果正常大鼠进食基础饲料或不同营养制剂后各指标间差异无统计学意义。MTX造模导致了大鼠肠黏膜严重损伤,MTX+BFG各项指标与BFG之间差异有统计学意义(均P〈0.05)。给予PBEN后,MTX+PBENG的小肠损伤评分(Chiu评分,2.3±0.69)以及小肠组织中MPO[(2.30±0.42)U/g组织]、iNOS活力[(0.37±0.06)U/mg蛋白]较MTX+BFG大鼠[2.96±0.75、(2.98±0.23)U/g组织、(0.44±0.10)U/mg蛋白]显著降低(P=0.003,P=0.040,P=0.030);MTX+PBENG血清IgG[(7.45±0.67)g/L]和IgA[(0.46±0.03)g/L]均较MTX+BFG[(6.57±0.48)g/L与(0.42±0.04)g/L]明显改善(P=0.015,P=0.021);而NO和IgM含量差异无统计学意义(P=0.597,P=0.160)。MTX+IPENG与MTX+BFG各指标间差异均无统计学意义(均P〉0.05)。结论PBEN可以明显减轻肠黏膜炎大鼠 展开更多
关键词 短肽 肠内营养制剂 炎症 免疫
塞尼卡病毒与口蹄疫病毒双重RT-PCR鉴别检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 刘涛 黄元 +7 位作者 陈锦良 向华 肖少波 王晓虎 陈晶 向蓉 何继军 郑海学 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期16-21,共6页
2014~2015年,美国、巴西等国爆发了一种症状类似于口蹄疫的水泡性疾病,病原被确定为塞尼卡病毒A(Senecavirus A,SVA)。为了鉴别和诊断塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV),本研究针对塞尼卡病毒的VP1基因和口... 2014~2015年,美国、巴西等国爆发了一种症状类似于口蹄疫的水泡性疾病,病原被确定为塞尼卡病毒A(Senecavirus A,SVA)。为了鉴别和诊断塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV),本研究针对塞尼卡病毒的VP1基因和口蹄疫的5’UTR基因,合成特异性引物,优化了反应体系和扩增条件,建立了一种可同时检测塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒的双重RT-PCR方法。特异性和敏感性试验结果表明,建立的双重RT-PCR检测方法特异性好,敏感性强,对塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒最低检出量分别为104 copies/μL、103 copies/μL。本研究建立的方法对临床快速鉴别塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒感染具有重要意义。 展开更多
关键词 塞尼卡病毒A 口蹄疫病毒 双重RT-PCR
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小反刍兽疫病毒、A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 预览
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作者 黄元 袁淑英 +4 位作者 黄武 廖任如 王晓虎 陈晶 向华 《广东畜牧兽医科技》 2019年第3期44-47,共4页
小反刍兽疫病毒(PPRV)是一种感染小反刍动物的急性接触性传染病,近年来在我国多个省份流行,对我国养羊业造成了巨大危害。口蹄疫病毒(FMDV)A型和O型疫情曾在我国多地暴发,今年仍零星发生。小反刍兽疫和口蹄疫均为A类传染病,也都是水疱... 小反刍兽疫病毒(PPRV)是一种感染小反刍动物的急性接触性传染病,近年来在我国多个省份流行,对我国养羊业造成了巨大危害。口蹄疫病毒(FMDV)A型和O型疫情曾在我国多地暴发,今年仍零星发生。小反刍兽疫和口蹄疫均为A类传染病,也都是水疱性疾病,其临床症状极其相似。为建立一种检测并鉴别小反刍兽疫病毒和口蹄疫病毒的方法,针对小反刍兽疫病毒的F基因和口蹄疫的VP1基因,合成相应的引物,优化反应体系和扩增条件,建立一种同时检测小反刍兽疫病毒和A,O型口蹄疫病毒的方法。对建立的多重RT-PCR方法进行特异性和敏感性试验,结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法敏感性强,特异性良好,对小反刍兽疫病毒和A,O型口蹄疫病毒最低检出量分别为PPRV102copies/μL、A型FMDV102copies/μL、O型FMDV10copies/μL。本方法的建立对临床感染口蹄疫和小反刍兽疫病毒的家畜进行快速检测具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 口蹄疫 多重RT-PCR
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丁酸梭菌及荔枝多酚联合应用对腹泻小鼠抗氧化功能的影响 预览 被引量:3
