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突变质粒CMV-3flag-hPROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)的构建及表达
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作者 周晓涛 周文涛 +6 位作者 彭震 刘化蝶 陈丹娜 夏开德 迪丽娜尔·波拉提 赵云娟 李家大 《生物技术》 2018年第2期113-118,150共7页
[目的]构建CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)真核表达质粒并观察其蛋白表达。[方法]将NotⅠ的酶切位点(GCGGCCGCC)引入第一次PCR的后引物,扩增并突变h PROKR2的1-1035 bp(343YFK/AAA345),再将NotⅠ的酶切位点和3... [目的]构建CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)真核表达质粒并观察其蛋白表达。[方法]将NotⅠ的酶切位点(GCGGCCGCC)引入第一次PCR的后引物,扩增并突变h PROKR2的1-1035 bp(343YFK/AAA345),再将NotⅠ的酶切位点和3个连续甘氨酸突变碱基GCCGCCGCA引入第二次PCR的前引物扩增并突变h PROKR2的1036-1152bp(351HWR/AAA353),通过NotⅠ酶切位点连接前后两个片段,即可构建pc DNA3.1-h PROKR2-myc-his(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353),最后通过测序鉴定突变是否成功。扩增h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353),连接入CMV-3flag。Western Blot检测相应蛋白的表达。[结果]成功构建CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)质粒,并验证到相应蛋白表达。[结论]利用NotⅠ酶的碱基序列特性(GCGGCCGCC)进行3个连续氨基酸突变的方法简单有效。质粒CMV-3flag-h PROKR2(343YFK/AAA345,351HWR/AAA353)的成功构建为后期进一步实验创造条件。 展开更多
关键词 hPROKR2 连续多位点碱基突变 限制性内切酶NotⅠ 质粒构建
利用酵母双杂交技术筛选人PROKR2蛋白C端相互作用蛋白 预览 被引量:1
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作者 周晓涛 周文涛 +5 位作者 夏开德 刘化蝶 彭震 赵云娟 迪丽娜尔·波拉提 李家大 《生物技术通讯》 CAS 2018年第1期38-43,共6页
目的 利用酵母双杂交技术从人cDNA文库中筛选人前动力蛋白受体2 (hPROKR2) C端相互作用蛋白.方法: 复苏酵母菌Y2HGold-hPROKR2-C, 与人cDNA文库杂交, 计算杂交效率; 筛选相互作用克隆并测序, 寻找hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白; 通过在... 目的 利用酵母双杂交技术从人cDNA文库中筛选人前动力蛋白受体2 (hPROKR2) C端相互作用蛋白.方法: 复苏酵母菌Y2HGold-hPROKR2-C, 与人cDNA文库杂交, 计算杂交效率; 筛选相互作用克隆并测序, 寻找hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白; 通过在DDO/X、 QDO/A/X平皿上划线, 对筛选到的人cDNA文库质粒的自活性进行验证; 采用GSTpulldown进一步验证两者之间的相互作用.结果: 酵母双杂交实验的杂交融合效率为1.375×108; 在人cDNA文库中筛选出hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白SNAPIN, GSTpulldown实验证实两者之间存在相互作用.结论: SNAPIN可与hPROKR2蛋白C端结合. 展开更多
关键词 人前动力蛋白受体2(hPROKR2) SNAPIN 相互作用蛋白 酵母双杂交
