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文章速递蜱Kunitz型蛋白酶抑制剂的抗凝机制研究进展 认领
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作者 马静 高金亮 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期111-114,共4页
蜱是一类体外吸血寄生虫,在长期吸血的过程中蜱向宿主体内释放多种抗凝血物质来阻止宿主血液凝固。含有Kunitz结构域的丝氨酸蛋白酶抑制分子是蜱分泌的重要抗凝血物质。不同蜱种体内的抗凝血物质释放的部位、作用的凝血因子以及与凝血... 蜱是一类体外吸血寄生虫,在长期吸血的过程中蜱向宿主体内释放多种抗凝血物质来阻止宿主血液凝固。含有Kunitz结构域的丝氨酸蛋白酶抑制分子是蜱分泌的重要抗凝血物质。不同蜱种体内的抗凝血物质释放的部位、作用的凝血因子以及与凝血因子相结合的位点各有不同。通过对现有蜱源Kunitz结构域的抗凝血物质的综述,为今后发现更多的蜱源Kunitz型抗凝血物质,并在药理水平上研究蜱与宿主之间相互作用的机制提供参考。 展开更多
关键词 抗凝血 Kunitz结构域 丝氨酸蛋白酶抑制剂
猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1对人巨噬细胞THP-1的免疫调节功能研究 认领
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作者 毕研丽 刘仲藜 +3 位作者 郭爱疆 张少华 王帅 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS 北大核心 2021年第2期161-168,共8页
主要研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1(WormBase:TsM_000065700)对宿主THP-1细胞的免疫调节作用。通过设计特异性引物和RT-PCR扩增技术,获得Ts-serpin-1编码序列,用qRT-PCR分析Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫的... 主要研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Ts-serpin-1(WormBase:TsM_000065700)对宿主THP-1细胞的免疫调节作用。通过设计特异性引物和RT-PCR扩增技术,获得Ts-serpin-1编码序列,用qRT-PCR分析Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫的表达情况;构建pCold-Ts-serpin-1原核表达载体,诱导表达纯化重组蛋白Ts-serpin-1;用重组蛋白Ts-serpin-1处理THP-1细胞,采用qRT-PCR和ELISA方法检测Ts-serpin-1处理THP-1细胞后,各炎性细胞因子的变化情况。结果显示:获得的Ts-serpin-1目的基因长度为1149 bp,编码382个氨基酸,含有Serpin家族特有的反应中心环。Ts-serpin-1基因在猪带绦虫成虫和中绦期幼虫均表达,且成虫表达量显著高于幼虫。重组蛋白Ts-serpin-1的分子质量约为43 ku,可抑制THP-1细胞促炎性细胞因子IL-6、IL-1β、IL-12、TNF-α、IFN-γ和iNOS2的表达,促进抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β的分泌表达。以上结果提示,Ts-serpin-1在寄生虫-宿主互作过程中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 猪带绦虫 丝氨酸蛋白酶抑制剂 细胞因子 免疫调节
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乙型肝炎患者血清丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal1表达与病毒载量的相关性分析 认领
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作者 刘宏伟 王玉华 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2021年第3期230-233,共4页
目的:探究乙型肝炎患者血清丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal1(SPINK1)表达情况及其与病毒载量(HBV DNA)的关系。方法:选取在河北省沧州市传染病医院治疗的157例乙型肝炎患者为研究对象,选择126例健康者作为对照组,并收集血清,采用荧光实时定... 目的:探究乙型肝炎患者血清丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal1(SPINK1)表达情况及其与病毒载量(HBV DNA)的关系。方法:选取在河北省沧州市传染病医院治疗的157例乙型肝炎患者为研究对象,选择126例健康者作为对照组,并收集血清,采用荧光实时定量PCR法(qRT-PCR)检测SPINK1 mRNA表达及HBV DNA载量,检测不同HBV DNA载量患者血清中HBsAg、抗HBs、HBeAg、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)水平,Logistic分析影响患者HBV DNA载量的影响因素;Pearson相关性分析患者血清SPINK1与血清抗原、肝功能指标的相关性。结果:与对照组比较,乙型肝炎组患者血清中SPINK1 mRNA表达明显升高(P<0.05)。与HBV DNA低载量组相比,高载量组患者血清中SPINK1 mRNA表达明显升高,血清HBsAg、HBeAg水平明显升高,HBcAb水平明显降低(P<0.05)。与HBV DNA低载量组相比,高载量组患者血清ALT水平明显升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示HBeAg、ALT、SPINK1是影响乙型肝炎患者HBV DNA载量的危险因素。Pearson相关性分析显示,SPINK1与HBV DNA载量、HBeAg、ALT呈显著正相关,差异均有统计学意义(r=0.426,r=0.408,r=0.395,均P<0.05)。结论:乙型肝炎患者血清SPINK1表达显著升高,与患者肝损伤、血清抗原水平及病毒载量有关,是影响病毒载量的危险因素。SPINK1有望成为乙型肝炎患者病情评估、诊治的生物学指标。 展开更多
