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shRNA沉默TRAF6基因对急性肝损伤小鼠炎症反应的影响 预览 被引量:2
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作者 陈锋 张芙蓉 +3 位作者 何生松 庞然 许娟娟 董继华 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期278-283,310共7页
目的通过shRNA沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验... 目的通过shRNA沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验筛选针对TRAF6基因的最有效小干扰RNA(siRNA)序列,采用流体力学注射法将pTRAF6-shRNA表达质粒转染BALB/c小鼠,24h后重复注射1次。第2次注射后24h,予LPS/D-GalN腹腔注射制备急性肝衰竭内毒素炎症模型。设正常对照组、模型对照组、空白质粒/LPS组及RNAi/LPS组。观察各组小鼠肝脏病理变化,Real-time PCR检测TRAF6、IL-6及COX-2mRNA的表达,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平变化,Western blot检测肝细胞TRAF6、NF-κB p65的表达。结果 Real-time PCR及Western blot检测显示,pTRAF6-shRNA1能有效沉默TRAF6mRNA及蛋白表达,其中TRAF6mRNA表达较正常小鼠下降约60.13%,TRAF6蛋白表达降低约52.08%,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。ELISA检测显示各组小鼠TNF-α、IL-1β均于造模后8h达到峰值,TGF-β1于16h达到峰值;RNAi/LPS组小鼠血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平明显低于同时间点模型对照组。Real-time PCR结果显示RNAi/LPS组小鼠IL-6、COX-2及TRAF6mRNA表达下降,与模型对照组比较差异均有统计学意义(均P〈0.01)。Western blot结果显示RNAi/LPS组小鼠肝组织总蛋白NF-κB p65表达水平显著高于正常对照组(P〈0.05),与模型对照组无差异,而胞核NF-κB p65明显低于模型对照组(P〈0.05)。结论 pTRAF6-shRNA可能通过下调NF-κB p65水平,抑制炎症相关细胞因子和炎性介质表达水平,从而减轻内毒素/半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤。 展开更多
关键词 TRAF6 RNA干扰 TLR4信号通路 NF-κB 急性肝衰竭
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一个先天性无虹膜症家系中PAX6基因突变位点的检测 被引量:1
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作者 陈晶 祝建芳 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期523-525,共3页
目的确定一个先天性无虹膜症家系的PAx6基因致病突变。方法采集先证者及其家系所有成员13人外周静脉血,提取DNA,对先证者PAX6基因的全部外显子进行PCR扩增及测序,发现异常后对家庭所有成员进行PAX6基因的检测,并对160例正常对照的全... 目的确定一个先天性无虹膜症家系的PAx6基因致病突变。方法采集先证者及其家系所有成员13人外周静脉血,提取DNA,对先证者PAX6基因的全部外显子进行PCR扩增及测序,发现异常后对家庭所有成员进行PAX6基因的检测,并对160例正常对照的全血DNA用PCR一直接测序法排除多态性。结果先证者的PAX6基因第6外碌子有一杂合突变(C.151G〉A),造成第51位氨基酸的改变(P.Asp51Asn);家系中所有患者均存在此突变,而正常家系成员和160例正常对照均未检测到相同突变。结论先证者PAX6基因的C.151C〉A改变为致病突变。 展开更多
关键词 先天性无虹膜症 PAX6基因 突变
参芪扶正注射液对放射性脑损伤保护的分子机制探讨 被引量:1
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作者 张健 张瑞光 +4 位作者 蔡茜 陈玲娟 董继华 伍钢 董晓荣 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期419-422,共4页
目的 研究参芪扶正注射液对于放疗引起脑损伤保护的分子机制.方法 将6~8周龄C57BL/6J小鼠按随机数字表法随机分成3组:空白对照组:不做任何处理;单纯照射组:全脑照射20 Gy;照射加药组:全脑20 Gy照射后参芪扶正注射液(20 mg/kg)治... 目的 研究参芪扶正注射液对于放疗引起脑损伤保护的分子机制.方法 将6~8周龄C57BL/6J小鼠按随机数字表法随机分成3组:空白对照组:不做任何处理;单纯照射组:全脑照射20 Gy;照射加药组:全脑20 Gy照射后参芪扶正注射液(20 mg/kg)治疗4周;水迷宫检测参芪扶正注射液对放射性脑损伤后小鼠认知功能的影响;Real-time PCR检测急性脑损伤后炎性因子TNF-α与IL-1β表达情况;免疫荧光检测急性放射性脑损伤后海马区的小胶质细胞的激活水平;免疫荧光检测各组NF-κB p65的胞质胞核表达水平.结果 Morris水迷宫显示,参芪扶正注射液可以改善小鼠放射性脑损伤后的认知功能障碍(t=6.34、6.70,P<0.05);PCR显示照射后TNF-α在3h表达最高,随后下降,在4周又达到较高水平,参芪扶正注射液治疗下调TNF-α表达水平(t=11.34、9.70、6.07,P<0.05);IL-1β在照射后表达水平逐渐升高,在72 h达到较高水平,其后开始下降,而参芪扶正注射液可以降低照射后IL-1β表达水平(t=12.27、5.70、7.52,P<0.05);免疫荧光显示参芪扶正注射液能够抑制海马区小胶质细胞激活(t=12.35、8.64、7.82,P<0.05);小胶质细胞p65免疫荧光显示参芪扶正注射液照射后NF-κB p65胞质、胞核的转位.结论 参芪扶正注射液可能通过抑制NF-κB p65的胞质、胞核转位,抑制小胶质细胞的激活,从而下调炎性因子的表达,起到治疗放射性脑损伤的作用. 展开更多