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X-连锁遗传性耳聋的研究进展 预览 被引量:1
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作者 牛志杰 冯永 梅凌云 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期110-116,共7页
耳聋是一种常见的公共健康问题,对社会经济造成极大的损失。X染色体基因突变可引起综合征型遗传性耳聋和非综合征型耳聋,其中非综合征型耳聋相关位点报道甚少。本文针对引起非综合征型耳聋和部分综合征型耳聋的X连锁耳聋基因与位点进... 耳聋是一种常见的公共健康问题,对社会经济造成极大的损失。X染色体基因突变可引起综合征型遗传性耳聋和非综合征型耳聋,其中非综合征型耳聋相关位点报道甚少。本文针对引起非综合征型耳聋和部分综合征型耳聋的X连锁耳聋基因与位点进行综述,并探讨X连锁耳聋家系的研究策略。 展开更多
关键词 X连锁 遗传性耳聋 基因
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非综合征型X连锁隐性遗传耳聋家系临床表型及遗传学特征分析 预览 被引量:6
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作者 牛志杰 冯永 +7 位作者 梅凌云 孙捷 陈红胜 贺楚峰 刘亚兰 王雪萍 文杰 蒋璐 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第2期195-200,共6页
目的分析一个X连锁隐性遗传性耳聋家系的临床特征及遗传学规律。方法通过问卷调查,收集家系成员临床资料,并进行听力学检测、专科检查及全面体查,对临床听力学特征进行分析并绘制遗传图谱,并对先证者进行GJB2、GJB3以及线粒体全序... 目的分析一个X连锁隐性遗传性耳聋家系的临床特征及遗传学规律。方法通过问卷调查,收集家系成员临床资料,并进行听力学检测、专科检查及全面体查,对临床听力学特征进行分析并绘制遗传图谱,并对先证者进行GJB2、GJB3以及线粒体全序列进行筛查。结果家系成员共28人,其中男性患者5人,分布于第二、三及四代,耳聋发生于0~5岁,迅速进展为双侧对称性中高频下降的重度至极重度感音神经性听力下降,典型听力图表现为特征性的‘U’型或陡降型。4例为语后聋,1例语前聋患儿未能通过新生儿听力筛查。根据系谱图分析,该家系均为男性患病,双亲正常,符合X连锁隐性遗传模式,同时先证者耳聋基因筛查亦为阴性。结论本家系的临床听力学及遗传学特征分析符合X连锁隐性遗传,进一步将通过外显子测序探索该家系耳聋致病基因。 展开更多
关键词 家系 X连锁隐性遗传 表型 遗传性耳聋
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下一代测序技术应用于无创产前检测的现状与未来 被引量:3
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作者 魏贤达 吕卫刚 邬玲仟 《中华检验医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期489-491,共3页
下一代测序大力推动了无创产前检测的研究和应用.基于下一代测序的孕妇外周血浆胎儿游离DNA检测技术筛查胎儿患染色体非整倍体综合征(T21、T18、T13)的灵敏度高,假阳性率和假阴性率低,在全球广泛应用.性染色体非整倍体、常见染色体微... 下一代测序大力推动了无创产前检测的研究和应用.基于下一代测序的孕妇外周血浆胎儿游离DNA检测技术筛查胎儿患染色体非整倍体综合征(T21、T18、T13)的灵敏度高,假阳性率和假阴性率低,在全球广泛应用.性染色体非整倍体、常见染色体微重复微缺失综合征以及一些单基因病的无创检测也已在技术上实现.未来NIPT面临的主要挑战将不在技术层面,而在于配套服务和监管的完善. 展开更多
关键词 高通量核苷酸序列分析 产前诊断
额叶-纹状体-丘脑神经环路功能连接与精神分裂症患者阳性症状的相关 被引量:1
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作者 黄小军 艾力莎 +4 位作者 蒲唯丹 刘海洪 吕东升 薛志敏 刘哲宁 《中国临床心理学杂志》 CSSCI CSCD 北大核心 2017年第5期793-799,819共8页
