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不同裂果类型番茄成熟过程果皮组织衰老研究 预览
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作者 王傲雪 苗爽 +2 位作者 陈秀玲 张瑶 刘佳音 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期19-28,共10页
针对抗裂(17922)、环裂(16750)、射裂(16620)3个番茄品种在成熟过程中(绿熟期、转色期和红熟期)不同部位(果肩、果腹和果顶)果皮,研究其抗氧化酶活性、抗氧化物质、活性氧含量及膜质过氧化程度。结果表明,16750和16620在红熟期果肩活性... 针对抗裂(17922)、环裂(16750)、射裂(16620)3个番茄品种在成熟过程中(绿熟期、转色期和红熟期)不同部位(果肩、果腹和果顶)果皮,研究其抗氧化酶活性、抗氧化物质、活性氧含量及膜质过氧化程度。结果表明,16750和16620在红熟期果肩活性氧含量、SOD和CAT活性均显著高于果腹和果顶,在转色期和红熟期果肩膜质过氧化程度和相对电导率均显著高于果腹和果顶,且均显著高于17922。16750和16620,GR和AsA含量在成熟过程中均显著低于17922,而POD活性在成熟过程中显著高于17922,APX在转色期果肩处显著高于17922。说明16750和16620在转色期和红熟期,果肩处果皮抗氧化酶活性和抗氧化物质含量较低,活性氧代谢失调,膜质过氧化程度较高,衰老加剧。研究为进一步探讨果实裂果机制提供理论基础。 展开更多
关键词 番茄 裂果 组织衰老 果皮
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糖基化反应对大豆分离蛋白/麦芽糊精体系酸诱导凝胶流变性及微观结构的影响 预览
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作者 赵城彬 鄢健楠 +5 位作者 刘景圣 许秀颖 吴玉柱 张浩 曹勇 齐宝坤 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第3期35-41,共7页
将大豆分离蛋白(SPI)与麦芽糊精(MD)通过美拉德反应制成SPI/MD糖基化复合物,采用紫外-可见分光光度计测定游离氨基含量和接枝度,利用差示扫描量热法分析热性质,并对SPI/MD复合体系和混合体系酸诱导凝胶流变性和微观结构进行比较。结果表... 将大豆分离蛋白(SPI)与麦芽糊精(MD)通过美拉德反应制成SPI/MD糖基化复合物,采用紫外-可见分光光度计测定游离氨基含量和接枝度,利用差示扫描量热法分析热性质,并对SPI/MD复合体系和混合体系酸诱导凝胶流变性和微观结构进行比较。结果表明:长时间热处理会使SPI与更多的MD发生糖基化反应,SPI与MD共价结合会使体系结构发生明显改变,SPI/MD复合体系的Tp增加且ΔH降低,表明体系的热稳定性增加。SPI/MD复合体系凝胶G′显著降低,随着热处理时间的延长,凝胶G′的降低趋势明显,这可能是由于MD的共价结合引起SPI结构的改变,使共价相互作用不能很好地支撑凝胶网络,导致SPI/MD复合体系凝胶的弱化。SPI/MD混合体系凝胶G′显著增加,这是由于两种高分子聚合物之间的相分离作用所致。此外,SPI/MD复合体系形成的酸凝胶微观结构不均一、疏松且有较大的孔洞,而SPI/MD混合体系能够形成均匀、致密的凝胶网络。 展开更多
关键词 糖基化反应 大豆分离蛋白 酸诱导凝胶 流变性 微观结构
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番茄OSCA基因家族鉴定及不同胁迫条件下表达分析 预览
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作者 王傲雪 张可为 +2 位作者 张瑶 陈秀玲 刘佳音 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期19-28,共10页
