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癌基因HuR调节胃癌功能的研究 预览
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作者 曹小梅 曹楠婧 +3 位作者 王福花 孙瑞芳 李峰 郭素堂 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1328-1332,共5页
目的:探讨癌基因HuR在胃癌组织的表达和对胃癌MGC-803细胞功能的影响。方法:使用RT-qPCR分析80例临床确诊的胃癌患者胃癌组织样本中HuR的表达水平;利用pSIH载体构建敲减HuR的重组质粒,实现HuR在MGC-803细胞中的低表达,以空载体pSIH作为... 目的:探讨癌基因HuR在胃癌组织的表达和对胃癌MGC-803细胞功能的影响。方法:使用RT-qPCR分析80例临床确诊的胃癌患者胃癌组织样本中HuR的表达水平;利用pSIH载体构建敲减HuR的重组质粒,实现HuR在MGC-803细胞中的低表达,以空载体pSIH作为对照;使用划痕实验检测细胞迁移能力,使用Transwell实验检测细胞侵袭能力,使用CCK-8法检测细胞活力。结果:RT-qPCR结果显示,与癌旁对照相比,67例(84%)胃癌组织中出现HuR的表达上调;低表达HuR能显著抑制MGC-803细胞的侵袭能力、迁移能力和活力(P<0.05),提示HuR作为癌基因起作用。结论:HuR的异常表达可能与胃癌的发生发展有关,低表达HuR可以抑制胃癌MGC-803细胞的侵袭、迁移和活力。 展开更多
关键词 HuR基因 胃癌 细胞活力 细胞迁移 细胞侵袭
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地高辛标记Nkx2.1基因RNA探针的制备及应用
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作者 张凯丽 孙雨晴 +5 位作者 王宇飞 赵虹 郝宇卉 杨丽红 白云 刘志贞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第8期870-873,879共5页
目的制备地高辛(digoxigenin,DIG)标记的Nkx2. 1基因RNA探针,用于小鼠胚胎早期神经管发育关键时期Nkx2. 1基因表达的检测。方法巢式PCR法扩增Nkx2. 1基因,将其克隆至pGEM-T载体;以其为模板,通过Nkx2. 1特异性引物,PCR扩增RNA探针转录模... 目的制备地高辛(digoxigenin,DIG)标记的Nkx2. 1基因RNA探针,用于小鼠胚胎早期神经管发育关键时期Nkx2. 1基因表达的检测。方法巢式PCR法扩增Nkx2. 1基因,将其克隆至pGEM-T载体;以其为模板,通过Nkx2. 1特异性引物,PCR扩增RNA探针转录模板;采用T7 RNA聚合酶,制备DIG标记的正义、反义Nkx2. 1 RNA原位杂交探针。经全胚胎原位杂交(whole-mount in situ hybridization,WM-ISH)技术分析胚胎8. 5、9. 5、10. 5 d小鼠体内Nkx2. 1基因的表达情况。结果制备的探针浓度为1 521. 986 ng/mL,纯度A260/280=2. 39。Nkx2. 1基因反义探针能高效检测到Nkx2. 1基因在胚胎8. 5、9. 5及10. 5 d小鼠神经系统中表达,正义探针未能检测到表达信号。结论成功制备了特异高效的DIG标记的Nkx2. 1基因RNA原位杂交探针,为进一步研究Nkx2. 1基因在小鼠胚胎组织中的表达,探索其在神经管发育中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 Nkx2. 1基因 RNA探针 全胚胎原位杂交
生精障碍BALB/c小鼠睾丸组织的体外培养研究
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作者 李慧赟 宋春英 +3 位作者 赵均 王怀秀 李宏军 郭兴萍 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期681-689,共9页
目的:探寻生精障碍小鼠睾丸组织生精能力的体外发育与成熟方法。方法:8周龄BALB/c雄性小鼠68只,随机分为4组,每组17只。对照组为正常同龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织,实验组分别采用注射40mg/kg白消安后第4周睾丸组织为SCOS组,第6周睾丸组... 目的:探寻生精障碍小鼠睾丸组织生精能力的体外发育与成熟方法。方法:8周龄BALB/c雄性小鼠68只,随机分为4组,每组17只。对照组为正常同龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织,实验组分别采用注射40mg/kg白消安后第4周睾丸组织为SCOS组,第6周睾丸组织为重度H-S(H-S1)组,第8周睾丸组织为轻度H-S(H-S2)组。