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高效体积排阻色谱法定量检测口蹄疫疫苗中146S的疫苗预处理方法
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作者 宋艳民 杨延丽 +6 位作者 苏志国 刘丽丽 朱元源 徐嫄 邹兴启 赵启祖 张松平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1441-1452,共12页
旨在建立一种口蹄疫灭活病毒疫苗的处理方法,去除尺寸排阻色谱法(HPSEC)检测146S抗原过程中的杂质干扰,获得最佳的检测信号并实现146S抗原含量的准确测定。分别考察了超速离心法、PEG沉淀法、核酸酶消化法对两批疫苗样品中的HPSEC检测... 旨在建立一种口蹄疫灭活病毒疫苗的处理方法,去除尺寸排阻色谱法(HPSEC)检测146S抗原过程中的杂质干扰,获得最佳的检测信号并实现146S抗原含量的准确测定。分别考察了超速离心法、PEG沉淀法、核酸酶消化法对两批疫苗样品中的HPSEC检测干扰杂质的去除效果。在优化条件下,超速离心法处理后146S检测结果分别为7.1、7.6 μg/mL,PEG沉淀法为9.7、10.4 μg/mL;酶消化法处理后的检测值最高,分别为10.5、10.4 μg/mL,且杂质去除完全、处理速度快、操作条件温和。通过响应面法确定最优酶消化处理条件如下:200 μL水相中添加终浓度421 U/mL的Benzonase,25.1 ℃下反应1.29 h。在该最优条件下,对4家企业各3种不同血清型共12批疫苗样品进行146S含量检测,结果表明建立的方法对不同疫苗均有良好适用性,且重复性好(RSD<5.3%,n=3)。通过该处理方法,解决了杂质对146S定量检测的干扰,扩大了HPSEC检测技术的应用范围,进一步确保了检测结果的准确可靠。 展开更多
关键词 尺寸排阻色谱 口蹄疫疫苗 146S 定量 酶消化
宿主细胞基因序列插入亚洲1型口蹄疫病毒导致病毒对牛的致病性减弱的研究
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作者 邹兴启 朱元源 +13 位作者 包慧芳 孙普 郭晓宇 徐璐 万建青 夏应菊 张乾义 徐嫄 李翠 王兆 王琴 刘在新 朱鸿飞 赵启祖 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期152-158,共7页
1株Asia 1型口蹄疫疫苗毒株在BHK21悬浮培养细胞中传代时与宿主BHK21细胞m RNA重组,导致VP1第206位与第207位氨基酸之间插入了VDLV序列,该插入突变使得疫苗免疫效果大幅下降,不能产生有效保护。比较发现,含12 nt插入序列的变异毒株(Vac-... 1株Asia 1型口蹄疫疫苗毒株在BHK21悬浮培养细胞中传代时与宿主BHK21细胞m RNA重组,导致VP1第206位与第207位氨基酸之间插入了VDLV序列,该插入突变使得疫苗免疫效果大幅下降,不能产生有效保护。比较发现,含12 nt插入序列的变异毒株(Vac-Asia1-VDLV)与亲本毒株(Asia 1/HN/06)在BHK21细胞上的生长曲线存在较大差异,变异毒株可感染CHO-K1,pgsA-745,pgsB-618,pgsD-677细胞,毒价可达到1×10^5PFU/mL以上,而亲本毒不能感染CHO类细胞并产生蚀斑。动物试验结果显示,乳鼠半数致死量(LD50)与亲本毒株相比变化不明显。但牛感染试验表明,大剂量(1×10^7LD50)接种牛舌面,Vac-Asia1-VDLV不引起体温反应和其它临床症状,荧光定量PCR检测鼻拭子和血液时未发现病毒,而Asia 1/HN/06引起典型的口蹄疫症状,鼻拭子和血液中检出病毒。上述试验结果表明,与亲本毒相比,变异毒株Vac-Asia 1-VDLV对牛的致病性明显降低。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 ASIA 1型 重组 致病力
抗火鸡疱疹病毒特异性血清的制备与检测
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作者 秦义娴 刘丹 +6 位作者 杨承槐 赵鹏 陈晓春 黄小洁 李俊平 王乐元 侯力丹 《中国家禽》 北大核心 2019年第5期21-24,共4页