为阐明高渗性钙离子通道OSCA基因在不同胁迫条件下作用,基于番茄全基因组信息,从栽培番茄中鉴定出12个SlOSCA基因,均含DUF221结构域,分别位于1、2、4、6、7、8、9、12号染色体上,亚细胞定位分析表明均位于质膜和高尔基体上。系统进化分... 为阐明高渗性钙离子通道OSCA基因在不同胁迫条件下作用,基于番茄全基因组信息,从栽培番茄中鉴定出12个SlOSCA基因,均含DUF221结构域,分别位于1、2、4、6、7、8、9、12号染色体上,亚细胞定位分析表明均位于质膜和高尔基体上。系统进化分析显示SlOSCA基因家族可分为5个进化群。根据番茄表达量数据库组织特异性分析发现,SlOSCA基因家族在不同组织部位表达量不同,其中根部和叶片表达量相对较高。Realtime PCR结果表明,多数SlOSCA基因响应干旱、盐、低温、ABA和灰霉病胁迫。SlOSCA基因响应ABA胁迫普遍强烈,受低温胁迫影响较小。其中SlOSCA9受干旱、盐和ABA胁迫强烈诱导,SlOSCA10受灰霉病胁迫强烈诱导。 展开更多
关键词 番茄 OSCA 家族分析 表达分析 生物胁迫 非生物胁迫
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甜瓜属FRK基因家族的鉴定与特征分析
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作者 徐雅菲 孙宇蛟 +1 位作者 崔浩楠 王学征 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期4954-4960,共7页
果糖激酶是果糖磷酸化过程中主要的催化酶,在植物的生长发育过程中起着非常关键的调节作用。为了深入研究果糖激酶在甜瓜属作物中的结构及理化性质、鉴定出更多潜在的果糖激酶基因,本研究从两个拟南芥(Arabidopsis thaliana)果糖激酶基... 果糖激酶是果糖磷酸化过程中主要的催化酶,在植物的生长发育过程中起着非常关键的调节作用。为了深入研究果糖激酶在甜瓜属作物中的结构及理化性质、鉴定出更多潜在的果糖激酶基因,本研究从两个拟南芥(Arabidopsis thaliana)果糖激酶基因(AT-FRK)入手,在葫芦科数据库(http://cucurbitgenomics.org/)中鉴定出甜瓜(Cucumis melo L.)果糖激酶基因3条、黄瓜(Cucumis sativus L.)果糖激酶基因2条,并利用生物信息学的分析方法对甜瓜属FRK基因的结构特征、编码蛋白质的理化性质和结构进行分析,还进行了系统进化树的构建。结果显示,甜瓜属FRK基因在染色体上的分布无规律,编码区序列有996 bp和1 047 bp 2种大小,亚细胞定位预测有胞外基质和细胞质2种情况。FRK蛋白绝大数为亲水性蛋白,稳定性较好,等电点在酸性范围内,α螺旋和无规则卷曲为蛋白二级结构的主要构成形式,高级结构则大部分相似。本研究为甜瓜属作物FRK基因结构及功能的进一步发掘提供参考。 展开更多
关键词 甜瓜属 果糖激酶基因 生物信息学分析
Gga-miR-7b和靶基因SNCA在两品系鸡脾脏中的表达分析 预览
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作者 肖春婷 廉传江 +1 位作者 易诚 陈洪岩 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期874-879,共6页
为确定gga-miR-7b与SNCA的靶向关系以及检测他们在MDV超强毒株Md5感染SPF抗性鸡(B21单倍型)和易感鸡(B19单倍型)后5 d、14 d、25 d脾脏中的表达量。利用TargetScan、miRBD软件预测gga-miR-7b的靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测系统体... 为确定gga-miR-7b与SNCA的靶向关系以及检测他们在MDV超强毒株Md5感染SPF抗性鸡(B21单倍型)和易感鸡(B19单倍型)后5 d、14 d、25 d脾脏中的表达量。利用TargetScan、miRBD软件预测gga-miR-7b的靶基因,通过双荧光素酶报告基因检测系统体外验证gga-miR-7b与SNCA之间的靶向关系。qRT-PCR检测SNCA和gga-miR-7b在B21、B19感染Md5脾脏中的表达量。荧光素酶活性结果显示,gga-miR-7b与SNCA-wt-3′UTR共转染后显著抑制萤火虫荧光素酶活性(P<0.05),对SNCA-mut-3′UTR活性无显著影响。qRT-PCR结果显示,SNCA在B21、B19中,Md5感染5 d均显著上调表达(P<0.05),Md5感染25 d时SNCA在B21中极显著上调表达(P<0.01),在B19中极显著下调表达(P<0.01)。gga-miR-7b在Md5感染14 d,在B21中显著上调表达而在B19中显著下调表达(P<0.05),Md5感染25 d,gga-miR-7b在B21、B19中均极显著上调表达(P<0.01)。综上所述,SNCA是gga-miR-7b的靶基因。gga-miR-7b和SNCA可能与MD抗性/易感性以及MD肿瘤转化有关。 展开更多