目的:探讨纹状体的功能连接和精神分裂症临床症状的关系。方法:运用基于体素的功能连接分析法来识别精神分裂症患者纹状体与其他脑区功能连接的异常,入组对象为70位精神分裂症患者和60位年龄、性别相匹配的健康对照。结果:与健康对... 目的:探讨纹状体的功能连接和精神分裂症临床症状的关系。方法:运用基于体素的功能连接分析法来识别精神分裂症患者纹状体与其他脑区功能连接的异常,入组对象为70位精神分裂症患者和60位年龄、性别相匹配的健康对照。结果:与健康对照比较,我们发现患者的左侧尾状核与左侧额中回、左侧额上回以及左侧丘脑,右侧尾状核与右侧额中回、左右两侧丘脑,右侧壳核与右侧楔叶均表现为功能连接减弱。相关分析发现,左侧尾状核和左侧额中回的功能连接强度与患者阳性症状量表的幻觉评分成负相关,右侧尾状核与右侧丘脑的功能连接强度与患者阳性症状量表的怪异行为呈正相关。结论:结果显示精神分裂症患者额叶-纹状体-丘脑环路静息态功能连接存在异常。并且此环路中的左侧尾状核与左侧额中回以及右侧尾状核与右侧丘脑的功能连接异常可能分别为精神分裂症患者幻觉和怪异行为的神经生物学基础。 展开更多
关键词 功能连接分析 阳性症状 静息态 精神分裂症 纹状体
精神疾病的遗传学研究的当前实践 被引量:1
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作者 刘春宇 Kay S·Grennan Elliot S·Gershon 《国际精神病学杂志》 2017年第3期389-391,403共4页
在简要回顾影响遗传研究结果的主要因素后,我们总结了在设计精神疾病的遗传学研究时需要考虑的关键因素。首先,研究需要足够大的样本量,以及一个适当的、衡量统计学显著性的阈值。其次,严格的质量评估,协变量和群体结构的控制,以及结果... 在简要回顾影响遗传研究结果的主要因素后,我们总结了在设计精神疾病的遗传学研究时需要考虑的关键因素。首先,研究需要足够大的样本量,以及一个适当的、衡量统计学显著性的阈值。其次,严格的质量评估,协变量和群体结构的控制,以及结果的可重复是避免假阳性的关键。另外,数据共享应得到推广,以实现强有力的大数据分析。最后,功能研究将逐渐被纳入遗传学研究,以提高遗传学研究的质量和加强对统计学关联研究结果的生物学解释。 展开更多
关键词 精神疾病 遗传学 实践
人PROKR2蛋白274位缬氨酸突变质粒的构建及表达 预览
8
作者 周晓涛 陈丹娜 +4 位作者 刘化蝶 周文涛 彭震 戴雨亭 李家大 《生物技术通讯》 CAS 2017年第2期90-95,共6页
目的:构建人前动力蛋白受体2(hPROKR2)274位缬氨酸残基突变的真核表达质粒pKR5-mGlu-FlaghPROKR2(V274D或V274R或V274T或V274A),并观察其蛋白表达。方法:将pKR5-mGlu-Flag-mPKR2质粒和PCR扩增的hPROKR2编码序列用MluⅠ、XbaⅠ酶... 目的:构建人前动力蛋白受体2(hPROKR2)274位缬氨酸残基突变的真核表达质粒pKR5-mGlu-FlaghPROKR2(V274D或V274R或V274T或V274A),并观察其蛋白表达。方法:将pKR5-mGlu-Flag-mPKR2质粒和PCR扩增的hPROKR2编码序列用MluⅠ、XbaⅠ酶切后连接,构建pKR5-mGlu-Flag-hPROKR2质粒;以后者为模板,利用定点突变技术分别构建pKR5-mGlu-Flag-hPROKR2(V274D)、(V274R)、(V274T)、(V274A)真核表达质粒;用Western印迹验证Flag-hPROKR2(V274D)、(V274A)、(V274T)、(V274R)在真核细胞中的表达。结果:构建了pKR5-mGlu-Flag-hPROKR2(V274D)、(V274R)、(V274T)、(V274A)真核表达质粒,并观察到相应的蛋白表达。结论:pKR5-mGlu-Flag-hPROKR2(V274D)、(V274R)、(V274T)、(V274A)真核表达质粒的构建,为后期检测第274位缬氨酸对hPROKR2蛋白分子空间结构及功能的影响创造了条件。 展开更多
关键词 人前动力蛋白受体2 定点突变 缬氨酸
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2015年中国医学遗传学研究领域若干重要进展 预览 被引量:4
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作者 李元丰 韩玉波 +9 位作者 曹鹏博 孟金凤 李海北 秦庚 张锋 靳光付 杨勇 邬玲仟 平杰 周钢桥 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期363-390,共28页
