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侵染红肉火龙果的蟹爪兰X病毒贵州分离物基因组分析
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作者 郑乾明 王小柯 +1 位作者 王壮 马玉华 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期219-225,共7页
通过高通量测序和RT-PCR扩增,克隆并分析蟹爪兰X病毒(Zygocactus virus X,ZyVX)贵州分离物ZyVX-GZ基因组序列。对表现病毒病症状的红肉火龙果植株进行高通量测序,获得4条ZyVX相关contig。RT-PCR扩增并拼接获得ZyVX-GZ基因组,全长为6 567... 通过高通量测序和RT-PCR扩增,克隆并分析蟹爪兰X病毒(Zygocactus virus X,ZyVX)贵州分离物ZyVX-GZ基因组序列。对表现病毒病症状的红肉火龙果植株进行高通量测序,获得4条ZyVX相关contig。RT-PCR扩增并拼接获得ZyVX-GZ基因组,全长为6 567 nt,5’-UTR和3’-UTR分别为60nt和70nt。含有5个ORF,分别编码复制酶蛋白、TGB1、TGB2、TGB3蛋白和外壳蛋白。ZyVX-GZ与P39和B1分离物基因组序列一致性均为91%。TGB1-3、外壳蛋白基因与大多数分离物核苷酸和推导的氨基酸序列一致性分别为95%~99%和96%~100%;复制酶基因的核苷酸和推导的氨基酸序列一致性分别为80%~89%和92%~97%。系统进化分析表明,ZyVX群体的遗传分化与寄主种类、地理分布不存在相关性。本研究结果丰富了ZyVX群体的基因组序列信息,为ZyVX的监测和防控提供了基础。 展开更多
关键词 复制酶 外壳蛋白 核苷酸 序列一致性
突变和重组可克服异源复制酶在病毒复制中的功能缺陷 预览
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作者 卢金达 廖乾生 杜志游 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期445-449,共5页
异源复制酶的组合无法有效地支持重组病毒的复制是雀麦花叶病毒科病毒存在的普遍现象。利用雀麦花叶病毒科黄瓜花叶病毒属的典型成员黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和番茄不孕病毒(tomato aspermy virus,TAV)作为研究对象... 异源复制酶的组合无法有效地支持重组病毒的复制是雀麦花叶病毒科病毒存在的普遍现象。利用雀麦花叶病毒科黄瓜花叶病毒属的典型成员黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和番茄不孕病毒(tomato aspermy virus,TAV)作为研究对象,分析2个复制酶的异源组合对重组病毒复制的影响。通过农杆菌浸润,将CMV RNA1(C1)和TAV RNA2(T2)进行异源组合,并将此与CMV RNA3(C3)或TAV RNA3(T3)混合侵染本生烟。接种后10 d,C1T2C3和C1T2T3接种的植物没有出现明显的病毒症状,通过Northern杂交,在系统叶中仅检测到微弱的病毒特异条带,这说明C1T2的异源组合无法高效地支持病毒的复制和侵染。当C1T2C3转接3代之后,接种的本氏烟植株表现明显的病毒症状,且病毒RNA的积累水平显著增加。病毒基因组RNA的测序结果显示,C1第1 390位、T2第1 695位发生点突变,而且C3的3'末端融合了T2的完整3'UTR序列。以上结果表明,通过病毒的突变或/和重组可有效提高异源复制酶对重组病毒的复制效率。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 番茄不孕病毒 复制酶 突变 重组
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中国小麦花叶病毒(CWMV)复制酶基因在病株体内的表达分析
3
作者 张芬 蔡年俊 +3 位作者 羊健 李静 陈剑平 张恒木 《植物病理学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期640-646,共7页
中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus, CWMV)是引起我国小麦花叶病的重要病原之一,其基因组由2条单链正义RNA片段(RNA1-2)组成。本研究根据发表的基因组序列设计特异性引物,扩增了CWMV复制酶基因的部分片段(nt102~1101)... 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus, CWMV)是引起我国小麦花叶病的重要病原之一,其基因组由2条单链正义RNA片段(RNA1-2)组成。本研究根据发表的基因组序列设计特异性引物,扩增了CWMV复制酶基因的部分片段(nt102~1101),并克隆至原核表达载体pGEX-6P1,然后导入大肠杆菌E. coli BL21(DE3)pLysS中诱导表达。重组的复制酶蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。Western-blot分析表明该抗体具有高度的特异性,能用于病株体内CWMV复制酶蛋白的检测。检测分析显示在病株体内,CWMV基因组RNA1可直接充当其复制酶基因的mRNA;在感染的细胞中,其复制酶组分主要是RNA1 ORF1编码的蛋白,分子量约153 kDa,且特异性地定位于膜结构上。 展开更多
