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MicroRNA-30a-5p靶向Beclin1抑制自噬减轻牛胆酸钠诱导的胰腺泡细胞损伤 预览
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作者 郑学松 胡善策 冯广才 《实用药物与临床》 CAS 2019年第7期684-692,共9页
目的探究微小型RNA-30a-5p(MicroRNA-30a-5p,miR-30a-5p)对胰腺泡细胞损伤的影响及作用机制.方法不同浓度牛胆酸钠诱导AR42J细胞损伤,取最佳用药浓度,建立胰腺泡损伤模型.细胞分为Control组、Model组、mimicmock组及miR-30a-5p mimic组... 目的探究微小型RNA-30a-5p(MicroRNA-30a-5p,miR-30a-5p)对胰腺泡细胞损伤的影响及作用机制.方法不同浓度牛胆酸钠诱导AR42J细胞损伤,取最佳用药浓度,建立胰腺泡损伤模型.细胞分为Control组、Model组、mimicmock组及miR-30a-5p mimic组,牛胆酸钠及miR-30a-5p mimic处理细胞后,RT-PCR检测miR-30a-5p mRNA水平,MTT检测细胞存活,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测脂肪酶及淀粉酶活性,ELISA检测多种炎症因子的浓度,免疫印记检测自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达.生物信息预测miR-30a-5p和Beclin1的靶向关系,通过荧光素酶报告实验验证.pcDNA Beclin1(pc-Beclin1)及miR-30a-5p mimic转染经牛胆酸钠处理的AR42J细胞,检测细胞存活、凋亡、脂肪酶淀粉酶活性、自噬相关蛋白表达及炎症因子浓度.结果500μmol/L牛胆酸钠处理AR42J细胞.miR-30a-5p mimic可显著提高Model组AR42J细胞中miR-30a-5p的mRNA水平及细胞存活率,降低凋亡细胞百分比、脂肪酶淀粉酶活性及细胞培养上清中炎症因子的浓度.同时,miR-30a-5p mimic可显著降低Model组AR42J细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Beclin1表达,提高p62、p-P13K、p-Akt及p-mTOR表达.miR-30a-5p mimic显著降低Beclin1wt的荧光酶活性.pc-Beclin1显著上调Beclin1,提高LC3表达,并显著减弱miR-30a-5pmimic对AR42J细胞的促增殖抗凋亡作用及对炎症反应的抑制作用.结论miR-30a-5p通过靶向下调Beclin1,减轻牛胆酸钠诱导的胰腺泡细胞损伤. 展开更多
关键词 miR-30a-5p BECLIN1 胰腺泡细胞损伤 自噬
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红景天苷通过调节miR-30d-5p表达减弱大鼠心肌细胞肥大的机制研究 预览
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作者 楼婷婷 余平 毛竹君 《浙江中医药大学学报》 CAS 2019年第10期1162-1169,共8页
[目的]研究红景天苷(salidroside,SAL)调控微小RNA(microRNA,miR)改善大鼠心肌肥大的机制。[方法]采用苯肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,以miR基因芯片筛选出3组细胞(正常对照组、模型组和SAL组... [目的]研究红景天苷(salidroside,SAL)调控微小RNA(microRNA,miR)改善大鼠心肌肥大的机制。[方法]采用苯肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,以miR基因芯片筛选出3组细胞(正常对照组、模型组和SAL组)中有显著差异的miR,利用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因确定靶基因。以Real-time PCR与Western blot分别检测靶基因mRNA及蛋白表达。在分别以SAL、候选miR模拟物和抑制物干预后,检测心肌细胞的表面积,分析靶基因和靶蛋白的表达。[结果]基因芯片结果表明,模型组与正常对照组有14种miR存在显著差异,SAL组与模型组有10种miR存在显著差异。模型组miR-30d-5p表达水平显著低于正常对照组和SAL组(P<0.05),而SAL组miR-30d-5p表达量与正常对照组无统计学差异(P>0.05)。生物信息学方法和双荧光素酶报告基因测定确定葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein78,GRP78)是miR-30d-5p的靶基因。SAL能够上调PE刺激诱导的肥大心肌细胞的miR-30d-5p水平,抑制心肌细胞表面积增大;miR-30d-5p模拟物能抑制心肌细胞GRP78蛋白表达,而miR-30d-5p抑制物的作用结果相反。[结论]miR-30d-5p具有抑制心肌肥大的作用,SAL可能通过增加心肌细胞中miR-30d-5p的表达,抑制GRP78 mRNA及蛋白表达,从而改善心肌肥大。 展开更多
关键词 红景天苷 心肌肥大 基因芯片 miR-30d-5p GRP78
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舒筋接骨汤调控微小RNA?30a?5p/Sprouty1基因对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响
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作者 王均动 郑胜 王功国 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2019年第2期155-160,共6页
