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羊口疮病毒ORF128锚蛋白对HEK293T细胞NF-κB信号通路的调节作用及机制
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作者 安雪珂 贾怀杰 +4 位作者 冯园 陈国华 何小兵 景志忠 王晓霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期243-249,共7页
目的研究羊口疮病毒(ORFV)感染HEK293T宿主细胞后,其编码的锚蛋白ORF128蛋白对宿主核因子κB(NF-κB)信号通路的影响及其机制。方法将来自ORFV/QH02/2010株的ORF128 DNA序列分别构建至真核表达载体pCMV-tag2B和pEGFP-N1;在病毒感染细胞... 目的研究羊口疮病毒(ORFV)感染HEK293T宿主细胞后,其编码的锚蛋白ORF128蛋白对宿主核因子κB(NF-κB)信号通路的影响及其机制。方法将来自ORFV/QH02/2010株的ORF128 DNA序列分别构建至真核表达载体pCMV-tag2B和pEGFP-N1;在病毒感染细胞期间,利用反转录PCR检测ORF128 mRNA水平、激光共聚焦显微镜检测ORF128蛋白的亚细胞定位;利用双荧光素酶报告基因检测系统分析ORF128对NF-κB信号通路的调节作用, Western blot法检测NF-κBp65的核移位以及NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白磷酸化水平。结果 ORF128蛋白在病毒感染早期表达且定位于宿主细胞核, ORF128蛋白可抑制NF-κB转录因子报告载体荧光素酶活性;ORF128的表达抑制NF-κBp65的核移位和磷酸化的IκBα(p-IκBα)的降解。结论 ORF128蛋白通过抑制p-IκBα蛋白的降解过程,阻止NF-κBp65蛋白核移位,进而抑制宿主NF-κB信号通路的活化。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(ORFV) 锚蛋白 核因子κB( NF-κB) 羊口疮病毒蛋白128(ORF128)
白花杜鹃水提液对多房棘球蚴的体外杀灭和体内感染疗效的研究
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作者 高艳 郝宝成 +7 位作者 宋向东 续文君 李立 闫鸿斌 吴金措姆 拉巴次旦 田波 贾万忠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1331-1339,共9页
为研究白花杜鹃水提液对多房棘球蚴--原头蚴的体外杀灭作用,以及对多房棘球蚴感染小鼠的治疗作用,通过在体外原头蚴培养体系中分别添加白花杜鹃水提液生药质量浓度分别为10、20和40 mg/mL,以阿苯达唑伊维菌素培养基(阿苯达唑的质量浓度... 为研究白花杜鹃水提液对多房棘球蚴--原头蚴的体外杀灭作用,以及对多房棘球蚴感染小鼠的治疗作用,通过在体外原头蚴培养体系中分别添加白花杜鹃水提液生药质量浓度分别为10、20和40 mg/mL,以阿苯达唑伊维菌素培养基(阿苯达唑的质量浓度为20 mg/mL、伊维菌素的质量浓度为0.83 mg/mL)、阿苯达唑伊维菌素溶剂培养基和常规培养基分别作为对照组进行原头蚴的培养,分别经第0、12小时和第1、2、3、4、5、6、7天观察记录各药物对原头蚴的杀灭效果,并于第7天通过台盼蓝染色比较各组死亡率;将50只感染多房棘球蚴1个月的雌性BALB/c小鼠随机分为5组,每组10只,依次为白花杜鹃水提液低剂量(10 mg/mL,RL组)、中剂量(20 mg/mL,RM组)、高剂量(40 mg/mL,RH组)治疗组,阿苯达唑伊维菌素治疗组(C组),感染不治疗组(IT组),另包括10只健康小鼠作为空白对照组(B组),各组小鼠连续灌胃给药后第7天,第30天后剖检,对小鼠脏器及棘球蚴组织固定并做石蜡切片进行病理学观察。结果显示,白花杜鹃水提液低、中、高剂量组,阿苯达唑伊维菌素溶液组,溶剂对照组以及空白对照组原头蚴培养后第7天后,原头蚴的死亡率分别为54.00%、56.53%、89.27%、57.60%、19.27%和15.80%,白花杜鹃高剂量组与对照组相比差异极显著(P<0.01)。多房棘球蚴感染小鼠腹部明显肿胀,剖检可见腹腔内有大量大小不等的包囊。石蜡切片结果表明,RH组小鼠脏器病变程度最低,且RH组和C组小鼠体内少量包囊发生钙化。研究表明,白花杜鹃水提液对体外原头蚴具有杀灭作用,且40 mg/mL白花杜鹃水提液对小鼠感染多房棘球蚴有一定的治疗作用。 展开更多
