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薄荷醇通过mTOR活化促进人支气管上皮细胞气道炎症相关因子的表达 预览
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作者 陈海博 李敏超 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1344-1349,共6页
目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)气道炎症相关因子表达的影响及其机制。方法将细胞分为4组:正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧... 目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)气道炎症相关因子表达的影响及其机制。方法将细胞分为4组:正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测瞬时受体电位蛋白-8(TRPM8)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达,Western blot检测BEAS-2B中磷酸化的mTOR(p-mTOR)、TRPM8、TNF-α和IL-1β的蛋白表达。用流式细胞术检测胞内Ca2+荧光强度。结果与正常对照组相比,薄荷醇组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达升高,p-mTOR蛋白表达升高,胞内Ca2+浓度升高(P<0.05)。与正常对照组相比,雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达均无差异(P>0.05),p-mTOR蛋白表达降低(P<0.05),胞内Ca2+浓度无差异(P>0.05)。与薄荷醇组相比,薄荷醇+雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达降低,p-mTOR蛋白表达降低,胞内Ca2+浓度降低(P<0.05)。结论薄荷醇可能通过活化mTOR诱导胞内Ca2+浓度升高,进而促进气道炎症相关因子IL-1β和TNF-α的表达。 展开更多
关键词 人支气管上皮细胞 薄荷醇 瞬时受体电位蛋白-8 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 气道炎症
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瞬时受体电位M8离子通道在前列腺癌DU145细胞表达及其激动剂对细胞增殖迁移的影响
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作者 李靖 任君凯 +2 位作者 田沛 冯超杰 何朝宏 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1278-1280,共3页
目的 观察瞬时受体电位M8离子通道(TRPM8)在前列腺癌DU145细胞表达及TRPM8激动剂对细胞增殖迁移的影响.方法 使用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和瞬时受体电位A1离子通道(TRPA1)在前列... 目的 观察瞬时受体电位M8离子通道(TRPM8)在前列腺癌DU145细胞表达及TRPM8激动剂对细胞增殖迁移的影响.方法 使用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和瞬时受体电位A1离子通道(TRPA1)在前列腺癌旁组织、癌组织和DU145细胞中的表达,使用噻唑蓝(MTT)和划痕试验检测TRPM8受体激动剂薄荷醇对DU145细胞细胞增殖与迁移的影响,使用流式细胞术检测TRPM8对DU145细胞周期与凋亡的影响.结果 TRPM8在前列腺癌DU145细胞中呈明显高表达,TRPA1在DU145细胞中不表达;25、50、75、100 μmol/L浓度薄荷醇处理后,DU145相对细胞数量明显低于空白组[(90.01±8.52)%比(83.24±7.21)%比(71.23±6.45)%比(53.12±5.22)%比(100.00±3.26)%](P<0.05);100 μmol/L薄荷醇处理24、48和72 h后,DU145细胞中G0/G1期细胞明显高于未处理时[(60.98±7.21)%比(76.49±8.12)%比(72.03±7.65)%比(50.26±6.41)%] (P <0.05);100 μmol/L TRPM8激动剂处理24h和48 h后,DU145的细胞迁移率明显低于空白对照组[(58.59±5.24)%比(48.09±4.23)%]比(100.00±3.54)%](P <0.05).结论 TRPM8在DU145细胞中高表达,TRPM8激动剂能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,进而抑制肿瘤细胞的增殖及迁移. 展开更多