关键词 gga-miR-7b SNCA 靶向关系 表达分析
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FLCN对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳功能的影响 预览
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作者 张娜 张艳莹 +4 位作者 王伟华 黄冠 曹慧 赵峰 李璐 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期44-52,共9页
FLCN基因参与多种代谢途径和细胞过程,国内外关于FLCN在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。应用RNA干扰技术和质粒转染技术改变FLCN基因在奶牛乳腺上皮细胞中表达量,流式细胞仪检测细胞增殖,采用qRT-PCR和Western blot检测F... FLCN基因参与多种代谢途径和细胞过程,国内外关于FLCN在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。应用RNA干扰技术和质粒转染技术改变FLCN基因在奶牛乳腺上皮细胞中表达量,流式细胞仪检测细胞增殖,采用qRT-PCR和Western blot检测FLCN对泌乳相关功能基因AMPK、mTOR、CyclinD1、Caspase3和β-酪蛋白表达的影响。结果表明,FLCN正向调节mTOR磷酸化水平,促进乳蛋白合成和细胞增殖,抑制细胞凋亡,负调控能量代谢调节子AMPK。FLCN在奶牛乳腺上皮细胞中可通过mTOR信号通路调控细胞增殖及乳蛋白合成,研究对揭示FLCN调控奶牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳具有重要作用。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 FLCN 增殖 泌乳
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老山芹种子成熟度差异研究 预览
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作者 李富恒 于萍 +4 位作者 赵恒田 王崢鉴 吴晶晶 张晓雯 刘玉美 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期19-27,共9页
针对老山芹生产存在种子发芽率低、出苗不整齐、育苗周期过长等问题,以夏季采收老山芹种子为材料,系统研究果穗外部和中部种子成熟度和重量差异、不同阴干重种子形态和胚形态指标及种胚发育程度差异、各指标相关性等。结果表明,采收时... 针对老山芹生产存在种子发芽率低、出苗不整齐、育苗周期过长等问题,以夏季采收老山芹种子为材料,系统研究果穗外部和中部种子成熟度和重量差异、不同阴干重种子形态和胚形态指标及种胚发育程度差异、各指标相关性等。结果表明,采收时老山芹种子胚发育不完全,存在后熟现象,种胚主要处于心形胚及鱼雷形胚时期,其中心形胚后期种子数量最多;位于果穗外部种子较果穗中部种子百粒重高,成熟度高;重量大的种子胚发育程度较高,胚率较大。研究可为老山芹规模化人工栽培提供理论依据和技术支撑。 展开更多
关键词 老山芹 种子 成熟度 形态指标 相关性分析
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牡荆苷纳米混悬剂在大鼠体内的药代动力学初步研究
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作者 顾成波 马慧 +5 位作者 宁文娟 李旺 韩海燕 付玉杰 祖元刚 袁肖寒 《辽宁中医杂志》 CAS 2019年第5期1027-1029,共3页
