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一例手足裂胎儿的临床特征及病因学分析
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作者 李闯 吕远 +3 位作者 侯瑞 刘彩霞 李岭 李欢 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2020年第4期462-466,共5页
目的分析一例手足裂胎儿的临床特征以及基因组拷贝数变异(copy number variations,CNVs)的情况。方法收集孕期胎儿超声以及引产儿X线检查资料并进行总结。应用二代测序(next generation sequencing,NGS)检测引产儿的CNVs。用NGS及荧光... 目的分析一例手足裂胎儿的临床特征以及基因组拷贝数变异(copy number variations,CNVs)的情况。方法收集孕期胎儿超声以及引产儿X线检查资料并进行总结。应用二代测序(next generation sequencing,NGS)检测引产儿的CNVs。用NGS及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)对其亲代进行分析,用实时荧光定量PCR对胎儿染色体异常区域的基因表达量进行检测。结果超声及X线检查提示胎儿右手及双足均呈"V"形开裂。NGS检测提示胎儿染色体7q21.3区存在约0.36 Mb的缺失。NGS及FISH检测提示其双亲均未携带相同的变异。实时荧光定量PCR结果提示胎儿DYNC1I1基因存在杂合缺失,而SEM1、DLX5、DLX6基因的拷贝数则未见异常。结论胎儿手足裂畸形的致病原因为7q21.3区微缺失,后者为新发变异。 展开更多
关键词 手足裂畸形 二代测序技术 荧光原位杂交 染色体拷贝数变异 实时荧光定量PCR
CD44和RHAMM在胃肠肿瘤中的表达及其临床意义 预览
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作者 王建芳 康乐 宋红杰 《实用癌症杂志》 2020年第4期530-533,共4页
目的研究实时荧光定量PCR检测CD44和RHAMM在胃肠肿瘤中的表达及其临床意义。方法随机选取胃肠肿瘤患者95例,将肿瘤组织及其周边5cm以上的正常组织取出来,保存在液氮中。进行总RNA抽提与cDNA合成、逆转录-PCR、CD44、RHAMM GAPDH质粒制... 目的研究实时荧光定量PCR检测CD44和RHAMM在胃肠肿瘤中的表达及其临床意义。方法随机选取胃肠肿瘤患者95例,将肿瘤组织及其周边5cm以上的正常组织取出来,保存在液氮中。进行总RNA抽提与cDNA合成、逆转录-PCR、CD44、RHAMM GAPDH质粒制备、实时PCR。结果实时荧光定量PCR检测CD44、RHAMM在胃肠肿瘤组织中的表达均显著高于正常组织(P<0.05)。CD44和RHAMM在胃肠肿瘤的表达显著相关(P<0.05),其中肠道、有淋巴结转移CD44和RHAMM均呈显著的正相关关系(P<0.05),但胃部、无淋巴结转移CD44和RHAMM均无相关性(P>0.05)。结论实时荧光定量PCR检测CD44和RHAMM在胃肠肿瘤组织中的表达均高于正常组织,且具有相关性,能够对肿瘤淋巴结转移情况进行判定参考。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR CD44 RHAMM 胃肠肿瘤 表达 预后
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三氯生对雌性斑马鱼肝胰脏凋亡相关基因表达的影响 预览
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作者 刘旭昊 祖恩普 王凡 《广东海洋大学学报》 CAS 2020年第1期15-18,共4页
【目的】研究三氯生(TCS)对雌性硬骨鱼类肝胰脏损伤的相关分子机制。【方法】采用半静态水体接触染毒法,将雌性斑马鱼(Danio rerio)暴露于0、0.017、0.034、0.068 mg/L的TCS溶液42 d,采用普通PCR和实时荧光定量PCR技术测定雌性斑马鱼肝... 【目的】研究三氯生(TCS)对雌性硬骨鱼类肝胰脏损伤的相关分子机制。【方法】采用半静态水体接触染毒法,将雌性斑马鱼(Danio rerio)暴露于0、0.017、0.034、0.068 mg/L的TCS溶液42 d,采用普通PCR和实时荧光定量PCR技术测定雌性斑马鱼肝胰脏凋亡相关基因(Bcl-2、p53、MDM2、Bax)的表达情况。【结果】0.017~0.068 mg/L组的雌性斑马鱼肝胰脏Bcl-2、MDM2和Bax基因的表达极显著下调(P<0.01),p53基因的表达极显著上调(P<0.01)。【结论】0.017~0.068 mg/L的TCS显著影响雌性斑马鱼肝胰脏凋亡相关基因的表达,促进雌性斑马鱼肝胰脏细胞凋亡的发生。 展开更多