关键词 乙型肝炎 病毒载量 丝氨酸蛋白酶抑制因子
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VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin在妊娠高血压患者血清及胎盘中的表达水平研究 认领
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作者 朱萍 沈萍 《河北医药》 CAS 2020年第15期2268-2272,共5页
目的研究血管内皮生长因子(VEGF)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、血管紧张素转换酶(ACE)及丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)在妊娠高血压患者血清及胎盘中的表达水平。方法选取2016年8月至2018年8月就诊的妊娠高血压患者30例为妊娠高血压组... 目的研究血管内皮生长因子(VEGF)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、血管紧张素转换酶(ACE)及丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)在妊娠高血压患者血清及胎盘中的表达水平。方法选取2016年8月至2018年8月就诊的妊娠高血压患者30例为妊娠高血压组,选取30例体检的正常妊娠产妇为正常组。采集分娩产妇的胎盘组织和空腹静脉血,免疫组化染色、酶联免疫吸附试验检测VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin表达。结果妊娠高血压组血清中VEGF、ESM-1、ACE和Vaspin表达水平高于正常组(P<0.05)。妊娠高血压组胎盘组织中VEGF、ESM-1、ACE和Vaspin阳性表达率高于正常组(P<0.05)。重度妊娠高血压患者VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin阳性表达率高于轻度妊娠高血压患者和中度妊娠高血压患者(P<0.05)。有高血压家族史患者VEGF、ESM-1、ACE、Vaspin阳性表达率高于无高血压家族史患者(P<0.05)。VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin间进行相关性分析,VEGF与ESM-1间呈正相关(r=0.373,P=0.043);VEGF与ACE间呈正相关(r=0.369,P=0.044);VEGF与Vaspin间呈正相关(r=0.479,P=0.007);ESM-1与ACE间呈正相关(r=0.409,P=0.025);ESM-1与Vaspin间呈正相关(r=0.481,P=0.004);ACE与Vaspin间呈正相关(r=0.448,P=0.013)。结论VEGF、ESM-1、ACE及Vaspin在妊娠高血压患者血清及胎盘中高表达,与妊娠高血压的严重程度和有无高血压家族史有关,四个因子之间呈正相关,在妊娠高血压发展中有重要意义。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 内皮细胞特异性分子-1 血管紧张素转换酶 丝氨酸蛋白酶抑制剂 妊娠高血压
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百子莲ApSPI基因原核表达及其重组菌的抗逆性研究 认领
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作者 李蕊莲 陈冠群 申晓辉 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1087-1096,共10页
丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine Protease Inhibitor,SPI)通过抑制靶蛋白活性参与调节内源蛋白平衡,并在植物发育、防御机制中发挥重要作用。该研究利用RACE技术克隆获得百子莲(Agapanthus praecox ssp.orientalis)ApSPI基因全长序列,构建了... 丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine Protease Inhibitor,SPI)通过抑制靶蛋白活性参与调节内源蛋白平衡,并在植物发育、防御机制中发挥重要作用。该研究利用RACE技术克隆获得百子莲(Agapanthus praecox ssp.orientalis)ApSPI基因全长序列,构建了E.coli Transetta(pET-32a-ApSPI)重组菌株,并检测重组菌株在不同非生物胁迫下的耐受性。结果显示:(1)ApSPI基因全长为652 bp,开放阅读框为366 bp,编码122个氨基酸。(2)ApSPI蛋白含有一个N端信号肽和一个典型的Kazal结构域,是一种Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂。重组蛋白最佳诱导温度为37℃,诱导时间6 h,IPTG浓度为0.1 mmol·L^-1,且主要以可溶性形式存在。(3)重组菌非生物胁迫耐受性研究发现,重组菌Transetta(pET-32a-ApSPI)对NaCl(200~400 mmol·L^-1)、KCl(200~400 mmol·L^-1)和PEG6000(5%)的耐受性明显高于对照菌株Transetta(pET-32a)。研究表明,过表达ApSPI蛋白增强了大肠杆菌对盐、干旱胁迫的抗性,为进一步研究ApSPI在植物抗逆中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 百子莲 丝氨酸蛋白酶抑制剂 原核表达 非生物胁迫 抗逆性研究