关键词 白花杜鹃水提液 多房棘球蚴 小鼠 原头蚴 杀灭率 钙化
羊口疮病毒青海QH02株ORF011基因的克隆、原核表达及鉴定
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作者 耿嘉谦 贾怀杰 +4 位作者 陈国华 何小兵 房永祥 景志忠 王晓霞 《中国病毒病杂志》 CAS 2019年第3期188-194,共7页
目的克隆羊口疮病毒QH02株ORF011基因并进行序列分析及原核表达、鉴定。方法提取羊口疮病毒QH02株的DNA,根据GenBank中(GU320351.1)的序列设计并合成引物,PCR扩增ORF011基因。将测序正确的序列用生物信息学软件对其基因及蛋白的结构进... 目的克隆羊口疮病毒QH02株ORF011基因并进行序列分析及原核表达、鉴定。方法提取羊口疮病毒QH02株的DNA,根据GenBank中(GU320351.1)的序列设计并合成引物,PCR扩增ORF011基因。将测序正确的序列用生物信息学软件对其基因及蛋白的结构进行预测,并将基因构建至pET-32a(+)原核表达载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),挑取阳性克隆测序正确后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)诱导表达,经十二烷基硫酸钠-十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)、Western-blot验证重组蛋白反应原性。结果 PCR扩增得到1 137 bp的ORF011基因片段,重组蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式存在,重组蛋白相对分子质量为60×10~3,且纯度较高,Western-blot检测结果表明目的蛋白具有较好的反应原性。结论构建的原核表达系统可以成功表达B2L蛋白,经Western-blot验证具有良好的反应原性,可作为羊口疮防控产品研发的候选分子。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORF011基因 克隆 生物信息学分析 原核表达
蛇蛔虫及蛇蛔虫病的研究进展 预览
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作者 周成艳 马君 +3 位作者 黄兵 翟斌涛 徐前明 朱兴全 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期108-112,共5页
蛇蛔虫是常见的且严重危害蛇健康的一类寄生虫,呈世界性分布,蛇感染后主要造成胃肠道损伤,影响其消化功能。蛇蛔虫的感染可通过流行病学调查、临床剖检以及粪便检查等方法进行诊断。蛇蛔虫病的治疗主要通过服用磷酸左旋咪唑等咪唑类抗... 蛇蛔虫是常见的且严重危害蛇健康的一类寄生虫,呈世界性分布,蛇感染后主要造成胃肠道损伤,影响其消化功能。蛇蛔虫的感染可通过流行病学调查、临床剖检以及粪便检查等方法进行诊断。蛇蛔虫病的治疗主要通过服用磷酸左旋咪唑等咪唑类抗寄生虫药。本文对蛇蛔虫病的病原种类、危害、流行概况、分子鉴定研究现状、治疗与预防措施等方面进行综述,旨在为蛇蛔虫病的研究和防控提供参考。 展开更多
关键词 蛇蛔虫 蛇蛔虫病 流行 分子鉴定
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应用qRT-PCR方法检测鼠痘病毒在小鼠不同组织中的差异分布 预览
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作者 张君 成温玉 +3 位作者 贾怀杰 牛贤云 程国锋 景志忠 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期13-18,共6页