目的:研究牡荆苷纳米混悬剂注射给药后在大鼠体内的药代动力学行为。方法:以Wistar大鼠为模型动物,建立反相高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠血浆中牡荆苷的含量,并采用3P87软件计算药代动力学参数。结果:大鼠血浆样品中牡荆苷在0. 5~20μg... 目的:研究牡荆苷纳米混悬剂注射给药后在大鼠体内的药代动力学行为。方法:以Wistar大鼠为模型动物,建立反相高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠血浆中牡荆苷的含量,并采用3P87软件计算药代动力学参数。结果:大鼠血浆样品中牡荆苷在0. 5~20μg/m L范围内线性关系良好,定量限为0. 3μg·m L-1。牡荆苷的日内和日间精密度均小于10%,准确度在85%~115%范围内。牡荆苷纳米混悬剂在大鼠体内的药动力学符合二房室模型,分布相半衰期T1/2α=2. 4924 min,T1/2β=57. 123 min,K12=0. 159 min-1,K21=0. 035 min-1,K10=0. 965 min-1,AUC=407. 668 mg·min·L-1,CL=0. 0074 L·kg-1·min-1,Vc=0. 0762 L·kg-1。结论:建立了测定大鼠血浆中牡荆苷含量HPLC方法,此法适用于牡荆苷纳米混悬剂在大鼠体内的药代动力学研究,牡荆苷纳米混悬剂在大鼠体内的动力学行为符合二室模型。 展开更多
关键词 牡荆苷 纳米混悬剂 药代动力学 高效液相色谱
巴马小型猪高脂诱导模型建立及其肝脏转录组学研究 预览
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作者 尹智 蔡铭铭 +3 位作者 翁晓刚 牟彦双 刘忠华 张贵学 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期36-44,共9页
利用高脂饲料诱导建立巴马小型猪代谢疾病模型并分析肝脏转录组变化。选取1月龄巴马小型猪24头,随机分为对照组与高脂诱导组,对照组饲喂普通饲料,高脂诱导组饲喂含2.0%胆固醇饲料,定时监测体重、血常规及生化指标,6个月后试验结束,作心... 利用高脂饲料诱导建立巴马小型猪代谢疾病模型并分析肝脏转录组变化。选取1月龄巴马小型猪24头,随机分为对照组与高脂诱导组,对照组饲喂普通饲料,高脂诱导组饲喂含2.0%胆固醇饲料,定时监测体重、血常规及生化指标,6个月后试验结束,作心脏冠状动脉造影、器官组织学检测及肝脏转录组分析。结果表明,高脂诱导组个体饲喂4个月体重显著高于对照组,诱导期后血液生化指标中甘油三酯显著高于对照组,饲喂6个月时冠状动脉造影及器官组织切片未见显著病变,肝脏转录组分析显示高脂诱导组与对照组相比有2468个差异表达基因,主要与代谢途径相关。为期6个月的高脂饲喂未致巴马小型猪明显代谢性疾病及心血管病变,但血液甘油三酯水平显著升高,显著影响肝脏代谢途径相关基因表达。文章系统探讨高脂诱导模型,结合血液生化、组织学、冠脉造影及肝脏转录组分析,进一步获得代谢通路相关潜在标记基因,为建立理想小型猪代谢疾病模型提供参考。 展开更多
关键词 巴马小型猪 高脂诱导 代谢疾病 转录组分析
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烟草miRNA169基因家族及启动子的生物信息学分析 预览
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作者 蔡健宇 贾蒙骜 +4 位作者 张孝廉 余婧 李勇 雷波 郭玉双 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1-12,共12页
miRNA169是介导植物低温早花的关键因子。为了明确低温诱导烟草miRNA169基因家族表达的调控机制,培育耐低温抗早花的烟草新品种,对miRBase数据库中烟草miRNA169基因数据进行了分析,并对该基因家族及其启动子的结构和功能进行了预测。结... miRNA169是介导植物低温早花的关键因子。为了明确低温诱导烟草miRNA169基因家族表达的调控机制,培育耐低温抗早花的烟草新品种,对miRBase数据库中烟草miRNA169基因数据进行了分析,并对该基因家族及其启动子的结构和功能进行了预测。结果表明:在烟草基因组中共有19个miRNA169基因,分布在1号、8号和9号染色体上,同一染色体上的miRNA169分布集中。除pre-miRNA169t外,其他pre-miRNA169均具有很高的同源性。同时,在所有烟草miRNA169的启动子上均发现低温胁迫应答元件LTR,以及参与低温应答的激素脱落酸(ABA)和茉莉酸(JA)的应答元件。因此,推测烟草miRNA169对低温胁迫的响应过程可能是LTR、ABA和JA途径三者共同作用的结果。 展开更多