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毛果杨丝氨酸蛋白酶抑制剂基因PtrSPI的克隆及真核表达 认领
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作者 杨帅 黄颖 +1 位作者 王志英 刁桂萍 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期88-92,98共6页
利用PCR技术从毛果杨(Populus trichocarpa)中分离得到1条丝氨酸蛋白酶抑制剂基因PtrSPI,该基因cDNA编码区全长为1176 bp,可编码391个氨基酸。BlastP预测结果显示,该丝氨酸蛋白酶抑制剂属于SERPIN超家族。多序列比对结果表明,毛果杨Ptr... 利用PCR技术从毛果杨(Populus trichocarpa)中分离得到1条丝氨酸蛋白酶抑制剂基因PtrSPI,该基因cDNA编码区全长为1176 bp,可编码391个氨基酸。BlastP预测结果显示,该丝氨酸蛋白酶抑制剂属于SERPIN超家族。多序列比对结果表明,毛果杨PtrSPI基因的氨基酸序列与已报道的胡杨(P.euphratica)丝氨酸蛋白酶抑制剂氨基酸序列XP_011030699同源性最高,相似性为92%,且蛋白的C端氨基酸序列都含有高度保守的反应中心环(RCL)。在此基础上,成功构建了PtrSPI基因的重组真核表达载体pPICK-PtrSPI并获得了重组毕赤酵母菌株GS115-PtrSPI。利用终质量分数为0.5%甲醇诱导重组真核蛋白表达,SDS-PAGE电泳结果显示,在42648.45处出现了重组蛋白,与预期值一致。 展开更多
关键词 毛果杨 丝氨酸蛋白酶抑制剂 异源表达
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家蝇3种丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)基因在感染白色念珠菌后的表达 认领
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作者 胡亚 罗嫚 +2 位作者 魏川川 修江帆 吴建伟 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2020年第5期1191-1200,共10页
研究家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)基因Sp2、Sp13、Sp16在感染白色念珠菌后的表达模式。利用白色念珠菌刺激家蝇幼虫,对收集的标本进行逆转录,以GAPDH为内参基因,通过qPCR技术检测3条Serpin基因在家蝇感染后不同时间点及不同组织中的... 研究家蝇丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)基因Sp2、Sp13、Sp16在感染白色念珠菌后的表达模式。利用白色念珠菌刺激家蝇幼虫,对收集的标本进行逆转录,以GAPDH为内参基因,通过qPCR技术检测3条Serpin基因在家蝇感染后不同时间点及不同组织中的表达特征,统计分析结果。结果表明,不同时间点感染组和对照组比较,Sp2 mRNA在3 h、6 h和48 h的表达量比对照组高;Sp13 mRNA在6 h的表达量比对照组高,在3 h和24 h时的表达量比对照组低;Sp16 mRNA在6 h、24 h和48 h时的表达量比对照组高,在36 h时的表达量比对照组低。不同组织中感染组和对照组比较,Sp2 mRNA在3 h时,在血淋巴和脂肪体中的表达量比对照组高,在马氏管、气管和肠道的表达量比对照组低;12 h时,在血淋巴中的表达量比对照组高,在马氏管和唾液腺中的表达量比对照组低;24 h时,在脂肪体中的表达量比对照组低;48 h时,在血淋巴中呈高表达,在唾液腺中的表达量比对照组低。Sp13 mRNA在3 h时,在唾液腺和脂肪体中的表达量比对照组高,在马氏管、体壁、血淋巴和气管中的表达量比对照组低;12 h时,在血淋巴中呈高表达,在体壁和脂肪体中的表达量比对照组低;24 h时,在血淋巴、气管和唾液腺中的表达量比对照组高,在脂肪体中的表达量比对照组低;48 h时,在马氏管、血淋巴、气管和脂肪体中的表达量比对照组高,在体壁和唾液腺中的表达量比对照组低。Sp16 mRNA在3 h时,在马氏管和气管中的表达量比对照组低;12 h时,在马氏管和脂肪体中其表达量比对照组低;24 h时,其表达量在马氏管中比对照组高,在脂肪体中比对照组低;48 h时,在血淋巴中呈高表达,而在马氏管中的表达量比对照组低。家蝇3种Serpin基因在白色念珠菌感染后均呈现出差异性表达,推测Serpin基因在家蝇免疫调节中具有协同调节作用。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂 家蝇 感染 时空表达 实时荧光定量PCR
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褐飞虱丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin4的克隆及表达模式分析 认领
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作者 王正亮 朱杭锋 +1 位作者 潘海波 俞晓平 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期779-787,共9页