关键词 中国小麦花叶病毒 多克隆抗体 复制酶
转基因小麦抗大麦黄矮病毒研究进展 预览 被引量:1
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作者 李永丽 史洪中 +1 位作者 陈利军 周洲 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第21期 5451-5453,共3页
转基因技术为培育抗黄矮病小麦提供了一条有力的途径,综述国内外在小麦抗BYDV的转基因研究进展。探讨目前主要基于BYDV自身的外壳蛋白基因、复制酶基因、运动蛋白基因以及蚜虫传毒相关蛋白基因进行的抗BYDV小麦转基因研究现状和成果.... 转基因技术为培育抗黄矮病小麦提供了一条有力的途径,综述国内外在小麦抗BYDV的转基因研究进展。探讨目前主要基于BYDV自身的外壳蛋白基因、复制酶基因、运动蛋白基因以及蚜虫传毒相关蛋白基因进行的抗BYDV小麦转基因研究现状和成果.并对未来培育抗黄矮病小麦研究进行展望。 展开更多
关键词 转基因小麦 大麦黄矮病毒 外壳蛋白 复制酶 运动蛋白 传毒蛋白
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基于α-病毒复制酶的基因疫苗对人黑色素瘤的免疫作用 预览
5
作者 倪兵 姜曼 +4 位作者 黎万玲 毛丽伟 何仰东 肖宇 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第14期 1432-1435,共4页
目的研究基于α-病毒复制酶的人黑色素瘤基因疫苗免疫学作用.方法建立及鉴定人/鼠嵌合模型(trimera),将基于α-病毒复制酶的mage-3基因疫苗免疫动物,检测动物体内特异抗体滴度;用标准4 h51Cr释放实验检测动物体内特异CTL活性.结果FACS... 目的研究基于α-病毒复制酶的人黑色素瘤基因疫苗免疫学作用.方法建立及鉴定人/鼠嵌合模型(trimera),将基于α-病毒复制酶的mage-3基因疫苗免疫动物,检测动物体内特异抗体滴度;用标准4 h51Cr释放实验检测动物体内特异CTL活性.结果FACS分析显示,trimera小鼠腹腔细胞中人白细胞占总细胞的88.84%,脾脏细胞中人白细胞的比例占57%,同国外文献报道一致.基于α-病毒复制酶的重组基因疫苗mage-3/pSMART2a对trimera小鼠免疫后,小鼠腹腔细胞的CTL在效靶比为100:l时杀伤率达到70%左右,此时的对照组mage-3/pCI-neo组最大杀伤率为40%左右.ELISA结果显示,重组基因疫苗mage-3/pSMART2a组产生的mage-3抗原特异性抗体效价达到1:512,mage-3/pCI-neo组为1:256.结论成功建立了人/鼠嵌合模型,并在动物体内激发出针对人黑色素瘤基因疫苗的初次免疫应答. 展开更多
关键词 α-病毒 复制酶 基因疫苗 trimera 人黑色素瘤
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Sequence Analysis and Structural Prediction of the Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus nsp5
6
作者 Jia-HaiLU Ding-MeiZHANG +7 位作者 Guo-LingWANG Zhong-MinGUO JuanLI Bing-YanTAN Li-PingOU-YANG Wen-HuaLING Xin-BingYU Nan-ShanZHONG 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期 473-479,共7页
The non-structural proteins (nsp or replicase proteins) of coronaviruses are relatively conserved and can be effective targets for drugs. Few studies have been conducted into the function of the severe acute respirato... The non-structural proteins (nsp or replicase proteins) of coronaviruses are relatively conserved and can be effective targets for drugs. Few studies have been conducted into the function of the severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) nsp5. In this study, bioinformatics methods were employed to predict the secondary structure and construct 3-D models of the SARS-CoV GD strain nsp5. Sequencing and sequential comparison was performed to analyze the mutation trend of the polymerase nsp5 gene during the epidemic process using a nucleotide-nucleotide basic local alignment search tool (BLASTN) and a protein-protein basic local alignment search tool (BLASTP). The results indicated that the nsp5 gene was steady during the epidemic process and the protein was homologous with other coronavirus nsp5 proteins. The protein encoded by the nsp5 gene was expressed in COS-7 cells and analyzed by sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). This study provided the foundation for further exploration of the protein's biological function, and contributed to the search for anti-SARS-CoV drugs. 展开更多
关键词 SARS 严重急性呼吸综合症 冠状病毒 非结构蛋白 复制酶 次级结构 3-D结构 基因序列分析
SARS冠状病毒非结构蛋白Nsp的原核表达 预览
7
作者 刘家森 陈淑红 +3 位作者 刘怀然 孟庆文 庞海 孔宪刚 《中国病毒学》 CSCD 2005年第5期 552-554,共3页
严重急性呼吸综合征病毒,即SARS冠状病毒((Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV),为具有囊膜的单股正链RNA病毒,基因组约长29~31kb.基因组从5′到3′端依次编码复制酶蛋白(Rep)、刺突蛋白(S)、囊膜蛋白(E)、膜蛋白... 严重急性呼吸综合征病毒,即SARS冠状病毒((Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV),为具有囊膜的单股正链RNA病毒,基因组约长29~31kb.基因组从5′到3′端依次编码复制酶蛋白(Rep)、刺突蛋白(S)、囊膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)以及其他一些辅助性蛋白[1]. 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 复制酶 表达
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N-terminal of L protein of vesicular stomatitis virus contains a new signal sequence
8
作者 NIEYuchun KEYeyan WANGZai YUXiang DENGHongkui DINGMingxiao 《中国科学通报:英文版》 SCIE CAS 2003年第13期1352-1357,共6页
The L protein (241 kD) of vesicular stomatitis virus (VSV) is the mostimportant subunit of the replication complex. The existence of specific localization signal in the L protein was investigated by making recombinant... The L protein (241 kD) of vesicular stomatitis virus (VSV) is the mostimportant subunit of the replication complex. The existence of specific localization signal in the L protein was investigated by making recombinant constructs expressing truncated mutants of the L protein fused to green fluorescent protein(GFP) in transient transfection assays. The chimeric genes encoding varied N-terminal of L and GFP gene were put under the control of T7 promoter or CMV promoter. The fusion proteins were transiently expressed in BHK-21, COS-7, CHO or Hep G2 cells. When more than 120 residues were deleted or only 96 residues were kepton the N-terminal, the fusion proteins were shown to be distributed throughout the cells, cytoplasm and nucleus under the confocal microscope. However, other chimeric proteins with 120 or more amino acids were dotted and distributed in theperinuclear regions. And the fusion protein