抗火鸡疱疹病毒(Turkey herpes virus,HVT)特异性标准血清是鸡HVT活疫苗成品和毒种鉴别检测以及外源病毒检测中常用的标准品。为了制备检测用抗鸡HVT特异性血清,研究选取200只2周龄SPF鸡进行了针对HVT的基础免疫和加强免疫,于第四次免疫... 抗火鸡疱疹病毒(Turkey herpes virus,HVT)特异性标准血清是鸡HVT活疫苗成品和毒种鉴别检测以及外源病毒检测中常用的标准品。为了制备检测用抗鸡HVT特异性血清,研究选取200只2周龄SPF鸡进行了针对HVT的基础免疫和加强免疫,于第四次免疫后21d采血分离血清,血清经混合、分装、冷冻真空干燥后,按照《中国兽药典》(2015年版)对其进行了性状、细菌、支原体、外源病毒、效价、特异性、剩余水分和真空度检测。结果表明,制备的抗HVT血清特异性良好,其中和效价为1:8,其他各项检测均符合《中国兽药典》(2015年版)规定,可应用于鸡HVT活疫苗成品或毒种的外源病毒检测以及鉴别检测,制备和检验流程对其他禽源病毒阳性血清的制备也具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 火鸡疱疹病毒 特异性血清 马立克氏病
采矿权退出补偿金协商范围与非直接补偿研究 预览
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作者 柴阳 肖畅 周进生 《中国矿业》 北大核心 2019年第10期19-23,44共6页
为了深入贯彻落实生态文明建设的理念,我国政府已发布一系列政策要求清退自然保护区内的采矿权。当前评估采矿权退出补偿的方式主要为应用折现现金流量法(DCF法),由于折现现金流量法的缺陷以及采矿权退出补偿需要经过谈判才能确定过程,... 为了深入贯彻落实生态文明建设的理念,我国政府已发布一系列政策要求清退自然保护区内的采矿权。当前评估采矿权退出补偿的方式主要为应用折现现金流量法(DCF法),由于折现现金流量法的缺陷以及采矿权退出补偿需要经过谈判才能确定过程,本文通过研究提出了采矿权退出补偿金协商范围。其中,协商范围上限由实物期权方法计算,协商范围下限由套期保值比率和净现值法计算。此外,为降低地方政府的补偿金筹资压力,研究了非直接补偿方案,提出了补偿金资产证券化方案,期望通过采矿权退出补偿金谈判范围与非直接补偿研究推动采矿权退出实现顺利执行。 展开更多
关键词 采矿权退出 退出补偿 补偿金范围 非直接补偿 补偿金资产证券化
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布鲁氏菌LS蛋白(BLS)研究进展
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作者 孙佳丽 彭小薇 +2 位作者 孙石静 袁维峰 丁家波 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1179-1184,共6页
LS蛋白(2,4-二氧四氢蝶啶合成酶)广泛存在于动物、植物和微生物中,是催化核黄素生物合成的重要合成酶之一。该酶最显著的特征之一是其在不同物种中具有空间结构差异。布鲁氏菌LS蛋白(BLS)是布鲁氏菌的一种优势抗原,是由两个五聚体组成... LS蛋白(2,4-二氧四氢蝶啶合成酶)广泛存在于动物、植物和微生物中,是催化核黄素生物合成的重要合成酶之一。该酶最显著的特征之一是其在不同物种中具有空间结构差异。布鲁氏菌LS蛋白(BLS)是布鲁氏菌的一种优势抗原,是由两个五聚体组成的结构稳定的十聚体。BLS是光滑型和粗糙型布鲁氏菌所共有的抗原,用于布鲁氏菌病的诊断可提高其敏感性;BLS可以激发抗原特异性细胞应答产生IFN-γ,从而对宿主产生保护力,是一种理想的布鲁氏菌病亚单位疫苗的候选蛋白。本文综述了BLS的结构特性及应用研究进展,旨在为BLS的深入研究和开发应用提供参考。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 BLS 疫苗 应用
循环microRNA在动物疫病诊断中的研究进展
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作者 高强 彭小薇 +5 位作者 冯宇 蒋卉 朱良全 秦玉明 董浩 丁家波 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第5期139-142,共4页
microRNA(简称miRNA)是一类长约22 nt的小分子RNA,广泛存在于真核生物中,调节着生物体的诸多生理活动并与疾病的发生息息相关。大量研究发现,miRNA可以从细胞内释放,广泛而稳定地存在于包括血清、血浆、唾液、尿液、甚至牛奶等细胞外液... microRNA(简称miRNA)是一类长约22 nt的小分子RNA,广泛存在于真核生物中,调节着生物体的诸多生理活动并与疾病的发生息息相关。大量研究发现,miRNA可以从细胞内释放,广泛而稳定地存在于包括血清、血浆、唾液、尿液、甚至牛奶等细胞外液中,统称为循环miRNA(circulating microRNA)。研究表明,在正常机体和患病机体内某些循环miRNA的表达谱存在着明显的差异,因此循环miRNA常被作为一种非侵入性、内源性新型疾病诊断标志物来研究。文章对循环miRNA作为一种新型疾病诊断标志物在动物疾病中的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 循环MICRORNA 血清 新型疾病诊断标志物 动物疾病
牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备 预览
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作者 林伟东 隋修锟 +5 位作者 王召阳 贾红 房立春 王海春 朱良全 鑫婷 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期1774-1782,共9页
为制备能够特异性识别牛分枝杆菌(M.bovis)抗酸蛋白酶(MarP)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用大肠杆菌表达系统表达了MarP蛋白的胞浆区,并以β-casein为底物、DTT为抑制剂检测MarP的丝氨酸蛋白酶活性。以具有活性的MarP蛋白免疫小鼠... 为制备能够特异性识别牛分枝杆菌(M.bovis)抗酸蛋白酶(MarP)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用大肠杆菌表达系统表达了MarP蛋白的胞浆区,并以β-casein为底物、DTT为抑制剂检测MarP的丝氨酸蛋白酶活性。以具有活性的MarP蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,并加入饲养层细胞轻轻摇匀分装于96孔培养板,置于37℃、5%CO2培养箱内培养10 d,通过IFA和间接ELISA筛选阳性细胞株进行亚克隆,制备能分泌针对MarP MAb的杂交瘤细胞株,并通过Western blotting和ELISA检测MAb与重组表达和天然的MarP蛋白的反应性。结果显示,重组表达的MarP具有良好的丝氨酸蛋白酶活性,能够在12 h内将30μg的β-casein酶解完全,DTT能够抑制MarP的酶活性。具有活性的MarP蛋白免疫小鼠后,获得5株针对MarP的MAb,均能够特异性识别重组和牛分枝杆菌天然表达的MarP蛋白的线性表位,而不与大肠杆菌(E.coli)和耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)的蛋白反应。本研究成功制备了MarP蛋白及MAb,为进一步研究MarP的作用底物及其在牛分枝杆菌抗酸胁迫中作用机制提供了必备材料。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 抗酸 抗酸蛋白酶(MarP) 单克隆抗体(MAb) 丝氨酸蛋白酶
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生物安全三级实验室生物安全风险点的识别与控制 预览
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作者 王团结 姚文生 +4 位作者 康凯 万建青 王利永 李阳 赵俊杰 《中国动物检疫》 CAS 2019年第3期39-42,共4页
BSL-3实验室须经国家生物安全认可和严格的实验活动审批才能开展相应活动,是国家(地区)开展高致病性病原微生物实验活动的重要技术支撑平台。实验室生物安全风险点易发生在样本及菌毒种的接收、传递和保存,动物实验,污水以及固体废弃物... BSL-3实验室须经国家生物安全认可和严格的实验活动审批才能开展相应活动,是国家(地区)开展高致病性病原微生物实验活动的重要技术支撑平台。实验室生物安全风险点易发生在样本及菌毒种的接收、传递和保存,动物实验,污水以及固体废弃物处理等环节,而实验室的意外事件(电力故障、火灾、积水等)与生物安保漏洞也会造成重大的生物安全事故。提示应准确地识别风险并通过人员日常监管、标准操作规程、两级屏障设施和个人防护装备等系列措施对生物安全风险点予以严格控制。 展开更多
关键词 生物安全三级实验室 样本和菌毒种 动物实验 意外事件 风险识别 风险控制
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细菌Lon蛋白酶研究进展
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作者 刘郁夫 董浩 +2 位作者 孙石静 陈瑞爱 丁家波 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1706-1711,共6页
Lon蛋白酶是首个被鉴定的ATP依赖蛋白酶家族成员,在原核生物中发挥着降解错误折叠蛋白、维持胞内蛋白质平衡的作用。最近研究表明Lon蛋白还可以作为压力应激蛋白,参与降解多种转录调控因子和二元调控系统,改变细菌胞内的生理代谢过程以... Lon蛋白酶是首个被鉴定的ATP依赖蛋白酶家族成员,在原核生物中发挥着降解错误折叠蛋白、维持胞内蛋白质平衡的作用。最近研究表明Lon蛋白还可以作为压力应激蛋白,参与降解多种转录调控因子和二元调控系统,改变细菌胞内的生理代谢过程以适应环境的改变。本文从Lon蛋白酶的结构、功能与上下游调控网络作一综述,旨在更全面清楚地了解ATP依赖蛋白酶的生理功能,以期为其胞内调控机制研究提供参考。 展开更多