关键词 三氯生 斑马鱼 雌性斑马鱼 肝胰脏损伤 凋亡基因 实时荧光定量PCR
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样品保存液在猪口腔液检测中的应用 预览
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作者 柴伟东 《猪业科学》 2020年第2期90-92,共3页
猪口腔液作为血清、鼻腔拭子和肛拭子的替代品,已被用来检测和监测包括非洲猪瘟病毒在内的多种传染病。由于口腔液样品自身的复杂性,使得口腔液样品中的病原微生物容易降解,导致检测结果的不准确。试验的目的是分析动物DNA病毒(PRV)和RN... 猪口腔液作为血清、鼻腔拭子和肛拭子的替代品,已被用来检测和监测包括非洲猪瘟病毒在内的多种传染病。由于口腔液样品自身的复杂性,使得口腔液样品中的病原微生物容易降解,导致检测结果的不准确。试验的目的是分析动物DNA病毒(PRV)和RNA病毒(PRRSV)在口腔液样品中的储运条件对病原核酸检测结果的影响。将PRV和PRRSV与猪口腔液样品混合制备参考品,样品保存液A、B、C和生理盐水,在保存温度为4℃,25℃和40℃,保存0 d,3 d,7 d时分别提取各样品核酸,通过实时荧光定量PCR方法检测病毒样品量的变化。当用生理盐水作为样品保存液时,病毒的检出量下降;3种商业化的样品保存液在4℃条件下对病毒核酸都有保护作用,样品检出量优于其他温度条件。口腔液样品储运条件优选使用样品保存液,并在低温条件下储运最佳。 展开更多
关键词 猪口腔液 样品保存液 实时荧光定量PCR 样品储运
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酿酒酵母细胞壁可通过TLR2受体调控绵羊瘤胃上皮细胞表达SBD-1
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作者 田巧珍 金鑫 +3 位作者 张曼 张召议 王云鹤 杨银凤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期296-302,共7页
旨在研究酿酒酵母细胞壁对体外培养绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的影响及其调控途径,为揭示酿酒酵母细胞壁对机体免疫的调控机制提供理论依据。本研究将不同质量浓度的酿酒酵母细胞壁提取物(0,25,50,1... 旨在研究酿酒酵母细胞壁对体外培养绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的影响及其调控途径,为揭示酿酒酵母细胞壁对机体免疫的调控机制提供理论依据。本研究将不同质量浓度的酿酒酵母细胞壁提取物(0,25,50,100,200,400mg/L)作用于绵羊瘤胃上皮细胞不同时间(0,2,4,8,12,24h)后,检测上皮细胞SBD-1和Toll样受体-2(TLR2)mRNA表达水平,并进一步通过TLR2阻断试验来证实TLR2是否介导酵母细胞壁促进SBD-1表达。结果表明,不同浓度的酵母细胞壁刺激瘤胃上皮细胞时,随着细胞壁浓度的增加SBD-1mRNA表达量呈先升高后降低的趋势,且酿酒酵母细胞壁质量浓度为200mg/L刺激12h时,SBD-1 mRNA表达量达到峰值,与对照组和其他时间组相比差异显著(P<0.05);用质量浓度为200mg/L的酿酒酵母细胞壁刺激绵羊瘤胃上皮细胞不同时间,同样在12h时,TLR2的mRNA表达量达到最大;阻断试验表明TLR2可介导SBD-1的表达。本研究结果表明酿酒酵母细胞壁可促进绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,且质量浓度200mg/L时,刺激瘤胃上皮细胞12h时SBD-1的表达量达到最高,而TLR2参与该调控过程。 展开更多
关键词 酿酒酵母细胞壁 β-防御素-1 实时荧光定量PCR Toll样受体-2
RT-qPCR检测Wistar大鼠黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因转录水平方法的建立
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作者 王陈芸 李哲丽 +4 位作者 叶尤松 蔡发晶 肖涵 谢季平 唐东红 《实验动物科学》 2019年第1期26-30,共5页
