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Early active immunization with Aβ3–10-KLH vaccine reduces tau phosphorylation in the hippocampus and protects cognition of mice 预览
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作者 Jin-Chun Wang Kun Zhu +3 位作者 Hui-Yi Zhang Guo-Qing Wang Hui-Ying Liu Yun-Peng Cao 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2020年第3期519-527,共9页
Active and passive anti-Aβimmunotherapies have successfully been used for the prevention and treatment of Alzheimer’s disease animal models.However,clinical use of these immunotherapies is not effective,because the ... Active and passive anti-Aβimmunotherapies have successfully been used for the prevention and treatment of Alzheimer’s disease animal models.However,clinical use of these immunotherapies is not effective,because the vaccination is administered too late.At 1 month of age,100μL of Aβ3–10-KLH peptide(vaccine,2μg/μL)was subcutaneously injected into the neck of an amyloid precursor protein/presenilin-1/tau transgenic(3×Tg-AD)mouse model.Aβ3–10-KLH peptide was re-injected at 1.5,2.5,3.5,4.5,5.5,and 6.5 months of age.Serum levels of Aβantibody were detected by enzyme-linked immunosorbent assay,while spatial learning and memory ability were evaluated by Morris water maze.Immunohistochemistry was used to detect total tau with HT7 and phosphorylated tau with AT8(phosphorylation sites Ser202 and Thr205)and AT180(phosphorylation site Thr231)antibodies in the hippocampus.In addition,western blot analysis was used to quantify AT8 and AT180 expression in the hippocampus.The results showed that after vaccine injection,mice produced high levels of Aβantibody,cognitive function was significantly improved,and total tau and phosphorylated tau levels were significantly reduced.These findings suggest that early active immunization with Aβ3–10-KLH vaccine can greatly reduce tau phosphorylation,thereby mitigating the cognitive decline of 3×Tg-AD mice.This study was approved by the Animal Ethics Committee of China Medical University,China(approval No.103-316)on April 2,2016. 展开更多
关键词 3×Tg-AD Aβ3–10-KLH VACCINE Alzheimer’s disease amyloid precursor protein AMYLOID-BETA cognitive DECLINE tau phosphorylation transgenic mouse
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Phosphorylation Properties of the N-Terminal Region of Twitchin from Molluscan Catch Muscle 预览
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作者 Daisuke Funabara Yuuki Nishimura Satoshi Kanoh 《美国分子生物学期刊(英文)》 2019年第3期110-120,共11页