琼脂糖凝胶法体外培养3种生精障碍小鼠睾丸组织及对照组睾丸组织至第4周,通过免疫组化检测减数分裂过程中标记蛋白[减数分裂启动:维甲酸诱导蛋白8(STRA8);减数分裂中:联会复合蛋白3(SCP3);减数分裂后:转换蛋白1(TNP1)]的表达情况,判断体外培养过程中生殖细胞的发育与成熟能力;TUNEL法检测培养前后生殖细胞凋亡情况。结果:①培养前与对照组相比,睾丸组织损伤越严重其STRA8的表达越少(P<0.05);随着培养时间的延长,在培养4周后3个实验组中STRA8的表达呈上升趋势(P<0.05)。②培养前与对照组相比,SCOS组SCP3表达最少、H-S2表达最多(P<0.05);培养4周后SCP3表达增加,但仍未达到对照组表达水平,且损伤越严重,表达越少;③培养4周后TNP1在对照组有阳性表达,H-S1、H-S2组可见个别阳性表达(P<0.05),SCOS组无表达。④与培养前相比,培养4周后SCOS组凋亡增加,H-S组凋亡减少(P<0.05)。结论:琼脂糖凝胶体外培养可以诱导生精障碍的BALB/c小鼠睾丸组织进行减数分裂,生精功能损伤较轻者的体外培养效果好。 展开更多
关键词 睾丸 生精障碍 凋亡 体外培养 小鼠
蛋白激酶C在七氟醚预处理高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型中的作用 预览
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作者 王丽丽 常冰梅 张文颉 《中国药物与临床》 CAS 2019年第11期1777-1778,共2页
目的观察七氟醚预处理高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型中蛋白激酶C(PKC)活性变化,并探讨其意义。方法原代培养HUVECs并鉴定;将HUVECs细胞生长至70%~80%融合时分为4组:正常糖浓度对照组,高糖组,甘露醇组(高渗对照),高糖+七... 目的观察七氟醚预处理高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型中蛋白激酶C(PKC)活性变化,并探讨其意义。方法原代培养HUVECs并鉴定;将HUVECs细胞生长至70%~80%融合时分为4组:正常糖浓度对照组,高糖组,甘露醇组(高渗对照),高糖+七氟醚组;各组细胞培养72 h时采用非放射性PKC活性试剂盒检测4组细胞PKC活性。结果各组的细胞增殖水平差异无统计学意义,高糖组的细胞凋亡增加,高糖+七氟醚组水平细胞存活数量增多,4组细胞PKC活性分别为0.143±0.047,0.231±0.037、0.151±0.043,0.189±0.037,高糖组和高糖+七氟醚组与正常血糖组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),高糖组与高糖+七氟醚相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论七氟醚对高糖诱导的HUVECs细胞损伤有保护作用,PKC活性水平可能起到重要作用。 展开更多
关键词 蛋白激酶C 内皮细胞 细胞凋亡
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不同培养方法对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响 预览
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作者 郝宇卉 李美宁 +2 位作者 张凯丽 杨丽红 刘志贞 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第3期8-14,共7页
目的比较组织块贴壁法及胶原酶消化法所得脂肪干细胞的成骨分化能力。方法分别采用组织块贴壁法及胶原酶消化法原代培养小鼠脂肪干细胞,观察细胞形态及细胞增殖情况,并进行细胞鉴定,比较两者成骨分化能力。结果两种方法所得脂肪干细胞... 目的比较组织块贴壁法及胶原酶消化法所得脂肪干细胞的成骨分化能力。方法分别采用组织块贴壁法及胶原酶消化法原代培养小鼠脂肪干细胞,观察细胞形态及细胞增殖情况,并进行细胞鉴定,比较两者成骨分化能力。结果两种方法所得脂肪干细胞在形态学上无差异,培养至第3代,细胞生长状态良好,生物学特性稳定,CD44、Sca-1表达率 >90%,CD31表达率<10%,具有较好的成脂、成骨分化能力;组织块贴壁法培养所得脂肪干细胞增殖率高于胶原酶消化法(P<0.05);组织块贴壁法培养所得脂肪干细胞矿化结节、ALP活性及钙离子浓度高于胶原酶消化法(P<0.05)。结论组织块贴壁法相对胶原酶消化法在脂肪干细胞培养及成骨诱导分化过程中更具优势。 展开更多
关键词 脂肪干细胞/干细胞 组织块贴壁法/细胞培养技术 胶原酶消化法/细胞培养技术 成脂分化 成骨分化 小鼠
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小鼠腹白线组织中Sca-1~+成体干细胞的分布 预览