目的建立实时荧光定量(RT-qPCR)检测Wistar大鼠黄嘌呤脱氢酶/氧化酶(XDH/XO)基因转录水平的方法,以在转录水平上对XDH/XO基因进行定量检测。方法提取Wistar大鼠肝脏组织中总RNA,经逆转录得到cDNA,以10倍为稀释因子稀释为5个浓度梯度,使... 目的建立实时荧光定量(RT-qPCR)检测Wistar大鼠黄嘌呤脱氢酶/氧化酶(XDH/XO)基因转录水平的方法,以在转录水平上对XDH/XO基因进行定量检测。方法提取Wistar大鼠肝脏组织中总RNA,经逆转录得到cDNA,以10倍为稀释因子稀释为5个浓度梯度,使用设计的引物序列和内参基因进行RT-qPCR检测,得到XDH/XO基因表达的标准曲线。进而检测Wistar大鼠高尿酸血症动物模型中XDH/XO基因转录水平的变化。结果 RT-qPCR法检测得到的XDH/XO基因标准曲线溶解峰单一,R^2接近1,能检测出高尿酸动物模型中XDH/XO基因转录水平的变化。结论 RT-qPCR检测Wistar大鼠XDH/XO基因转录水平的方法具有定量准确,重复性好的特点,可应用于高尿酸血症的发病机理、新药研究等方面。 展开更多
关键词 实时荧光定量(RT-qPCR) 嘌呤脱氢酶/氧化酶(XDH/XO) WISTAR大鼠 肝脏 mRNA
实时荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色法诊断结核病的灵敏度、特异度比较 预览
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作者 李艳红 李春艳 +1 位作者 陈天芳 杨静芬 《临床医学研究与实践》 2019年第30期128-130,共3页
目的比较实时荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色法诊断结核病的灵敏度、特异度。方法选取我院2017年1月至2018年12月收治的110例结核病患者(肺结核88例、肺外结核22例),采集样本后分别进行实时荧光定量PCR和痰涂片抗酸染色法检测,以临床诊断... 目的比较实时荧光定量PCR与痰涂片抗酸染色法诊断结核病的灵敏度、特异度。方法选取我院2017年1月至2018年12月收治的110例结核病患者(肺结核88例、肺外结核22例),采集样本后分别进行实时荧光定量PCR和痰涂片抗酸染色法检测,以临床诊断为金标准,比较两种方法的诊断效能。结果肺结核患者中实时荧光定量PCR检测的阳性率为94.32%,灵敏度为98.81%,特异度为100.00%,显著高于痰涂片抗酸染色法的85.23%、88.10%、75.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。肺外结核患者中实时荧光定量PCR检测的阳性率为86.36%,灵敏度为95.00%,特异度100.00%,显著高于痰涂片抗酸染色法59.09%、60.00%、50.00%(P<0.05)。结论在结核病诊断中使用实时荧光定量PCR检测的灵敏度、特异度高,可做为临床的优选诊断手段。 展开更多
关键词 结核病 实时荧光定量PCR 痰涂片抗酸染色法 肺结核 肺外结核
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我国20个梨品种(种质)对国外梨火疫病菌的抗病性评价 预览
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作者 李洪涛 张静文 +4 位作者 盛强 唐章虎 张祥林 张春竹 罗明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期629-637,共9页
【目的】选取Erwinia amylovora国外菌株及国内梨品种(种质),经室内接种,评价不同菌株的致病力及梨品种的抗病性,为研究梨火疫病防控技术提供技术资料。【方法】对供试的梨品种(种质)枝条采用离体接种、梨幼果半果接种法,比较3个不同来... 【目的】选取Erwinia amylovora国外菌株及国内梨品种(种质),经室内接种,评价不同菌株的致病力及梨品种的抗病性,为研究梨火疫病防控技术提供技术资料。【方法】对供试的梨品种(种质)枝条采用离体接种、梨幼果半果接种法,比较3个不同来源的国外菌株E.a 0001、E.a 0017、E.a 0055的致病力。通过离体枝条接种强致病力菌株E.a0017,结合实时荧光PCR定量检测病原菌数量,制定梨品种抗病性分级指标,综合评估梨品种的抗病水平。【结果】3个菌株对供试梨品种枝条均具有致病力,对‘库尔勒香梨‘’砀山梨‘’黑酸梨’、杜梨具有强致病力,对‘库尔勒香梨’的致病力最强;综合对梨枝条接种的病情指数均值,其致病力的强弱依次为E.a 0001>E.a 0055>E.a 0017。E.a 0017菌株对梨幼果的致病力较E.a 0001和E.a 0055强,而E.a 0001和E.a 0055对幼果的致病力相近。供试的20个梨品种(种质)对Erwinia amylovora的抗性水平普遍较低,其中14个品种都不同程度感病(占70%),没有发现高抗品种,2个表现出抗病性和4个具有耐病性的品种均为我国的地方品种。【结论】3个E. amylovora菌株对供试梨品种(种质)均具有强和较强的致病力。供试梨品种(种质)中‘,晋酥‘’绿梨’表现抗病性‘,霍城冬黄梨‘’八月酥‘’库车阿木特‘’棉梨’表现出耐病性,其他均为感病品种。 展开更多