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作者 涂杜 谭富英 徐志宏 《畜牧与饲料科学》 2016年第6期12-15,共4页
探讨丁酸梭菌和荔枝多酚联合应用对腹泻小鼠机体氧化还原状态的调节功能。设空白组、模型组、荔枝多酚组、丁酸梭菌组以及丁酸梭菌—荔枝多酚混合液低、中、高剂量组,于试验第1天至第10天分别进行预防性及治疗性给药,试验第5天时,利用... 探讨丁酸梭菌和荔枝多酚联合应用对腹泻小鼠机体氧化还原状态的调节功能。设空白组、模型组、荔枝多酚组、丁酸梭菌组以及丁酸梭菌—荔枝多酚混合液低、中、高剂量组,于试验第1天至第10天分别进行预防性及治疗性给药,试验第5天时,利用番泻叶水煎剂灌胃法制备小鼠腹泻模型,试验第10天时,对各组小鼠血清中的MDA含量、SOD活性、GSH含量和小肠组织MPO活力等指标进行测定。结果表明,腹泻模型小鼠抗氧化能力降低,小肠组织发生炎症;不同浓度的丁酸梭菌—荔枝多酚混合液能够不同程度地降低腹泻小鼠体内的氧化产物MDA含量,提高还原酶SOD活性,促进还原性物质GSH生成,同时可以减轻炎症反应,其中以混合液中剂量组效果最优。综上提示,丁酸梭菌与荔枝多酚联合应用可提高腹泻小鼠的抗氧化能力,二者具有协同效应。 展开更多
关键词 丁酸梭菌 荔枝多酚 番泻叶 腹泻 抗氧化
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我国鸭疫里氏杆菌病流行概述 预览 被引量:4
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作者 吴彩艳 程淑琴 +8 位作者 张建峰 李娟 林栩慧 董嘉文 吕敏娜 廖申权 戚南山 孙铭飞 刘雅红 《动物医学进展》 北大核心 2017年第6期86-90,共5页
鸭疫里氏杆菌因其血清型多且复杂,抗药性严重,其已成为危害我国养鸭业的一种主要疾病。为进一步提高对鸭疫里氏杆菌病的防控水平,论文就该病的流行病学、诊断方法及疫苗研制等方面的研究进展进行综述,以期为指导临床安全合理用药及... 鸭疫里氏杆菌因其血清型多且复杂,抗药性严重,其已成为危害我国养鸭业的一种主要疾病。为进一步提高对鸭疫里氏杆菌病的防控水平,论文就该病的流行病学、诊断方法及疫苗研制等方面的研究进展进行综述,以期为指导临床安全合理用药及制定综合防控措施提供参考。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌病 流行病学 诊断方法 疫苗研制
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广东一株牛源流行性出血病病毒的分离鉴定 预览 被引量:8
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作者 吕敏娜 朱建波 +10 位作者 李娟 杨振兴 林栩慧 陈琴苓 张健騑 廖申权 戚南山 吴彩艳 陈志虹 李华春 孙铭飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期67-70,共4页
为了解广东反刍动物流行性出血病(EHD)的感染情况,本研究对采集的牛血液样品进行EHD病毒(EHDV)的RT-PCR检测,对核酸检测为阳性的样品进行病毒分离鉴定。将阳性样品接种BHK-21细胞连续传3代时出现细胞病变,扩增出了VP7基因,进行BLAS... 为了解广东反刍动物流行性出血病(EHD)的感染情况,本研究对采集的牛血液样品进行EHD病毒(EHDV)的RT-PCR检测,对核酸检测为阳性的样品进行病毒分离鉴定。将阳性样品接种BHK-21细胞连续传3代时出现细胞病变,扩增出了VP7基因,进行BLAST序列比对,结果表明该分离株与国内外EHDV分离株的同源性达98%~100%,TCID50为10-6.5/50μL,不能凝集鸡红细胞,表明该分离株为EHDV,命名为GD-N133。根据VP2基因序列的分析和微量中和试验结果,确定该病毒株为EHDV-1型。 展开更多
关键词 流行性出血病病毒 血清型 分离 鉴定
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广东地区蓝舌病流行病学初步研究 预览 被引量:2
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作者 吕敏娜 林丽琴 +7 位作者 陈琴苓 张健騑 廖申权 李娟 戚南山 李华春 吴彩艳 孙铭飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期499-501,共3页
为探明广东省牛羊蓝舌病(BT)的流行情况,本研究于2013年与2014年的4月~7月在广东省13个市的不同牛场和羊场随机采集716份血清样品。采用竞争性ELISA检测方法,对这些血清样品进行BT病毒(BTV)抗体检测,结果显示BTV抗体的阳性率为56.70... 为探明广东省牛羊蓝舌病(BT)的流行情况,本研究于2013年与2014年的4月~7月在广东省13个市的不同牛场和羊场随机采集716份血清样品。采用竞争性ELISA检测方法,对这些血清样品进行BT病毒(BTV)抗体检测,结果显示BTV抗体的阳性率为56.70%(406/716)。其中牛和羊BTV抗体平均阳性率分别为69.62%(362/520)和22.45%(44/196),表明广东省牛羊普遍存在BTV感染,而且牛的感染率比羊高。通过对新生犊牛的BTV抗体跟踪,分析其母源抗体的存在以及其维持时间,结果显示新生犊牛能够获得7周以上的被动免疫保护力。 展开更多