关键词 瞬时受体电位M8离子通道 前列腺癌 增殖 迁移
下调瞬时受体电位蛋白M8对HOS细胞增殖和迁移能力的影响
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作者 庞卓彦 沈俊 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期3097-3101,共5页
目的观察瞬时受体电位蛋白M8(TRPM8)在骨肉瘤组织及HOS细胞中的表达及干扰其表达后对细胞增殖及迁移能力的影响。方法分别选取未经治疗的8例骨软骨瘤标本及骨肉瘤标本,用免疫组织化学法检测TRPM8蛋白的表达;采用Westernblot方法检测... 目的观察瞬时受体电位蛋白M8(TRPM8)在骨肉瘤组织及HOS细胞中的表达及干扰其表达后对细胞增殖及迁移能力的影响。方法分别选取未经治疗的8例骨软骨瘤标本及骨肉瘤标本,用免疫组织化学法检测TRPM8蛋白的表达;采用Westernblot方法检测TRPM8蛋白在人骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞及骨肉瘤HOS细胞中的表达;小片段RNA干扰(siRNA)法干扰TRPM8蛋白的表达后,利用噻唑蓝(MTr)法及划痕实验检测细胞的增殖及迁移能力,并采用Westernblot检测相关蛋白的变化。结果免疫组织化学结果提示8例骨软骨瘤中1例TRPM8高表达,7例低表达,而在骨肉瘤中结果为6例高表达,2例低表达,差异有统计学意义(P〈0.05)。Westernblot结果提示与BMSCs比较HOS细胞中TRPM8的表达上调,约为BMSCs细胞中TRPM8表达量的3倍。下调TRPM8表达后,HOS细胞的增殖和迁移能力显著抑制,流式细胞仪检测发现下调TRPM8后HOS细胞周期出现G0/G1期阻滞且细胞迁移能力受到抑制,Westernblot检测发现细胞周期蛋白D1(CyclinD1)及细胞周期蛋白依赖性激酶4(Cdk4)表达受到抑制,同时局部黏着斑激酶(FAK)磷酸化水平及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达水平受到抑制,TRPM8可能通过上述蛋白调控HOS细胞的增殖及迁移。结论TRPM8的表达在骨肉瘤组织及HOS细胞中显著升高,且通过siRNA抑制其表达后可显著抑制细胞增殖及迁移能力。TRPM8通道可能是骨肉瘤治疗的一个潜在靶点。 展开更多
关键词 瞬时受体电位蛋白M8 人骨肉瘤HOS细胞 增殖 迁移 骨肉瘤
瞬时受体电位通道A1和瞬时受体电位通道M8在冷过敏中的作用 被引量:1
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作者 李伟 范晓华 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2014年第7期656-659,共4页
背景 冷过敏是炎性痛和神经病理性疼痛的一个常见症状,其内在机制尚不清楚. 目的 阐明瞬时受体电位通道A1 (transient receptor potential cation channel,subfamily A,member 1,TRPA1)和瞬时受体电位通道M8(transient receptor pote... 背景 冷过敏是炎性痛和神经病理性疼痛的一个常见症状,其内在机制尚不清楚. 目的 阐明瞬时受体电位通道A1 (transient receptor potential cation channel,subfamily A,member 1,TRPA1)和瞬时受体电位通道M8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)参与冷过敏的机制. 内容 综述TRPA1和TRPM8的分子结构和门控机制及其在有害的冷、炎性痛和神经病理性疼痛的冷过敏形成、维持中的作用等方面的研究. 趋向 深入研究TRPA1和TRPM8在冷过敏发生中的作用,有助于阐明冷过敏的机制,并为开发拮抗剂提供理论依据. 展开更多
关键词 冷过敏 瞬时受体电位通道A1 瞬时受体电位通道M8 炎性痛 神经病理性疼痛
人气道上皮细胞感知冷刺激的受体机制 被引量:2
5
作者 李敏超 何叶 +2 位作者 Juliy M.Perelman Victor P.Kolosov 周向东 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第20期2071-2076,共6页