关键词 参芪扶正注射液 急性放射性脑损伤 炎性因子 小胶质细胞激活
AT富集序列特异性结合蛋白1在人膀胱移行细胞癌组织中的表达及其与上皮间质转化的关系 被引量:2
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作者 吴晓飞 朱朝辉 +2 位作者 万锋 成超 邢诗安 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1145-1148,共4页
目的观察AT富集序列特异性结合蛋白1(SATBl)与上皮一间质转化(EMT)相关基因在人膀胱移行细胞癌中的表达,探讨SATB1与EMT相关基因表达与膀胱癌病理分级、临床分期及淋巴结转移的关系。方法分别用免疫组织化学和实时定量逆转录聚合... 目的观察AT富集序列特异性结合蛋白1(SATBl)与上皮一间质转化(EMT)相关基因在人膀胱移行细胞癌中的表达,探讨SATB1与EMT相关基因表达与膀胱癌病理分级、临床分期及淋巴结转移的关系。方法分别用免疫组织化学和实时定量逆转录聚合酶链反应(RT—qPCR)检测82例膀胱癌组织标本中的SATB1、E-钙黏蛋白(E—cadherin)及Snail的表达,每例标本均选用癌组织中心、癌旁组织,并选择癌组织远端正常黏膜作为对照。结果免疫组织化学显示SATB1、E—cadherin及Snail在膀胱各组标本的阳性表达率分别为:膀胱癌为90.24%、18.29%、80.49%,癌旁组织为17.07%、79.27%、30.49%,正常膀胱组织为8.54%、91.46%、15.85%,SATB1和Snail阳性表达率在膀胱癌组明显高于癌旁组织和正常膀胱组织组,E—cadhefin阳性表达率膀胱癌组明显低于癌旁组织和正常膀胱组织组,各组比较差异有统计学意义(P〈0.05);SATBl、E—cadhefin及Snail在膀胱癌不同病理分级中的阳性表达率分别为G.组76.19%、23.81%、61.90%,G,组92.00%、20.00%、76.00%,G,组97.22%、13.89%、94.44%,差异有统计学意义(P〈0.05);在膀胱癌不同临床分期中,SATBl、E—cadherin及Snail阳性表达率分别为:Tis~T.组为78.00%、24.24%、66.67%,T2~T4组为97.96%、14.29%、89.80%;在淋巴结转移组和非淋巴结转移组的阳性表达率为92.86%、25.00%、96.43%、88.89%、14.81%、72.22%,随着临床分期的增高和淋巴结转移的出现,SATBl和Snail表达水平逐渐升高,E—cadherin表达水平逐渐降低,各组间差异有统计学意义(P〈0.05);RT—qPCR结果显示,SATBl和Snail基因在膀胱癌中的表达明显高于癌旁组织和正常膀胱黏膜组织,而E-cadherin在膀胱癌中的表达明显低于癌旁组织和正常膀 展开更多
关键词 膀胱移行细胞癌 上皮-间质转化 AT富集序列特异性结合蛋白1 E-钙黏蛋白
激活素A对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响 被引量:2
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作者 方胜英 王华 +3 位作者 曾令兰 卢银平 刘朝 杨小铭 《临床消化病杂志》 2012年第2期 88-90,93,共4页
目的观察激活素A对人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系LX-2细胞增殖的影响。方法体外培养人HSC LX-2。设正常对照组和激活素A干预组,其中激活素A干预组分为9个浓度梯度,药物终浓度分别为1、2.5、5、10、20、40、80、160、320... 目的观察激活素A对人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系LX-2细胞增殖的影响。方法体外培养人HSC LX-2。设正常对照组和激活素A干预组,其中激活素A干预组分为9个浓度梯度,药物终浓度分别为1、2.5、5、10、20、40、80、160、320μg/L,采用CCK-8法检测激活素A对细胞增殖的影响;再选取25、50、100、200、300μg/L5个浓度分别作用24、48、72 h,观察激活素A对细胞增殖的影响。结果激活素A可刺激LX-2细胞增殖,1~2.5μg/L浓度范围内作用轻微(P〉0.05),而80~320μg/L的激活素A作用明显增强(P〈0.01),且在细胞指数生长期对刺激细胞增殖有时间浓度依赖性。结论激活素A可通过刺激HSC增殖,参与肝纤维化的形成。 展开更多
关键词 激活素A 肝星状细胞 肝纤维化
激活素A对LX-2分泌细胞外基质的影响
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作者 汪涌 方胜英 +2 位作者 朱励 祝剑方 曾令兰 《临床血液学杂志:输血与检验》 2012年第5期633-635,共3页