鼠痘(mouse pox)是由鼠痘病毒(Ectromelia virus,ECTV)感染实验小鼠引起的一种毁灭性、烈性传染病,为SPF小鼠必须排除的病原之一。本研究基于ECTV主要核蛋白P4b基因片段建立了实时定量PCR方法(real-time quantitative PCR,qRTPCR),用于... 鼠痘(mouse pox)是由鼠痘病毒(Ectromelia virus,ECTV)感染实验小鼠引起的一种毁灭性、烈性传染病,为SPF小鼠必须排除的病原之一。本研究基于ECTV主要核蛋白P4b基因片段建立了实时定量PCR方法(real-time quantitative PCR,qRTPCR),用于检测C57BL/6小鼠感染ECTV后心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和皮肤中的病毒载量,并用病理组织学观察验证了qRT-PCR方法的特异性和可靠性。结果表明,所建立的qRT-PCR方法能够准确检测小鼠感染后d5和d7不同组织的病毒载量,d5不同组织中病毒载量低于d7,与病理组织学检测结果一致。本研究建立的qRT-PCR检测方法且具有较高的灵敏性、特异性和可靠性,可用于ECTV感染细胞和组织器官中病毒载量、分布和消长动态的定性定量检测。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 实时定量PCR 定量检测 分布
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捻转血矛线虫病的研究进展 预览
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作者 李芳芳 张挺 +6 位作者 周彩显 冯新港 杜爱芳 索勋 李祥瑞 朱兴全 胡敏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期107-111,共5页
捻转血矛线虫病是由主要寄生于反刍动物皱胃的捻转血矛线虫引起的一种重要的寄生线虫病,在我国草地牧区普遍流行,可引起宿主消瘦、贫血等慢性消耗性症状,严重感染甚至可引起死亡,给我国养殖业带来巨大的经济损失。由于基层养殖人员常常... 捻转血矛线虫病是由主要寄生于反刍动物皱胃的捻转血矛线虫引起的一种重要的寄生线虫病,在我国草地牧区普遍流行,可引起宿主消瘦、贫血等慢性消耗性症状,严重感染甚至可引起死亡,给我国养殖业带来巨大的经济损失。由于基层养殖人员常常忽视寄生线虫病的危害,缺乏基本的防控常识和驱虫意识,从而错过了预防和治疗该病的最佳时机,最终导致动物大批感染,极大的降低了动物的品质和养殖的经济效益。本文从捻转血矛线虫的形态和生活史着手,介绍了捻转血矛线虫病的危害和症状、诊断和治疗、防控方法及感染和致病的相关分子机制研究进展,希望能为该病的防控提供一定的指导。 展开更多
关键词 捻转血矛线虫病 感染 致病分子机制 防控
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VP3 G-H环中氨基酸突变对O型口蹄疫病毒生物学特性的影响
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作者 陈冬冬 白兴文 +12 位作者 宫晓华 包慧芳 李平花 李冬 付元芳 白启峰 袁红 孙普 马雪青 曹轶梅 陈应理 卢曾军 刘在新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1285-1294,共10页
【目的】为了研究O型口蹄疫病毒VP3 G–H环中氨基酸突变对其生物学特性的影响。【方法】借助口蹄疫病毒反向遗传操作技术平台拯救出2株定点突变体rHNV3174Y和rHND3173N+V3174E+N3179C。进行蚀斑形成试验、一步生长曲线的绘制、TCID50和L... 【目的】为了研究O型口蹄疫病毒VP3 G–H环中氨基酸突变对其生物学特性的影响。【方法】借助口蹄疫病毒反向遗传操作技术平台拯救出2株定点突变体rHNV3174Y和rHND3173N+V3174E+N3179C。进行蚀斑形成试验、一步生长曲线的绘制、TCID50和LD50的测定、间接免疫荧光与激光共聚焦显微镜检测。【结果】结果显示,与骨架病毒rHN相比,虽然rHNV3174Y和rHND3173N+V3174E+N3179C对BHK-21细胞的感染性及其蚀斑表型和复制动力学无显著性差异;但rHNV3174Y和rHND3173N+V3174E+N3179C对乳鼠的致病力明显减弱,且均获得了小窝蛋白介导侵染CHO-K1细胞的能力。【结论】VP3上第3174位特征性氨基酸突变影响O型口蹄疫病毒感染宿主细胞的毒力及其内吞作用路径,这有助于我们认知VP3 G-H环在口蹄疫病毒粒子立体空间构象中潜在的作用。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP3 G-H环 定点突变体 生物学特性 内吞作用
罗伊氏乳杆菌ZL2a株体外益生潜能的评价