【目的】克隆和分析褐飞虱Nilaparvata lugens丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin4,并探明其时空表达谱和病原真菌诱导表达模式。【方法】基于褐飞虱转录组和全基因组序列数据,利用PCR技术克隆得到褐飞虱Nlserpin4基因的全长cDNA序列;利用... 【目的】克隆和分析褐飞虱Nilaparvata lugens丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Nlserpin4,并探明其时空表达谱和病原真菌诱导表达模式。【方法】基于褐飞虱转录组和全基因组序列数据,利用PCR技术克隆得到褐飞虱Nlserpin4基因的全长cDNA序列;利用生物信息学手段分析其核苷酸和蛋白质序列特征;通过qRT-PCR技术检测其在褐飞虱不同发育时期(卵、1-5龄若虫和初羽化雌雄成虫)和5龄若虫不同组织(脂肪体、肠道、血淋巴和剩余虫体)中的时空表达谱,以及金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae注射感染褐飞虱5龄若虫不同时间后的诱导表达模式。【结果】克隆获得褐飞虱Nlserpin4基因全长cDNA序列(GenBank登录号:MN822802),其开放阅读框长1227 bp,编码408个氨基酸,蛋白的相对分子质量和等电点分别为45.91 kD和6.23。氨基酸序列分析表明,Nlserpin4蛋白无糖基化位点,N端包含一段由23个氨基酸残基组成的信号肽,C端具有serpin蛋白家族典型的RCL区,且含有能被靶标蛋白酶识别的活性裂解位点。系统发育分析表明,Nlserpin4与半翅目其他昆虫的serpin亲缘关系较近,其中与蔗黄伪毛蚜Sipha flava serpin4的亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,Nlserpin4基因表达具有明显的时空特异性,其在成虫中的表达量显著高于在其他龄期的,且在雄成虫中表达量最高;Nlserpin4基因在褐飞虱5龄若虫脂肪体、肠道、血淋巴和剩余虫体中均有表达,且在剩余虫体组织中表达量最高;病原真菌金龟子绿僵菌诱导48 h内Nlserpin4表达量均显著下调,但随着诱导时间的增加,Nlserpin4表达量呈回升趋势。【结论】褐飞虱Nlserpin4基因在褐飞虱不同发育阶段、不同组织以及病原真菌金龟子绿僵菌诱导不同时间下差异表达。研究结果为深入研究Nlserpin4在褐飞虱生长发育和免疫调节中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 褐飞虱 金龟子绿僵菌 丝氨酸蛋白酶抑制剂 基因克隆 时空表达 诱导表达
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家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂Bmserpin2对酚氧化酶原激活和抗菌肽基因表达的抑制作用 认领
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作者 李冰 孙帆 +2 位作者 陶姗姗 夏家凤 叶崇军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期798-806,共9页
【目的】丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白是昆虫中调控自身免疫反应的重要蛋白酶抑制剂,本研究旨在研究家蚕Bombyx mori丝氨酸蛋白酶抑制剂2(Bmserpin2)在家蚕2个重要的自身免疫通路即酚氧化酶原(prophenol oxidase,PPO)激活通路和革兰氏阳... 【目的】丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白是昆虫中调控自身免疫反应的重要蛋白酶抑制剂,本研究旨在研究家蚕Bombyx mori丝氨酸蛋白酶抑制剂2(Bmserpin2)在家蚕2个重要的自身免疫通路即酚氧化酶原(prophenol oxidase,PPO)激活通路和革兰氏阳性菌诱导抗菌肽的TOLL通路中的调控作用。【方法】PCR扩增家蚕Bmserpin2基因片段后原核表达并通过镍柱纯化。利用纯化后的重组Bmserpin2蛋白分别与胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶和蛋白酶K反应,检测Bmserpin2对上述蛋白酶活性的影响。通过RT-qPCR检测Bmserpin2在家蚕5龄第3天幼虫头、中肠、脂肪体、血淋巴、丝腺和表皮组织中表达的模式。往家蚕5龄第3天幼虫注射Bmserpin2重组蛋白,检测Bmserpin2对其血淋巴中PPO活性的影响。通过滕黄微球菌Micrococcus luteus诱导家蚕5龄第3天幼虫产生抗菌肽并注射Bmserpin2重组蛋白后,RT-qPCR检测其血淋巴中抗菌肽基因gloverin2和moricin表达量。【结果】成功构建重组质粒并表达纯化目的蛋白Bmserpin2。通过与不同蛋白酶反应得出Bmserpin2可极显著抑制消化酶胰蛋白酶和弹性蛋白酶活性,对胰凝乳蛋白酶和蛋白酶K活性影响不显著,提示Bmserpin2对不同蛋白酶具有生物学活性和催化特异性。基因表达模式显示Bmserpin2在家蚕5龄幼虫血淋巴和脂肪体中表达量最高。家蚕5龄幼虫注射重组Bmserpin2蛋白后发现目的蛋白能有效抑制血淋巴中PPO活性。利用滕黄微球菌诱导家蚕5龄幼虫产生抗菌肽后,滕黄微球菌和Bmserpin2混合注射组中血淋巴中抗菌肽基因gloverin2和moricin的转录表达与只注射滕黄微球菌的比较被显著下调。【结论】Bmserpin2可能参与家蚕酚氧化酶原激活和TOLL途径的胞外级联反应的免疫通路。 展开更多
关键词 家蚕 自身免疫 丝氨酸蛋白酶抑制剂 酚氧化酶原 抗菌肽 TOLL通路
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旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用 认领
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作者 杨慧娟 李徽徽 +9 位作者 庞雪蕊 高世芳 梁金宝 郑欣 李丁茹 王雨航 于雪琴 钱雪倩 杨小迪 陈卫东 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期361-366,共6页