关键词 ERWINIA amylovora 致病力 荧光定量PCR检测 抗性
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棉花E3泛素连接酶基因GhRING1-like的克隆及功能分析 预览
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作者 夏朝阳 安晓晖 +2 位作者 张中起 葛冬冬 刘康 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期39-50,共12页
[目的] RING(really interesting new gene)finger E3泛素连接酶在植物生长发育和抵御环境胁迫中具有重要作用。克隆棉花RING finger E3泛素连接酶基因 GhRING1 -like 并分析其表达特征和功能,为该基因分子作用机制研究和育种应用奠定... [目的] RING(really interesting new gene)finger E3泛素连接酶在植物生长发育和抵御环境胁迫中具有重要作用。克隆棉花RING finger E3泛素连接酶基因 GhRING1 -like 并分析其表达特征和功能,为该基因分子作用机制研究和育种应用奠定基础。[方法]根据棉花表达谱分析,选取并克隆干旱胁迫处理上调表达基因 GhRING1 -like ,qRT-PCR分析 GhRING1 -like 的组织表达特性及其对不同非生物胁迫和激素处理的响应模式;采用瞬时表达对GhRING1-like-GFP融合蛋白进行亚细胞定位分析;通过获得病毒介导的基因沉默(VIGS)棉花和过表达拟南芥植株,分析沉默或过表达 GhRING1 -like 对植株生长发育及其抗旱性的影响。[结果] GhRING1 -like 基因序列全长996 bp,编码332个氨基酸,其C端含有RING-H2(C3H2C3)结构域。GhRING1-like定位于内质网上。 GhRING1 -like 在叶片中优势表达;200 g · L^-1 PEG6000诱导处理1 h后瞬时显著上调表达12倍; GhRING1 -like 对NaCl、ABA和SA的响应时间都在处理后3 h,上调表达均在5倍左右。干旱胁迫处理后,VIGS沉默 GhRING1 -like 棉花叶片相对含水量和叶绿素荧光参数 Fv/ Fm分别较未沉默对照降低17.1%和30.6%,而电解质渗透率和丙二醛含量分别较对照提高70.8%和100%。过表达 GhRING1 -like 显著提高了拟南芥种子萌发和幼苗期对于甘露醇引起的渗透胁迫的耐受性;可使营养生长中后期阶段的拟南芥在水分亏缺处理下的存活率提高2.4倍;转基因拟南芥叶片气孔开度降低 51.2%,失水率明显降低。干旱胁迫下,过表达 GhRING1 -like 使依赖于ABA诱导表达的 AtAREB 1、AtERD15、AtRD29A 上调表达,而对不依赖ABA的干旱胁迫诱导基因 AtDREB和脯氨酸合成基因AtPLD 没有影响。[结论]棉花 GhRING1 -like 参与了植物非生物胁迫抗性的调控,主要通过依赖于ABA通路正向调控植物的抗旱反应。 展开更多
关键词 E3泛素连接酶 干旱胁迫 实时荧光定量PCR 病毒介导的基因沉默(VIGS) 转基因拟南芥
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甘薯淀粉合成相关酶基因的克隆与表达分析
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作者 侯夫云 李丰 +4 位作者 秦桢 李爱贤 董顺旭 王庆美 张立明 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第23期7663-7668,共6页
为研究甘薯块根淀粉合成酶基因的表达特征,本研究以淀粉含量不同的两个品种为试验材料,利用转录组数据克隆了甘薯颗粒结合淀粉合成酶GBSS、异淀粉酶ISA、淀粉分支酶SBEⅠ、SBEⅡ的cDNA片段,采用实时荧光定量RT-PCR方法对块根不同生长期... 为研究甘薯块根淀粉合成酶基因的表达特征,本研究以淀粉含量不同的两个品种为试验材料,利用转录组数据克隆了甘薯颗粒结合淀粉合成酶GBSS、异淀粉酶ISA、淀粉分支酶SBEⅠ、SBEⅡ的cDNA片段,采用实时荧光定量RT-PCR方法对块根不同生长期淀粉合成相关酶基因的表达进行研究。结果表明,在甘薯不同生长时期,淀粉含量从块根形成期开始逐渐积累,到栽插后80 d、110 d时达到高峰,在块根膨大后期,淀粉含量相对稳定。IbGBSSⅠ、IbSBEⅡ、IbISA 3个基因表达量呈双峰曲线变化,IbSBEⅠ表达呈单峰曲线变化。IbGBSSⅠ、IbISA在栽插后70 d和100 d时表达量达到高峰,IbSBEⅠ在栽插后70 d表达量达到最大。在不同类型甘薯品种中,IbGBSSⅠ在高淀粉品种‘漯徐薯8号’中的表达量显著高于‘郑薯20’,低淀粉品种‘郑薯20’的IbISA表达量显著高于‘漯徐薯8号’。 展开更多