目的探讨温度感受器瞬时受体电位蛋白-8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)在人气道上皮细胞感受冷刺激过程中发挥的作用及其机制。方法用薄荷醇及冷空气(18℃)刺激人气道上皮16HBE细胞:1以TRPM8通道特异性拮抗剂B... 目的探讨温度感受器瞬时受体电位蛋白-8(transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)在人气道上皮细胞感受冷刺激过程中发挥的作用及其机制。方法用薄荷醇及冷空气(18℃)刺激人气道上皮16HBE细胞:1以TRPM8通道特异性拮抗剂BCTC、TRPM8 shRNA为干预手段,动态观察在薄荷醇、冷刺激作用下细胞内Ca^2+荧光强度变化来监测气道上皮细胞上TRPM8的功能;2以磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate,PIP2)荧光分子探针PLCδ1-PH-GFP转染细胞,通过动态观察各组细胞内PLCδ1-PH-GFP从细胞膜至细胞质的荧光转位变化来检测PIP2的动态变化来研究冷刺激作用下TRPM8的信号通路。结果 1细胞内相对钙离子浓度变化:薄荷醇组处理4 min后、冷刺激组处理6 min后分别为(5.80±0.34)、(5.02±0.36),明显高于对照组(1.04±0.12)、(1.03±0.08)(P〈0.05),1 mmol/L薄荷醇组+BCTC组、1 mmol/L薄荷醇组+转染TRPM8 shRNA组最高值分别为(2.68±0.19)、(1.08±0.16),明显低于1 mmol/L薄荷醇组,18℃+BCTC组、18℃+转染TRPM8 shRNA组最高值分别为(1.77±0.22)、(1.02±0.18),明显低于18℃组(均P〈0.05);2PLCδ1-PH-GFP从细胞膜至细胞质的转位变化(Fm/Fc值):1 mmol/L薄荷醇组、冷刺激组最高值分别为(0.90±0.01)、(0.90±0.01),明显高于对照组最高值(1.01±0.02)(P〈0.05),细胞处理200 s时1 mmol/L薄荷醇+BCTC15μmol/L组、1 mmol/L薄荷醇组+转染TRPM8 shRNA组分别为(0.86±0.03)、(0.89±0.02),明显低于1 mmol/L薄荷醇组(0.36±0.06)(P〈0.05),细胞处理220 s时18℃+BCTC15μmol/L组、18℃+转染TRPM8 shRNA组分别为(0.82±0.02)、(0.93±0.01),明显低于18℃组(0.40±0.06)(P〈0.05)。结论TRPM8受体是人气道上皮细胞感受冷刺激的主要受体,并通过TRPM8→Ca^2+→PLC→PIP2信号通路引起气道黏液高分泌等反应。 展开更多
关键词 气道上皮细胞 冷刺激 瞬时受体电位蛋白-8 CA^2+ PIP2
瞬时受体通道TRPM8及其对前列腺癌的影响
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作者 盛晓波 汪思亮 +6 位作者 韦忠红 杨召聪 陈晨 陈文星 王爱云 郑仕中 陆茵 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期739-742,共4页
瞬时受体电位melastatin8(transient receptor potential melastatin8,TRPM8)蛋白是瞬时受体电位(transientreceptor potential,TRP)蛋白超家族中的一员,负责调控细胞内游离钙离子的动态平衡,在细胞增殖、凋亡以及分化中起着重要的... 瞬时受体电位melastatin8(transient receptor potential melastatin8,TRPM8)蛋白是瞬时受体电位(transientreceptor potential,TRP)蛋白超家族中的一员,负责调控细胞内游离钙离子的动态平衡,在细胞增殖、凋亡以及分化中起着重要的作用。TRPM8最初作为一种前列腺特异性蛋白被克隆出来,之后发现其在肺癌、乳腺癌、结肠癌以及皮肤来源的恶性肿瘤中均有表达。最新研究发现,TRPM8不仅能感知冷知觉,还可作为前列腺癌诊断和治疗的新靶点。本文对TRPM8的结构、功能、定位、调控及其在前列腺癌发生和发展中的作用研究进行回顾,并对其在前列腺癌诊断和治疗中的应用前景进行展望。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 瞬时受体电位通道 细胞凋亡 TRPM8
TRPM8与神经病理性疼痛 被引量:2
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作者 苏林 王国林 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2011年第1期96-100,共5页