目的探讨旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsadSPI)对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用。方法 BALB/c雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、TsadSPI治疗组,每组6只,共18只。模型组和TsadSPI治疗组小鼠采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建脓毒症... 目的探讨旋毛虫重组成虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsadSPI)对小鼠脓毒症急性肾损伤的保护作用。方法 BALB/c雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、TsadSPI治疗组,每组6只,共18只。模型组和TsadSPI治疗组小鼠采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建脓毒症急性肾损伤模型,假手术组小鼠剖腹探查,不结扎、不穿孔盲肠。术后30 min,假手术组和模型组小鼠腹腔注射100μL PBS溶液,TsadSPI治疗组小鼠腹腔注射100μL含有2μg TsadSPI蛋白的PBS溶液。造模后12 h,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平以评价肝肾功能,HE染色观察小鼠肾脏结构改变,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10、转化生长因子(TGF)-β水平,采用免疫组化染色评估肾脏组织中髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达水平。结果术后12 h,3组小鼠血清ALT(F=41.031,P <0.001)、AST(F=54.757,P <0.001)、Cr(F=24.142,P <0.001)和BUN水平(F=214.849,P <0.001)差异均有统计学意义,模型组小鼠ALT、AST、Cr和BUN水平均显著高于假手术组(P <0.001),而TsadSPI治疗组小鼠ALT、AST、Cr和BUN水平均显著低于模型组(P <0.001)。HE染色结果显示,小鼠CLP术后肾脏损伤严重,TsadSPI治疗后损伤明显缓解。ELISA检测结果表明,3组小鼠血清TNF-α(F=47.502,P <0.001)和IL-6水平(F=222.061,P <0.001)差异均有统计学意义,TsadSPI治疗组小鼠TNF-α、IL-6水平较模型组显著下降(P <0.001);3组小鼠血清IL-10(F=16.227,P <0.001)和TGF-β水平(F=52.092,P <0.001)差异均有统计学意义,TsadSPI治疗组小鼠血清IL-10、TGF-β水平较模型组均显著升高(P <0.001)。免疫组化染色结果表明,模型组小鼠肾脏组织内MyD88表达水平及NF-κB p65核阳性率显著高于TsadSPI治疗组。结论TsadSPI可减少小鼠肾脏组织内MyD88表达及NF-κB p65核阳性率,进而上调� 展开更多
关键词 旋毛虫 丝氨酸蛋白酶抑制剂 脓毒症 急性肾损伤 髓样分化因子88 核因子-κB
冈田绕眼果蝇丝氨酸蛋白酶抑制蛋白生物信息学分析 认领
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作者 黄琳 王金仙 +3 位作者 廖德君 贺莉芳 郑明辉 刘晖 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第10期1165-1170,共6页
目的运用生物信息学方法预测分析冈田绕眼果蝇丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,Serpin)的结构与功能。方法基于冈田绕眼果蝇转录组数据分析,筛选出高差异表达的Serpin基因;利用在线软件TMHMM、ProtScale、Signal分别预... 目的运用生物信息学方法预测分析冈田绕眼果蝇丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,Serpin)的结构与功能。方法基于冈田绕眼果蝇转录组数据分析,筛选出高差异表达的Serpin基因;利用在线软件TMHMM、ProtScale、Signal分别预测Serpin跨膜结构域、亲/疏水性、信号肽;运用NetPhos、SOPMA、SWISS-MODEL等工具预测Serpin潜在的磷酸化位点以及二、三级结构;利用MEGA5.0软件构建其系统进化树,通过STRING数据库对其互作蛋白网络进行预测,利用KEGG数据库对Serpin进行相关通路预测分析。结果从冈田绕眼果蝇转录组数据库中筛选出1条具有完整编码区的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白序列,其基因全长1940 bp,开放阅读框为1344 bp,编码448个氨基酸;预测该基因编码蛋白相对分子质量约为49.28×10^5,为分泌蛋白;无信号肽,含有跨膜结构域,蛋白局部亲水性好,有潜在的磷酸化位点;二级结构分析显示,该蛋白无规则卷曲所占比例较高,为36.52%,三级结构所建模型准确可靠;系统进化分析显示,冈田绕眼果蝇Serpin与拟暗果蝇(Drosophila pseudoobscura)Serpin同源性100%,与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)Serpin同源性为73.8%,表明与上述果蝇亲缘关系较近。STRING数据库中鉴定出8种蛋白与Serpin具有相互作用,KEGG数据库显示13条与Serpin相关的信号通路。结论从冈田绕眼果蝇转录组数据库中筛选出1条丝氨酸蛋白酶抑制蛋白基因,生物信息学分析其编码蛋白为分泌蛋白,含有潜在的磷酸化位点,为该蛋白的生物学功能研究及冈田绕眼果蝇的防治研究奠定了基础。 展开更多
关键词 冈田绕眼果蝇 丝氨酸蛋白酶抑制蛋白 生物信息学
家族血栓与抗凝血酶Ⅲrs2227589 突变研究 认领
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作者 王海平 张素平 +3 位作者 阙敢波 张奕平 刘全芳 张洪彬 《中国卫生标准管理》 2019年第12期119-122,共4页
目的对1 例家族性血栓患者及其家系成员进行AT 基因突变检测。方法采用发色底物法检测先证者及其家系成员血浆AT 活性,采用PCR 法对先证者及其家系成员AT 基因的7 个外显子及其侧翼内含子序列进行扩增,PCR 产物纯化后直接测序检测基因... 目的对1 例家族性血栓患者及其家系成员进行AT 基因突变检测。方法采用发色底物法检测先证者及其家系成员血浆AT 活性,采用PCR 法对先证者及其家系成员AT 基因的7 个外显子及其侧翼内含子序列进行扩增,PCR 产物纯化后直接测序检测基因突变。结果全基因组测序显示,包括先证者在内共计8 位个体存在SERPINC1rs2227589 位点基因突变。其中,除先证者以外,确诊的反复VTE 成员(Ⅱ-1、Ⅲ-1)均是SERPINC1 rs2227589 位点突变携带者。结论考虑SERPINC1 rs2227589 位点是该家族血栓高发的易感因素。 展开更多