Molluscan smooth muscles, such as the bivalve adductor muscles and the mussel anterior byssus retractor muscles (ABRM), exhibit a unique contraction called “catch”. Catch contraction is regulated through twitchin ph... Molluscan smooth muscles, such as the bivalve adductor muscles and the mussel anterior byssus retractor muscles (ABRM), exhibit a unique contraction called “catch”. Catch contraction is regulated through twitchin phosphorylation and dephosphorylation. Twitchin from the ABRM of the Mediterranean mussel, Mytilus galloprovincialis, is phosphorylated by cAMP-dependent protein kinase (PKA), and PKA phosphorylation sites are located in both the N- and C-terminal regions of the twitchin molecule. The D2 site, which is adjacently located to the C-terminus, participates in forming a myosin, actin, and twitchin complex that is thought to contribute towards the maintenance of tension in the catch state. In contrast, although it has been reported to interact with thin-filaments, the molecular function of the region including the D1 site has remained largely unstudied. Three additional PKA consensus sequences were identified near the D1 site;however, it was not known if these sites could be directly phosphorylated by PKA. Here, we performed phosphorylation assays to identify phosphorylation sites near the D1 site using recombinant protein variants (TWD1-SSSS, TWD1-AAAS, TWD1-AASA, TWD1-ASAA, TWD1-SAAA, and TWD1-AAAA). All variants, except TWD1-AAAA (where all phosphorylatable serine residues were replaced by alanines), were phosphorylated by PKA. The four phosphorylation sites were named D1-1, D1-2, D1-3, and D1-4 (the originally identified D1) in order from the N-terminus. Phosphorylation assays using a 1/12.5 weight ratio of PKA to each TWD1 variant revealed that D1-4 was the most rapidly phosphorylated, closely followed by D1-1. However, D1-2 and D1-3 were phosphorylated at a lower level under equivalent conditions and were not phosphorylated when PKA was incubated with each TWD1 variant at a 1/100 weight ratio. Furthermore, we observed that TWD1-SSSS was phosphorylated in a stepwise fashion. These findings contribute towards the elucidation of the function of the twitchin D1 region in the regulatory system of catch co 展开更多
关键词 CATCH CONTRACTION PHOSPHORYLATION PHOS-TAG Gel ELECTROPHORESIS PKA Twitchin
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Phosphorylation of AMMECR1 at Serine16 Is Not Essential for Its Nuclear Localization 预览
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作者 Chengfeng Cai Meng Xu +1 位作者 Yongquan Su Huamin Zhou 《生物科学与医学(英文)》 2019年第11期146-153,共8页