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作者 贾丹 王雅 +7 位作者 李禤 王杰 李贺海 刘军龙 关贵全 罗建勋 殷宏 李有全 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1450-1456,共7页
为了评价新分离猪源罗伊氏乳杆菌ZL2a株的益生潜能,通过测定其生长曲线、产酸能力、对低pH和高胆盐环境的耐受性、在体外模拟胃肠道溶液中的存活能力、抑菌能力、抗生素抗性及对Caco-2细胞的黏附能力评价了该菌株的益生特性。结果表明,... 为了评价新分离猪源罗伊氏乳杆菌ZL2a株的益生潜能,通过测定其生长曲线、产酸能力、对低pH和高胆盐环境的耐受性、在体外模拟胃肠道溶液中的存活能力、抑菌能力、抗生素抗性及对Caco-2细胞的黏附能力评价了该菌株的益生特性。结果表明,菌株ZL2a产酸能力较强且能迅速进入对数生长期;在pH为2.5的MRS培养基中耐受4 h时活菌数目基本不变,在胆盐浓度为3 g/L的条件下至少可耐受4 h,在人工模拟胃液和肠液中耐受8 h时存活率高于70%;对大肠杆菌、溶血性葡萄球菌、普通变形杆菌等致病菌具有广谱的抑菌效果;对Caco-2细胞的黏附能力为621±30.4 CFU/30 cells。这些特性表明,新分离的罗伊氏乳杆菌ZL2a株具有优良的体外益生性能,可作为潜在饲用益生菌进一步研究。 展开更多
关键词 罗伊氏乳杆菌 益生特性 酸和胆盐耐受性 抑菌试验 黏附 CACO-2细胞
双芽巴贝斯虫Hsp20一新基因型的发现及生物学特性分析
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作者 曲志强 张亮 +10 位作者 罗金 陈泽 任巧云 刘文阁 倪军 许肖枫 吴泽功 罗建勋 殷宏 孙晓林 刘光远 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期567-573,共7页
为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的1... 为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的18种不同物种的氨基酸序列构建遗传发育树,结果表明本实验获得的双芽巴贝斯虫与美国株和中国新疆株的亲缘关系最近。对其氨基酸序列进行比对分析,发现在第31~85位点存在冗余,与公布的Hsp20氨基酸序列存在明显的差异。通过同源建模分析,发现该冗余致使Hsp20蛋白在第7号位形成1个环形结构,从而引起了第3号位的拉伸。通过生物信息学分析得出,获得的双芽巴贝斯虫甘肃株的Hsp20基因是一新基因型。该基因型的存在为更加准确诊断双芽巴贝斯虫病提供了依据。 展开更多
关键词 双芽巴贝斯虫 Hsp20 基因型 生物学特征
MPLA对口蹄疫O型灭活疫苗的免疫增强效应 预览
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作者 赵波 房永祥 +4 位作者 贾怀杰 陈国华 何小兵 杨孝朴 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1-9,共9页
【目的】探讨单磷酰脂质A(monophosphoryl lipid A,MPLA)对口蹄疫(food and mouth disease,FMD)O型灭活疫苗的免疫增强效应,提高口蹄疫灭活疫苗的免疫效果.【方法】通过检测MPLA刺激脾脏细胞的增殖情况和刺激DC后成熟及吞噬能力的大小,... 【目的】探讨单磷酰脂质A(monophosphoryl lipid A,MPLA)对口蹄疫(food and mouth disease,FMD)O型灭活疫苗的免疫增强效应,提高口蹄疫灭活疫苗的免疫效果.【方法】通过检测MPLA刺激脾脏细胞的增殖情况和刺激DC后成熟及吞噬能力的大小,对MPLA的体外免疫刺激效应进行评价;将MPLA与ISA 206和灭活FMDVO型抗原配制疫苗后免疫小鼠,通过检测抗体水平、T细胞亚群、抗原特异性淋巴细胞增殖及浆细胞的比例,评价MPLA对口蹄疫O型灭活疫苗的免疫增强作用.【结果】MPLA体外可刺激B淋巴细胞增殖,上调DC表面共刺激分子的表达,使其吞噬能力减弱;制备疫苗免疫小鼠,血清抗体水平检测发现,MPLA组在7、14 d时抗体水平显著高于ISA 206组,且其抗原特异性的B淋巴细胞增殖,外周血中CD19+CD27+CD38+浆细胞的比例也显著高于ISA 206组.【结论】MPLA通过促进B淋巴细胞的增殖与活化增加了抗体的产生,增强了小鼠对口蹄疫疫苗的免疫应答能力,证实MPLA是口蹄疫疫苗的良好候选免疫佐剂. 展开更多