关键词 静脉血栓 家族血栓 抗凝血酶 丝氨酸蛋白酶抑制剂 基因突变 rs2227589
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Trevo支架取栓对缺血性脑卒中患者血清Vaspin、NSE、血液流变学及认知功能的影响 认领 被引量:3
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作者 左书浩 宋春旺 +2 位作者 朱习会 赵建飞 田军 《疑难病杂志》 CAS 2019年第10期986-990,共5页
目的观察Trevo支架取栓对缺血性脑卒中患者的疗效及对血清丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血液流变学、认知功能的影响。方法 2015年9月-2018年8月河北医科大学附属人民医院(石家庄市第一医院)神经外科收治急... 目的观察Trevo支架取栓对缺血性脑卒中患者的疗效及对血清丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血液流变学、认知功能的影响。方法 2015年9月-2018年8月河北医科大学附属人民医院(石家庄市第一医院)神经外科收治急性缺血性脑卒中患者116例,按随机数字表法分为2组,每组58例。对照组采用人组织型纤溶酶原激活剂进行溶栓治疗,观察组采用Trevo支架取栓治疗。比较2组治疗前及治疗后24 h、72 h血清Vaspin、NSE水平、MoCA评分、NIHSS评分、血液流变学变化。结果与治疗前比较,治疗后24 h、72 h,2组血清Vaspin、MoCA评分均升高,且观察组优于对照组(t/P=2.378/0.019、2.693/0.008,8.321/<0.001、7.699/<0.001);治疗72 h,2组血浆黏度、全血黏度切变率、纤维蛋白原、NIHSS评分均降低,且观察优于对照组(t/P=3.210/0.002、3.106/0.002、3.185/0.002、5.483/<0.001);2组治疗后24 h血清NSE均升高,治疗后72 h血清NSE均降低,观察组治疗后24 h、72 h血清NSE均低于对照组(t/P=3.910/<0.001、4.659/<0.001);观察组预后良好率89.66%高于对照组70.69%(χ^2/P=6.562/0.011)。结论 Trevo支架取栓可提高缺血性脑卒中患者血清Vaspin水平,降低NSE水平,改善神经缺损程度、血液流变学及认知功能,临床疗效满意,不良反应少,具有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 Trevo支架 缺血性脑卒中 丝氨酸蛋白酶抑制剂 神经元特异性烯醇化酶 神经缺损 血液流变学 认知功能
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镰形扇头蜱卵巢中丝氨酸蛋白酶抑制分子群的克隆和生物信息学分析 认领
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作者 许正茂 周勇志 +4 位作者 曹杰 张厚双 龚海燕 巴音查汗 周金林 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期55-62,共8页
丝氨酸蛋白酶抑制分子(serine protease inhibitor,Serpin)参与多种生物学过程,对蜱的吸血发育、生殖产卵和先天免疫系统反应等具有重要作用,在蜱体内以多分子形式存在。为了研究蜱生殖相关的Serpin分子群,本研究通过构建镰形扇头蜱(Rhi... 丝氨酸蛋白酶抑制分子(serine protease inhibitor,Serpin)参与多种生物学过程,对蜱的吸血发育、生殖产卵和先天免疫系统反应等具有重要作用,在蜱体内以多分子形式存在。为了研究蜱生殖相关的Serpin分子群,本研究通过构建镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides)卵巢转录组测序数据库,发现并克隆了10条Serpin家族基因(RhS),其中3条为分泌型Serpin,6条为细胞内Serpin和1条亲缘关系较远的Serpin。本研究通过生物信息学方法分析其理化性质、遗传进化关系,预测其结构和功能,为镰形扇头蜱Serpin分子群的功能解析和应用研究提供了重要基础。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制分子 镰形扇头蜱 克隆 生物信息学
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SerpinD1的研究进展 认领
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作者 王心 金海 庹必光 《医学综述》 2019年第13期2548-2551,共4页
丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)超家族成员在多种生物体的基因家族中存在,其参与了机体多种生命活动的调节。SerpinD1是其中的一员,与多种疾病的发生发展具有相关性,如代谢性疾病、血管性疾病和肿瘤等;SerpinD1随表达部位的不同而发挥不同... 丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)超家族成员在多种生物体的基因家族中存在,其参与了机体多种生命活动的调节。SerpinD1是其中的一员,与多种疾病的发生发展具有相关性,如代谢性疾病、血管性疾病和肿瘤等;SerpinD1随表达部位的不同而发挥不同的生物学作用,且对于疾病的诊断及治疗也具有一定的指导意义。未来,进一步对SerpinD1介导治疗疾病的机制和疗效进行深入探究,可能为疾病的诊疗提供新方向,从而最大限度地缓解甚至治愈多种疾病。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂 SerpinD1 肿瘤 凝血系统