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作者 郝宇卉 刘志贞 +2 位作者 刘丹 冯玉娟 解军 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第17期2672-2677,共6页
背景:干细胞与经络的关系目前还停留在理论探讨阶段,亟需通过实验进行科学研究。目的:通过实验观察小鼠腹白线脂肪组织Sca-1~+成体干细胞的分布情况,为进一步探讨干细胞与任脉的关系提供实验基础。方法:选取Balb/c小鼠,通过体视显微镜... 背景:干细胞与经络的关系目前还停留在理论探讨阶段,亟需通过实验进行科学研究。目的:通过实验观察小鼠腹白线脂肪组织Sca-1~+成体干细胞的分布情况,为进一步探讨干细胞与任脉的关系提供实验基础。方法:选取Balb/c小鼠,通过体视显微镜、苏木精-伊红染色观察小鼠皮下胸部前正中线任脉循行部位组织形态特点。以任脉在腹部的体表标志——腹白线为研究对象,通过体视显微镜、苏木精-伊红染色、油红O染色、Masson染色观察小鼠腹白线组织形态特点;通过免疫组织化学染色、多层切片观察小鼠腹白线脂肪组织Sca-1~+成体干细胞分布情况。结果与结论:①首次观察到脂肪组织呈条带状分布于小鼠皮下前正中线任脉循行部位;②首次观察到小鼠腹白线由脂肪组织构成;③首次观察到Sca-1~+成体干细胞沿小鼠任脉在腹部的体表标志——腹白线分布;④该实验只对任脉腹白线段Sca-1~+成体干细胞进行了观察,是在一个小范围的尝试,但这一尝试有可能为探讨任脉功能与干细胞功能提供实验基础与思路。 展开更多
关键词 干细胞 成体干细胞 脂肪组织 腹白线 任脉 Sca-1+成体干细胞 国家自然科学基金
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2016年山西省某三甲医院临床分离菌的耐药性监测 预览
7
作者 王晓玲 熊怡 +5 位作者 郭璇 奥瑞芳 杨少芳 田勇 董变变 任建平 《中国药物与临床》 CAS 2019年第9期1541-1544,共4页
随着抗菌药物、免疫抑制剂、激素及介入性诊疗等治疗措施的广泛应用,临床感染性疾病的病原菌的种类和耐药性均有所变迁,且耐药性也相应增加,为临床常规治疗带来困难.因此分析当前临床分离菌的分布及其耐药趋势可以为临床合理应用抗菌药... 随着抗菌药物、免疫抑制剂、激素及介入性诊疗等治疗措施的广泛应用,临床感染性疾病的病原菌的种类和耐药性均有所变迁,且耐药性也相应增加,为临床常规治疗带来困难.因此分析当前临床分离菌的分布及其耐药趋势可以为临床合理应用抗菌药物提供依据.现就山西省中医院2016年度临床分离菌耐药监测结果总结报告如下. 展开更多
关键词 临床分离菌 耐药性监测 山西省 三甲医院 临床合理应用 抗菌药物 常规治疗 免疫抑制剂
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一种可自由组合的自制细胞滤网 预览
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作者 郝宇卉 冯玉娟 刘志贞 《山西医药杂志》 CAS 2019年第4期403-405,共3页
目的设计一种可弥补现有细胞滤网实验缺陷的、可自由组合的自制细胞滤网。方法准备5mL、10mL、15mL、50mL离心管作为第一部分;剪裁不同规格尼龙细胞滤网作为第二部分;将1.5mL、5mL离心管剪去底部,经酒精灯外焰修整作为第三部分。第三部... 目的设计一种可弥补现有细胞滤网实验缺陷的、可自由组合的自制细胞滤网。方法准备5mL、10mL、15mL、50mL离心管作为第一部分;剪裁不同规格尼龙细胞滤网作为第二部分;将1.5mL、5mL离心管剪去底部,经酒精灯外焰修整作为第三部分。第三部分套叠在第一部分里,第二部分夹在第一部分与第三部分之间。结果可组装出满足实验规格和目数的自制细胞滤网。结论这种可自由组合的自制细胞滤网经济适用,简化了实验环节,减少了污染,并可适用于小容积细胞滤液制备。 展开更多
关键词 过滤 聚丙烯类 自制细胞滤网
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长链非编码RNA-671对食管鳞癌细胞增殖和侵袭的影响 预览
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作者 郝跃鹏 赵梓彤 +2 位作者 杨成园 宋咏梅 王晓霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1551-1556,共6页