AMMECR1 is a critical gene in the pathogenesis of AMME syndrome. But, little is known about how AMMECR1 is regulated. Here, we showed that many human cell lines expressed AMMECR1. With Phos-tag SDS PAGE analysis, we d... AMMECR1 is a critical gene in the pathogenesis of AMME syndrome. But, little is known about how AMMECR1 is regulated. Here, we showed that many human cell lines expressed AMMECR1. With Phos-tag SDS PAGE analysis, we demonstrated that AMMECR1 was constitutively phosphorylated at Ser16. AMMECR1 was localized in the nucleus. Mutation of Ser16 to alanine did not affect its nuclear localization. The homologs of AMMECR1, PAC688.03c and MTH857, were also nuclear proteins, but they were not phosphorylated when tested in HeLa cells. Therefore, AMMECR1 and its homologs might have atypical nuclear localization sequences. 展开更多
关键词 AMMECR1 TRANSCRIPTION PHOSPHORYLATION NUCLEAR LOCALIZATION
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皮层肌动蛋白络氨酸磷酸化对宫颈鳞状上皮细胞癌发展研究 预览
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作者 申英姬 陈海月 《创伤与急危重病医学》 2019年第3期131-135,共5页
目的探讨皮层肌动蛋白表达及其磷酸化在宫颈鳞状上皮细胞癌发生、发展过程中的作用。方法选取11例正常宫颈组织、61例宫颈不典型增生组织及116例宫颈鳞状上皮细胞癌组织标本,探讨皮层肌动蛋白和磷酸化皮层肌动蛋白的临床病理学意义,通... 目的探讨皮层肌动蛋白表达及其磷酸化在宫颈鳞状上皮细胞癌发生、发展过程中的作用。方法选取11例正常宫颈组织、61例宫颈不典型增生组织及116例宫颈鳞状上皮细胞癌组织标本,探讨皮层肌动蛋白和磷酸化皮层肌动蛋白的临床病理学意义,通过体外实验观察皮层肌动蛋白对宫颈鳞状上皮细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的改变。结果与正常宫颈组织比较,磷酸化皮层肌动蛋白的表达在不典型增生及鳞状上皮细胞癌组织显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈鳞状上皮细胞癌细胞通过干扰皮层肌动蛋白的表达,使细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论皮层肌动蛋白及磷酸化皮层肌动蛋白的下调,可显著降低宫颈鳞状上皮细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 皮层肌动蛋白 磷酸化 鳞状上皮细胞癌
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不同钙离子浓度体外条件下磷酸化对肌联蛋白降解的影响 预览
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作者 王颖 李欣 +3 位作者 李铮 朱杰 张社奇 张德权 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第16期52-57,共6页
以羊背最长肌中肌联蛋白为原料,添加蛋白激酶A和碱性磷酸酶体外孵育使肌联蛋白发生磷酸化和去磷酸化反应。反应后添加μ-钙蛋白酶,在钙离子浓度分别为0.05 mmol/L和2 mmol/L条件下,4℃孵育2 d。测定孵育体系pH值、肌联蛋白磷酸化水平及... 以羊背最长肌中肌联蛋白为原料,添加蛋白激酶A和碱性磷酸酶体外孵育使肌联蛋白发生磷酸化和去磷酸化反应。反应后添加μ-钙蛋白酶,在钙离子浓度分别为0.05 mmol/L和2 mmol/L条件下,4℃孵育2 d。测定孵育体系pH值、肌联蛋白磷酸化水平及其降解程度。结果表明:不同处理组孵育体系pH值差异不显著(P>0.05);蛋白激酶A组肌联蛋白磷酸化水平显著高于对照组,对照组肌联蛋白磷酸化水平显著高于碱性磷酸酶组(P<0.05);当钙离子浓度为0.05 mmol/L时,蛋白激酶A组和对照组未检测到分子质量为1 200 kDa的降解条带,而碱性磷酸酶组在孵育12 h检测到该条带;当钙离子浓度为2 mmol/L时,蛋白激酶A组和对照组均在孵育12 h检测到1 200 kDa降解条带,而碱性磷酸酶组在孵育0.5 h时检测到该条带。结论:蛋白激酶A和碱性磷酸酶能够促进肌联蛋白发生磷酸化和去磷酸化反应;随着钙离子浓度增加,肌联蛋白降解速率加快;并且在相同钙离子浓度下,肌联蛋白在碱性磷酸酶组降解较快,表明去磷酸化可以促进肌联蛋白的降解。 展开更多
关键词 肌联蛋白 蛋白激酶A 碱性磷酸酶 磷酸化 降解
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4∶5,7∶8-二异亚丙基-3-去氧-D-甘露-2-辛酮酸(Kdo)甲酯及其对甲基硫苷合成 预览
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作者 陈越 杨静 +1 位作者 杨丹梅 梁兴勇 《科学技术与工程》 北大核心 2019年第20期289-292,共4页