目的:了解激活素A(ACTA)对体外培养的人肝星状细胞(HSC)系LX-2细胞分泌细胞外基质(ECM)的影响。方法:将培养的LX-2细胞分成5组,除正常对照组外,其余4组分别加入浓度为10、20、100、200μg/LAC-TA,作用24、48和72h后取培养上清,... 目的:了解激活素A(ACTA)对体外培养的人肝星状细胞(HSC)系LX-2细胞分泌细胞外基质(ECM)的影响。方法:将培养的LX-2细胞分成5组,除正常对照组外,其余4组分别加入浓度为10、20、100、200μg/LAC-TA,作用24、48和72h后取培养上清,用化学免疫发光法检测Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-COL)、透明质酸(HA)及层粘连蛋白(LN)的含量。结果:ACTA刺激后的PⅢNP、Ⅳ-COL和HA表达水平均呈上升趋势,表现出与时间和剂量较强的依赖关系(成正比);而LH仅在后期(72h)将ACTA上调到200μg/L时,与正常对照组比才出现统计性差异。结论:ACTA能成功诱导HSC分泌ECM;PⅢNP等4项指标均能反映ACTA参与了肝纤维化的发生发展过程以及肝纤维化病理程度;如何阻断ACTA途径,为今后预防和治疗肝纤维化提供了新思路。 展开更多
关键词 激活素A 肝星状细胞 细胞外基质 肝纤维化
雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的调节作用 被引量:3
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作者 文璐 陈燕 +3 位作者 曾令兰 杨立靖 易莎 张纯 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1975-1980,共6页
目的研究雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的影响,探讨其表观遗传调控作用。方法采用MTT法检测细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI双标法流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR法检测U266细胞组蛋白赖氨酸去甲基化酶1(LSD1)m... 目的研究雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤U266细胞组蛋白去甲基化酶的影响,探讨其表观遗传调控作用。方法采用MTT法检测细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI双标法流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR法检测U266细胞组蛋白赖氨酸去甲基化酶1(LSD1)mRNA、组蛋白去甲基化酶(JMJD2B)mRNA表达的变化;激光共聚焦显微技术观察LSD1亚细胞定位情况及蛋白量的变化;Western blotting法检测在雷公藤内酯醇干预下LSD1和JMJD2B蛋白表达的变化。结果雷公藤内酯醇以剂量、时间相关方式抑制U266细胞增殖,与细胞培养24 h的IC50为153.2 nmol/L;以剂量相关方式诱导U266细胞凋亡,雷公藤内酯醇80 nmol/L作用U266细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡形态学改变,总凋亡率达32.9%。;以剂量相关方式抑制JMJD2B蛋白的表达,同时促进LSD1蛋白表达。结论雷公藤内酯醇在抑制U266细胞增殖、诱导其凋亡的同时,明显改变LSD1、JMJD2B的表达,其诱导U266细胞凋亡和抗肿瘤效应可能与其调节LSD1、JMJD2B表达有关。 展开更多
关键词 雷公藤内酯醇 多发性骨髓瘤U266细胞 细胞凋亡 细胞增殖 组蛋白去甲基化酶 表观遗传
TRAF6 shRNA对LPS/TLR4信号传导通路的体外干预作用 预览 被引量:2
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作者 陈锋 孙继民 +3 位作者 何生松 庞然 许娟娟 董继华 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第25期 2637-2643,共7页
目的: 体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因TRAF6的表达对RAW264.7细胞增殖的影响, 初步探讨TRAF6-shRNA对LPS/TLR4胞内信号转导的影响. 方法: 构建靶向抑制小鼠TRAF6的shRNA的真核表达载体, 转染RAW264.7细胞后培养48 h, 予... 目的: 体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因TRAF6的表达对RAW264.7细胞增殖的影响, 初步探讨TRAF6-shRNA对LPS/TLR4胞内信号转导的影响. 方法: 构建靶向抑制小鼠TRAF6的shRNA的真核表达载体, 转染RAW264.7细胞后培养48 h, 予以终浓度为100 ng/mL的LPS刺激, 0、4、8 h和16 h后收集细胞上清, 同时设空白对照及地塞米松阳性对照组, ELISA法测定上清液中TNF-α、IL-1β、TGF-β1, Real-time PCR方法检测TRAF6、IL-6、COX-2 mRNA, Western blot检测细胞核内NF-κB p65. 结果: 转染TRAF6-shRNA 48 h后, TRAF6 mRNA及蛋白表达明显受到抑制, 其抑制率分别为79.17%、68.74%. MTT法检测结果显示, 重组质粒转染72 h内对细胞增殖无明显的抑制. LPS刺激后, TNF-α、IL-1β、TGF-β1表达量都有明显变化(P〈0.01), 其中TNF-α、IL-1β在8 h达高峰, TGF-β1在16 h达高峰, TRAF6 基因沉默后, 以上细胞因子增长率明都显下降(P〈0.01). 实验结果显示, TRAF6基因沉默明显能下调IL-6、COX-2 mRNA表达, 并能抑制LPS激活的NF-κB核转位. 结论: 重组质粒TRAF6-shRNA能有效降低RAW264.7细胞中基因TRAF6 mRNA及蛋白的表达, 并对内毒素炎症反应具有明显的抑制效应. 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体相关因子6 RNA干扰 细菌脂多糖 Toll样受体4信号通路 核因子-κB