with 96-120 aa has the similar distribution. A thirteen-residue peptide QGYSFLHEVDKEA (108-120) was identified as localization signal, whose function would be absolutely distributed with the deficiency of D or V. Our results show that there is an independent localizing signal in N-terminal domain of L protein of VSV and this functional signal is conserved in different cell lines. 展开更多
关键词 L蛋白质 水泡性口膜炎病毒 VSV 基因编码 绿色荧光蛋白质
烟草花叶病毒复制酶介导抗性的研究进展 预览
9
作者 邵碧英 吴祖建 +1 位作者 林奇英 谢联辉 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期 416-418,共3页
在抗病毒植物基因工程中,利用病毒的复制酶基因是一种很有前途的方法.本文对烟草花叶病毒(TMV)的基因组结构及其编码的蛋白的功能作了简介,同时较详细地阐述了由TMV复制酶的通读部分、全长复制酶以及突变或缺失的复制酶介导的对病毒抗... 在抗病毒植物基因工程中,利用病毒的复制酶基因是一种很有前途的方法.本文对烟草花叶病毒(TMV)的基因组结构及其编码的蛋白的功能作了简介,同时较详细地阐述了由TMV复制酶的通读部分、全长复制酶以及突变或缺失的复制酶介导的对病毒抗性的研究进展. 展开更多
关键词 抗病毒植物基因工程 烟草花叶病毒 复制酶 介导 抗性
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缺失GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的克隆及植物表达载体构建 预览 被引量:1
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作者 温瑞 郑重 周雪平 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期 531-534,共4页
以CMV亚组1株系Fny-CMV RNA2基因组为模板,根据其序列设计引物进行PCR扩增,得到2.5 kb的全长复制酶基因扩增产物.对此产物进行纯化,并用NcoI和BspHI进行双酶切,得到3个片段,将不含有GDD保守区的2个片段用T4 DNA连接酶连接,并对连接产物... 以CMV亚组1株系Fny-CMV RNA2基因组为模板,根据其序列设计引物进行PCR扩增,得到2.5 kb的全长复制酶基因扩增产物.对此产物进行纯化,并用NcoI和BspHI进行双酶切,得到3个片段,将不含有GDD保守区的2个片段用T4 DNA连接酶连接,并对连接产物进行PCR扩增,得到2.2kb左右缺失GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的扩增产物.将其克隆到pGEM-T Easy Vector上,进行序列测定,结果表明GDD保守区确已缺失.该缺失不导致开放阅读框架的移码将缺失GID保守区的基因定向克隆到植物表达载体pBI121中,并经三亲交配导入根癌农杆菌中,经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入. 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 复制酶 植物表达载体 基因克隆 GDD保守区缺失
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Effects of mutated replicase and movement protein genes on attenuation of tobacco mosaic virus
11
作者 杨恭 邱并生 +1 位作者 魏军亚 刘广超 《中国科学:生命科学英文版》 SCIE CAS 2001年第6期628-636,共9页
Our previous reports showed that one opal mutation (UGA) and one ochre mutation (UAA) respectively located in the replicase and movement protein (MP) genes of the attenuated tomato mosaic virus K(ToMV-K) contribute to... Our previous reports showed that one opal mutation (UGA) and one ochre mutation (UAA) respectively located in the replicase and movement protein (MP) genes of the attenuated tomato mosaic virus K(ToMV-K) contribute to the viral attenuation. To explore a wider application of this attenuation pattern to other plant viruses, we have constructed three mutants which