以D-甘露糖和L-酒石酸二甲酯为原料合成4∶5,7∶8-O-二异亚丙基-3-去氧-D-甘露-2-辛酮酸甲酯及其对甲基苯硫苷衍生物。首先,D-甘露糖通过缩酮反应制得2∶3,5∶6-O-二异亚丙基-D-甘露糖1;然后,L-酒石酸二甲酯2经过氧化水解,磷酰化和硅烷... 以D-甘露糖和L-酒石酸二甲酯为原料合成4∶5,7∶8-O-二异亚丙基-3-去氧-D-甘露-2-辛酮酸甲酯及其对甲基苯硫苷衍生物。首先,D-甘露糖通过缩酮反应制得2∶3,5∶6-O-二异亚丙基-D-甘露糖1;然后,L-酒石酸二甲酯2经过氧化水解,磷酰化和硅烷基化制得磷酸酯4。化合物1和磷酸酯4经Wittig-Horner反应缩合得到化合物5,脱除硅基制得4∶5,7∶8-二异亚丙基-3-去氧-β-D-甘露-2-辛酮酸甲酯6,总收率为34%。化合物6通过端基乙酰化和硫取代反应得到硫苷衍生物8,六步总收率为26%。产物结构经NMR和HRMS确证。 展开更多
关键词 3-去氧-D-甘露-2-辛酮酸 磷酸酯 磷酰化反应 WITTIG-HORNER反应 硫代反应
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ManLAM诱导结核性关节炎FLS细胞中IL-37表达的机制 预览
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作者 束振华 黄震 +2 位作者 吴雨梅 孙俊生 武红梅 《锦州医科大学学报》 CAS 2019年第5期23-27,I0006,I0007共7页
目的使用人成纤维样滑膜细胞(FLS细胞)系探究甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖(Man LAM)对人结核性关节炎中白介素-37 (IL-37)产生的作用及相关分子机制。方法从H37RV结核杆菌中提取并纯化Man LAM,提取人FLS细胞中的总RNA,将RNA反转录为c ... 目的使用人成纤维样滑膜细胞(FLS细胞)系探究甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖(Man LAM)对人结核性关节炎中白介素-37 (IL-37)产生的作用及相关分子机制。方法从H37RV结核杆菌中提取并纯化Man LAM,提取人FLS细胞中的总RNA,将RNA反转录为c DNA。蛋白质免疫印迹法(Western Blot)对p38丝裂原活化蛋白激酶类/拮抗剂和抑制剂(p38和ERK1/2 MAPKs)进行检测。ELISA法和流式细胞术检测FLS细胞中表达出来的IL-37水平,用以评估Man LAM诱导FLS细胞中IL-37表达的能力以及观察p38和ERK1/2等抑制剂对Man LAM诱导产生的IL-37表达的影响。结果发现ManLAM诱导IL-37 mRNA及蛋白表达具有时间和剂量依赖性,然而这种活性几乎可以全部被ERK1/2 (U0126)和p38(SB203580)抑制剂所消除。TLR2表达受到干扰后,ERK1/2和p38磷酸化水平也显著下降,同时IL-37的产物也大大减少。但是干扰TLR4对Man LAM诱导IL-37的表达几乎没有影响。结论 Man LAM通过上调TLR2/p38或ERK1/2信号通路来诱导人FLS细胞中IL-37的产生,而且,这为解释Man LAM促进结核杆菌持久性的病理学作用提供了一个重要的依据。 展开更多
关键词 成纤维样滑膜细胞 甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖 白细胞介素-37 磷酸化
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66例晚期黑色素瘤患者组织中磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白表达水平分析及其临床意义评价
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作者 邓园欣 孔燕 +2 位作者 毛丽丽 斯璐 郭军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期882-887,共6页
目的:分析晚期黑色素瘤组织中磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(phosphorylated retinoblastoma,p-Rb)的表达情况,并探讨其与临床病理特征及预后之间的相关性。方法:收集2011至2014年在北京大学肿瘤医院肾癌黑色素瘤科住院治疗并符合纳入和排... 目的:分析晚期黑色素瘤组织中磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(phosphorylated retinoblastoma,p-Rb)的表达情况,并探讨其与临床病理特征及预后之间的相关性。方法:收集2011至2014年在北京大学肿瘤医院肾癌黑色素瘤科住院治疗并符合纳入和排除标准的66例晚期黑色素瘤患者的临床资料及其石蜡包埋组织切片,采用免疫组化方法检测患者原发灶肿瘤组织中p-Rb的表达情况,结合患者临床病理特征、总生存期等临床数据进行相关性分析。结果:晚期黑色素瘤组织中p-Rb的阳性表达率为57.6%(38/66)。非肢端的皮肤型、肢端型及黏膜型的p-Rb阳性率分别为73.7%(14/19)、63.0%(17/27)和35.0%(7/20),差异有统计学意义(P=0.039)。p-Rb在不同基因突变亚组中的阳性率亦不同,BRAF突变组为83.3%(5/6),C-KIT突变组为100.0%(2/2),N-RAS突变组为100.0%(9/9),PDGFRA突变组为50.0%(1/2),2个基因突变组为50.0%(1/2),基因野生型为44.4%(20/45),差异有统计学意义(P=0.004)。p-Rb表达水平与年龄、性别、分期、溃疡、血清LDH水平无相关性(P>0.05)。p-Rb阳性患者的中位总生存期(OS)较阴性患者略短(30.0 vs 39.2个月),但差异无统计学意义(P=0.555)。结论:超过半数的晚期黑色素瘤组织中有p-Rb的阳性表达,非肢端的皮肤型中p-Rb阳性率高于肢端型、黏膜型,且携带c-KIT和N-RAS突变的患者黑色素瘤组织中p-Rb阳性率较高。 展开更多
关键词 恶性黑色素瘤 成视网膜细胞瘤蛋白 磷酸化 预后
植物远红光受体——光敏色素A的研究进展 预览