目的:检测长链非编码RNA-671(long non-coding RNA-671, lnc671)在食管鳞癌细胞系中的表达及其对食管鳞癌细胞恶性表型的影响。方法:通过网络数据库GEPIA分析lnc671的表达与食管癌患者生存期的相关性。采用RT-qPCR检测lnc671在食管鳞癌... 目的:检测长链非编码RNA-671(long non-coding RNA-671, lnc671)在食管鳞癌细胞系中的表达及其对食管鳞癌细胞恶性表型的影响。方法:通过网络数据库GEPIA分析lnc671的表达与食管癌患者生存期的相关性。采用RT-qPCR检测lnc671在食管鳞癌细胞系中的表达水平。使用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)干扰lnc671的表达,利用RTCA-MP检测系统、集落形成实验及Transwell实验观察lnc671对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果: GEPIA数据库分析显示,lnc671的表达水平增高与食管鳞癌患者生存期负相关( P <0.05)。与正常永生化食管上皮细胞相比,lnc671在多种食管鳞癌细胞系中高表达。干扰lnc671的表达,可以显著抑制食管癌细胞的生长、集落形成能力及迁移和侵袭能力( P <0.01)。结论: lnc671在多种食管鳞癌细胞系中表达增高,干扰lnc671的表达可以抑制食管鳞癌细胞的恶性表型。 展开更多
关键词 长链非编码RNA-671 食管鳞状细胞癌 细胞增殖 细胞侵袭 细胞迁移
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应用流式细胞仪检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率
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作者 田九博 张丽娜 +6 位作者 王萱 马培元 穆秀丽 孟涛涛 孟凡秀 弓韬 于保锋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第9期1020-1024,共5页
目的探索应用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测纳米级聚合物胶束(polymeric micelles,PMs)表面偶联抗体效率的方法。方法将DMPE-PEG-Maleimide、DPPE-PEG-Maleimide、DSPE-PEG-Maleimide、DOPE-PEG-Malei-mide、DLPE-PEG-Maleimide... 目的探索应用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测纳米级聚合物胶束(polymeric micelles,PMs)表面偶联抗体效率的方法。方法将DMPE-PEG-Maleimide、DPPE-PEG-Maleimide、DSPE-PEG-Maleimide、DOPE-PEG-Malei-mide、DLPE-PEG-Maleimide聚合物纳米胶束分别与Anti-GOLPH2抗体共同孵育,使其彼此偶联;再与SNU-423细胞共同孵育,采用FCM检测SNU-423细胞膜表面GOLPH2抗原的阳性表达率,并比较各类聚合物纳米胶束与AntiGOLPH2抗体的相对偶联效率。结果 SNU-423细胞表面GOLPH2抗原的阳性表达率为1.23%;在各类聚合物纳米胶束中,DLPE-PEG-Maleimide与Anti-GOLPH2抗体的相对偶联效率最高,且与抗体浓度呈正相关。结论应用FCM检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率的方法,能在一定程度上反映抗体与聚合物纳米胶束的抗体偶联情况,其检测结果具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 流式细胞仪 聚合物纳米胶束 GOLPH2抗原 Anti-GOLPH2抗体 抗体偶联比
Aurora激酶抑制剂VX-680对食管癌细胞间黏附能力的影响
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作者 寇俊婷 贺春 +5 位作者 杨成园 王安彦 牛仕诗 郭紫禅 张震 王晓霞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第8期880-884,889共6页
目的探讨Aurora激酶抑制剂VX-680对食管癌KYSE150及EC9706细胞间黏附能力的影响。方法培养KYSE150及EC9706细胞至密度为50%时,选取不同浓度VX-680分别作用KYSE150(0. 5和1. 0μmol/L VX-680)和EC9706(0. 1和0. 2μmol/L VX-680)细胞48 h... 目的探讨Aurora激酶抑制剂VX-680对食管癌KYSE150及EC9706细胞间黏附能力的影响。方法培养KYSE150及EC9706细胞至密度为50%时,选取不同浓度VX-680分别作用KYSE150(0. 5和1. 0μmol/L VX-680)和EC9706(0. 1和0. 2μmol/L VX-680)细胞48 h(实验组),未经VX-680处理的细胞为空白对照。采用细胞聚集及细胞分离试验分别检测两种细胞的黏附能力;采用Western blot法检测两种细胞上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平。