关键词 烟草 基因家族 miRNA169 生物信息学 低温胁迫 启动子
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Q型烟粉虱芳香基硫酸酯酶B基因的克隆及表达分析
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作者 宋天雪 田丽霞 +3 位作者 谢文 崔洪莹 向文胜 张友军 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期40-48,共9页
为明确烟粉虱Bemisia tabaci取食感染番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)的番茄植株后,其体内的芳香基硫酸酯酶B基因(arylsulfatase B,ARSB)是否能够做出应答反应,基于Q型烟粉虱基因组数据克隆得到ARSB基因cDNA全长... 为明确烟粉虱Bemisia tabaci取食感染番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)的番茄植株后,其体内的芳香基硫酸酯酶B基因(arylsulfatase B,ARSB)是否能够做出应答反应,基于Q型烟粉虱基因组数据克隆得到ARSB基因cDNA全长,采用生物信息学方法分析其序列特征,并通过实时荧光定量PCR技术测定ARSB基因在Q型烟粉虱不同发育阶段、不同组织及携带TYLCV前后的表达量变化情况。结果显示:Q型烟粉虱ARSB基因的cDNA全长为1 731 bp,编码576个氨基酸,分子量为64.89 kD,具有ARSB的保守结构域。ARSB基因在Q型烟粉虱不同发育阶段均有表达,在卵期表达量最高,成虫期表达量最低;该基因在Q型烟粉虱头胸部的表达量显著高于腹部;Q型烟粉虱获取TYLCV 72 h后其体内ARSB基因表达量显著提高。表明ARSB基因在Q型烟粉虱不同龄期、不同组织内存在差异表达,并可能参与Q型烟粉虱对TYLCV的响应和传毒过程。 展开更多
关键词 Q型烟粉虱 芳香基硫酸酯酶B 基因克隆 表达分析
苏云金芽胞杆菌谷氨酰胺合成酶基因glnA的转录调控和过表达 预览
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作者 杨帆 秦嘉欣 +3 位作者 彭琦 张杰 朱延明 宋福平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期563-569,共7页
氮代谢对细菌生存至关重要,谷氨酰胺和谷氨酸盐在细菌氮代谢中发挥重要作用。本文对苏云金芽胞杆菌谷氨酰胺合成酶基因glnA的转录调控及过表达进行了研究。通过构建glnR基因的缺失突变株及glnA基因启动子融合lacZ基因的表达载体,测定突... 氮代谢对细菌生存至关重要,谷氨酰胺和谷氨酸盐在细菌氮代谢中发挥重要作用。本文对苏云金芽胞杆菌谷氨酰胺合成酶基因glnA的转录调控及过表达进行了研究。通过构建glnR基因的缺失突变株及glnA基因启动子融合lacZ基因的表达载体,测定突变株中glnA启动子活性,发现在胞外营养充足的情况下转录因子GlnR负调控glnA基因。同时在glnR基因苏云金芽胞杆菌缺失突变株中过表达glnA基因。发现与野生型相比,过表达菌株杀虫活性得到提高。 展开更多
关键词 氮代谢 谷氨酰胺合成酶 转录调控
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苏云金芽胞杆菌Vip3AaAdAa嵌合蛋白的构建及其杀虫活性分析 预览
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作者 于爽 李帅 +2 位作者 李海涛 刘荣梅 高继国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期51-56,共6页