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人pre-miR-145真核表达载体的构建及其对胃癌细胞游走、侵袭活性的影响 被引量:3
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作者 张桓瑜 梁铸林 +2 位作者 郑丽端 童强松 董继华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期571-573,共3页
目的构建人微小RNAl45(miR-145)前体的真核表达载体,探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接人pPG-miR-EGFP载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lip... 目的构建人微小RNAl45(miR-145)前体的真核表达载体,探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法根据人pre-miR-145序列,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接人pPG-miR-EGFP载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR.145表达水平,黏附实验和Transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的pPG—miRl45-EGFP载体中插入基因片段与设计序列完全匹配;重组质粒转染SGC.7901细胞后,miR-145表达分别上调20.45倍(P〈0.01),细胞黏附能力分别下降51.5%(P〈0.01),细胞侵袭能力分别下降30.4%(P〈0.01)。结论成功构建人pre—miR-145真核表达载体,转染胃癌细胞过表达后,能抑制癌细胞的游走和侵袭能力。 展开更多
关键词 微小RNA145 胃癌 表达载体
积雪草酸对HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA表达的影响 预览 被引量:4
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作者 陈杰 曾令兰 +1 位作者 王华 刘朝 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第3期251-253,264共4页
目的检测积雪草酸对HSC-T6细胞Smad-7和PPARγ的mRNA表达的影响,探讨积雪草酸抗肝纤维化的分子生物学机制。方法用MTT实验检测积雪草酸对HSC-T6细胞的增殖抑制作用,计算抑制率,确定积雪草酸作用浓度;设置空白对照组与积雪草酸干预组,用... 目的检测积雪草酸对HSC-T6细胞Smad-7和PPARγ的mRNA表达的影响,探讨积雪草酸抗肝纤维化的分子生物学机制。方法用MTT实验检测积雪草酸对HSC-T6细胞的增殖抑制作用,计算抑制率,确定积雪草酸作用浓度;设置空白对照组与积雪草酸干预组,用半定量RT-RCR检测两组HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA表达差异。结果积雪草酸抑制HSC-T6细胞的增殖,药物浓度为10、20、30、40、50、70、90μmol/L时,抑制率分别为7.47%、12.42%、13.97%、21.32%、47.31%、51.18%、60.36%。空白对照组和积雪草酸干预组的半定量RT-PCR的结果分别为:Smad7/GAPDH mRNA空白对照组为0.267±0.037,积雪草酸干预组为0.358±0.035;PPARγ/GAPDH mRNA空白对照组为0.157±0.054,积雪草酸干预组为0.570±0.066。两组结果间比较差异具有统计学意义,P〈0.05。结论积雪草酸可以上调HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA的表达,从而抑制HSC-T6细胞合成和分泌胶原,改善肝纤维化的病理表现。 展开更多
关键词 肝细胞 Smad7蛋白质 PPARΓ RNA信使 积雪草酸
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特异性小干扰RNA靶向沉默Oct4基因表达对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响 被引量:3
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作者 万锋 朱朝辉 +4 位作者 吕磊 王智宇 邢诗安 曾甫清 王艳波 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期281-283,共3页