2015年中国医学遗传学稳步发展,众多具有原创性的研究论文在国际顶级杂志上发表。中国科学家在医学遗传学的诸多领域,如罕见疾病的致病基因、复杂疾病的易感基因、癌症的体细胞突变、遗传学新方法新技术、疾病相关微小 RNA(microRNA... 2015年中国医学遗传学稳步发展,众多具有原创性的研究论文在国际顶级杂志上发表。中国科学家在医学遗传学的诸多领域,如罕见疾病的致病基因、复杂疾病的易感基因、癌症的体细胞突变、遗传学新方法新技术、疾病相关微小 RNA(microRNA,miRNA)、疾病相关长链非编码 RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)、疾病相关竞争性内源 RNA(Competing endogenous RNA,ceRNA)、疾病相关可变剪接和分子进化等研究领域均取得了突破性的进展。中国科学家在医学遗传学研究中逐步从常见变异延伸到罕见变异,从遗传学现象的描述到功能机制的确证,从单组学分析扩展至多组学数据整合,从基础研究走向临床应用。同时,中国科学家的研究成果引起了国际同行的高度关注。本文概括性综述了2015年中国科学家在医学遗传学领域取得的若干重要研究进展,旨在追踪当前中国医学遗传学领域发展的前沿,与国内读者分享我国科学家在该领域取得的重要成果以及研究思路。 展开更多
关键词 中国 医学遗传学 表观遗传学 研究进展 2015
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一个常染色体显性遗传非综合征型聋家系的听力学及遗传学特征分析 预览
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作者 牛志杰 蒋璐 +7 位作者 梅凌云 冯永 陈红胜 贺楚峰 刘亚兰 王雪萍 刘畅 熊俊 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期5-9,共5页
目的分析一个常染色体显性遗传非综合征型聋家系的听力学和遗传学特征。方法对收集到的一个常染色体显性遗传非综合征型聋家系成员进行家系调查、听力学检测和全身体格检查,绘制家系图谱,整理、分析家系成员的听力学和遗传学特征;提取... 目的分析一个常染色体显性遗传非综合征型聋家系的听力学和遗传学特征。方法对收集到的一个常染色体显性遗传非综合征型聋家系成员进行家系调查、听力学检测和全身体格检查,绘制家系图谱,整理、分析家系成员的听力学和遗传学特征;提取外周血DNA,对已知常见耳聋基因GJB2、GJB3、COCH、EYA4以及线粒体DNA全序列进行筛查。结果该家系由5代53名成员组成,现存4代42人,耳聋患者11人;耳聋表型连续遗传,男女均可患病,符合常染色体显性遗传规律,均表现为对称性语后感音神经性聋(12~36岁之间发病),起初为高频听力下降,随着年龄的增长,逐渐累及中低频听力。已知常见致聋基因全编码序列突变检测分析无阳性发现。结论该常染色体显性遗传非综合征型聋家系中耳聋者表现为对称性、迟发性、进行性、高频下降为主的语后感音神经性聋。 展开更多
关键词 常染色体显性遗传 遗传性聋 基因突变 家系
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无创产前检测的临床应用及随访研究 预览 被引量:11
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作者 赖允丽 陈筠 +7 位作者 易升 周林 易赏 雷亚琴 郑海洋 林飞 邬玲仟 韦红卫 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第11期1491-1495,共5页