respectively contain one opal mutation of the replicase gene and/or one ochre mutation of the MP using PCR-mediated site-directed mutagenesis from a virulent tobacco mosaic virus isolated from China (TMV-Cv). Plant infection performed by in vitro transcripts revealed that the MP truncated mutant TMV-Cvmp and the replicase-MP truncated mutant TMV-Cvrase-mp were infectious on both local lesion (Nicotiana tabacum cv. Xanthi NC) and systemic (N. tabacum cv. K326) host plants, while the replicase truncated mutant TMV-Cvrase was non-infectious. The K326 plant infected by TMV- Cvrease-mp displayed only a little mild mosaic. By electronic microscopy (EM), plant re-inoculation, RNA Dot-blot, RT-PCR and sequencing we demonstrated that the progeny viruses of TMV-Cvmp and TMV-Cvrease-mp shared similar morphological character with TMV-Cv, owned the abilities to infect, replicate and propagate in the assayed plants, and maintained the mutated sites during infection. These data showed that both the opal and the ochre mutations are able to cooperatively induce the attenuated phenotypes of TMV-Cvrase-mp on plants, indicating that the mutation pattern of ToMV-K could be used to attenuate other virulent plant viruses. 展开更多
链霉菌质粒pSGL1最小复制子序列测定及分析 预览 被引量:1
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作者 张华 洪斌 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期 327-332,共6页
质粒pSGL1(7.4kb)是从球孢链霉菌(Streptomycesglobisporus)中分离得到的一个高拷贝质粒,已证明其最小复制子位于Sau3AI酶切的2.0kb片段上,对该片段进行了亚克隆,测序后数据表明该... 质粒pSGL1(7.4kb)是从球孢链霉菌(Streptomycesglobisporus)中分离得到的一个高拷贝质粒,已证明其最小复制子位于Sau3AI酶切的2.0kb片段上,对该片段进行了亚克隆,测序后数据表明该片段是一个新序列,仅有一个开放阅读框架(ORFR)位于最小复制子中,推测其编码的蛋白质含量有滚环复制质粒复制酶的特定序列。 展开更多
关键词 质粒 最小复制子 滚环复制 序列分析 链霉菌
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马铃薯卷叶病毒复制酶基因3‘端克隆及序列分析 预览 被引量:4
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作者 梁成罡 哈斯阿古 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期 278-282,共5页
马铃薯卷叶病毒复制酶基因3端克隆及序列分析梁成罡哈斯阿古拉张鹤龄(内蒙古大学,呼和浩特市010021)关键词马铃薯卷叶病毒,复制酶,基因克隆,PCR马铃薯卷叶病毒(Potatoleafrolvirus,PLRV)属... 马铃薯卷叶病毒复制酶基因3端克隆及序列分析梁成罡哈斯阿古拉张鹤龄(内蒙古大学,呼和浩特市010021)关键词马铃薯卷叶病毒,复制酶,基因克隆,PCR马铃薯卷叶病毒(Potatoleafrolvirus,PLRV)属黄化病毒组(Luteovirus)... 展开更多
关键词 植物病毒 马铃薯卷叶病毒 复制酶 基因克隆
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基于复制酶基因序列的黄瓜绿斑驳花叶病毒系统进化及生物信息学分析 被引量:2
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作者 梁超琼 孟嫣 +2 位作者 罗来鑫 刘鹏飞 李健强 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期620-628,共9页