目的 探讨舒筋接骨汤对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖和成骨分化能力的影响及其可能作用机制.方法 培养hMSCs,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度舒筋接骨汤生药和下调Sprouty1对细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR(qRT?PCR)检测hMSCs中微小RN... 目的 探讨舒筋接骨汤对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖和成骨分化能力的影响及其可能作用机制.方法 培养hMSCs,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度舒筋接骨汤生药和下调Sprouty1对细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR(qRT?PCR)检测hMSCs中微小RNA?30a?5p(miR?30a?5p)表达水平,RT?qPCR和免疫印迹法检测不同分组细胞中Sprouty1及核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)mRNA和蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR?30a?5p靶向调控Sprouty1的作用.结果 舒筋接骨汤呈浓度依赖性促进hMSCs增殖,1 mg/ml时促进细胞增殖效果最佳;与对照组比较,舒筋接骨汤处理可明显促进hMSCs中miR30a?5p及RUNX2、OSX mRNA和蛋白表达(P<0.05),抑制Sprouty1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果显示miR?30a?5p靶向负调控Sprouty1的表达;下调Sprouty1促进hMSCs增殖及细胞中OSX、RUNX2 mRNA和蛋白表达.结论 舒筋接骨汤可能通过调控miR?30a?5p/Sprouty1基因表达,促进hMSCs增殖和成骨分化. 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 舒筋接骨汤 微小RNA?30a?5p Sprouty1
ApoE通过影响mir-30a-5p调控BDNF表达 预览
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作者 臧贵勇 潘开昌 +4 位作者 龙友国 余跃生 李成朋 官志忠 禹文峰 《中风与神经疾病杂志》 2018年第10期893-896,共4页
目的研究ApoE基因型是如何影响脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达,以更好的理解AD的发病机制。方法在SH-SY5Y细胞系和大鼠原代神经元中加入ApoE3和ApoE4重组蛋白,用real-time PCR、Western blot和ELIS... 目的研究ApoE基因型是如何影响脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达,以更好的理解AD的发病机制。方法在SH-SY5Y细胞系和大鼠原代神经元中加入ApoE3和ApoE4重组蛋白,用real-time PCR、Western blot和ELISA检测BDNF的表达水平;用luciferase assay、real-time PCR和Western blot证实BDNF是mir-30a-5p的靶基因;用TaqMan技术检测mir-30a-5p的水平。结果与对照组相比,ApoE3增加了BDNF的mRNA、蛋白水平和培养基中的BDNF浓度,而ApoE4减少了BDNF的mRNA、蛋白水平和培养基中的BDNF浓度;hsa-mir-30a-5p抑制BDNF的3’UTR的luciferase活性,mRNA和蛋白水平。ApoE3降低mir-30a-5p的表达,ApoE4增加mir-30a-5p的表达,而过表达mir-30a-5p inhibitor可以逆转ApoE4对BDNF的抑制效果。结论BDNF是mir-30a-5p的靶基因,ApoE是通过影响mir-30a-5p的水平来调控BDNF的表达。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 APOE 神经营养因子 mir-30a-5p
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miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制 预览
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作者 邱会 胡敏 钟敏钰 《中国现代医学杂志》 北大核心 2017年第15期1-4,共4页
目的 研究miR-30a-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和... 目的 研究miR-30a-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应(real time-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别测定两组泛素蛋白连接酶(UBE3C)mRNA和蛋白质表达水平。结果 培养48 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组[(203.7±16.8)%vs(330.4±20.7)%(P=0.000)];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比(258±30.2)%,对照组相对活细胞百分比(403.4±28.4)%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组(P=0.001)。细胞划痕实验示:miR-30a-5p组划痕愈合率为(23.2±2.7)%,对照组划痕愈合率为(89.2±4.8)%,miR-30a-5p组划痕愈合率低于对照组(P=0.000)。