目的采用大规模平行测序检测胎儿染色体疾病,通过全面随访,为无创产前检测(NIPT)的临床应用提供有效的数据支持及遗传咨询方案。方法唐氏筛查高风险的孕妇接受NIPT,结果提示高危者进行核型确诊,低危者进行生育前后随访。结果 (1)NIP... 目的采用大规模平行测序检测胎儿染色体疾病,通过全面随访,为无创产前检测(NIPT)的临床应用提供有效的数据支持及遗传咨询方案。方法唐氏筛查高风险的孕妇接受NIPT,结果提示高危者进行核型确诊,低危者进行生育前后随访。结果 (1)NIPT提示胎儿异常25例,异常率为1.49%,核型确诊异常12例,均已引产,NIPT对T21、T18、XO、XXY、XYY的准确性依次为99.93%、100.00%、99.66%、100.00%、100.00%;在高龄妊娠和双胎妊娠中对T21/T18的准确性达100.00%;产前阳性干预率达100.00%。(2)NIPT提示低风险1 651例,完成随访1 468例,成功率为88.91%,发现1例9号染色体倒位(母源性)。(3)B超检测染色体异常准确率达98.17%,检出率仅7.69%;唐氏筛查高风险人群的准确率仅为0.88%,假阳性率高达99.12%;NIPT避免了98.71%的孕妇进行介入性产前诊断。结论 NIPT作为现有产前检测技术的重要补充,为寻找最合适的产前筛查模式提供参考。在医疗机构建立健全NIPT随访和服务系统对降低出生缺陷疾病尤为重要。 展开更多
关键词 无创产前检测 染色体疾病 超声检测 唐氏筛查高风险 随访研究
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两例22号环状染色体的遗传学诊断及分析 被引量:1
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作者 彭莹 唐桂芝 +5 位作者 张锐 张杨慧 夏艳 马瑞玉 郭若兰 邬玲仟 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期494-497,共4页
目的明确两例22号环状染色体的遗传学诊断,探讨其形成机制及其与临床表型的关系。方法应用外周血染色体G显带、荧光原位杂交及单核苷酸多态性微阵列芯片分析对两例疑似患者进行检测。结果病例1染色体核型为46,XY,r(22)(pllql3)... 目的明确两例22号环状染色体的遗传学诊断,探讨其形成机制及其与临床表型的关系。方法应用外周血染色体G显带、荧光原位杂交及单核苷酸多态性微阵列芯片分析对两例疑似患者进行检测。结果病例1染色体核型为46,XY,r(22)(pllql3),微阵列检测结果示arr[-Hgl9]22q13.2-q13.33(44183172—51211392)×1dn,杂合缺失约7.0Mb;病例2染色体核型为46,XY,r(22)(pllql3)E84]/45,XY,-22[6],微阵列检测结果为arr[-Hgl9]22q13.33(49612799—51211392)×1dn,杂合缺失约1.6Mb。结论联合应用多种遗传学检测技术对两例r(22)综合征患者明确了诊断,为分析22号环状染色体末端微缺失与临床表型之间的关系提供了新的材料及依据。 展开更多
关键词 22号环状染色体综合征 22q13微缺失综合征 精神运动发育迟滞 单核苷酸多态性 微阵列芯片
Shank3基因多态性与汉族儿童孤独症的病例对照研究 预览
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作者 李小平 郝朝亮 郭辉 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第4期469-471,共3页
目的探讨Shank3基因的单核苷酸多态性(SNPs)与汉族儿童孤独症的相关性。方法采用Illumina CNV 370-Duo芯片和Illumina 610芯片对455例孤独症患者(孤独症组)和1 097例无孤独症及相关精神疾病儿童(对照组)的Shank3基因SNPs位点进行... 目的探讨Shank3基因的单核苷酸多态性(SNPs)与汉族儿童孤独症的相关性。方法采用Illumina CNV 370-Duo芯片和Illumina 610芯片对455例孤独症患者(孤独症组)和1 097例无孤独症及相关精神疾病儿童(对照组)的Shank3基因SNPs位点进行基因分型检测,对基因分型数据采用haploview4.1软件进行关联分析。结果Shank3基因的rs736334、rs8137951位点的等位基因频率和rs9616816-rs736334的G-G、A-A及rs715586-rs8137951的G-A单体型频率在两组间的传递比较,差异有统计学意义(P〈0.05),但经1 000次模拟置换检验后的结果比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 Shank3基因与汉族儿童孤独症的致病不存在相关性,Shank3基因可能不是汉族儿童孤独症的易感基因。 展开更多
关键词 Shank3基因 多态性 单核苷酸 病例对照研究