关键词 MPLA 口蹄疫 免疫 疫苗佐剂
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环形泰勒虫spm-N蛋白的原核表达及鉴定
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作者 杜晓悦 杨晓野 田占成 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第6期92-95,共4页
子孢子与裂殖体2(spm2)是环形泰勒虫重要的表面抗原。为了深入研究环形泰勒虫spm2主要抗原区域spm-N蛋白的功能,利用大肠杆菌表达系统表达重组spm-N蛋白并进行纯化及鉴定。通过序列设计合成特异性引物,利用PCR扩增环形泰勒虫spm-N基因片... 子孢子与裂殖体2(spm2)是环形泰勒虫重要的表面抗原。为了深入研究环形泰勒虫spm2主要抗原区域spm-N蛋白的功能,利用大肠杆菌表达系统表达重组spm-N蛋白并进行纯化及鉴定。通过序列设计合成特异性引物,利用PCR扩增环形泰勒虫spm-N基因片段,将目的片段定向克隆至表达载体pET30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,用IPTG诱导表达重组蛋白。结果显示:重组spm-N蛋白以可溶性的形式表达,获得了较高纯度的spm-N蛋白,且该蛋白的反应原性和特异性均较好。本研究成功表达了重组spm-N蛋白,为深入揭示spm-N蛋白的功能提供了依据。 展开更多
关键词 牛环形泰勒虫 spm-N蛋白 原核表达 蛋白纯化
2018年全国省级兽医系统实验室检测能力比对结果分析 预览
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作者 邴国霞 金萍 +6 位作者 刘伟 董昕欣 吴迪 王晓英 原霖 李雁冰 郭建宏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期131-133,I0010共4页
实验室检测能力比对是农业农村部加强兽医系统实验室管理的主要抓手,也是评价和提高实验室管理水平和检测能力的重要手段。按照《农业农村部办公厅关于开展2018年兽医系统实验室检测能力比对工作的通知》[1]要求,中国动物疫病预防控制... 实验室检测能力比对是农业农村部加强兽医系统实验室管理的主要抓手,也是评价和提高实验室管理水平和检测能力的重要手段。按照《农业农村部办公厅关于开展2018年兽医系统实验室检测能力比对工作的通知》[1]要求,中国动物疫病预防控制中心组织实施了2018年兽医系统省级实验室能力比对,全国32个省级兽医实验室参加,在规定时间内完成了比对样品制备、分发、检测和结果回收。 展开更多
关键词 实验室检测 兽医实验室 能力比对 系统 省级 实验室管理 动物疫病预防 检测能力
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牛羊泰勒虫病的流行、危害、防控技术及致病机制研究进展 预览
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作者 刘军龙 关贵全 +6 位作者 刘群 李祥瑞 赵俊龙 周金林 张西臣 朱兴全 罗建勋 《中国动物保健》 2019年第6期55-57,共3页
牛羊泰勒虫病是由寄生于牛或羊的淋巴样细胞和红细胞内的泰勒虫所引起的一类血液原虫病,通过硬蜱传播,在我国农牧区广泛分布,患病动物表现为发热、贫血、黄疸、浅表淋巴结肿胀等典型临床症状,重症病例常会导致死亡,给养殖业带来巨大经... 牛羊泰勒虫病是由寄生于牛或羊的淋巴样细胞和红细胞内的泰勒虫所引起的一类血液原虫病,通过硬蜱传播,在我国农牧区广泛分布,患病动物表现为发热、贫血、黄疸、浅表淋巴结肿胀等典型临床症状,重症病例常会导致死亡,给养殖业带来巨大经济损失。本文将从泰勒虫病主要病原、流行特点、临床症状、诊断治疗、防控方法及致病机制等方面对该病进行介绍。 展开更多
关键词 泰勒虫病 临床症状 诊断治疗 防控 致病机制
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宿主细胞基因序列插入亚洲1型口蹄疫病毒导致病毒对牛的致病性减弱的研究
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作者 邹兴启 朱元源 +13 位作者 包慧芳 孙普 郭晓宇 徐璐 万建青 夏应菊 张乾义 徐嫄 李翠 王兆 王琴 刘在新 朱鸿飞 赵启祖 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期152-158,共7页