关键词 甘薯(Ipomoea BATATAS L.) 淀粉合成相关酶基因 克隆 荧光定量 RT-PCR 基因表达
不同光周期及不同胁迫对水稻OsHGO基因表达的影响 预览
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作者 陈彦成 赵杨 +2 位作者 刘之熙 黄丽华 任春梅 《湖南农业科学》 2019年第7期1-3,8共4页
以水稻野生型日本晴为研究材料,采用不同光周期及不同胁迫对其进行处理,通过实时荧光定量PCR对三叶期的水稻叶片OsHGO基因的表达量进行检测。结果表明:OsHGO基因在长日照、短日照、全日照时的表达水平与对照相比差别不大,但黑暗处理可... 以水稻野生型日本晴为研究材料,采用不同光周期及不同胁迫对其进行处理,通过实时荧光定量PCR对三叶期的水稻叶片OsHGO基因的表达量进行检测。结果表明:OsHGO基因在长日照、短日照、全日照时的表达水平与对照相比差别不大,但黑暗处理可显著提高该基因的表达量。ABA(脱落酸)可诱导OsHGO基因的表达;SA(水杨酸)、MeJA(茉莉素)、低温胁迫、盐胁迫和稻瘟病菌下调OsHGO基因的表达。 展开更多
关键词 水稻 光周期 胁迫 OsHGO基因 实时荧光定量PCR
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肺癌患者早期个性化治疗中ERCC1和TUBB3基因联合检测的临床意义
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作者 万李萍 李艳 朱洪松 《医药论坛杂志》 2019年第11期79-82,共4页
目的探索肺癌患者早期个性化治疗中ERCC1和TUBB3基因联合检测的临床意义。方法从复旦大学附属闵行医院2017年5月至2018年5月期间收治的肺癌患者中选择79例作为研究对象,按照随机分组的原则将研究对象分为研究组(n=41)和对照组(n=38),对... 目的探索肺癌患者早期个性化治疗中ERCC1和TUBB3基因联合检测的临床意义。方法从复旦大学附属闵行医院2017年5月至2018年5月期间收治的肺癌患者中选择79例作为研究对象,按照随机分组的原则将研究对象分为研究组(n=41)和对照组(n=38),对照组采用DP(多西紫杉醇+顺铂)方案进行化疗,研究组首先采用实时荧光定量PCR法检测ERCC1和TUBB3基因,根据检测结果制定个性化治疗方案,化疗结束后观察两组患者有效率、不良反应、中位生存时间(mOS)、总生存时间、生活质量改善等指标。结果研究组患者化疗后有效率为82.93%。对照组为50.00%,经统计学分析后差异有统计学意义(P<0.05),研究组中位生存时间为17.1个月,38例生活质量改善,对照组中位生存时间为12.5个月,生活质量改善为22例,且差异均有统计学意义(均P<0.05),研究组出现1例肝肾损害和2例骨髓抑制,对照组分别为9例和8例,经统计学分析后差异有统计学意义(P<0.05),研究组总生存时间明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论根据ERCC1和TUBB3检测结果制定的个性化化疗方案可明显提高化疗效果,延长患者生存时间,提高生活质量,减少不良反应的发生,可在临床上推广应用。 展开更多
关键词 肺癌 实时荧光定量PCR 化疗 生活质量
DNase处理法结合数字PCR与qPCR对活的非可培养状态副溶血性弧菌检测比较研究
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作者 杨娟 何宇平 +6 位作者 黄新新 彭强辉 曾静 孙晓红 赵勇 李想 郭德华 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第10期3180-3185,共6页
目的探讨DNase处理法结合微滴化数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)在检测冷冻食品中活的非可培养状态(viable but non-culturable state, VBNC)副溶血性弧菌的适用性,并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较。方法用无菌磷酸盐缓冲液对解... 目的探讨DNase处理法结合微滴化数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)在检测冷冻食品中活的非可培养状态(viable but non-culturable state, VBNC)副溶血性弧菌的适用性,并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较。