目的 观察RNA干扰沉默Oct4基因表达对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响.方法 将人膀胱癌EJ细胞,常规分为空白对照组、阴性对照组和实验转染组进行实验.体外化学合成Oct4基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),脂质体Lipofectamine 2000介导转染... 目的 观察RNA干扰沉默Oct4基因表达对人膀胱癌EJ细胞生物学的影响.方法 将人膀胱癌EJ细胞,常规分为空白对照组、阴性对照组和实验转染组进行实验.体外化学合成Oct4基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),脂质体Lipofectamine 2000介导转染人膀胱癌细胞株EJ细胞;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测特异性siRNA对Oct4基因在mRNA和蛋白水平上沉默效果;转染后采用噻唑蓝(MTT)比色法检测siRNA对细胞增殖的作用;AO/EB荧光染色法检测其凋亡;用细胞划痕和Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力.结果 成功转染Oct4-siRNA的膀胱癌EJ细胞,RT-PCR及Western blot分别显示Oct4 mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时细胞凋亡率增加(52.73%比11.70%);RNA干扰明显抑制EJ细胞迁移力和侵袭力(15.34±1.85比63.07±1.73).结论 Oct4-siRNA可有效抑制膀胱癌EJ细胞Oct4基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,Oct4-siRNA有效地调控EJ细胞恶性生物学行为. 展开更多
关键词 RNA干扰 Oct4基因 膀胱癌
干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱移行细胞癌中的表达及其意义 被引量:5
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作者 万锋 王艳波 +3 位作者 朱朝辉 王智宇 吕磊 邢诗安 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期452-454,F0004共4页
目的 观察干细胞关键转录因子Oct4在膀胱移行细胞癌中的表达,探讨Oct4的表达与膀胱癌病理分级和临床分期的关系.方法 分别用免疫组织化学和实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测74例膀胱癌组织、32例癌旁组织及24例正常膀胱组织... 目的 观察干细胞关键转录因子Oct4在膀胱移行细胞癌中的表达,探讨Oct4的表达与膀胱癌病理分级和临床分期的关系.方法 分别用免疫组织化学和实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测74例膀胱癌组织、32例癌旁组织及24例正常膀胱组织病理标本中的Oct4表达.结果 免疫组织化学显示Oct4在膀胱癌组织的表达明显高于癌旁组织和正常膀胱组织,阳性表达率分别为83.78%、21.87%、0.00%,各组差异有统计学意义(P<0.05),Oct4在膀胱癌不同病理分级中的阳性表达率分别为:G1组66.67%、G2组87.50%、G3组100.00%,在淋巴结转移组和非淋巴结转移组的阳性表达率为92.3%、79.1%,随着病理分级的升高和淋巴结转移的出现,Oct4表达水平逐渐升高,各组间差异有统计学意义(P<0.05),但不同分期的膀胱癌组织中Oct4表达差异无统计学意义(P>0.05);实时定量RT-PCR结果显示Oct4在膀胱癌组织中的表达是癌旁组织的2.00倍,是正常膀胱组织的3.41倍,各组间差异有统计学意义(P<0.05),但不同分期的膀胱癌组织中Oct4表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 Oct4的表达与膀胱癌的分级和淋巴结转移密切相关但与临床分期无关,Oct4的过高表达可能在膀胱癌的发生发展中起重要作用. 展开更多
关键词 膀胱移行细胞癌 OCT4
靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用
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作者 蒋国松 曾甫清 +3 位作者 郑丽端 童强松 董继华 侯晓华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期623-625,共3页
目的构建靶向人肝素酶(HPSE)的短发卡状RNA(shRNA)表达载体,探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接人pGenesil-1载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Li... 目的构建靶向人肝素酶(HPSE)的短发卡状RNA(shRNA)表达载体,探讨其基因沉默作用。方法根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接人pGenesil-1载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ,每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSEshRNA转染组3组,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Westernblot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平,黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力。