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作者 周杨杨 李继刚 《自然杂志》 2019年第3期188-196,共9页
光敏色素是植物中感受红光和远红光的光受体,而光敏色素A(phyA)是植物中唯一感受并响应远红光信号的光受体。phyA以Pr形式在细胞质中合成,接受光照后被激活,转换为具有生物活性的Pfr形式。Pfr形式的phyA与穿梭蛋白FHY1/FHL结合并被转运... 光敏色素是植物中感受红光和远红光的光受体,而光敏色素A(phyA)是植物中唯一感受并响应远红光信号的光受体。phyA以Pr形式在细胞质中合成,接受光照后被激活,转换为具有生物活性的Pfr形式。Pfr形式的phyA与穿梭蛋白FHY1/FHL结合并被转运进入细胞核,在细胞核中与FHY1/FHL分离;FHY1/FHL出核,进行下一个转运phyA进入细胞核的循环。近年发展的phyA数学模型指出,phyA受体Pr与Pfr形式间的转换,以及特异性依赖FHY1/FHL转运进入细胞核,决定其成为植物远红光的光受体。在细胞核中,激活形式的phyA与COP1和SPA蛋白直接相互作用,抑制其形成有功能的E3泛素连接酶复合体;从而使转录因子HY5等蛋白能够积累,促进光形态建成的发生。Pfr形式的phyA也可以与转录因子PIFs相互作用,并介导PIFs的快速磷酸化和降解,从而解除PIFs对光形态建成的抑制作用。FHY3和FAR1是转座酶衍生的一类转录因子,能够在远红光下直接激活FHY1/FHL的基因表达;而HY5能够负反馈调控FHY3/FAR1对于FHY1/FHL的转录激活作用,从而维持远红光信号的动态平衡。Pfr形式的phyA在细胞核内能够被磷酸化,磷酸化的phyA是COP1/SPA的E3泛素连接酶复合体优先降解的底物;而最新的研究表明,磷酸化的phyA可能是一种活性更强的形式,在诱导植物远红光信号响应中扮演重要的角色。 展开更多
关键词 光敏色素A 远红光受体 磷酸化 信号转导
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MAPK/ERK信号通路在卵巢上皮性癌组织和细胞中的表达及其临床意义
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作者 江雪莲 高景春 +7 位作者 姜丽 张朋新 亢铁金 孙倩 祁文静 张秋萍 关宏伟 石红 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期541-547,共7页
目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织和细胞中的表达及其临床意义。方法(1)收集2004年1月—2013年12月大连医科大学附属第一医院收治的术后病理检查证实为卵巢癌的104例... 目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织和细胞中的表达及其临床意义。方法(1)收集2004年1月—2013年12月大连医科大学附属第一医院收治的术后病理检查证实为卵巢癌的104例患者的石蜡标本,采用免疫组化SP法检测卵巢癌组织中磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达,并分析其与各临床病理特征的关系。(2)蛋白印迹(western blot)法检测MAPK激酶(MEK)抑制剂——司美替尼(AZD6244)作用前后不同卵巢癌细胞(包括SKOV3、OV2008、C13、A2780S、A2780CP、OVCAR4、OVCAR5、OVCAR8和CAOV3细胞共9种)中p-ERK1/2、ERK1/2蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测AZD6244作用后不同卵巢癌细胞的增殖情况,流式细胞仪检测AZD6244作用后不同卵巢癌细胞的凋亡率及细胞周期比例。结果(1)免疫组化SP法检测显示,p-ERK1/2蛋白的阳性表达率与卵巢癌患者的年龄、病理类型、手术病理分期、术前血清CA125水平均无明显相关性(P>0.05)。进一步分析发现,在不同病理类型的卵巢癌组织中,p-ERK1/2蛋白的阳性表达率,高级别浆液性癌、黏液性癌及子宫内膜样癌均低于低级别浆液性癌(LGSC),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而透明细胞癌与LGSC比较,差异则无统计学意义(P=0.196)。(2)western blot法检测显示,p-ERK1/2、ERK1/2蛋白在9种卵巢癌细胞中均有不同程度的表达;不同浓度(5、10 μmol/L)的AZD6244分别作用于OVCAR5和OVCAR8细胞后,均可抑制p-ERK1/2、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)蛋白的表达,且AZD6244作用后可伴有PARP裂解片段的出现。MTT比色法检测显示,不同浓度(0、2.5、5、10、25、50、100 μmol/L)的AZD6244作用后,OVCAR5、OVCAR8和A2780S细胞增殖的抑制率均随着AZD6244浓度的增高而降低,呈显著的浓度依赖性(P<0.05)。流式细� 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 丝裂原激活蛋白激酶类 细胞增殖 细胞凋亡 磷酸化
超声联合微泡对内皮细胞一氧化氮合酶磷酸化程度的影响
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作者 吴玉鹏 李岩峰 马逸 《生物医学工程与临床》 CAS 2019年第1期14-18,共5页