Vip3A类杀虫蛋白是一类新型杀虫蛋白,在氨基酸序列上与研究较为深入的Cry蛋白没有同源性,且昆虫受体结合位点与Cry蛋白也没有竞争关系。利用同源重组技术针对对甜菜夜蛾具有高活性的Vip3Aa39与无活性的Vip3Ad开展研究,成功构建了三个vip... Vip3A类杀虫蛋白是一类新型杀虫蛋白,在氨基酸序列上与研究较为深入的Cry蛋白没有同源性,且昆虫受体结合位点与Cry蛋白也没有竞争关系。利用同源重组技术针对对甜菜夜蛾具有高活性的Vip3Aa39与无活性的Vip3Ad开展研究,成功构建了三个vip3AaAdAa型嵌合基因,将其转入大肠杆菌中表达嵌合蛋白Vip3AaAdAa1、Vip3AaAdAa2、Vip3AaAdAa3,并将这三种嵌合蛋白对甜菜夜蛾进行了杀虫活性测定。研究表明,三种嵌合蛋白对甜菜夜蛾具有杀虫活性,Vip3AaAdAa3蛋白的LC50值比Vip3Aa39增加了1.4倍,Vip3AaAdAa1蛋白的LC50值比Vip3Aa39增加了2.7倍,嵌合蛋白Vip3AaAdAa1和Vip3AaAdAa3的杀虫活性均低于Vip3Aa39;Vip3AaAdAa2的杀虫活性与Vip3Aa39差异不显著。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 嵌合蛋白 甜菜夜蛾 杀虫活性
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猪胚胎体外培养体系优化对胚胎干细胞建系的影响 预览
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作者 余卓然 张雪 +3 位作者 高放 安铁洙 孔庆然 刘忠华 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期28-34,共7页
为提高体外胚胎发育质量和体外胚胎建立胚胎干细胞系效率,研究以N2B27为基础的干细胞培养体系对猪孤雌胚胎体外发育和后续建立胚胎干细胞系的影响。设立3个试验组:PZM-3组,孤雌激活的胚胎全程PZM-3培养体系中培养;N2B27组,孤雌激活的胚... 为提高体外胚胎发育质量和体外胚胎建立胚胎干细胞系效率,研究以N2B27为基础的干细胞培养体系对猪孤雌胚胎体外发育和后续建立胚胎干细胞系的影响。设立3个试验组:PZM-3组,孤雌激活的胚胎全程PZM-3培养体系中培养;N2B27组,孤雌激活的胚胎全程N2B27培养体系中培养;PZM-3-N2B27组,孤雌胚胎在PZM-3培养体系中培养至桑葚胚后更换为N2B27培养体系。结果表明,N2B27组无法获得囊胚,但PZM-3-N2B27组胚胎可正常发育至囊胚,囊胚率未显著提高,但囊胚细胞总数显著提高(P<0.05)。PZM-3-N2B27组获得孤雌囊胚用于建立猪胚胎干细胞系,显著提高原代克隆形成率(P<0.05),获得猪胚胎干细胞系呈碱性磷酸酶阳性,表达Oct4、Sox2和Nanog等多能性基因。结果表明,采用PZM-3和N2B27培养体系结合获得的猪孤雌囊胚利于猪胚胎干细胞系建立。研究为进一步优化猪胚胎体外培养体系,获得初始态胚胎干细胞系提供参考。 展开更多
关键词 体外培养 胚胎干细胞
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苏云金芽胞杆菌cry8Ea启动子区orf1片段缺失增强启动子活性 预览
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作者 崔婷婷 杜立新 +3 位作者 彭琦 张杰 高继国 宋福平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期30-36,共7页
本文分别构建了cry8E基因上游的启动子(Porf18E)和其上游缺失orf1基因的启动子(PΔorf18E)融合lacZ基因的表达载体,通过β-半乳糖苷酶活性的分析,发现PΔorf18E的转录活性高于Porf18E。分别用PΔorf18E和Porf18E指导cry1Ac基因的表达,... 本文分别构建了cry8E基因上游的启动子(Porf18E)和其上游缺失orf1基因的启动子(PΔorf18E)融合lacZ基因的表达载体,通过β-半乳糖苷酶活性的分析,发现PΔorf18E的转录活性高于Porf18E。分别用PΔorf18E和Porf18E指导cry1Ac基因的表达,通过光学显微镜观察,发现两个启动子指导表达的Cry1Ac蛋白均可形成双锥形晶体;通过总蛋白定量分析发现,缺失orf1基因的启动子(PΔorf18E)指导的Cry1Ac蛋白表达量高于Porf18E启动子指导的Cry1Ac蛋白表达量;生物活性测定表明:PΔorf18E指导的Cry1Ac晶体蛋白对小菜蛾Plutella xylostella 具有杀虫活性,高于Porf18E指导的Cry1Ac晶体蛋白对小菜蛾的杀虫活性。本文获得的强活性的启动子PΔorf18E是目前已报道的转录活性最高的cry基因启动子,该启动子为Cry蛋白的表达和遗传工程菌株构建提供了重要元件。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cry基因启动子 转录活性 Cry晶体蛋白 晶体蛋白表达