结果所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配,载体构建成功;重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后,肝素酶mRNA表达分别下调78.6%(P〈0.01)、82.6%(P〈0.01)、81.9%(P〈0.01),肝素酶蛋白表达分别下调76.4%(P〈0.01)、85.9%(P〈0.01)、83.3%(P〈0.01),细胞黏附能力分别下降37.7%(P〈0.01)、44.6%(P〈0.01)、43.8%(P〈0.01),细胞侵袭能力分别下降66.8%(P〈0.01)、76.6%(P〈0.01)、80.5%(P〈0.01)。结论成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体,沉默肝素酶基因表达后,能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力。 展开更多
关键词 肝素酶 短发卡状RNA 肿瘤 基因表达
核苷类似物早期病毒学应答慢性乙型肝炎患者血清sTRAIL水平变化及意义 预览
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作者 魏屏 王华 +1 位作者 曾令兰 朱励 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期 174-177,共4页
目的:探索核苷类似物早期病毒学应答慢性乙型肝炎患者(CHB)血清sTRAIL水平变化及意义。方法:60例CHB均接受核苷类似物抗病毒药物治疗(拉米夫定或替比夫定),根据治疗24周末HBVDNA水平将患者分为完全病毒学应答组、部分病毒学应答... 目的:探索核苷类似物早期病毒学应答慢性乙型肝炎患者(CHB)血清sTRAIL水平变化及意义。方法:60例CHB均接受核苷类似物抗病毒药物治疗(拉米夫定或替比夫定),根据治疗24周末HBVDNA水平将患者分为完全病毒学应答组、部分病毒学应答组、无病毒学应答组,设正常对照组。采集治疗前、治疗4、12、24周末患者的血清,检测血清sTRAIL水平,同时检测IFN-γ、ALT水平。结果:患者治疗前sTRAIL、IFN-γ及ALT水平均较正常对照组升高(P〈0.05或P〈0.01)。sTRAIL水平在完全应答组治疗4周末、部分应答组治疗12周末下降。与治疗前比,差异均有统计学意义(P〈0.05),在治疗4周末完全应答组sTRAIL水平低于同期部分应答组(P〈0.05)。IFN-γ水平在完全应答组治疗4周末、部分应答组治疗12周末升高,与治疗前比差异均有统计学意义(P〈0.05),但完全应答组IFN-γ水平在治疗4周末与同期部分应答组差异无统计学意义。AⅡ水平在三组的治疗过程中均逐步下降,各时间点间差异均有统计学意义(P〈0.05)。完全应答组治疗前邢AIL水平与IFN-γ水平、A叩水平呈正相关(P〈0.01),治疗后sTRAIL水平与IFN-γ水平呈负相关(P〈0.05)。结论:CHB血清sTRAIL水平升高;核苷类似物抗病毒治疗早期病毒学应答者血清sTRAIL水平下降,尤其是完全应答者在疗程的第4周就有明显的变化。sTRAIL在CHB免疫损伤中起重要作用,在其核苷类似物抗病毒治疗免疫恢复中也起重要作用,可作为核苷类似物治疗CHB早期应答指标预测远期疗效。 展开更多
关键词 TRAIL 慢性乙型肝炎 核苷类似物 早期应答
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丹参酮ⅡA抑制电离辐射诱导胶质BV-2细胞激活的实验研究
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作者 董晓荣 董继华 +4 位作者 张瑞光 范丽 刘莉 张涛 伍钢 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期535-539,共5页
目的 探讨丹参酮ⅡA能否抑制电离辐射诱导小胶质细胞激活及其机制.方法 用1.0μg/ml丹参酮ⅡA处理小胶质细胞12 h,体外接受137Cs γ射线照射2、4、8、16和32 Gy后,用实时PCR检测致炎因子的变化,Western blot检测NF-κB p65表达的变化,... 目的 探讨丹参酮ⅡA能否抑制电离辐射诱导小胶质细胞激活及其机制.方法 用1.0μg/ml丹参酮ⅡA处理小胶质细胞12 h,体外接受137Cs γ射线照射2、4、8、16和32 Gy后,用实时PCR检测致炎因子的变化,Western blot检测NF-κB p65表达的变化,免疫荧光染色及共聚焦显微镜检测γ-H2AX和p65的表达变化.结果 16和32 Gy照射后小胶质细胞激活,形态学上从静息状态下的小胞体多突起转变为放疗后胞体变圆和突起皱缩,并释放致炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ和COX-2与对照组相比,分别上调(5.0±0.60)、(2.1±0.20)、(2.4±0.25)、(1.6±0.30)和(3.6±0.50)倍(P<0.05).丹参酮ⅡA能明显减少致炎细胞因子IL-1β、IL-6、IFN-γ和COX-2的释放,与对照组相比,分别为(2.3±0.10)、(1.8±0.20)、(0.3±0.30)、(0.2±0.10)(t=5.56,P<0.05).Western blot分析提示,接受8和16 Gy电离辐射后,NF-κB的亚单位p65在细胞核的表达显著增加,而使用丹参酮ⅡA后可以减低电离辐射后p65在细胞核的表达;免疫荧光染色提示在未照射组p65表达于细胞质,电离辐射后p65转位至细胞核,而使用丹参酮ⅡA后可以抑制电离辐射后p65的核转位,使其表达于细胞质.结论 电离辐射后迅速引起一系列的分子内信号传导,通过DNA双链断裂(DSB)触发信号传导激活NF-κB信号通路;丹参酮ⅡA可以抑制电离辐射后NF-κB信号通路下调致炎因子表达,从而抑制小胶质细胞激活. 展开更多