目的探索超声联合微泡对内皮细胞一氧化氮合酶(e NOS)磷酸化程度的影响。方法将人脐静脉内皮细胞分为3组(对照组、单纯超声组、超声微泡组),超声微泡组给予超声(频率1 MHz,输出功率100 k Pa,占空比20%)联合微泡(500μL)刺激2 min,单纯... 目的探索超声联合微泡对内皮细胞一氧化氮合酶(e NOS)磷酸化程度的影响。方法将人脐静脉内皮细胞分为3组(对照组、单纯超声组、超声微泡组),超声微泡组给予超声(频率1 MHz,输出功率100 k Pa,占空比20%)联合微泡(500μL)刺激2 min,单纯超声组给予单纯超声(频率1 MHz,输出功率100 kPa,占空比20%)刺激2 min,对照组无任何干预。应用Western blot方法检测磷酸化一氧化氮合酶(S1177)[p-eNOS(S1177)]和总e NOS表达、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞核数目及台盼蓝染色检测3组细胞存活率。结果3组总e NOS相对表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.11、0.99±0.02,差异无统计学意义(P>0.05)。3组p-eNOS(S1177)相对表达量分别为0.41±0.10、0.49±0.08、0.98±0.05,与对照组和单纯超声组比较,超声微泡组p-eNOS(S1177)表达水平显著升高(P<0.05)。p-eNOS(S1177)与总e NOS的比值亦显著升高(P<0.05)。而3组细胞存活率、细胞核数量及细胞核形态未见明显差异(P>0.05)。结论超声联合微泡可以促进e NOS磷酸化、p-eNOS(S1177)表达增加,并且不会对内皮细胞的存活产生影响;为临床应用超声联合微泡治疗微血管阻塞提供了理论基础,也为心血管疾病的治疗提供一个新思路。 展开更多
关键词 超声 微泡 内皮细胞 一氧化氮合酶 磷酸化
RhoA/ROCK信号通路相关疾病的研究进展 预览
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作者 刘建兵 刘敏丽 《海南医学院学报》 CAS 2019年第6期472-476,共5页
RhoA属于RhoGTP亚家族蛋白。RhoA能够激活下游的ROCK激酶,进而影响细胞分子的生成和分泌,并产生相应的生物学效应。这一系列反应构成RhoA/ROCK信号通路。因此该通路的激活和抑制与多种疾病的发生发展密切相关。对其中所涉及的分子机制... RhoA属于RhoGTP亚家族蛋白。RhoA能够激活下游的ROCK激酶,进而影响细胞分子的生成和分泌,并产生相应的生物学效应。这一系列反应构成RhoA/ROCK信号通路。因此该通路的激活和抑制与多种疾病的发生发展密切相关。对其中所涉及的分子机制的研究可能会对临床治疗及疾病的预后有所启发和帮助。本文结合近年来的研究对RhoA/ROCK信号通路所涉及的相关典型疾病进行综述。 展开更多
关键词 RHOA ROCK RhoA/ROCK通路 磷酸化
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高糖对大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡和迁移的影响及机制 预览
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作者 程锦 孙闯 +1 位作者 邹青 薛玉刚 《解放军医药杂志》 CAS 2019年第7期5-8,共4页
目的 观察高糖对体外培养的心肌微血管内皮细胞(CMEC)的凋亡及迁移能力的影响及可能的分子机制。方法 将原代分离、培养的大鼠CMEC随机分为对照组、高糖组、抑制剂组(高糖+XMD8-92)。流式细胞计数检测细胞凋亡,划痕实验测定细胞迁移能力... 目的 观察高糖对体外培养的心肌微血管内皮细胞(CMEC)的凋亡及迁移能力的影响及可能的分子机制。方法 将原代分离、培养的大鼠CMEC随机分为对照组、高糖组、抑制剂组(高糖+XMD8-92)。流式细胞计数检测细胞凋亡,划痕实验测定细胞迁移能力;蛋白免疫印迹实验测定细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase5, ERK5)水平及ERK5磷酸化水平。酶联免疫吸附试验测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)水平。结果 与对照组比较,高糖组细胞凋亡率增加,迁移能力及VEGF表达水平明显降低,P-ERK5水平明显升高( P <0.05)。抑制剂组与对照组比较差异无统计学意义( P >0.05)。结论 高糖可促进CMEC凋亡,抑制内皮细胞迁移能力,其机制可能与高糖促进ERK5的磷酸化从而抑制VEGF的表达有关。 展开更多
关键词 心肌微血管内皮细胞 细胞凋亡 细胞运动 磷酸化 血管内皮生长因子类 大鼠 Sprague-Dawley
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磷酸化调控泛素单体与Rad23A/Ubiquilin-1中泛素结合域互作的检测 预览
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作者 冉梦琳 覃凌云 +1 位作者 唐淳 董旭 《波谱学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期15-22,共8页
泛素(ubiquitin,Ub)是一种广泛存在、高度保守的信号蛋白质,它能够特异性识别成千上万种靶蛋白,以非共价方式行使不同的功能,其中包含蛋白质降解.Ubiquilin-1(Ubql-1)和Rad23A作为两种蛋白降解的转运因子,都包含有与泛素结合的结构域,... 泛素(ubiquitin,Ub)是一种广泛存在、高度保守的信号蛋白质,它能够特异性识别成千上万种靶蛋白,以非共价方式行使不同的功能,其中包含蛋白质降解.Ubiquilin-1(Ubql-1)和Rad23A作为两种蛋白降解的转运因子,都包含有与泛素结合的结构域,被称为泛素结合域(ubiquitin-associated domain,UBA).2014年,泛素S65位磷酸化修饰的特异性激酶PINK1被发现,磷酸化使泛素在溶液中呈现舒展态与收缩态两种互相转换的构象.本文通过核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术对UBA和磷酸化泛素之间的相互作用进行检测,观测磷酸化对UBA和泛素结合的影响.实验结果表明Rad23A-UBA2与Ubql-1 UBA都特异性的与磷酸化泛素的舒展态相互作用,但是磷酸化未改变泛素与UBA之间的亲和力.值得注意的是与Ubql-1 UBA相互作用时,磷酸化促进了泛素收缩态向舒展态的转换. 展开更多