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重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定 预览
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作者 董雪 徐雨昕 +4 位作者 郭晶 龚忠阔 夏霖亚 殷玉和 吴丛梅 《吉林大学学报:理学版》 CAS 北大核心 2019年第6期1538-1543,共6页
通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA... 通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV共转染HEK-293F细胞,可显著抑制C6细胞增殖(P<0.01);转染24~144h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达;所得纯化蛋白和标准品一致;纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖(P<0.05~0.01),与标准品抑制效果相似. 展开更多
关键词 密码子优化 VEGF单克隆抗体 纯化 生物活性
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表达双基因的重组新城疫病毒载体的构建
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作者 高超 李德山 肖莉杰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第21期87-90,178,179,共6页
为了构建表达双外源基因的重组新城疫病毒载体,试验采用分子生物学方法对重组新城疫病毒进行了研究。通过反向遗传学操作构建并拯救表达双基因的重组新城疫病毒[rClone30-EGFP(NP/P)-RFP(P/M)];用重组新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞并绘... 为了构建表达双外源基因的重组新城疫病毒载体,试验采用分子生物学方法对重组新城疫病毒进行了研究。通过反向遗传学操作构建并拯救表达双基因的重组新城疫病毒[rClone30-EGFP(NP/P)-RFP(P/M)];用重组新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞并绘制生长曲线;通过免疫荧光试验检测重组新城疫病毒感染HepG2细胞后荧光蛋白的表达情况。结果表明:试验成功构建并拯救了表达双基因的重组新城疫病毒;重组新城疫病毒的生长动力学与亲本病毒相似,差异不显著(P>0.05);重组新城疫病毒能够在HepG2细胞中稳定表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和红色荧光蛋白(RFP)。说明重组新城疫病毒感染HepG2细胞后可稳定表达双外源基因。 展开更多
关键词 重组新城疫病毒 反向遗传学 双基因 生长曲线 免疫荧光试验 增强型绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白
牛床垫料有机肥对牧草品质及产量的影响 预览
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作者 赫兰保 安志民 +8 位作者 孙照勇 何鑫淼 赵晓川 冯艳忠 刘建河 刘中珊 曲大鹏 杨秀梅 李凤兰 《新农民》 2019年第27期36-38,共3页
本研究利用牛床垫料为主要原料,添加发酵菌种进行简易露天条垛式好氧堆肥处理,将堆制好的牛床垫料有机肥散入牧场可显著改善牧草品质,增加牧草产量。对畜牧养殖,发展农牧循环、种养结合有一定的借鉴意义。
关键词 牛床垫料 有机肥 牧草 品质 产量