关键词 LON ATP依赖蛋白酶 蛋白结构 基因功能 毒力因子
Brucellacapt、RBT、SAT、iELISA四种血清学检测方法对布鲁氏菌病检测价值的比较研究
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作者 王慧飞 宗鹏 +2 位作者 徐磊 喻名成 王楠 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第4期672-675,641共5页
目的:探讨布鲁氏菌病血清学试验(Brucellacapt)、虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(i ELISA)四种血清学检测方法对布鲁氏菌病检测价值的比较研究。方法:收集近两年110例布鲁氏菌病疑似病例人员的静脉血... 目的:探讨布鲁氏菌病血清学试验(Brucellacapt)、虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(i ELISA)四种血清学检测方法对布鲁氏菌病检测价值的比较研究。方法:收集近两年110例布鲁氏菌病疑似病例人员的静脉血分离得到血清后进行Brucellacapt、RBT、SAT、i ELISA四种血清学检测,以卫生部制定的《布鲁氏菌病诊疗指南》中布鲁氏菌病确诊方法为诊断金标准,将检测结果与其确诊结果进行比较,评价比较各组血清检测方法对布鲁氏菌病的检测价值。结果:110例疑似人员中确诊为布鲁氏菌病阳性91例、阴性19例。Brucellacapt试验阳性89例、阴性21例;RBT试验阳性79例、阴性31例;SAT试验阳性71例、阴性39例;i ELISA检验阳性82例、阴性28例。Brucellacapt试验的灵敏度、符合率、Kappa值、ROC曲线下面积均最大,i ELISA试验、RBT试验、SAT试验依次减小;i ELISA试验的ROC曲线下面积最大,Brucellacapt试验次之,其次为RBT试验,SAT试验的ROC曲线下面积最小。结论:Brucellacapt、RBT、SAT、i ELISA四种血清学检测方法对于布鲁氏菌病检测均有一定的检测价值,对于常规普通患者可采用RBT试验、SAT试验进行检查,而对于疑似病例人员可采用灵敏度更高的Brucellacapt试验、i ELISA试验。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 血清学试验 虎红平板凝集试验 试管凝集试验 间接酶联免疫吸附试验
BSL-4实验室废弃物处理与风险评估
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作者 张一帜 张媛 +2 位作者 李宁 王利永 万建青 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第6期128-133,共6页
BSL-4实验室,即四级生物安全实验室,又被称为P4实验室,是目前国际上最高级别的生物安全实验室。从某种程度上来说,BSL-4实验室的建立和运行标志着一个国家防控传染病的能力和生物科技发展的水平。而废弃物处理对保证高级别生物安全实验... BSL-4实验室,即四级生物安全实验室,又被称为P4实验室,是目前国际上最高级别的生物安全实验室。从某种程度上来说,BSL-4实验室的建立和运行标志着一个国家防控传染病的能力和生物科技发展的水平。而废弃物处理对保证高级别生物安全实验室人员及环境的安全至关重要。本文通过对BSL-4实验室废弃物处理环节中废弃物主要类别、处理方法、分类处理及风险评估等方面的综合分析。明确了废弃物处理相关设备要求和处理方法,提出了符合我国国情的BSL-4实验室废弃物处理的几点建议。 展开更多
关键词 废弃物处理 BSL-4实验室 风险评估 生物安全
产气荚膜梭菌α毒素突变体的表达及免疫保护力评价
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作者 杜吉革 薛麒 +5 位作者 朱真 李启红 印春生 姚文生 康凯 陈小云 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期265-270,280共7页