关键词 泛素(Ub) 磷酸化 核磁共振(NMR) 蛋白质之间相互作用 泛素结合域(UBA)
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磷酸化壳聚糖对镉离子的吸附研究
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作者 罗珊 陈前林 +3 位作者 敖先权 谢燕 刘境 李宸 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期101-105,共5页
通过对壳聚糖(CS)进行磷酸化改性,文章制备了N-亚甲基磷酸壳聚糖(MPCS)吸附剂,探讨了MPCS对溶液中Cd^2+的吸附性能和吸附机理。结果表明:MPCS的吸附性能优于CS;MPCS用量为0.15 g,温度为303 K时,吸附率达到98.46%;其吸附行为符合Langmui... 通过对壳聚糖(CS)进行磷酸化改性,文章制备了N-亚甲基磷酸壳聚糖(MPCS)吸附剂,探讨了MPCS对溶液中Cd^2+的吸附性能和吸附机理。结果表明:MPCS的吸附性能优于CS;MPCS用量为0.15 g,温度为303 K时,吸附率达到98.46%;其吸附行为符合Langmuir吸附模型,MPCS对Cd^2+的最大饱和吸附容量为105.26 mg/g;MPCS对镉离子的吸附机理,主要是通过氨基以及磷酸酯基对Cd^2+进行配位作用。 展开更多
关键词 壳聚糖 磷酸化 镉离子 吸附机理 磷酸酯基
The expression of MAPK signaling pathways in conjunctivochalasis
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作者 Yuan-Ling Jia Xiao-Jing Liu +2 位作者 Hang Wen Yue-Ping Zhan Min-Hong Xiang 《国际眼科杂志:英文版》 SCIE CAS 2019年第11期1801-1806,共6页
This study investigated the potential role of MAPK signaling pathways in conjunctivochalasis(CCH). Twenty loose conjunctival biopsy samples from 20 CCH and 15 conjunctival biopsy samples from 15 normal controls(CON) w... This study investigated the potential role of MAPK signaling pathways in conjunctivochalasis(CCH). Twenty loose conjunctival biopsy samples from 20 CCH and 15 conjunctival biopsy samples from 15 normal controls(CON) were collected. The conjunctival fibroblasts were cultured in vitro. Immunofluorescence, ELISA, Western blot and reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) were used. Our results showed that the expression of p-ERK, p-JNK, and p-p38 in CCH conjunctiva was significantly higher than that in CON group. The expression of p38 MAPK, JNK, and ERK proteins in CCH fibroblasts was significantly higher than that in CON group. The total expression of MAPK m RNA in CCH fibroblasts was significantly higher than that in CON group. The activated forms of p38 MAPK, JNK, and ERK proteins and m RNAs might up-regulate the expression of MMPs in CCH loose conjunctival tissue and fibroblasts, causing the degradation of collagen fibers and elastic fibers and promoting the occurrence of CCH. Our results deepen the understanding of CCH pathological mechanism. 展开更多
关键词 ERK JNK p38 MAPK CONJUNCTIVOCHALASIS phosphorylation level
EB病毒抑制小肠上皮细胞增殖的ERK1/2途径分析
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作者 胡香珍 张艳飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期46-48,共3页