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6p22.3微缺失导致精神发育迟滞一例
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作者 张锐 彭莹 +3 位作者 郭若兰 郭婧 夏艳 邬玲仟 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期866-867,共2页
患儿女,6岁,因"精神发育迟滞6年"就诊.患儿系母亲第2胎第2产,母亲34岁妊娠,否认孕期有毒物、化学品及放射线接触史,孕期规律产检,未见异常.停经38周因胎心监护提示"胎儿窘迫"急诊行剖宫产术,术中见羊水清.患儿出生后Apgar评分9~10... 患儿女,6岁,因"精神发育迟滞6年"就诊.患儿系母亲第2胎第2产,母亲34岁妊娠,否认孕期有毒物、化学品及放射线接触史,孕期规律产检,未见异常.停经38周因胎心监护提示"胎儿窘迫"急诊行剖宫产术,术中见羊水清.患儿出生后Apgar评分9~10分,出生后4d因"感染性黄疸、脓疱疮"行抗感染治疗,患儿3月龄余能竖头,8月龄仍独坐不稳,在当地医院诊断为精神发育迟缓,脑发育不全. 展开更多
关键词 精神发育迟滞 微缺失 APGAR评分 精神发育迟缓 感染性黄疸 抗感染治疗 脑发育不全 剖宫产术
酵母表达质粒pGBKT7-hPROKR2-Ct的构建及hPROKR2C端蛋白的自激活鉴定 预览
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作者 周晓涛 夏开德 +4 位作者 周文涛 刘化蝶 彭震 汤勇 李家大 《生物技术通讯》 CAS 2016年第4期479-482,共4页
目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算... 目的:检测Y2HGold酵母株中表达的h PROKR2 C端蛋白是否有毒性及自激活,为后期利用酵母双杂交技术研究h PROKR2 C端相互作用蛋白奠定基础。方法:构建酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct质粒,将其转入酵母感受态中验证其是否表达并计算转化率;通过观察SD/-Trp平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白的毒性检测;通过观察SD/-Trp、SDO/-Trp/X、SDO/-Trp/X/Aba平板上酵母菌落生长状态进行h PROKR2 C端蛋白自活性检测。结果:构建了酵母双杂交载体p GBKT7-h PROKR2-Ct,将其转入酵母感受态中,转化率为8.5×104cfu/μg;毒性及自活性检测均显示h PROKR2 C端蛋白对酵母菌株无毒性、不具有自活性。结论:可以利用酵母双杂交系统研究hPROKR2 C端相互作用蛋白。 展开更多
关键词 酵母双杂交 PROKR2 自激活实验
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MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质脑组织DNA甲基化研究 被引量:5
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作者 胡雅岑 徐倩 +9 位作者 郭纪峰 艾三喜 宋承远 孙启英 翁翎 周琳 江泓 沈璐 严新翔 唐北沙 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第3期277-285,共9页
为研究DNA甲基化在帕金森病发病机制中的作用,本研究用环境毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)连续腹腔给药诱导小鼠帕金森病(Parkison's disease,PD)模型,应用ELISA检测小鼠黑质脑组织总体甲基化水平,应用实时荧光定量PCR... 为研究DNA甲基化在帕金森病发病机制中的作用,本研究用环境毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)连续腹腔给药诱导小鼠帕金森病(Parkison's disease,PD)模型,应用ELISA检测小鼠黑质脑组织总体甲基化水平,应用实时荧光定量PCR方法检测DNA甲基转移酶表达水平,探讨MPTP诱导的小鼠PD模型黑质部位是否存在DNA甲基化异常.