对已知的产气荚膜梭菌CPA编码基因进行优化设计,同时引入包括第56和130位的天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G),及第275位的酪氨酸(Y)和第336位的天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N)的4个氨基酸突变,经人工合成获得基因片段Gcpam4。将Gcpam4克隆至... 对已知的产气荚膜梭菌CPA编码基因进行优化设计,同时引入包括第56和130位的天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G),及第275位的酪氨酸(Y)和第336位的天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N)的4个氨基酸突变,经人工合成获得基因片段Gcpam4。将Gcpam4克隆至原核表达载体pET-30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白rCPAm4。利用Western blot方法检测rCPAm4与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清的反应性,并采用小鼠检测纯化蛋白的毒力。随后,将rCPAm4与Montanide ISA 201佐剂以1∶1的比例混合乳化制备疫苗,免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测兔血清的中和抗体效价。二免后21d,对家兔通过耳缘静脉注射1个家兔MLD剂量的A型产气荚膜梭菌毒素,以检测rCPAm4对家兔的免疫保护效果。结果表明,rCPAm4主要以包涵体的形式表达,且能与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清反应;小鼠安全性试验显示,5.5mg/kg剂量的rCPAm4对小鼠仍无致死性;免疫rCPAm4后,每毫升的一免抗血清可中和10~20个小鼠MLD、二免抗血清可中和30~50个小鼠MLD的A型产气荚膜梭菌毒素;1个家兔MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔100%死亡,免疫组家兔得到了100%的保护。以上结果表明,rCPAm4具有良好的安全性和免疫原性,从而为A型产气荚膜梭菌基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。 展开更多
关键词 A型产气荚膜梭α毒素 突变 重组表达 毒力 抗原性
截短腐败梭菌α毒素的表达及其免疫原性评价 被引量:1
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作者 彭国瑞 彭小兵 +1 位作者 李旭妮 蒋玉文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期220-225,共6页
为了获得截短腐败梭菌α毒素并评价其毒性、反应原性和免疫原性,根据腐败梭菌α毒素的结构与功能,设计2对引物分别扩增含有穿孔活性区和受体结合区的α毒素基因csaN和csaC,克隆至pET-28a(+)质粒,构建截短α毒素表达载体,转化大肠杆菌BL2... 为了获得截短腐败梭菌α毒素并评价其毒性、反应原性和免疫原性,根据腐败梭菌α毒素的结构与功能,设计2对引物分别扩增含有穿孔活性区和受体结合区的α毒素基因csaN和csaC,克隆至pET-28a(+)质粒,构建截短α毒素表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导csaN和csaC表达,鉴定产物的反应原性和毒性,将经过诱导表达的工程菌灭活制成铝佐剂疫苗免疫家兔1次,通过血清中和试验和攻毒保护试验评价免疫效力,设立重组α全毒素rcsa免疫组作为阳性对照。结果显示,2个截短α毒素在大肠杆菌BL21(DE3)中均获得表达,产物能够与腐败梭菌抗毒素血清发生特异性反应,但失去了小鼠致死毒性。免疫家兔血清中和试验结果显示,csaN组血清的中和效价为1 MLD/0.1 mL,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015年版)》效力检验的最低标准,csaC组为0,rcsa组为8 MLD/0.1 mL;csaN和csaC组家兔用1 MLD毒素攻击均未获得保护,而rcsa组家兔4/4获得保护。结果表明,截短α毒素与全毒素相比,失去了毒性但保留了反应原性,仅含穿孔活性结构区的截短部分具有较弱的免疫原性。 展开更多
关键词 腐败梭菌 截短α毒素 毒性 免疫原性
个人防护装备在高等级兽医生物安全实验室中的使用原则 预览
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作者 吴思捷 李增顺 +7 位作者 康凯 姚文生 张媛 李宁 王团结 张一帜 万建青 王利永 《中国猪业》 2019年第3期57-59,62共4页