1株Asia 1型口蹄疫疫苗毒株在BHK21悬浮培养细胞中传代时与宿主BHK21细胞m RNA重组,导致VP1第206位与第207位氨基酸之间插入了VDLV序列,该插入突变使得疫苗免疫效果大幅下降,不能产生有效保护。比较发现,含12 nt插入序列的变异毒株(Vac-... 1株Asia 1型口蹄疫疫苗毒株在BHK21悬浮培养细胞中传代时与宿主BHK21细胞m RNA重组,导致VP1第206位与第207位氨基酸之间插入了VDLV序列,该插入突变使得疫苗免疫效果大幅下降,不能产生有效保护。比较发现,含12 nt插入序列的变异毒株(Vac-Asia1-VDLV)与亲本毒株(Asia 1/HN/06)在BHK21细胞上的生长曲线存在较大差异,变异毒株可感染CHO-K1,pgsA-745,pgsB-618,pgsD-677细胞,毒价可达到1×10^5PFU/mL以上,而亲本毒不能感染CHO类细胞并产生蚀斑。动物试验结果显示,乳鼠半数致死量(LD50)与亲本毒株相比变化不明显。但牛感染试验表明,大剂量(1×10^7LD50)接种牛舌面,Vac-Asia1-VDLV不引起体温反应和其它临床症状,荧光定量PCR检测鼻拭子和血液时未发现病毒,而Asia 1/HN/06引起典型的口蹄疫症状,鼻拭子和血液中检出病毒。上述试验结果表明,与亲本毒相比,变异毒株Vac-Asia 1-VDLV对牛的致病性明显降低。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 ASIA 1型 重组 致病力
片形吸虫分子检测技术的研究进展 被引量:1
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作者 袁晓丹 黄思扬 +2 位作者 田艾灵 朱兴全 王春仁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期241-246,共6页
片形吸虫病(Fascioliasis)是由片形属吸虫(Fasciola spp.)感染所引起的一种危害严重的人兽共患寄生虫病,病原主要包括大片吸虫(Fasciola gigantica)、肝片吸虫(Fasciola hepatica)及其中间型。该病在全球范围内流行,严重损害人及动物健... 片形吸虫病(Fascioliasis)是由片形属吸虫(Fasciola spp.)感染所引起的一种危害严重的人兽共患寄生虫病,病原主要包括大片吸虫(Fasciola gigantica)、肝片吸虫(Fasciola hepatica)及其中间型。该病在全球范围内流行,严重损害人及动物健康,威胁公共卫生安全,造成巨大的经济损失。尽管目前在片形吸虫病的免疫预防及新型药物制剂的研发方面已经取得一些进展,但是该病防控的前提是对片形吸虫病的准确诊断及检测。本文对近二十年来片形吸虫病的分子诊断与检测技术的研究进展进行总结,包括基于核糖体DNA、线粒体DNA及全基因组序列的片形吸虫分子鉴定,以及基于这些遗传标记进行PCR诊断、TaqMan探针实时定量PCR、环介导等温扩增试验(LAMP)等检测及诊断方法,以期为人和动物片形吸虫病的早期诊断及微量检测技术的研究提供科学参考。 展开更多
关键词 片形吸虫病 大片吸虫 肝片吸虫 分子诊断 检测
大片吸虫钙结合蛋白2基因的克隆表达及其表达产物的免疫活性研究
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作者 袁晓丹 张念章 +3 位作者 黄思扬 马元元 王春仁 朱兴全 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期294-300,共7页
通过克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白2(FgCaBP2)基因,旨在探索其作为诊断抗原的可行性。在分析大片吸虫蛋白组数据的基础上,根据肝片吸虫CaBP2基因组序列和转录组数据,设计以NdeⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物。以大片吸虫总RNA为模板,通过R... 通过克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白2(FgCaBP2)基因,旨在探索其作为诊断抗原的可行性。