背景传统疗法治疗神经病理性疼痛的效果不甚理想。适度的冷刺激具有镇痛作用,但是过低的温度又会引起疼痛,研究温度和疼痛的关系有助于开发神经病理性疼痛治疗的新方法。新的研究发现瞬时感受器电位(transient receptor potential,... 背景传统疗法治疗神经病理性疼痛的效果不甚理想。适度的冷刺激具有镇痛作用,但是过低的温度又会引起疼痛,研究温度和疼痛的关系有助于开发神经病理性疼痛治疗的新方法。新的研究发现瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)蛋白家族中可以感受冷刺激的离子通道瞬时感受器电位melastatin 8 (transient receptor potential melastatin 8,TRPM8)参与冷刺激的镇痛和致痛机制。目的提示从冷觉感受器的角度研究神经病理性疼痛的发生机制可以成为发展慢性疼痛治疗方法的新思路。内容现对TRPM8及其参与神经病理性疼痛发生机制的研究进展作一综述。趋向目前的研究已经证实,神经病理性疼痛状况下TRPM8的表达水平和功能发生变化,激活TRPM8可以产生镇痛或致痛两种截然相反的效果。如果能够阐明TRPM8介导的两种不同效应的不同信号转导通路,合理地利用TRPM8介导的镇痛效应而避开其介导的冷痛敏反应,对于神经病理性疼痛治疗方法的发展将会有重要意义。 展开更多
关键词 瞬时感受器电位melastatin 8 神经痛 冷痛觉过敏 未损伤神经元
Inhibition of transient receptor potential melastatin 8 alleviates airway inflammation and remodeling in a murine model of asthma with cold air stimulus
8
作者 Haipei Liu Quanhua Liu +1 位作者 Li Hua Jun Pan 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期499-506,共8页
冷空气刺激是加重气喘的一个重要环境因素。在分子的水平,短暂受体潜力 melastatin (TRPM8 ) 8 在冷察觉起一个关键作用。在航线发炎的 TRPM8 的角色并且与冷刺激和相关分子的机制在气喘的一个鼠科的模型改变大部分是未知的。在这研究... 冷空气刺激是加重气喘的一个重要环境因素。在分子的水平,短暂受体潜力 melastatin (TRPM8 ) 8 在冷察觉起一个关键作用。在航线发炎的 TRPM8 的角色并且与冷刺激和相关分子的机制在气喘的一个鼠科的模型改变大部分是未知的。在这研究, C57BL/6 老鼠随机被划分成四个组:缓冲磷酸盐的盐的控制组(控制) , ovalbumin (卵) 导致了气喘组(卵) ,与冷空气刺激组(OVA+cold ) 一起的卵,和 OVA+cold+shTRPM8 (TRPM8 短发卡 RNA ) 组织。我们证明寒冷在 OVA+cold 组让导致刺激的 TRPM8 upregulation 通风。而且, TRPM8 击倒的显著地稀释的导致寒冷的发炎和渗入,免疫球蛋白 E 的减少的层次,恢复了改变的 Th1/Th2 平衡,和减少的煽动性的房间累积和航线。而且,我们表明了那 TRPM8 击倒的戏剧性地禁止的激活 mitogen 的蛋白质 kinase 和原子 factor-B 小径。一起,这些结果表明那冷空气刺激导致了一条航线煽动性的反应并且由增加 TRPM8 表示和 TRPM8 的那 downregulation 改变减轻了这些回答。 展开更多
关键词 冷空气 气喘 航线 受体 模型 鼠科 免疫球蛋白 环境因素
瞬时受体电位通道家族M8亚型在大鼠偏头痛发病机制中的作用 预览
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作者 秦冬梅 邹撰 +1 位作者 周超然 母发光 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期515-519,共5页
目的:通过检测瞬时受体电位通道家族M8(TRPM8)亚型在偏头痛模型大鼠三叉神经组织中的表达变化探讨TRPM8在大鼠偏头痛发病机制中的作用。方法将20只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组和模型组,每组10只。采用颈背部每... 目的:通过检测瞬时受体电位通道家族M8(TRPM8)亚型在偏头痛模型大鼠三叉神经组织中的表达变化探讨TRPM8在大鼠偏头痛发病机制中的作用。方法将20只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组和模型组,每组10只。采用颈背部每周1次皮下注射硝酸甘油(10 mg/kg)建立无先兆性偏头痛大鼠模型,共5周;对照组则用生理盐水代替硝酸甘油行皮下注射。最后一次皮下注射4 h后,对各组大鼠行行为学评分,而后采集两组大鼠颅底三叉神经节,采用免疫组化法检测两组三叉神经节中谷氨酸受体(NMDAR)的表达变化;采用免疫荧光检测法观察两组三叉神经节中蛋白激酶A(PKA)的表达;采用western blot法检测TRPM8蛋白在两组中的表达情况。结果模型组大鼠在建模过程中每周的行为学评分均高于对照组(P〈0.05)。模型组中NMDAR、PKA及TRPM8表达水平均高于对照组(P〈0.01)。行为学评分与TRPM8表达水平呈正相关(r=0.822,P〈0.01);NMDAR与TRPM8表达水平亦呈正相关(r=0.794,P〈0.01)。结论 TRPM8可能参与了偏头痛的发病机制,并且可能是通过NMDAR途径实现。 展开更多