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重组蛋白ApSerpin-FA72的包涵体复性及活性研究 认领
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作者 贾洋洋 张蕊 +1 位作者 刘阳 刘忠渊 《生物技术》 CAS 2019年第5期456-462,469共8页
[目的]原核表达及制备重组光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂(Ap Serpin-FA72),探索包涵体最优复性条件与最适酶反应条件。[方法]采用超声破碎获得大量包涵体,通过包涵体的洗涤、包涵体的溶解方法对包涵体进行纯化,获得高纯度的包涵体进行复... [目的]原核表达及制备重组光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂(Ap Serpin-FA72),探索包涵体最优复性条件与最适酶反应条件。[方法]采用超声破碎获得大量包涵体,通过包涵体的洗涤、包涵体的溶解方法对包涵体进行纯化,获得高纯度的包涵体进行复性液成分与复性方法的摸索。测定Trx A-Ap Serpin-FA72对胰蛋白酶的IC50、最适反应p H和最适反应温度。[结果]在32℃、180 r/min、0. 4 mmol/L IPTG浓度下以沉淀形式表达大量蛋白,通过包涵体复性在含有L-精氨酸复性液中获得有生物活性的Trx A-Ap Serpin-FA72,对胰蛋白酶的IC50为0. 48μmol/L,p H在7~9,温度在60℃时有较高的抑制活性。[结论]L-精氨酸是复性液中重要的组成部分,复性的重组蛋白Trx A-Ap SerpinFA72对胰蛋白酶有较强的抑制能力,是一种热稳定较好的弱碱性胰蛋白酶抑制剂。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂 复性 包涵体 活性检测
冈田绕眼果蝇丝氨酸蛋白酶抑制蛋白基因的克隆及组织表达水平 认领 被引量:2
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作者 黄琳 贺莉芳 +4 位作者 吕思颖 尚战阳 马元芬 刘晖 郑明辉 《医学动物防制》 2019年第8期715-718,721共5页
目的筛选并鉴定冈田绕眼果蝇转录组中的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,serpin)基因,分析其基因结构及在不同发育时期的表达水平。方法利用PCR技术克隆冈田绕眼果蝇serpin基因,对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息... 目的筛选并鉴定冈田绕眼果蝇转录组中的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,serpin)基因,分析其基因结构及在不同发育时期的表达水平。方法利用PCR技术克隆冈田绕眼果蝇serpin基因,对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析;利用MEGA 7. 0软件对获得的serpin基因进行系统进化树分析;利用HMMTOP version2. 0和TMHMM server version 2. 0软件预测serpin基因的跨膜结构域;利用RT-q PCR检测冈田绕眼果蝇几个不同发育时期(卵、蛆、蛹、雄蝇和雌蝇)中serpin基因表达水平。结果从冈田绕眼果蝇中克隆出serpin基因,开放阅读框全长1 323 bp,编码440个氨基酸,冈田绕眼果蝇serpin基因与其他果蝇serpin基因的氨基酸序列一致性最高为76%,serpin基因序列的系统进化分析表明冈田绕眼果蝇与Drosophila arizonae的进化关系最接近。冈田绕眼果蝇serpin存在跨膜结构,跨膜螺旋区的位置是第21~43位氨基酸。冈田绕眼果蝇serpin基因在卵、蛆、蛹、雄蝇、雌蝇等不同发育阶段中表达量不同,其中卵的表达量最高。结论成功克隆出冈田绕眼果蝇serpin基因序列,其编码蛋白主要在卵、蛆和雄蝇表达量高,为进一步研究冈田绕眼果蝇serpin基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 冈田绕眼果蝇 丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白 组织特异性
非酒精性脂肪性肝病患者血清chemerin、Vaspin、TXNIP水平研究及其相关性分析 认领 被引量:1
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作者 闫丽丽 吕骥 贾红玉 《贵州医药》 CAS 2019年第3期364-366,共3页
目的探讨非酒精性脂肪性肝病患者血清趋化素(chemerin)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)、硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)水平及其相关性。方法将86例非酒精性脂肪性肝病患者作为观察组,并取同期来院检查的56例健康人作为对照组,比较两组受试... 目的探讨非酒精性脂肪性肝病患者血清趋化素(chemerin)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)、硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)水平及其相关性。方法将86例非酒精性脂肪性肝病患者作为观察组,并取同期来院检查的56例健康人作为对照组,比较两组受试者的血清chemerin、vaspin、TXNIP、炎症因子以及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平变化,分析血清chemerin、vaspin、TXNIP水平与血清炎症因子以及HOMA-IR之间的相关性。结果观察组患者的血清chemerin、vaspin、TXNIP、TNF-α、CRP以及HOMA-IR水平均明显高于对照组(P<0.05)。NAFLD患者血清chemerin、vaspin、TXNIP水平与血清TNF-α、CRP以及HOMA-IR水平均呈现正相关(P<0.05)。结论非酒精性脂肪性肝病患者血清chemerin、vaspin、TXNIP水平显著高于正常健康人,且与血清TNF-α、CRP以及HOMA-IR水平均呈现正相关,具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性肝 趋化素 丝氨酸蛋白酶抑制剂 硫氧还蛋白结合蛋白 相关性