在分析大片吸虫蛋白组数据的基础上,根据肝片吸虫CaBP2基因组序列和转录组数据,设计以NdeⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物。以大片吸虫总RNA为模板,通过RT-PCR获得FgCaBP2基因,对其进行测序、生物信息学分析。构建pET-30a-FgCaBP2重组表达载体,在大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中完成诱导、表达;对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析,并用目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果表明,FgCaBP2基因的开放阅读框长570 bp,编码189个氨基酸残基。生物信息学预测显示,FgCaBP2主要以α螺旋为主,β折叠较少,有7个β转角、4个较长的无规则卷曲、含有4个亲水区、具有较多的B细胞抗原表位。SDS-PAGE分析表明,FgCaBP2呈现出可溶性表达。Western-blot分析表明,25 ku大小的特异性目的蛋白条带能够很好地被大片吸虫感染的阳性水牛血清识别,具有良好的免疫反应性。本研究成功克隆了FgCaBP2基因,并获得了可溶性重组蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,是潜在的大片吸虫病诊断抗原。 展开更多
关键词 大片吸虫 钙结合蛋白2(CaBP2) 克隆 表达 诊断候选抗原
环形泰勒虫喀什株感染牛淋巴细胞系的建立及其生物学特征的鉴定
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作者 马全英 李有全 +8 位作者 刘军龙 刘爱红 王锦明 赵帅阳 陈银银 徐建林 殷宏 关贵全 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期144-151,共8页
建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前... 建立1株环形泰勒虫(Theileria annulata)感染的牛淋巴细胞系,分析其生物学特征,为环形泰勒虫病疫苗研发提供新的细胞系。用环形泰勒虫喀什株感染的小亚璃眼蜱成蜱叮咬健康黄牛,当动物体温升高,体表淋巴结肿大时,用显微镜检查肩前和股前淋巴结穿刺物涂片,出现裂殖体感染的淋巴细胞时,手术摘取淋巴结,无菌条件下进行淋巴细胞的分离培养;选择合适的培养条件对该细胞进行适应性传代培养,可稳定传代培养后,绘制细胞生长曲线,测定细胞倍增时间和细胞周期,测定细胞系环形泰勒虫18S rRNA基因序列,通过序列比对分析其亲缘关系。结果显示,建立了1株可传代培养的环形泰勒虫喀什株裂殖体感染的淋巴细胞系(TaKashi),接种5.0×10^5 mL^-1的细胞,经72 h培养周期,细胞浓度可达到(2.8~3.0)×10^6mL^-1,细胞存活率维持在90%以上;细胞群体倍增时间为33.4 h。细胞周期分析显示,G1期占46.2%,G2期占10.4%,S1期占43.4%,TaKashi传50代后仍然保持着淋巴细胞的形态学特征。18S rRNA基因序列比对及抗原基因Tams1同源性分析显示,该虫株与我国不同省份流行的环形泰勒虫虫株的相似性在91.9%以上,并处于同一个分支。 展开更多
关键词 环形泰勒虫 细胞培养 牛淋巴细胞 细胞系
新疆部分地区蜱传斑点热立克次体的分子流行病学研究 预览
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作者 曲志强 林汉亮 +5 位作者 许肖枫 马力克·艾则孜 罗毅 马站 孙晓林 刘光远 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期10-16,共7页