本研究对江苏、浙江、湖南和北京等四个地区的葫芦、西瓜、黄瓜、西葫芦和甜瓜上的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)129kD和57kD蛋白复制酶基因分别进行扩增、测序和序列分析。结果显示,供试CGMMV分离物... 本研究对江苏、浙江、湖南和北京等四个地区的葫芦、西瓜、黄瓜、西葫芦和甜瓜上的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)129kD和57kD蛋白复制酶基因分别进行扩增、测序和序列分析。结果显示,供试CGMMV分离物CGMMV-No.1、CGMMV-No.2、CGMMV-No.3、CGMMV-No.4和CGMMVNo.5的129kD和57kD蛋白复制酶基因序列相似性分别为99.64%和99.74%,其中CGMMV-No.1、CGMMVNo.3和CGMMV-No.4的相似性较高,三者的129kD和57kD蛋白复制酶基因序列相似性分别为99.95%和99.94%,而CGMMV-No.2的129kD和57kD蛋白复制酶基因序列与其余四个参比序列的相似性相对较低,分别为99.16%~99.27%和99.04%~99.18%;供试样品在基于129kD和57kD蛋白复制酶基因序列构建的NJ系统发育树中均被分为6个类群,CGMMV-No.1、CGMMV-No.3、CGMMV-No.4与GenBank上已报道的中国山东分离物(Accession No.KJ754195)聚为一支,CGMMV-No.5与中国辽宁分离物(Accession No.EF611826)聚为一支,而浙江的CGMMV-No.2西瓜分离物在129kD蛋白复制酶基因系统发育树中与韩国西瓜分离物(Accession No.AF417242)聚为一支,其在57kD蛋白复制酶基因系统发育树中独立成群。本研究中供试CGMMV分离物的129kD和57kD蛋白均无显著疏水性,也无高度卷曲螺旋部位,ProtParam预测显示仅CGMMV-No.4的129kD蛋白为稳定蛋白,其余均为不稳定蛋白,CGMMV-No.1、CGMMV-No.2、CGMMV-No.3和CGMMV-No.5的129kD蛋白分别有6个、6个、2个和4个可能的跨膜结构区域,CGMMV-No.2、CGMMV-No.4和CGMMV-No.5的57kD蛋白分别有13个、13个和5个可能的跨膜结构域,供试样品129kD蛋白的糖基化位点分别有2个、4个、4个、4个和4个,57kD蛋白的糖基化位点分别有2个、5个、2个、5个和2个,其129kD和57kD蛋白的紊乱区、球蛋白区、磷酸化位点以及B细胞抗原表位位点均存在差异。综合分析认为,供试CGMMV分离物复制酶基因序列相似性较高,种内稳定且保守,种间差异� 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 复制酶基因 系统进化树 生物信息学
pBIN438-CMV△Rep表达载体的构建及其在根癌农杆菌中的转化 预览
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作者 雷霄飞 杨学领 《安徽农学通报》 2015年第8期13-14,共2页
用PCR方法扩增黄瓜花叶病毒部分复制酶基因(CMV△Rep),连接到PUCm-T载体上构建成克隆载体PUCm-T-CMV△Rep。用BamHⅠ和SalⅠ分别对克隆载体PUCm-T-CMV△Rep和植物表达载体pBIN438进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4 DNA连接... 用PCR方法扩增黄瓜花叶病毒部分复制酶基因(CMV△Rep),连接到PUCm-T载体上构建成克隆载体PUCm-T-CMV△Rep。用BamHⅠ和SalⅠ分别对克隆载体PUCm-T-CMV△Rep和植物表达载体pBIN438进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4 DNA连接酶的作用下进行定向连接,构建成植物表达载体pBIN438-CMV△Rep。采用CaCl2冻融法将重组子导入根癌农杆菌LBA4404。经PCR和双酶切鉴定,表明重组质粒pBIN438-CMV△Rep已成功导入根癌农杆菌中。 展开更多
关键词 复制酶基因 载体构建 农杆菌 黄瓜花叶病毒
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抗TMV、CMV转基因烟草的初步选育 预览 被引量:1
16
作者 杨晓朱 林爵平 李华平 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期 128-130,共3页
将烟草花叶病毒复制酶54 KD蛋白基因构建到质粒pSSZ32.54K,导入根癌农杆菌EHA105株系,用农杆菌介导的叶盘法转化含CMV CP基因的纯合系烟草,获得了含CMV CP基因和TMV RepE基因的转基因烟草,以及只含TMV RepE基因的转基因烟草。以繁殖于... 将烟草花叶病毒复制酶54 KD蛋白基因构建到质粒pSSZ32.54K,导入根癌农杆菌EHA105株系,用农杆菌介导的叶盘法转化含CMV CP基因的纯合系烟草,获得了含CMV CP基因和TMV RepE基因的转基因烟草,以及只含TMV RepE基因的转基因烟草。以繁殖于新鲜普通烟叶片上的TMV为毒源,机械摩擦接种含双基因的烟草和只含CMV CP基因的烟草。接种15 d后,观察植株发病情况,发现转双基因的烟草无花叶症状出现,而对照植株(只含CMV CP基因)出现花叶症状。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病毒含量,发现转基因植株体内无病毒积累,而对照植株体内有病毒积累。因此,含RepE基因的烟草对TMV有一定抗性。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 复制酶基因 抗病毒 转基因烟草 农杆菌转化