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OSA患者内脏脂肪因子Vaspin、Chemerin、Omentin表达与胰岛素抵抗相关性研究 认领
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作者 汤宇飞 周璇 +1 位作者 周燕 李无双 《世界最新医学信息文摘(电子版)》 2019年第26期10-11,14共3页
目的观察阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患者血清Vaspin、Chemerin、Omentin水平变化及与OSA胰岛素抵抗的关系,探讨三种脂肪因子在OSA发病机制中的作用。方法经多导睡眠监测检查,根据病情严重程度将受试对象分三组:健康对照组30例(AHI <5次... 目的观察阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患者血清Vaspin、Chemerin、Omentin水平变化及与OSA胰岛素抵抗的关系,探讨三种脂肪因子在OSA发病机制中的作用。方法经多导睡眠监测检查,根据病情严重程度将受试对象分三组:健康对照组30例(AHI <5次/小时)、轻中度组(AHI 5-30次/小时)32例、重度组(AHI>30次/小时)33例;测定所有受试者血脂、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBS)及血清Vaspin、Chemerin、Omentin水平,记录体重指数、腰围、颈围、血压。结果轻中度组、重度组血清Vaspin、Chemerin表达高于对照组(P<0.05),重度组血清Vaspin、Chemerin表达高于轻中度组(P<0.05);轻中度组、重度组血清Omentin表达低于对照组(P<0.05),重度组血清Omentin表达低于轻中度组(P<0.05)。相关分析结果表明:Vaspin水平与Chemerin、腰围、颈围、BMI、AHI、HOMA-IR、TG、TC、LDL呈正相关(r分别为0.553、0.584、0.739、0.697、0.496、0.415、0.506、0.475、0.421,P均<0.05),与Omentin、LSao2、HDL呈负相关(r分别为-0.603、-0.482、-0.572,P均<0.05);Chemerin水平与颈围、BMI、AHI、HOMA-IR、TG、TC、呈正相关(r分别为0.487、0.602、0.553、0.474、0.433、0.429,P均<0.05),与Omentin、LSao2、HDL呈负相关(r分别为-0.579、-0.518、-0.371,P均<0.05);Omentin与颈围、BMI、AHI、FBS、HOMA-IR、ESS、TG、呈负相关(r分别为-0.528、-0.541、-0.617、-0.412、-0.486、-0.467、-0.517,P均<0.05),与LSao2呈正相关(r为0.603,P<0.05)。逐步回归分析表明,颈围、BMI、AHI、HDL、DBP是血清vaspin水平的影响因素(β分别为0.07、0.103、0.009、-0.682、-0.009,P均<0.05);BMI、AHI是血清chemerin水平的影响因素(β分别为5.422、0.539,P均<0.05);AHI、BMI、TG、ESS评分是血清Omentin水平的影响因素(β分别为-0.159、-1.084、-5.815、-0.255,P均<0.05)。FINS、FBS、BMI、AHI是HOMA-IR的影响因素(β分别为0.228、0.746、0.017、0.004,P均<0.05)。结论 OSA患者血清Vaspin、Chemerin水平升高,血清Omenti 展开更多
关键词 阻塞性睡眠呼吸暂停 内脏脂肪因子 丝氨酸蛋白酶抑制剂 趋化素 网膜素 胰岛素抵抗
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丝氨酸蛋白酶抑制剂在肿瘤细胞迁移中的作用 认领 被引量:3
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作者 魏玲 程小艳 +4 位作者 李宝明 汪雨 高丽娟 王成彬 伦永志 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1518-1523,共6页
肿瘤细胞的转移(Migration)与侵袭(Invasion)是恶性肿瘤扩散的关键步骤,在这一过程中,一种丝氨酸蛋白酶:尿激酶型纤溶酶原激活因子(uP A)能够对基质金属蛋白酶(MMPs)进行剪切进而诱导其活化。活化的MMPs能够水解细胞外基质(ECM)实现肿... 肿瘤细胞的转移(Migration)与侵袭(Invasion)是恶性肿瘤扩散的关键步骤,在这一过程中,一种丝氨酸蛋白酶:尿激酶型纤溶酶原激活因子(uP A)能够对基质金属蛋白酶(MMPs)进行剪切进而诱导其活化。活化的MMPs能够水解细胞外基质(ECM)实现肿瘤细胞的转移与侵袭作用。uP A是肿瘤细胞转移与侵袭的调控枢纽,发现和筛选其抑制剂在恶性肿瘤诊疗,特别是预防恶性肿瘤转移与复发中具有重要意义。人体内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpins具有明确的抑制恶性肿瘤相关丝氨酸蛋白酶的活性,是潜在的抗肿瘤治疗药物。为更好地研究与开发Serpins相关药物,本研究系统总结了人体内与恶性肿瘤转移及侵袭相关的7种Serpins的研究现状,并对最新的研究进展进行介绍。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂 肿瘤细胞 迁移与侵袭
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