【目的】调查新疆地区斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsia,SFGR)在蜱虫中的感染情况及其分布.【方法】2018年4~5月,采用人工布旗法对新疆地区10个县(市)的游离蜱和寄生于家畜体表的蜱虫进行采集并鉴定.对采集的蜱虫提取... 【目的】调查新疆地区斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsia,SFGR)在蜱虫中的感染情况及其分布.【方法】2018年4~5月,采用人工布旗法对新疆地区10个县(市)的游离蜱和寄生于家畜体表的蜱虫进行采集并鉴定.对采集的蜱虫提取基因组,利用SFGR特异引物对提取的基因组进行PCR扩增及测序分析,用MEGA 6.0软件构建分子系统进化树.【结果】共采集蜱虫2 079只,经鉴定分析,采集的蜱种包括革蜱属、璃眼蜱属和扇头蜱属3属的7个种.扩增得到了包括拉欧蒂立克次体(Rickettsia raoultii)、斯洛伐克立克次体(Rickettsia slovaca)等在内的4种已知SFGR和2株未定种.对其阳性率进行统计结果表明,不同地区的蜱虫阳性率为40%~80%,平均阳性率为51.5%;不同蜱种间的感染率为1.1%~80%.【结论】通过对新疆地区SFGR病原的流行病学调查表明,被检地区SFGR病原阳性率较高,存在2种病原交叉感染现象,且扩增到的病原多属我国少见的人兽共患病病原. 展开更多
关键词 斑点热立克次体 阳性率 系统进化分析
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兔抗O型口蹄疫VLPs酶标抗体的制备及初步应用 预览
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作者 贺佳慧 白满元 +3 位作者 郭慧琛 孙世琪 张小丽 马小军 《动物医学进展》 北大核心 2019年第1期20-24,共5页
为制备兔抗O型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)的酶标抗体,进一步建立O型口蹄疫病毒的ELISA检测方法,通过原核表达、体外纯化和组装O型口蹄疫VLPs,免疫家兔制备兔抗O型口蹄疫VLPs 高免血清,并采用亲和层析法纯化IgG,改良过碘酸钠法制备兔抗O型... 为制备兔抗O型口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)的酶标抗体,进一步建立O型口蹄疫病毒的ELISA检测方法,通过原核表达、体外纯化和组装O型口蹄疫VLPs,免疫家兔制备兔抗O型口蹄疫VLPs 高免血清,并采用亲和层析法纯化IgG,改良过碘酸钠法制备兔抗O型口蹄疫VLPs的酶标抗体(rabbit anti-type O foot-and-mouth disease IgG-HRP)。结果显示,兔抗O型口蹄疫VLPs 高免血清效价达1∶4 096,纯化后的IgG纯度达90%,效价达1∶512 000。表明获得了高纯度的兔抗O型口蹄疫VLP的酶标抗体,可用于O型口蹄疫的ELISA检测。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 病毒样颗粒 IgG纯化 酶标抗体
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羊口疮病毒疫苗株和野毒株F1L基因的比较分析 预览
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作者 王文莉 魏楠楠 +5 位作者 徐守兴 卢炳洲 张大俊 张克山 郑海学 刘湘涛 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期83-87,共5页
羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,ORFV F1L基因编码肝素结合蛋白。为比较分析ORFV疫苗株和野毒株编码的F1L基因的特征,本试验对疫苗株和野毒株的F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学... 羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,ORFV F1L基因编码肝素结合蛋白。为比较分析ORFV疫苗株和野毒株编码的F1L基因的特征,本试验对疫苗株和野毒株的F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学相关软件及方法,对两者的F1L基因在核酸水平和氨基酸水平的变异情况及其二、三级蛋白结构变化情况进行了比较分析。结果显示,此次测定的ORFV疫苗株与野毒株F1L基因核苷酸序列相似性为95.9%,氨基酸序列相似性为94.5%。本研究结果为揭示ORFV异源宿主致弱的机制积累了资料。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 疫苗株 野毒株 F1L基因
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