关键词 蓝舌病 库蠓 竞争性ELISA 抗体检测
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亚临床症状猪群中PRRSV和PCV2的感染情况 预览 被引量:1
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作者 蔡汝健 蒋智勇 +1 位作者 张乐宜 宋长绪 《安徽农业科学》 CAS 2015年第9期99-101,共3页
[目的]了解亚临床症状猪群中PRRSV和PCV2的感染情况。[方法]选择7个有PRRSV和PCV2感染史且有亚临床症状的猪群,通过ELISA和PCR的相结合方法检测其PRRSV和PCV2的感染情况。[结果]ELISA检测结果表明,所有猪场12周龄仔猪PRRSV和PCV2抗体能... [目的]了解亚临床症状猪群中PRRSV和PCV2的感染情况。[方法]选择7个有PRRSV和PCV2感染史且有亚临床症状的猪群,通过ELISA和PCR的相结合方法检测其PRRSV和PCV2的感染情况。[结果]ELISA检测结果表明,所有猪场12周龄仔猪PRRSV和PCV2抗体能观察到血清抗体转化。PCR结果表明约3/7的猪场8周龄仔猪PRRSV呈阳性,12和20周龄仔猪PRRSV呈阴性;8~20周龄有不同比例仔猪PCV2呈阳性。[结论]在亚临床症状猪群中PRRSV的感染主要在8~12周龄,而PCV2在8~20周龄都有感染。 展开更多
关键词 猪群 亚临床症状 PRRSV PCV2 感染
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3株鸡巨型艾美耳球虫抗原性分析
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作者 吴彩艳 孙铭飞 +4 位作者 戚南山 廖申权 李娟 吕敏娜 谢明权 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第12期67-69,共3页
本研究对3株鸡巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)福建株、上海株和广东株进行免疫原性分析,其中广东株属于早熟株.将7日龄雏鸡分别免疫3株E.maxima孢子化卵囊,12 d后分别攻击相同剂量的同源及异源虫株孢子化卵囊,设不免疫攻虫对照组和... 本研究对3株鸡巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)福建株、上海株和广东株进行免疫原性分析,其中广东株属于早熟株.将7日龄雏鸡分别免疫3株E.maxima孢子化卵囊,12 d后分别攻击相同剂量的同源及异源虫株孢子化卵囊,设不免疫攻虫对照组和不免疫不攻虫对照组,17d开始收集粪便直至无卵囊排出为止,每日计数卵囊,计算卵囊相对减少率.结果:雏鸡免疫后以同源虫株攻击,保护率均在98%以上,而雏鸡免疫后以异源虫株攻击,其交叉保护率在40.78% ~72.37%之间.提示:E.maxima对同源虫株的保护率明显高于对异源虫株的保护率,说明各分离株间抗原性存在差异. 展开更多
关键词 巨型艾美耳球虫 免疫原性
阳江地区某猪场塞内卡病毒抗原和抗体的检测与分析 预览 被引量:2
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作者 黄元 刘涛 +5 位作者 陈锦良 王晓虎 陈晶 梁培新 黄武 向华 《广东农业科学》 CAS 2018年第12期107-111,共5页
塞内卡病毒是新发现的一种小RNA病毒,能使猪产生类似水疱样病变,并引起仔猪死亡。塞内卡病毒作为外来病原,近几年呈现蔓延趋势。从广东阳江地区某猪场采集病变组织和血清进行检测分析,针对塞内卡病毒VP1-2A基因进行RT-PCR扩增,得到特异... 塞内卡病毒是新发现的一种小RNA病毒,能使猪产生类似水疱样病变,并引起仔猪死亡。塞内卡病毒作为外来病原,近几年呈现蔓延趋势。从广东阳江地区某猪场采集病变组织和血清进行检测分析,针对塞内卡病毒VP1-2A基因进行RT-PCR扩增,得到特异性的单一条带。对PCR产物序列分析表明,与2015年美国毒株USA/GBI29/2015的同源性最高、为99.2%,而与我国2017年毒株CH-HN-2017的同源性为97.1%。将水泡皮处理后接种PK-15细胞,盲传4代产生显著病变,滴度可达107TCID50/0.1mL。对采集的16份血清进行抗体中和试验表明,发病种猪的抗体效价最高达到1︰4096,9头种猪全部感染SVA,发病率为66.7%,总感染率为68.8%。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 病毒分离 序列分析 抗体中和试验
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