结果细胞聚集及细胞分离试验结果显示,随VX-680浓度的增加,0. 5、1. 0、0. 1、0. 2μmol/L VX-680实验组团块均减少,体积变大致密,与空白对照组比较,各实验组团块数量差异均有统计学意义(P <0. 01);与空白对照组比较,各实验组的NTC/NTE值均显著降低,差异均有统计学意义(P <0. 01)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,各实验组E-cadherin蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P <0. 01)。结论 VX-680能增强食管癌细胞间的同质黏附能力,抑制食管癌细胞的恶性表型,为VX-680可能作为治疗食管癌的靶向药物提供了依据。 展开更多
关键词 AURORA激酶 抑制剂VX-680 食管癌 同质黏附能力
IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达
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作者 邓青 杨成园 +5 位作者 王安彦 牛仕诗 郝跃鹏 寇俊婷 孙雪娇 王晓霞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第8期858-861,共4页
目的构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达。方法以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有... 目的构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达。方法以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体GV102中,构建重组质粒IQGAP1-shRNA,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆测序鉴定。用脂质体2000介导IQGAP1-shRNA转染KYSE150细胞作为IQGAP1-shRNA干扰组,同时设转染载体GV102为对照组,RT-PCR及Western blot法检测IQGAP1基因的干扰效果。结果经测序鉴定,重组质粒IQGAP1-shRNA构建正确。IQGAP1-shRNA干扰组及对照组转染KYSE150细胞均可见绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),两组转染效率分别为(76±5. 780)%和(83±3. 851)%。IQGAP1-shRNA干扰组IQGAP1 mRNA转录水平和蛋白表达水平与对照组比较差异均有统计学意义(P <0. 001),表达抑制率分别为(82±2. 424)%及(77±2. 791)%。结论成功构建了IQGAP1-shRNA真核表达质粒,能特异性降低食管癌KYSE150细胞中IQGAP1基因的表达,为进一步研究IQGAP1基因在食管癌中的功能及靶向治疗作用奠定了基础。 展开更多
关键词 IQ结构域的GTP酶激活蛋白1 短发卡RNA RNA干扰 重组质粒 食管癌
低氧预处理人脐带间充质干细胞促进其源性外泌体对心肌梗死后心肌损伤的修复 预览 被引量:1
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作者 张蘋 郭莹 +8 位作者 高亚杰 王振东 李佰一 张晓敏 牛玉虎 刘志贞 马丽辉 牛勃 郭睿 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第17期2630-2636,共7页
背景:研究表明,外泌体是干细胞治疗心肌梗死的重要作用机制,低氧预处理对人脐带间充质干细胞外泌体的量和内容物都有所影响。目的:比较常氧和低氧预处理人脐带间充质干细胞源性外泌体对大鼠心肌梗死后心肌损伤修复的影响及可能机制。方... 背景:研究表明,外泌体是干细胞治疗心肌梗死的重要作用机制,低氧预处理对人脐带间充质干细胞外泌体的量和内容物都有所影响。目的:比较常氧和低氧预处理人脐带间充质干细胞源性外泌体对大鼠心肌梗死后心肌损伤修复的影响及可能机制。方法:①从健康新生儿脐带中分离出人脐带间充质干细胞培养至第4代,待50%-60%融合时,更换为无血清培养基,分别置于传统培养箱和低氧孵箱培养48 h,采用超速离心法从两组细胞培养上清中提取外泌体;②SD雌性大鼠(购于山西医科大学实验动物中心)50只,其中40只建立心肌梗死模型,10只进行假手术处理。从造模成功大鼠中取30只随机分为3组:模型对照组、低氧外泌体组、常氧外泌体组,每组10只。心肌梗死术后1周,再次打开心脏,在变白区即梗死区周边四点注射相同体积外泌体或PBS,每点体积25μL,每只100μL。