进一步应用甲基化DNA免疫共沉淀结合DNA甲基化芯片方法,构建MPTP诱导的小鼠PD模型黑质脑组织DNA甲基化谱,并寻找DNA甲基化修饰异常的PD相关基因对其进行验证.结果表明,模型组小鼠黑质脑组织DNA总体甲基化水平较对照组显著降低,Dnmt1的表达水平显著增高.利用DNA甲基化芯片在全基因组内筛选出甲基化差异修饰位点共48个,涉及44个基因,这些甲基化差异基因参与信号转导、分子转运、转录调控、发育、细胞分化、凋亡调控、氧化应激、蛋白质降解等生物学过程.在甲基化差异修饰基因中,对Uchl1基因及Arih2基因进行了甲基化水平以及表达水平的验证.结果表明,模型组小鼠黑质脑组织Uchl1启动子区域甲基化水平较对照组增高,m RNA及蛋白质表达水平降低,Arih2启动子区域甲基化水平较对照组降低,m RNA及蛋白质表达水平增高.实验结果进一步证实,DNA甲基化修饰异常在帕金森病发病机制中有重要作用,环境因素(如MPTP)可以通过改变DNA甲基化修饰参与帕金森病的发生发展. 展开更多
关键词 帕金森病 DNA甲基化 总体甲基化 DNA甲基转移酶 泛素羧基末端水解酶1
非综合征型耳聋家系的遗传学特征分析 预览 被引量:1
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作者 牛志杰 孙捷 +8 位作者 梅凌云 蒋璐 陈红胜 贺楚峰 刘亚兰 王雪萍 文杰 熊俊 冯永 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第4期658-662,共5页
目的分析一个常染色体显性遗传性耳聋家系临床及遗传学表型,并筛查常见耳聋致病基因。方法通过调查问卷、体格检查、听力学检测,完成该湖南籍耳聋家系的临床资料采集,绘制家系遗传图谱,分析其听力学及遗传学特征,对最常见的GJB2,SLC26A4... 目的分析一个常染色体显性遗传性耳聋家系临床及遗传学表型,并筛查常见耳聋致病基因。方法通过调查问卷、体格检查、听力学检测,完成该湖南籍耳聋家系的临床资料采集,绘制家系遗传图谱,分析其听力学及遗传学特征,对最常见的GJB2,SLC26A4和12S r RNA共3个耳聋基因八个位点以及线粒体DNA全组序列进行初步筛查。结果该家系共5代,现存家系成员35人,耳聋患者10人,除两人发病较晚,余均为自幼发病,听力曲线呈盆覆型,造成部分言语功能障碍,进展性加重,起初为中频受累,随着年龄的增长,以后逐渐累积高低频,表现为全频听力损失,发展为重度-极重度耳聋。对候选致病基因突变筛查,未发现致病突变。结论该耳聋家系符合常染色体显性遗传规律,进一步将通过新一代测序全外显子测序技术对其致病基因进行探索。 展开更多
关键词 家系 常染色体显性遗传 遗传性耳聋
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Ataxin-3的亚细胞定位及其对细胞器形态的影响 被引量:1
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作者 魏飞飞 肖涵 +4 位作者 胡治平 张海南 王春喻 戴和平 汤建光 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期353-357,共5页
目的 探讨ataxin-3蛋白的亚细胞定位及其多聚谷氨酰胺(polyglutamine,polyQ)扩展突变对线粒体、高尔基体和内质网形态的影响.方法 采用瞬时转染法构建表达野生型和突变型ataxin-3蛋白的细胞模型,用间接免疫荧光法识别细胞器膜的标记蛋... 目的 探讨ataxin-3蛋白的亚细胞定位及其多聚谷氨酰胺(polyglutamine,polyQ)扩展突变对线粒体、高尔基体和内质网形态的影响.方法 采用瞬时转染法构建表达野生型和突变型ataxin-3蛋白的细胞模型,用间接免疫荧光法识别细胞器膜的标记蛋白,在激光共聚焦显微镜下观察.结果 ataxin-3与TOM20无共定位,但突变组线粒体碎裂细胞百分比增加(P<0.05);ataxin-3与GM130无共定位且突变组无高尔基体碎裂;ataxin-3与calnexin部分共定位,突变组重叠信号较多且大多位于聚集体所在处.结论 polyQ扩展型ataxin-3蛋白可能间接损害线粒体完整性但并不影响高尔基体的结构和功能,而内质网可能是扩展型ataxin-3蛋白在细胞核外发挥毒性作用的场所. 展开更多