关键词 电离辐射 DNA双链断裂 小胶质细胞 炎性反应 丹参酮ⅡA
膀胱癌中Twist蛋白表达与上皮-间质转化的关系 被引量:5
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作者 张学能 李叶红 +6 位作者 邢诗安 朱朝辉 王智宇 吕磊 何远桥 刘朝 祝建芳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1134-1136,共3页
目的 探讨膀胱癌中上皮-间质转化因子Twist表达及其与上皮-间质转化及病理参数之间的关系.方法 应用E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达来检测上皮-间质转化的发生.采用免疫组织化学SABC法、实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot法观... 目的 探讨膀胱癌中上皮-间质转化因子Twist表达及其与上皮-间质转化及病理参数之间的关系.方法 应用E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达来检测上皮-间质转化的发生.采用免疫组织化学SABC法、实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot法观察45例膀胱癌组织和5例正常膀胱组织中Twist蛋白、E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达.结果 45例膀胱癌组织和5例正常膀胱黏膜中Twist阳性率分别为26.66%和0,随着膀胱癌的病理分级及临床分期的增高,Twist的表达率逐渐升高.且Twist在有淋巴转移中的表达明显高于无淋巴结转移的膀胱癌.Twist的表达与E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达显著相关.结论 Twist蛋白的表达对上皮-间质转化有重要影响,可为膀胱癌侵袭转移的研究和患者的预后判断提供参考. 展开更多
关键词 膀胱癌 TWIST蛋白 转移
Corilagin对小鼠小胶质细胞株照射后炎性反应因子表达的抑制作用
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作者 罗鸣 伍钢 +4 位作者 范丽 张瑞光 任精华 董继华 董晓荣 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期682-686,共5页
目的 研究抗炎药物Corilagin抑制放射引起小胶质细胞(BV-2)炎性反应的作用及其防护的分子机制.方法 细胞抑制实验(MTT)检测Corilagin对BV-2细胞的抑制率;Corilagin预处理小胶质细胞,12 h后,以0和32 Gy 2个放射剂量照射BV-2细胞,Real... 目的 研究抗炎药物Corilagin抑制放射引起小胶质细胞(BV-2)炎性反应的作用及其防护的分子机制.方法 细胞抑制实验(MTT)检测Corilagin对BV-2细胞的抑制率;Corilagin预处理小胶质细胞,12 h后,以0和32 Gy 2个放射剂量照射BV-2细胞,Real-time PCR检测小胶质细胞照射后不同时间点炎性反应因子IL-1β、TNF-α表达水平;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;Western blot检测各组细胞核转录因子NF-κB p65蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察各组细胞标志物Iba-1的表达、NF-κB p65核转位及Nemo的表达.结果 1~10μg/ml浓度范围内Corilagin对BV-2细胞增殖几乎无影响;照射后小胶质细胞表面标志物Iba-1表达明显,提示小胶质细胞激活,且炎性反应因子NO、TNF-α、IL-1β表达上调,而Corilagin(5μg/ml)可以显著抑制上述炎性反应因子的表达(tIL-1β=6.341,tTNF-α=3.411,tNO=3.134,P<0.05);Corilagin可抑制NF-κB活化蛋白Nemo,并显著抑制NF-κB p65的转位.结论 Corilagin可能通过NF-κB信号转导途径抑制照射后小胶质细胞的活化,从而下调炎性反应因子表达,保护神经元. 展开更多
关键词 CORILAGIN 小胶质细胞 NF-ΚB 放射性脑损伤
内脂素对THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的作用
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作者 庄世虹 成蓓 祝建芳 《武汉大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2010年第3期298-300,312共4页
目的:观察内脂素(visfatin)诱导人类单核细胞白血病细胞株THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达作用。方法:给予不同浓度的visfatin处理THP-1源性巨噬细胞,并加入低密度脂蛋白(LDL)孵育24 h后,... 目的:观察内脂素(visfatin)诱导人类单核细胞白血病细胞株THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达作用。方法:给予不同浓度的visfatin处理THP-1源性巨噬细胞,并加入低密度脂蛋白(LDL)孵育24 h后,运用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,运用逆转录聚合酶链反应和Western-blot检测PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果:高浓度的visfatin刺激负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞24 h后,细胞质内的脂滴明显增多。visfatin呈浓度依赖性的下调负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞中PPARγmRNA和蛋白表达(P〈0.05)。结论:visfatin对THP-1源性泡沫细胞形成中PPARγ表达水平的下调,这可能在动脉粥样硬化的发生发展起重要作用。 展开更多