方法用无菌磷酸盐缓冲液对解冻的大西洋鲑鱼样品进行10倍梯度稀释,再加入副溶血性弧菌,终浓度为6.6×10^5 CFU/mL。-20℃分别诱导10、20和30 d。将DNase试剂与叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)染料分别作用于不同时期的冷冻基质,结合qPCR和ddPCR进行比较检测,对比其作用效果。结果DNase-qPCR和PMA-qPCR检测3个冷冻阶段活性副溶血性弧菌的Cq值分别为31.41±0.06、32.40±0.04、34.59±0.15和31.24±0.06、32.32±0.03、34.25±0.12, 2种方法Cq值均呈现上升的趋势且数值接近。采用DNase-ddPCR和PMA-ddPCR检测各阶段活性副溶血性弧菌,可直接读出绝对拷贝数,分别为233±6.43、108±5.57、28±3.21和256±6.56、126±3.06、35±2.52。2种方法检测的拷贝数差异不大,重复性好。相对标准偏差均在可接受范围内,符合欧盟定量检测要求。结论DNase处理试剂与PMA对有活性的副溶血性弧菌检测效果相当,与PMA相比,DNase处理法无需强光照射,操作简便快捷,无试剂毒性。ddPCR不需要标准品即能实现对基质中微量活性副溶血弧菌精准定量检测。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 活的非可培养状态 DNASE 处理法 实时荧光定量 PCR 微滴化数字化 PCR
成都市某幼儿园儿童肠道双歧杆菌种群结构及其与饮奶量的关系
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作者 吴成 李媛媛 +3 位作者 李鸣 何方 王玥 曾果 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期435-439,共5页
目的测定学龄前儿童肠道双歧杆菌(Bifidobacterium)种群结构,探讨其与饮奶量的关系。方法以成都市某幼儿园200名2~6岁健康儿童作为研究对象,男女各半,通过家长填写问卷调查收集饮奶量信息。收集其粪便,采用实时荧光定量PCR对双歧杆菌属... 目的测定学龄前儿童肠道双歧杆菌(Bifidobacterium)种群结构,探讨其与饮奶量的关系。方法以成都市某幼儿园200名2~6岁健康儿童作为研究对象,男女各半,通过家长填写问卷调查收集饮奶量信息。收集其粪便,采用实时荧光定量PCR对双歧杆菌属和8个菌种水平进行定量测定,比较不同饮奶量儿童肠道双歧杆菌种群结构差异。结果受试儿童粪便均检出双歧杆菌,菌量为(9.33±0.54)log10 CFU/g。日均饮奶量≥300 mL组儿童肠道短双歧杆菌(B.breve)检出率高于饮奶量<300 mL组(88.9%vs.78.4%,χ^2=4.039,P=0.044)。日均饮奶量≥300 mL组儿童短双歧杆菌和婴儿双歧杆菌(B.infantis)的菌量高于饮奶量<300 mL组儿童[(7.35±1.25)log10 CFU/g vs.(6.91±1.32)log10 CFU/g,t=-2.096,P=0.038;(7.36±1.35)log10 CFU/g vs.(6.68±1.45)log10 CFU/g,t=-2.412,P=0.018]。结论成都市200名学龄前儿童肠道双歧杆菌属检出率为100%,优势菌种为链状双歧杆菌(B.catenulatum)、长双歧杆菌(B.longum)和短双歧杆菌。饮奶量与短双歧杆菌和婴儿双歧杆菌的定植有关。 展开更多
关键词 学龄前儿童 双歧杆菌 饮奶量 实时荧光定量PCR
快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价 预览
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作者 杜清春 董珊珊 +3 位作者 丁奕博 张艳 李伟 王鹏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期43-49,共7页
为建立一种能快速鉴定炭疽杆菌的检测技术,本研究根据炭疽杆菌染色体上的TJHP和BA5345 2个靶点,分别设计4对引物和2个探针,对10份已知浓度的炭疽杆菌DNA和阴性对照菌株DNA进行检测,将浓度最大的炭疽杆菌DNA进行10倍倍比稀释,用于检测4... 为建立一种能快速鉴定炭疽杆菌的检测技术,本研究根据炭疽杆菌染色体上的TJHP和BA5345 2个靶点,分别设计4对引物和2个探针,对10份已知浓度的炭疽杆菌DNA和阴性对照菌株DNA进行检测,将浓度最大的炭疽杆菌DNA进行10倍倍比稀释,用于检测4对引物及其探针的灵敏度,并选出2个针对TJHP和BA5345靶点的特异性强及灵敏度高的引物和探针进行重复性实验。结果显示,4对引物及其探针特异性较强,FP2/RP2和FP4/RP4 2对引物的灵敏度为4.513×10^-5 ng/μL;该荧光定量PCR方法重复性好(t=1.178,P=0.332)。FP2/RP2和FP4/RP4 2对引物及其探针可用于炭疽杆菌感染初期的快速筛查以及临床辅助诊断。 展开更多