关键词 脊髓小脑共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病 多聚谷氨酰胺 线粒体 高尔基体 内质网
内皮细胞特异性启动子pvWF和pVE的克隆及表达
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作者 陈毅瑶 罗莎 +4 位作者 吴涌 李卓 周妙金 邬玲仟 梁德生 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第17期3201-3206,共6页
目的:克隆并验证内皮细胞(Endothelial Cells,ECs)特异性启动子,为转染人胚胎干细胞(h ESC)后实时监测ECs的定向分化情况以及利用干细胞实施血友病A的基因治疗研究提供基础。方法:通过酶消化法原代分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs)... 目的:克隆并验证内皮细胞(Endothelial Cells,ECs)特异性启动子,为转染人胚胎干细胞(h ESC)后实时监测ECs的定向分化情况以及利用干细胞实施血友病A的基因治疗研究提供基础。方法:通过酶消化法原代分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs),结合RT-PCR和免疫荧光验证分离后的HUVECs表达内皮细胞特异性标志基因血管性血友病因子(v WF)和血管内皮钙粘素(VE-cadherin/CDH5)。抽提HUVECs的g DNA,通过PCR扩增内皮细胞特异性表达基因v WF和VE-cadherin转录起始位点上游不同大小的启动子片段,将其取代报告基因载体p EGFP-N1中的广谱启动子CMV,构建4个质粒,即pv WF-1、pv WF-2、p VE-1、p VE-2,分别转染HUVECs和h ESCs,48 h后观察并比较各启动子片段启动绿色荧光蛋白GFP表达情况,筛选最具特异性及转录活性的启动子片段。结果:通过酶消化法,本研究成功分离出具有典型上皮样细胞的HUVECs。RT-PCR和免疫荧光结果表明HUVECs特异性表达v WF和VE-cadherin。酶切及测序证实所构建的4个含ECs特异性启动子片段的质粒与理论序列相符,通过核转染至HUVECs及h ESCs后,48 h后观察到所克隆的VE-cadherin 2105bp启动子片段具有内皮细胞表达的特异性和较强的转录活性。结论:本研究成功筛选出具有内皮细胞表达特异性及较强转录活性的启动子片段。 展开更多
关键词 内皮细胞 人胚胎干细胞 特异性启动子 血管性血友病因子 血管内皮钙粘素 基因治疗
CNTNAP2基因与汉族儿童孤独症的病例对照研究 预览
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作者 李小平 郭辉 夏昆 《中国医学创新》 2015年第3期1-3,共3页
目的:探讨CNTNAP2基因的3个单核苷酸多态性(SNPs)位点rs10244837、rs7794745、rs10500171与汉族儿童孤独症之间的相关性。方法:应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法对汉族儿童孤独症患者及对照的rs10244837、rs... 目的:探讨CNTNAP2基因的3个单核苷酸多态性(SNPs)位点rs10244837、rs7794745、rs10500171与汉族儿童孤独症之间的相关性。方法:应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法对汉族儿童孤独症患者及对照的rs10244837、rs7794745、rs10500171位点进行的基因分型,对所获分型数据进行病例对照关联分析。结果:孤独症病例和对照的CNTNAP2基因的3个SNPs的基因型频率分布均未偏离哈德温伯格平衡(P〉0.05);CNTNAP2基因的rs10244837、rs7794745、rs10500171位点的基因型频率和单体型频率在病例与对照间比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:CNTNAP2基因的rs10244837、rs7794745、rs10500171位点的单核苷酸多态性及其单体型与儿童孤独症不相关。 展开更多
关键词 孤独症 CNTNAP2基因 PCR-RFLP 病例对照研究
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