关键词 瞬时受体电位通道家族M8 硝酸甘油 偏头痛 大鼠
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TRPM8在舌癌组织及Tca8113中的表达及其意义 预览 被引量:4
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作者 潘娴 吴煜农 +3 位作者 傅振 张阳 张红闯 叶金海 《口腔生物医学》 2010年第3期 120-123,共4页
目的观察瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin type8,TRPM8)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其在肿瘤生成与发展中的意义。方法应用免疫组织/细胞化学方法检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞株、舌乳... 目的观察瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin type8,TRPM8)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其在肿瘤生成与发展中的意义。方法应用免疫组织/细胞化学方法检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞株、舌乳头状瘤组织和正常舌体组织中的表达;应用Western blot检测TRPM8在舌癌组织、、Tca8113细胞及正常舌体组织中的表达。结果免疫组织化学显示:TRPM8在舌癌组织中100%(22/22)呈强阳性表达;而在舌乳头状瘤组织中18%(2/11)呈强阳性表达,45%(5/11)呈弱阳性表达,余为阴性表达;正常舌体组织中10%(1/10)呈弱阳性表达,余为阴性表达。TRPM8在舌癌、舌乳头状瘤及正常舌体组织中的表达有统计学差异(P〈0.05)。免疫细胞化学显示:TRPM8在舌癌细胞Tca8113中呈阳性表达。Western blot结果显示舌癌细胞及组织中TRPM8表达水平明显高于正常舌体组织。结论 TRPM8在舌癌中的高表达提示肿瘤的发生发展可能受到离子通道蛋白的调节。 展开更多
关键词 瞬时受体电位M8 舌鳞状细胞癌 TCA8113
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瞬时受体电位通道家族M8型受体转基因小鼠模型的建立 预览 被引量:2
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作者 马双陶 曹廷兵 +5 位作者 马丽群 罗志丹 郝新忠 王利娟 刘道燕 祝之明 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期251-254,共4页
目的建立瞬时受体电位通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型。方法通过显微注射法将pcDNA3.1-h Trpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和... 目的建立瞬时受体电位通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型。方法通过显微注射法将pcDNA3.1-h Trpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和免疫印迹法检测Trpm8基因及蛋白在组织中的表达。结果将405枚注射受精卵移植给15只假孕鼠,其中13只顺利妊娠并产下95只子鼠,经PCR鉴定得到5只转基因阳性首建鼠,其中4只小鼠可稳定传代,经与C57BL/6J小鼠回交7代后互交数代建系。子代转基因小鼠经RT-PCR检测发现Trpm8基因在心脏、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中均有表达,且TRPM8蛋白表达在转基因小鼠中显著增加。结论通过显微注射法成功建立了Trpm8转基因小鼠模型。 展开更多
关键词 瞬时受体电位通道家族M8型受体 显微注射法 转基因小鼠
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