兽医生物安全实验室的个体防护包括个体防护装备和防护操作程序,其中个体防护装备是用于防止实验室工作人员受到生物性、化学性或物理性等危害因子伤害,而穿戴和配备的器材和用品的总称。实验室内不同区域面对生物因子的暴露风险等级不... 兽医生物安全实验室的个体防护包括个体防护装备和防护操作程序,其中个体防护装备是用于防止实验室工作人员受到生物性、化学性或物理性等危害因子伤害,而穿戴和配备的器材和用品的总称。实验室内不同区域面对生物因子的暴露风险等级不同,导致各区域的防护级别不同,因此应采取相应的防护措施,选择适合的个人防护装备。 展开更多
关键词 兽医 生物安全 个体防护装备 防护措施
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兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验替代方法研究 预览
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作者 高金源 刘丹 +2 位作者 陈建 秦义娴 郎洪武 《中国兽药杂志》 2019年第1期9-12,共4页
为了采用血凝抑制(HI)试验方法替代兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验的免疫攻毒方法,试验在制备了HI试验用兔出血症病毒血凝(HA)抗原、阳性血清、阴性血清的基础上,研究了免疫攻毒保护与免疫血清HI效价之间的平行关系,并进行了替代方法... 为了采用血凝抑制(HI)试验方法替代兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验的免疫攻毒方法,试验在制备了HI试验用兔出血症病毒血凝(HA)抗原、阳性血清、阴性血清的基础上,研究了免疫攻毒保护与免疫血清HI效价之间的平行关系,并进行了替代方法的应用。结果表明,当免疫血清HI效价不低于1∶32时,两种方法的检验结果符合率为100%,证明了该替代方法的可行性,也为下一步修订兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验方法提供了数据支持。 展开更多
关键词 兔病毒性出血症 灭活疫苗 效力检验
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我国猪用病毒类生物制品质量情况分析及建议 预览
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作者 吴华伟 陈晓春 +5 位作者 秦义娴 高金源 李俊平 邓永 曹明慧 高月异 《中国兽药杂志》 2019年第1期19-26,共8页
对我国猪用病毒类生物制品基本现状及2008-2017年猪用病毒类生物制品质量情况进行总结,分析了猪用病毒类生物制品质量存在的问题,提出加强动物源性原辅材料质量控制、完善兽用生物制品标准物质、开展外源病毒检验和支原体检验等关键参... 对我国猪用病毒类生物制品基本现状及2008-2017年猪用病毒类生物制品质量情况进行总结,分析了猪用病毒类生物制品质量存在的问题,提出加强动物源性原辅材料质量控制、完善兽用生物制品标准物质、开展外源病毒检验和支原体检验等关键参数检验新方法研究以及制定全行业通用的标准操作程序等提升猪用病毒类生物制品质量的建议。 展开更多
关键词 病毒类生物制品 质量 分析 建议
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重组腐败梭菌α毒素的制备与免疫效力评价 预览
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作者 彭国瑞 彭小兵 +2 位作者 李旭妮 董令赢 蒋玉文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期192-195,共4页
为了对重组腐败梭菌α毒素的免疫效力进行评价,本研究以表达重组腐败梭菌α毒素的大肠杆菌BL21(pET28a-CSA)为研究对象,对影响重组腐败梭菌α毒素表达量的条件优化后,将重组腐败梭菌α毒素(分为上清分泌形式与包涵体形式)、超声波裂解... 为了对重组腐败梭菌α毒素的免疫效力进行评价,本研究以表达重组腐败梭菌α毒素的大肠杆菌BL21(pET28a-CSA)为研究对象,对影响重组腐败梭菌α毒素表达量的条件优化后,将重组腐败梭菌α毒素(分为上清分泌形式与包涵体形式)、超声波裂解和未裂解诱导后的全菌制成铝佐剂灭活疫苗皮下注射免疫家兔后,检测家兔血清中和效价,利用1 MLD腐败梭菌毒素攻击免疫家兔。结果显示,pET28a-CSA/BL21培养至OD600nm达到0.850~0.950时以0.40 mmol/L IPTG,37℃诱导6 h获得的重组腐败梭菌α毒素相对表达量较高,并且以包涵体和可溶性2种形式表达且以包涵体居多;除包涵体疫苗组血清中和抗体效价为6 MLD/0.1 mL外,其它可溶性、裂解菌苗和未裂解处理菌苗实验组均为8 MLD/0.1 mL,高于类毒素疫苗组和《中国兽药典》规定的1 MLD/0.1 mL,攻毒后各免疫组家兔均得到100%保护,而类毒素疫苗组保护率仅40%,空白对照组全部死亡。结果表明,本研究制备的重组腐败梭菌α毒素具有很好的免疫保护效果,尤以可溶性的重组腐败梭菌α毒素免疫保护最佳。本实验为羊快疫疫苗的研制提供了实验基础。 展开更多