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“顶岗实习”实践教学模式探究——以思想政治教育专业师范生为例
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作者 田起香 刘少宝 宋跃芬 《教育探索》 2019年第1期108-111,共4页
实践教学是对理论教学内容的强化,有利于促进学生理论知识与践行体会有机统一,对大学生专业化、职业化发展具有重要推动作用。顶岗实习作为实习实践的一种特殊形式,有其特色优势和实际价值,但在其实施过程中存在整体环境有待优化、有效... 实践教学是对理论教学内容的强化,有利于促进学生理论知识与践行体会有机统一,对大学生专业化、职业化发展具有重要推动作用。顶岗实习作为实习实践的一种特殊形式,有其特色优势和实际价值,但在其实施过程中存在整体环境有待优化、有效管理不足和学生自我管控问题突出等问题。而提升其效果的对策有:健全完善顶岗实习实践教学管理体系;增强顶岗实习专业课程教学的实践性;开展岗位管理及实习生自我调控培训。 展开更多
关键词 顶岗实习 实践教学 岗位管理 自我调控
应用iTRAQ定量蛋白质组学技术分析Sip毒素蛋白处理后的大猿叶甲差异蛋白
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作者 尹彦力 沙君雪 +4 位作者 张悠然 谭佳丽 孙敬 高泽平 李海涛 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1793-1803,共11页
Sip毒素蛋白(secreted insecticidal protein, Sip)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)杀虫家族中的分泌型杀虫蛋白,对鞘翅目幼虫表现出毒性。大猿叶甲(Colaphellus bowringi)是常见的十字花科害虫,Sip蛋白对大猿叶甲具有较... Sip毒素蛋白(secreted insecticidal protein, Sip)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)杀虫家族中的分泌型杀虫蛋白,对鞘翅目幼虫表现出毒性。大猿叶甲(Colaphellus bowringi)是常见的十字花科害虫,Sip蛋白对大猿叶甲具有较高的杀虫活性。本实验运用同位素相对标记与绝对定量技术(isotope relative labeling and absolute quantification technique, iTRAQ)分析Sip蛋白处理后大猿叶甲的差异蛋白,同时对其进行功能注释、富集分析。通过ProteinpilotTMV4.5软件进行定量分析,在基因本体数据库(Gene Ontology, GO)、蛋白相邻类的聚簇数据库(Cluster of Orthologous Groups of proteins, COG)对其进行功能注释,并对其进行KEGG通路分析,同时对所有显著性差异表达蛋白进行GO及KEGG通路分析。与对照组比对后,在实验组中鉴定出具有定量信息的蛋白质47个,包含27个上调蛋白和20个下调蛋白。通过GO、COG功能注释和KEGG分析,发现这些差异蛋白主要涉及结合和催化活性等分子功能;主要参与细胞进程和代谢进程等生物过程;预测到这些差异性蛋白可能有的功能为翻译后修饰,蛋白质周转,伴侣、翻译,核糖体结构和生物合成等。通过富集分析,发现这些差异蛋白主要有核核小体、非包膜细胞器、细胞内非包膜细胞器、核小体、核糖体、COPI包膜囊泡、蛋白质-DNA复合物、分泌颗粒、核染色质、高尔基体堆等生物学功能。本研究发现,在经过Sip毒素蛋白处理后,Bt毒素常见的一些受体发生了差异性表达,如钙黏蛋白(cadherin),氨肽酶N (aminopeptidase N, APN),碱式磷酸酶(alkaline phosphatase, Alp),G蛋白(G-protein)。本研究结果为Sip毒素作用机理的研究提供参考,并为Sip毒素的蛋白质组学研究提供科学参考。 展开更多
关键词 大猿叶甲 Sip毒素蛋白(Sip) 同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ) 差异蛋白
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