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转PRSV复制酶基因番木瓜食品安全性的初步评价 预览 被引量:4
17
作者 阮小蕾 侯燕 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期 381-386,共6页
应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白... 应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白不是已知的致敏源。将复制酶基因进行原核表达,并纯化复性表达蛋白,再通过模拟胃肠液消化试验,结果发现纯化的变性蛋白与复性蛋白均能在15 s内降解,表明复制酶蛋白能在人的消化系统内降解,使人体发生过敏的可能性不大。通过液相萃取法,提取转基因与非转基因番木瓜中的一种内源毒物苄基异硫氰酯(benzyl isothiocyanate,BITC),将浓缩后的样品进行气相色谱分析,结果表明BITC的含量在转基因与非转基因番木瓜中差异不显著。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 复制酶基因 食品安全
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马铃薯Y病毒复制酶基因不同位置cDNA区段介导对PVY的不同抗性 被引量:5
18
作者 徐丽 宋云枝 +2 位作者 王文俊 朱常香 温孚江 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期227-233,共7页
为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)复制酶基因(nuclear inclusion b,NIb)不同位置的cDNA区段,反向插入双元载体pR... 为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)复制酶基因(nuclear inclusion b,NIb)不同位置的cDNA区段,反向插入双元载体pROKII中,构建了发夹RNA(hairpin RNA,hpR—NA)结构的植物表达载体。将构建的植物表达载体采用冻融法转入农杆菌LBA4404,叶盘法转化烟草NC89,获得转基因植株。攻毒试验表明:PVYNIb基因不同位置cDNA区段介导的对PVY的抗性存在显著差异;3’端1/2处和中间位置的序列可介导高水平的病毒抗性,抗性植株的比例在50%以上,而5‘端、5’端1/2处和3’端的序列介导的抗性效率较低,抗性植株的比例仅为10%~30%。Northern杂交显示:抗病植株中RNA的积累量明显低于同类型的感病植株,抗性与RNA积累量呈负相关;抗病转基因植株中有siRNA存在,表明病毒抗性是由RNA介导的。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 复制酶基因 RNA介导的病毒抗性
丙型肝炎病毒抑制剂的研究进展
19
作者 孙鹏(综述) 尹文 汪爱勤(审校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2010年第5期238-241,共4页
丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus,HCV)NS3/4A蛋白酶和NS5B聚合酶在HCV复制中起至关重要的作用。随着人们对HCVNS3/4A蛋白酶和NS5B聚合酶结构认识的加深,许多研究已将重点置于HCV抑制剂的研究。越来越多针对NS3/4A蛋白酶和NS5B聚... 丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus,HCV)NS3/4A蛋白酶和NS5B聚合酶在HCV复制中起至关重要的作用。随着人们对HCVNS3/4A蛋白酶和NS5B聚合酶结构认识的加深,许多研究已将重点置于HCV抑制剂的研究。越来越多针对NS3/4A蛋白酶和NS5B聚合酶的抑制剂正在被发现,一些抑制剂已经进入临床试验并取得可喜的疗效。此文就这两大类抑制剂的最新研究成果及临床试验最新进展作简要综述。 展开更多
关键词 肝炎病毒 丝氨酸内肽酶类 RNA复制酶 酶抑制剂
抗PRSV转基因番木瓜研究进展 预览 被引量:2
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作者 高艳梅 翟金玲 +1 位作者 徐远峰 黄惜 《安徽农学通报》 2009年第3期36-38,45共4页
番木瓜花叶环斑病毒(PRSV)严重影响着热带亚热带的重要水果番木瓜的生产,在物理和化学防治措施效果不佳的情况下,利用病原获得抗性防治PRSV的方法给番木瓜的生产带来一线生机。综述了近年来转基因番木瓜中所采用的PRSV病毒的几个基因... 番木瓜花叶环斑病毒(PRSV)严重影响着热带亚热带的重要水果番木瓜的生产,在物理和化学防治措施效果不佳的情况下,利用病原获得抗性防治PRSV的方法给番木瓜的生产带来一线生机。综述了近年来转基因番木瓜中所采用的PRSV病毒的几个基因及其优缺点。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 外壳蛋白 复制酶 运动蛋白 核酶
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