关键词 羊快疫 腐败梭菌 疫苗 免疫效力
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伊维菌素吡喹酮咀嚼片含量测定方法的建立 预览
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作者 韩宁宁 赵富华 +3 位作者 戴青 赵晖 杨秀玉 于晓辉 《中国兽药杂志》 2019年第5期1-9,共9页
为了建立伊维菌素吡喹酮咀嚼片同时测定两种主药含量的方法,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈∶水的梯度洗脱系统作为流动相,伊维菌素检测波长为245nm,吡喹酮检测波长为210nm。在该色谱条件下,溶剂和辅料对伊维菌素和吡喹酮出... 为了建立伊维菌素吡喹酮咀嚼片同时测定两种主药含量的方法,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈∶水的梯度洗脱系统作为流动相,伊维菌素检测波长为245nm,吡喹酮检测波长为210nm。在该色谱条件下,溶剂和辅料对伊维菌素和吡喹酮出峰均无干扰,伊维菌素和吡喹酮与相邻杂质峰分离良好。伊维菌素在2~400μg/mL的浓度范围线性关系良好;吡喹酮在1~100μg/mL的浓度范围内线性关系良好。伊维菌素回收率为102.5%,吡喹酮回收率为99.4%。该方法操作简便,准确度高,重复性好,可用于伊维菌素吡喹酮咀嚼片同时测定两种主药的含量。 展开更多
关键词 伊维菌素吡喹酮咀嚼片 含量测定 伊维菌素 吡喹酮
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羊口疮的免疫防治研究进展 预览
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作者 陈勇 陈小云 《中国兽药杂志》 2019年第5期74-79,共6页
羊口疮是由羊口疮病毒感染所引起的一种人兽共患病,在世界范围内广泛流行,不仅给全球畜牧业造成巨大经济损失,而且危害相关从业人员的健康。目前免疫防治羊口疮的方法主要是疫苗接种。从传统疫苗与新型疫苗的角度对羊口疮疫苗研制现状... 羊口疮是由羊口疮病毒感染所引起的一种人兽共患病,在世界范围内广泛流行,不仅给全球畜牧业造成巨大经济损失,而且危害相关从业人员的健康。目前免疫防治羊口疮的方法主要是疫苗接种。从传统疫苗与新型疫苗的角度对羊口疮疫苗研制现状进行综述,以期为该病毒疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 羊口疮 免疫防治 疫苗
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猪瘟病毒E^rns蛋白在杆状病毒系统中的表达及纯化 预览
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作者 牛康 徐璐 +6 位作者 张乾义 夏应菊 朱元源 邹兴启 李翠 赵启祖 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期31-35,38,I0004共7页
采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数... 采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数,最终确定表达条件。将表达产物采用亲和层析法纯化后,采用Western Blotting 鉴定E^rns 蛋白的反应性,并采用间接ELISA 方法对其应用进行了初步探索。结果显示,获得了重组杆状病毒rBac-E^rns,经Western Blotting 和间接免疫荧光(IFA)鉴定,该重组病毒能够与猪瘟阳性血清和E^rns 单抗发生特异性反应。纯化后的E^rns 蛋白纯度较好,浓度为0. 2 mg/ mL,经Western Blotting 方法鉴定证明,纯化后的蛋白与E^rns单抗和猪瘟阳性血清能够发生特异性反应;初步建立了间接ELISA 方法检测猪瘟抗体,证明表达的蛋白可以区分猪瘟阳性血清和阴性血清。表明本研究利用杆状病毒表达系统成功表达并纯化了猪瘟病毒E^rns蛋白,纯化后的E^rns蛋白具有良好的反应性,可以作为开发鉴别诊断试剂的备选蛋白以及用于E^rns 蛋白的结构和生物学功能研究。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E^rns蛋白 杆状病毒系统 间接ELISA
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