关键词 内脂素 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ 泡沫细胞形成
脂多糖对人支气管上皮细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响
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作者 刘嵘 胡丽华 +3 位作者 李一荣 王琳 陈凤花 董继华 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期323-328,共6页
目的观察脂多糖对人支气管上皮细胞16HBESTAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响。方法采用普通RT—PCR检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达;Western印迹检测16HBE细胞STAT1、STAT4、STAT6的蛋白表达。分别采用不同浓度... 目的观察脂多糖对人支气管上皮细胞16HBESTAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响。方法采用普通RT—PCR检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达;Western印迹检测16HBE细胞STAT1、STAT4、STAT6的蛋白表达。分别采用不同浓度的脂多糖在不同的时间点处理16HBE细胞,采用Real—timePCR的方法检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达。结果1μg/m1的LPS处理16HBE细胞1h组、0.25μg/m1的LPS处理16HBE细胞4h组、1μg/ml的LPS处理16HBE细胞4h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组显著增高(P〈0.01);0.25μg/ml的LPS处理16HBE细胞2h组、1μg/ml的LPS处理16HBE细胞2h组、10μg/ml的LPS处理16HBE细胞2h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组有所增高(P〈0.05);1μg/ml的LPS处理16HBE细胞1h组STAT6的mRNA表达较正常对照组显著增高(P〈0.01)。所有LPS处理16HBE细胞组STAT3的mRNA表达均较正常对照组减低。结论人支气管上皮细胞表达STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA和STAT1、STAT4、STAT6的蛋白,一定剂量的脂多糖在某些时间点分别刺激了人支气管上皮细胞STAT1、sTAT4、STAT6的mRNA表达。 展开更多
关键词 脂多糖 支气管上皮细胞 信号传导子及转录激活子
人膀胱移行细胞癌上皮间质转化与胸腺素β4的关系 被引量:2
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作者 朱朝辉 曾甫清 +3 位作者 王智宇 吕磊 万锋 邢诗安 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期497-500,共4页
目的探讨人胸腺素β(Tβ)与膀胱移行细胞癌(BTCC)上皮-间质转化的相关性,以及与临床病理特征之间的关系。方法选用膀胱移行细胞癌手术切除标本60例,每例标本均选用癌组织中心、癌旁组织及其远端正常黏膜对照。采用定量逆转录-聚... 目的探讨人胸腺素β(Tβ)与膀胱移行细胞癌(BTCC)上皮-间质转化的相关性,以及与临床病理特征之间的关系。方法选用膀胱移行细胞癌手术切除标本60例,每例标本均选用癌组织中心、癌旁组织及其远端正常黏膜对照。采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、Westernblot和免疫组织化学技术检测切除标本中的Tβ4、整合素连接激酶(ILK)、E—cadherin和β-catenin的表达,并分析与各临床病理因素之间的关系。结果Tβ4在BTCC组织中的表达明显高于正常黏膜(91.7%比15.0%,P〈0.05),其在深层浸润组中的表达高于浅层浸润组(97.4%比81.0%,P〈0.05);ILK在BTCC组织中的表达明显高于正常黏膜(80.0%比18.3%,P〈0.05);β-catenin在BTCC组织中的表达高于正常黏膜(76.7%比26.7%,P〈0.05);E—cadherin在BTCC组织中的表达明显低于正常黏膜(30.0%比90.0%,P〈0.05);Tβ4与E—cadherin表达呈负相关,与ILK、β-catenin表达呈正相关。结论胸腺素β与膀胱移行上皮癌分化和转移有关,可能通过调控上皮-间质转化从而在膀胱移行上皮癌的侵袭转移过程中发挥作用。 展开更多
关键词 上皮-间质转化 膀胱移行细胞癌 胸腺素Β4
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