关键词 炭疽杆菌 实时荧光定量PCR TJHP BA5345
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2种矫治方式对牙周健康状况的对比研究 预览
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作者 邓晓瑜 张倩倩 +3 位作者 侯凤春 徐山山 张帆 于艳玲 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期432-435,共4页
目的:对比分析成人正畸患者采用固定矫治和无托槽隐形矫治对牙周健康的影响。方法:纳入成人正畸患者60例, A组30例采用固定矫治, B组30例采用无托槽隐形矫治,分别检查2组患者治疗前,第3个月和第6个月的临床牙周指标(PLI,PD,GI),同时利... 目的:对比分析成人正畸患者采用固定矫治和无托槽隐形矫治对牙周健康的影响。方法:纳入成人正畸患者60例, A组30例采用固定矫治, B组30例采用无托槽隐形矫治,分别检查2组患者治疗前,第3个月和第6个月的临床牙周指标(PLI,PD,GI),同时利用实时荧光定量PCR方法检测牙龈卟啉单胞菌(Pg)和福赛坦氏菌(Tf)的数量,进行组间及组内对比。结果:随着治疗时间的延长, 2组的牙周指数均有变化,A组的牙周指数及Pg的构成比均不同程度的于高B组(P<0.05);2组的Tf变化不显著(P>0.05)。结论:2组患者的牙周状况均在第6个月趋于稳定。隐形矫治比固定矫治更有利于患者牙周健康的维护。 展开更多
关键词 无托槽隐形矫治 固定矫治技术 牙周指数 实时荧光定量PCR
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实时荧光定量PCR技术鉴别非O157:H7大肠杆菌产志贺毒素菌株(STEC)的研究 预览
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作者 郭旸 崔思宇 +2 位作者 吴福平 徐建浦 邵景东 《工业微生物》 CAS 2019年第6期50-54,共5页
本文运用实时荧光定量PCR的技术对菌株进行stx1基因、stx2基因、eaeA毒力基因检测;并对stx阳性、eaeA阳性的菌株进行O抗原基因rfbE(O157)、wzx(O26)、wbdI(O111)、ihp1(O145)、wzx(O103)检测。探究了实验室保存的94株非O157:H7大肠杆菌... 本文运用实时荧光定量PCR的技术对菌株进行stx1基因、stx2基因、eaeA毒力基因检测;并对stx阳性、eaeA阳性的菌株进行O抗原基因rfbE(O157)、wzx(O26)、wbdI(O111)、ihp1(O145)、wzx(O103)检测。探究了实验室保存的94株非O157:H7大肠杆菌是否存在产志贺毒素菌株(STEC)存在;结果表明94株大肠杆菌中检出3株含有stx基因、12株含有eaeA基因;对stx和eaeA阳性菌株O抗原基因试验,检出2株含有wzx(O26)基;这2株大肠杆菌血清凝集试验结果为阳性。研究结果显示,实时荧光定量PCR技术具有特异性强,灵敏度高等特点,可用于产志贺毒素菌株(STEC)前期筛查。 展开更多
关键词 大肠杆菌 志贺毒素 荧光定量PCR
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乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法 预览 被引量:2
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作者 张娜娜 刘洋 +5 位作者 俞漪 赵渝 窦同海 徐琼 段文锋 翁史昱 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期27-32,共6页
目的:为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法:根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、... 目的:为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法:根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证,并利用模拟样品对方法进行检验,最后对市售的实际样品进行检测。结果:该方法的特异性较好;方法的绝对灵敏度达到3pg,相对灵敏度达103CFU/mL;重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下。