目的分析EB病毒(EB virus,EBV)抑制小肠上皮细胞增殖的机理,初步探讨EBV导致腹泻的病理机制。方法应用EBV作用于小肠上皮细胞,作用后0、12、24、36和48 h,采用MTT法检测细胞的增殖情况,Western blot法检测细胞MAPK(磷酸化的ERK1/2、JNK... 目的分析EB病毒(EB virus,EBV)抑制小肠上皮细胞增殖的机理,初步探讨EBV导致腹泻的病理机制。方法应用EBV作用于小肠上皮细胞,作用后0、12、24、36和48 h,采用MTT法检测细胞的增殖情况,Western blot法检测细胞MAPK(磷酸化的ERK1/2、JNK、p38)通路的表达情况。结果经EBV作用36及48 h的小肠上皮细胞存活率较24及12 h显著降低,并显著低于0 h(P<0.05);磷酸化ERK1/2的表达在36和48 h最低,显著低于其他3个时间点(P<0.05)。结论 EBV可抑制小肠上皮细胞的增殖,且通过抑制ERK1/2磷酸化途径实现。本实验为进一步研究EBV导致腹泻的发病机理提供了参考。 展开更多
关键词 EB病毒 小肠上皮细胞 MAPK通路 磷酸化
蛋白质翻译后修饰在ABA信号转导中的作用
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作者 张静 侯岁稳 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期300-315,共16页
脱落酸(ABA)是植物生长发育和逆境适应过程中非常关键的植物激素。植物响应ABA信号转导过程由信号识别、转导及响应级联完成,其中心转导途径由ABA受体RCAR/PYR/PYLs、磷酸酶PP2Cs、激酶SnRK2s、转录因子和离子通道蛋白构成。蛋白磷酸化... 脱落酸(ABA)是植物生长发育和逆境适应过程中非常关键的植物激素。植物响应ABA信号转导过程由信号识别、转导及响应级联完成,其中心转导途径由ABA受体RCAR/PYR/PYLs、磷酸酶PP2Cs、激酶SnRK2s、转录因子和离子通道蛋白构成。蛋白磷酸化、泛素化、类泛素化和氧化还原等翻译后修饰在ABA转导途径中起重要作用。该文综述了翻译后修饰在ABA信号转导中的作用。 展开更多
关键词 脱落酸 磷酸化 翻译后修饰 氧化还原修饰 类泛素化 泛素化
单核细胞增多性李斯特菌RsbR抗酸应激机制
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作者 Ke He Yong-Ping Xin +3 位作者 Ying Shan Xian Zhang Hou-Hui Song Wei-Huan Fang 《浙江大学学报:B卷英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第8期660-669,共10页
目的:探明单增李斯特菌RsbR的两个保守磷酸化位点是否影响SigB(sigmaB)的表达.创新点:解析了RsbR在单增李斯特菌中SigB网络调控中的作用.方法:通过基因缺失、定点突变和回补技术构建rsbR基因缺失株、回补株和回补突变菌株,进行酸应激条... 目的:探明单增李斯特菌RsbR的两个保守磷酸化位点是否影响SigB(sigmaB)的表达.创新点:解析了RsbR在单增李斯特菌中SigB网络调控中的作用.方法:通过基因缺失、定点突变和回补技术构建rsbR基因缺失株、回补株和回补突变菌株,进行酸应激条件下的生长能力和强酸条件下的存活能力试验,并检测在酸应激下菌株中的SigB基因和蛋白表达的改变情况.结论:RsbR缺失能够显著降低单增李斯特菌的抗酸应激能力和下调SigB表达,RsbR-175位点是SigB调控途径中RsbT释放的先决条件. 展开更多
关键词 单增李斯特菌 RsbR SIGB 抗酸应激
hCD47诱导人巨噬细胞对猪内皮细胞的免疫耐受 预览
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作者 胡文宝 潘登科 +2 位作者 DavidK.C.Cooper 蔡志明 牟丽莎 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期165-170,共6页
目的探讨人CD47(hCD47)在诱导人巨噬细胞对猪内皮细胞免疫耐受中的作用。方法将转染了pCDH-hCD47-FLAG质粒的猪髂总动脉内皮细胞(PIEC)设为pCDH-hCD47组;将转染了pCDH-FLAG空载体质粒的PIEC为pCDH组;将转染了hCD47-dN的PIEC设为pCDH-hCD... 目的探讨人CD47(hCD47)在诱导人巨噬细胞对猪内皮细胞免疫耐受中的作用。方法将转染了pCDH-hCD47-FLAG质粒的猪髂总动脉内皮细胞(PIEC)设为pCDH-hCD47组;将转染了pCDH-FLAG空载体质粒的PIEC为pCDH组;将转染了hCD47-dN的PIEC设为pCDH-hCD47-dN组;将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)设为阳性对照组。将细胞分别与人巨噬细胞共培养,检测信号调节蛋白α(SIRPα)的磷酸化情况以及人巨噬细胞对PIEC的杀伤作用。进一步从GT-/-及GT-/-/hCD47基因编辑猪中分离了猪主动脉血管内皮细胞(PAEC),并分析SIRPα的磷酸化情况及人巨噬细胞对PAEC的杀伤作用。结果 pCDH组细胞不能诱导SIRPα的磷酸化,而pCDH-hCD47组细胞与人巨噬细胞共培养10 min后便能够激活SIRPα的磷酸化,且随着共培养时间的延长,SIRPα的磷酸化程度也随之增强。pCDH-hCD47-dN组细胞不能激活SIRPα的磷酸化。人巨噬细胞对p CDH组细胞产生了明显的杀伤作用,p CDH-h CD47组细胞可明显抑制人巨噬细胞的杀伤作用(P<0.05),而pCDH-hCD47-dN组细胞则不能抑制人巨噬细胞的杀伤作用。GT-/--PAEC与人巨噬细胞共培养后,不能激活SIRPα的磷酸化;而GT-/-/hCD47-PAEC与人巨噬细胞共培养后则明显激活了SIRPα的磷酸化。人巨噬细胞对GT-/--PAEC产生了明显的杀伤作用,GT-/-/hCD47-PAEC可明显抑制人巨噬细胞的杀伤作用(P<0.05)。结论在猪内皮细胞中表达hCD47可以通过激活SIRPα的磷酸化抑制人巨噬细胞对内皮细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 异种移植 CD47 信号调节蛋白α 人巨噬细胞 内皮细胞 磷酸化 免疫排斥反应
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