移植后1周,行超声心动图检测,然后取心脏标本进行苏木精-伊红染色和Masson染色,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3和Bcl-2的表达。结果与结论:①移植后1周,与模型对照组相比,低氧外泌体组和常氧外泌体组左室射血分数、短轴缩短率明显增加(P <0.01),左室舒张末期内径、左室收缩末期内径显著减小(P <0.01),其中低氧外泌体组上述指标改善最显著(P<0.01);②苏木精-伊红染色结果显示,假手术组细胞排列整齐,模型对照组病变程度最严重,低氧外泌体组病变程度轻于常氧外泌体组;③Masson染色结果显示,低氧外泌体组和常氧外泌体组的胶原容积分数低于模型对照组,以低氧外泌体组减少最为明显(P <0.01);④Western blot结果显示,与模型对照组相比,低氧外泌体组和常氧外泌体组心肌组织凋亡相关蛋白Cleaved-caspase 3的表达减少,Bcl-2的表达增加,均以低氧外泌体组改变最为明显(P <0.01);⑤以上结果表明,人脐带间充质干细胞经低氧� 展开更多
关键词 心肌梗死 脐带间充质干细胞 低氧预处理 外泌体 间充质干细胞移植 国家自然科学基金
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人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较 预览 被引量:2
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作者 郭莹 王秀伟 +7 位作者 牛玉虎 王莉 周楠 李佰一 王振东 张蘋 高亚杰 牛勃 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第9期1382-1388,共7页
背景:近年来“无细胞”的干细胞治疗方法备受关注,但对于提取高质量外泌体的方法尚无确切定论。目的:采用3种方法提取人脐带间充质干细胞中的外泌体,筛选最佳提取外泌体的方法。方法:分别用Total Exosome Isolation试剂盒、Exo Qu... 背景:近年来“无细胞”的干细胞治疗方法备受关注,但对于提取高质量外泌体的方法尚无确切定论。目的:采用3种方法提取人脐带间充质干细胞中的外泌体,筛选最佳提取外泌体的方法。方法:分别用Total Exosome Isolation试剂盒、Exo Quick试剂盒及差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞来源的外泌体。使用透射电镜观察外泌体形态,BCA法进行蛋白质定量,western blot检测外泌体表面标志物CD9、CD81、CD63的表达。结果与结论:①3种方法均可以从培养基中提取到间充质干细胞来源的外泌体,并且在透射电镜下观察到圆形或椭圆形的膜性小囊泡;②差速超速离心法提取的外泌体中的蛋白浓度和纯度最高,Exo Quick试剂盒法其次,Total Exosome Isolation试剂盒法得到的蛋白浓度最低,且3者比较差异有显著性意义(P<0.05);③3种方法提取的外泌体均表达其表面特异性标志物CD81、CD63和CD9,且在含有相同蛋白浓度的情况下,差速超速离心法提取的外泌体的表面标志物含量最高,Exo Quick试剂盒法其次,Total Exosome Isolation试剂盒法提取的外泌体表面标志物含量较低;④差速超速离心法和Total Exosome Isolation试剂盒法的操作时间明显多于Exo Quick试剂盒法,差异有显著性意义(P<0.05);⑤结果表明,尽管差速超速离心法耗时稍长,但是纯度相对较高,满足实验的基本需求,可作为一种合理的分离方法。 展开更多
关键词 外泌体 脐带 间质干细胞 组织工程
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氯沙坦通过AT1R/VEGF信号通路对肝癌血管生成的影响 预览
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作者 武荣 张俊涛 +2 位作者 李卫斌 王坤 刘志贞 《中国现代医学杂志》 2018年第26期7-13,共7页
目的探讨氯沙坦是否通过下调血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,抑制肝癌细胞的血管生成。方法采用免疫荧光染色和Westernblot检测AT1R在肝癌细胞系HepG2、HuH-7和PLC/PRF/5,以及正常肝细胞LO2中的表达。采用We... 目的探讨氯沙坦是否通过下调血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,抑制肝癌细胞的血管生成。方法采用免疫荧光染色和Westernblot检测AT1R在肝癌细胞系HepG2、HuH-7和PLC/PRF/5,以及正常肝细胞LO2中的表达。采用Westernblot检测氯沙坦对肝癌细胞系HepG2中AT1R表达的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯沙坦对肝癌细胞系HepG2中VEGF的影响。采用免疫组织化学法检测氯沙坦对大鼠肝癌组织中AT1R、VEGF和CD34表达的影响。结果AT1R在正常肝细胞LO2中低表达(P<0.05),在肝癌细胞系HepG2、HuH-7和PLC/PRF/5中高表达(P<0.05),在HepG2细胞中表达最高(P<0.05)。在肝癌细胞系HepG2中加入氯沙坦后,AT1R蛋白水平和VEGF浓度降低(P<0.05)。大鼠肝癌组织中AT1R、VEGF和CD34高表达,而加入氯沙坦后,AT1R、VEGF和CD34表达降低(P<0.05)。结论氯沙坦通过抑制AT1R/VEGF信号通路,可以阻碍肝癌血管的生成。 展开更多