同时进行杂菌干扰实验,在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌,扩增均无明显影响,表明建立的方法抗干扰能力较好。利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线,得出R2为0.987,线性较好,可进行实际样品的检测。对市售的11份样品进行检测,其中6份含有嗜酸乳杆菌菌株,5份不含嗜酸乳杆菌菌株,标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×10^2~3.68×10^4CFU/mL之间。结论:建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 嗜酸乳杆菌 定量 检测
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人乳头瘤病毒16型E5基因在宫颈癌发生进程中的动态研究
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作者 李茂圆 简洁 +4 位作者 梁开如 喻景瑞 李明 唐凤祝 李婉宜 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期666-671,共6页
目的观察人乳头瘤病毒(HPV)16型E5基因在宫颈癌发生发展过程中的动态变化情况,探讨E5 mRNA在宫颈癌早期筛查中的临床意义。方法收集2015年9月至2017年12月在四川省妇幼保健院宫颈门诊就诊或行宫颈癌机会性筛查人群的宫颈病变组织石蜡标... 目的观察人乳头瘤病毒(HPV)16型E5基因在宫颈癌发生发展过程中的动态变化情况,探讨E5 mRNA在宫颈癌早期筛查中的临床意义。方法收集2015年9月至2017年12月在四川省妇幼保健院宫颈门诊就诊或行宫颈癌机会性筛查人群的宫颈病变组织石蜡标本49例(HPV阳性),按照FIGO标准将收集的宫颈病变标本进行分期:宫颈炎13例,宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ5例,CINⅡ18例,CINⅢ5例,宫颈癌8例。利用实时荧光定量PCR检测不同病理分级宫颈组织中E5基因的完整度及E5、E6、E7 mRNA的表达水平。结果在49例HPV16阳性感染患者中,CINⅠ宫颈病变组织中E5基因的完整度比宫颈炎、CINⅡ及宫颈癌组织更高(P<0.05);CINⅠ宫颈病变组织中E5基因完整度虽高于CINⅢ组织,但差异无统计学意义。不同病理级别标本中E5、E6、E7 mRNA的表达水平均在CINⅢ组织最高。与E6、E7 mRNA相比,E5 mRNA在宫颈病变的全过程中均呈现出优势表达状态(P<0.05),而E6、E7 mRNA的表达水平只在病变后期(CINⅢ和宫颈癌)有升高趋势。结论在HPV16阳性感染患者的病变组织中,E5基因的完整度可能与宫颈疾病的发生、发展有关。E5基因有望成为宫颈癌早期筛查的靶基因。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16 宫颈病变 E5基因 实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR技术检测妊娠晚期GBS感染的临床价值分析 预览
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作者 萧君明 尹青霞 黄婉婷 《数理医药学杂志》 2019年第7期973-975,共3页
目的:探讨实时荧光定量PCR技术检测妊娠晚期B型链球菌(GBS)感染的临床价值。方法:选择2018年1月~12月在某院产检的200例单胎初产妇,取阴道拭子,分别使用普通细菌培养法与实时荧光定量PCR法检测是否合并GBS,记录入组孕妇GBS携带情况、分... 目的:探讨实时荧光定量PCR技术检测妊娠晚期B型链球菌(GBS)感染的临床价值。方法:选择2018年1月~12月在某院产检的200例单胎初产妇,取阴道拭子,分别使用普通细菌培养法与实时荧光定量PCR法检测是否合并GBS,记录入组孕妇GBS携带情况、分析细菌培养法与实时荧光定量PCR法检测GBS阳性率,并比较GBS阳性与阴性者母婴妊娠结局。结果:200例孕妇GBS携带率为10.50%(21/200);实时荧光定量PCR法检测GBS阳性率明显高于细菌培养法,差异有统计学意义(P<0.05);GBS阳性组孕妇不良妊娠结局总发生率、新生儿不良结局总发生率高于GBS阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GBS会增加孕妇与新生儿不良结局的发生,实时荧光定量PCR可快速准确筛查GBS,指导临床及时给予产妇干预措施,改善母婴结局。 展开更多
关键词 B型链球菌感染 实时荧光定量PCR 细菌培养法
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