关键词 氯沙坦 AT1R VEGF 血管生成
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小鼠精子发生相关蛋白3基因在小鼠生精细胞的特异表达及对HEK 293T细胞凋亡和自噬的影响
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作者 王玉晶 温丽敏 +3 位作者 白欣艳 曹睿 王海龙 郭睿 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期41-48,共8页
目的检测小鼠精子发生相关蛋白3(spata3)基因在小鼠生精细胞的表达情况,并借助过表达细胞模型进一步分析该基因对人胚肾HEK 293T细胞凋亡及自噬的影响,旨在探讨spata3在精子发生过程中的意义。方法分别采用RT-PCR和免疫印迹法检测spa... 目的检测小鼠精子发生相关蛋白3(spata3)基因在小鼠生精细胞的表达情况,并借助过表达细胞模型进一步分析该基因对人胚肾HEK 293T细胞凋亡及自噬的影响,旨在探讨spata3在精子发生过程中的意义。方法分别采用RT-PCR和免疫印迹法检测spata3基因mRNA及蛋白产物在小鼠各组织中的表达;应用免疫组织化学和免疫荧光染色观察SPATA3蛋白在生精细胞中的定位;借助脂质体将真核表达载体Plv-EGFP-2(a)purospata3瞬时转染HEK 293T细胞,进一步在蛋白水平分析细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)、BAX和Bcl-2及自噬相关蛋白LC3A/B的变化。结果 Spata3基因及其编码产物在小鼠睾丸组织特异表达;粗线期精母细胞和圆形精子细胞的胞质与胞核均有显著SPATA3蛋白的阳性着色,长形精子细胞的胞质也有大量分布;过表达spata3的HEK 293T细胞内活化型Caspase-3和PARP降解产物的含量较对照组差异无显著性,BAX表达量0.815±0.020较裸细胞组0.469±0.012和空载体转染组0.588±0.018均有所增高,Bcl-2含量0.214±0.020低于裸细胞0.507±0.021和空载体转染组0.545±0.024,LC3A/B-Ⅱ的表达量0.741±0.037则显著高于裸细胞组0.136±0.011和空载体转染组0.169±0.012。结论 Spata3基因在小鼠生精细胞特异表达,过表达spata3对HEK 293T细胞凋亡无明显影响,但可以促进细胞自噬。 展开更多
关键词 精子发生相关蛋白3基因 HEK 293T细胞 细胞转染 自噬 免疫印迹法 小鼠
FloTrac/Vigileo系统用于非体外循环冠状动脉搭桥术中血流动力学监测的临床研究 预览
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作者 王丽丽 常冰梅 张文颉 《中国药物与临床》 CAS 2018年第10期1677-1680,共4页
目的观察FloTrac/Vigileo系统在非体外循环冠状动脉搭桥术(off-pump CABG)中血流动力学监测中应用的可行性。方法 76例择期实施非体外循环冠状动脉搭桥手术的冠心病患者,试验组患者围术期及(ICU)24 h采用目标导向容量治疗,对照组根... 目的观察FloTrac/Vigileo系统在非体外循环冠状动脉搭桥术(off-pump CABG)中血流动力学监测中应用的可行性。方法 76例择期实施非体外循环冠状动脉搭桥手术的冠心病患者,试验组患者围术期及(ICU)24 h采用目标导向容量治疗,对照组根据传统容量治疗方法。结果与对照组比较,试验组平均动脉压(MAP)、心率(HR)、心排血量(CO)、每搏变异度(SVV)、中心静脉压(CVP)等血流动力学指标在手术期间显著优于对照组。试验组患者排尿量显著高于对照组(P〈0.05)。试验组在T 3时静脉血氧分压(PvO2)和中心静脉血氧饱和度(ScvO2)水平显著高于对照组,乳酸水平和氧摄取率显著低于对照组(P〈0.05)。试验组在进入监护室后乳酸峰值和肌酐峰值均显著低于对照组(P〈0.05)。对照组术后24 h BNP水平显著高于观察组(P〈0.05)。试验组在术后24 h cTnⅠ水平较游离乳内动脉前显著降低(P〈0.05),而对照组在手术后24 h cTnⅠ水平比较差异无统计学意义((P〉0.05)。结论冠心病患者实施非体外循环冠状动脉搭桥手术期间,目标导向容量治疗可明显减少各类心脏不良事件的发生率,改其容量的治疗效果优于常规容量治疗方法。 展开更多
关键词 围手术期医护 冠状动脉旁路移植术 非体外循环 个体化容量治疗
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黑色素为基础的新型纳米基因载体的制备及毒性初步评估 预览
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作者 杨曦 张瑞平 解军 《中国药物与临床》 CAS 2018年第3期313-315,共3页
目的探讨黑色素纳米颗粒(MNP)经聚赖氨酸(PLL)改性连接小干扰RNA(siRNA)后的细胞毒性,为其在基因治疗中的应用提供依据。方法制备新型水溶性MNP并经PLL螯合改性,依靠静电作用连接siRNA,分别与4T1乳腺癌细胞和Hep2喉癌细胞进行孵育... 目的探讨黑色素纳米颗粒(MNP)经聚赖氨酸(PLL)改性连接小干扰RNA(siRNA)后的细胞毒性,为其在基因治疗中的应用提供依据。方法制备新型水溶性MNP并经PLL螯合改性,依靠静电作用连接siRNA,分别与4T1乳腺癌细胞和Hep2喉癌细胞进行孵育,采用CCK8检测法观察细胞生长状况,并对材料的细胞毒性进行分级。结果 4T1乳腺癌细胞和Hep2喉癌细胞在1 000μg/ml及其以下的实验分组中均生长良好,形态饱满。CCK8检测法数据表明细胞生存率均大于80%,毒性分级达合格。结论 MNP经PLL改性连接siRNA所形成的复合物是一种生物安全性高,毒性小的新型纳米基因载体。 展开更多
关键词 黑色素纳米颗粒 聚赖氨酸 RNA 小分子干扰 细胞毒性实验
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每搏量变异度监测机器人辅助腹腔镜前列腺癌根治手术容量变化准确性的评价 预览
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作者 王丽丽 常冰梅 +1 位作者 张文颉 余翔 《中国药物与临床》 CAS 2018年第9期1471-1473,共3页
目的 评价每搏量变异度(SVV)监测机器人辅助腹腔镜下前列腺癌根治手术中血容量变化的准确性。方法 择期在全身麻醉下行机器人辅助前列腺癌手术患者46例,全身麻醉后连续监测心率(HR)、平均动脉压(MAP)、每搏量(SV)、每搏量指数(... 目的 评价每搏量变异度(SVV)监测机器人辅助腹腔镜下前列腺癌根治手术中血容量变化的准确性。方法 择期在全身麻醉下行机器人辅助前列腺癌手术患者46例,全身麻醉后连续监测心率(HR)、平均动脉压(MAP)、每搏量(SV)、每搏量指数(SVI)、SVV等血流动力学指标,在过度Trendelenburg体位下建立人工气腹后进行容量负荷试验,记录输液前后各血流动力学指标数值,然后以输液前后每搏量变异指数的差(ΔSVI)将患者分为2组,即有反应组(ΔSVI≥15%)和无反应组(ΔSVI〈15%)组,绘制SVV判断扩容效应的受试者工作特征性(ROC)曲线,确定机器人辅助前列腺癌手术特殊的体位及气腹条件下SVV预测容量状况的准确性、诊断阈值。结果 SVV判断扩容有效的ROC曲线下面积为0.835,SVV的诊断阈值为13.8%。以SVV为13.8%作为阈值预测患者对容量不足的反应性,其敏感度为67.7%,特异度为86.7%。结论 SVV监测机器人辅助腹腔镜下前列腺癌根治手术患者麻醉期间血容量变化具有良好的敏感度和特异度。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 每搏输出量 机器人 腹腔镜检查 血管容量 气腹 人工
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STAT3通路与肿瘤关系的研究进展 预览 被引量:1
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作者 牛艳珍 陈显久 王军 《医学研究杂志》 2018年第3期9-11,16共4页
信号转导及转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在肿瘤中的持续激活和过度表达与肿瘤细胞的多种恶性生物学特征密切相关,受JAK-STAT、Ras-MAPK、非受体型酪氨酸激酶途径等多条信号通路和蛋白... 信号转导及转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在肿瘤中的持续激活和过度表达与肿瘤细胞的多种恶性生物学特征密切相关,受JAK-STAT、Ras-MAPK、非受体型酪氨酸激酶途径等多条信号通路和蛋白质酪氨酸磷酸酶、PIAS蛋白家族、SOCS蛋白家族等多重信号分子的调控,目前已成为肿瘤治疗领域的研究热点之一。本文就STAT3在肿瘤中的生物学作用及其调控方式做一综述,并讨论其靶向治疗策略。 展开更多
关键词 STAT3 肿瘤 信号转导 靶向治疗
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