real time-PCR显示,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平为(0.15±0.02),对照组UBE3C mRNA表达水平为(1.03±0.09),miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组(P=0.000);Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C蛋白表达水平为(1.57±0.26),对照组UBE3C蛋白表达水平为(5.32±0.42),miR-30a-5p组UBE3C蛋白表达水平低于对照组(P=0.000)。结论 miR-30a-5p抑制NSCLC增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。 展开更多
关键词 miR-30a-5p 非小细胞肺癌 增殖 迁移
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miR-30a-5p靶向作用蛋白激酶B基因促进骨关节炎患者软骨细胞的凋亡
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作者 沈鹏飞 瞿玉兴 +4 位作者 王斌 徐建达 魏康 谢子康 马勇 《中华医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第39期3079-3084,共6页
目的观察miR-30a-5p在骨关节炎(OA)患者软骨组织中的表达及其对软骨细胞凋亡的作用机制。方法2015年5月至2016年12月,收集南京中医药大学附属常州中医医院骨科289例OA软骨组织标本。聚合酶链反应(qPCR)检测不同患者软骨组织中miR.... 目的观察miR-30a-5p在骨关节炎(OA)患者软骨组织中的表达及其对软骨细胞凋亡的作用机制。方法2015年5月至2016年12月,收集南京中医药大学附属常州中医医院骨科289例OA软骨组织标本。聚合酶链反应(qPCR)检测不同患者软骨组织中miR.30a-5p以及蛋白激酶B(Akt)mRNA的表达情况,Tunel法检测软骨细胞凋亡情况,免疫印迹法组织和细胞中相关蛋白的表达,流式细胞仪检测不同细胞凋亡情况和细胞周期。结果OA患者软骨组织miR.30a-5p相对表达量显著高于非OA[(3.64±0.95)比(1.03±0.31),P〈0.05],Akt基因表达较非OA显著下调[(0.41±0.17)比(1.08±0.26),P〈0.05];miR-30a-5p在OA患者软骨组织中的表达与AktmRNA表达呈负相关(r=0.7293,P〈0.001),与细胞凋亡率呈正相关(r=0.8475,P〈0.001);在SW1353细胞内miR-30a-5p靶向负调控Akt基因表达,高表达的miR-30a-5p显著下调p-Akt,IkB-α,p-IkB-α,p65,p—p65和mTOR基因,p-mTOR蛋白表达(P〈0.05);与正常SW1353细胞相比,转入miR-30a-5p—mimics的SW1353细胞凋亡率增加9.65倍,G0/G1期细胞增加1.37倍,S期细胞降低了60.94%,G2/M期细胞降低了19.53%。结论miR-30a-5p在OA患者软骨组织中呈现高表达,并且其高表达可以通过靶向作用Akt基因而将软骨细胞阻滞在GO/G1期,进而诱导软骨细胞的凋亡。 展开更多
关键词 软骨细胞 骨关节炎 软骨组织 miR-30a-5p 蛋白激酶B
miR-30a-5p在肾癌中的表达分析及临床意义研究 被引量:2
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作者 何韬 李一帆 +6 位作者 金露 胡佳 刘家驹 杨尚琪 桂耀庭 毛向明 来永庆 《临床泌尿外科杂志》 2016年第3期215-219,共5页
目的:本研究通过检测32对肾细胞癌组织标本及相应癌旁正常组织标本中miR-30a-5p的表达水平,然后分析miR-30a-5p的表达量与患者临床特征之间的关系,为更深一步研究miR-30a-5p在肾细胞癌的发病机制的作用和功能的研究打下基础。方法:收... 目的:本研究通过检测32对肾细胞癌组织标本及相应癌旁正常组织标本中miR-30a-5p的表达水平,然后分析miR-30a-5p的表达量与患者临床特征之间的关系,为更深一步研究miR-30a-5p在肾细胞癌的发病机制的作用和功能的研究打下基础。方法:收集32对经手术切除的肾细胞癌及相应的癌旁组织标本,提取标本的总RNA,经反转录获得cDNA,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测miR-30a-5p的表达水平,利用统计学方法分析其表达量与患者临床特征之间有无相关性。结果:32对组织标本中有27例(84.38%)肾细胞癌组织的miR-30a-5p表达水平下降(P〈0.01),且统计学分析表明其下降和患者的年龄、性别、组织学分型及临床分期等临床特征无明显相关性(P〉0.05)。结论:miR-30a-5p在肾癌组织中表达明显下调,提示其可能与肾癌的发生发展有一定的相关性。 展开更多
关键词 microRAN miR-30a-5p 肾细胞癌 肿瘤分期
反义miR-30a-5p抑制脑胶质瘤生长的体内实验研究
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作者 孙即奎 贾志凡 +3 位作者 浦佩玉 王广秀 张安玲 杨卫东 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2013年第2期149-152,共4页
目的探讨敲低微RNA(miR)-30a.5p表达对裸鼠荷人脑胶质瘤细胞U87移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法建立裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤模型,采用随机数字表法将其分为对照组、无义序列治疗组和miR-30a-5p反义寡聚核苷酸(AS—miR-30a-5p... 目的探讨敲低微RNA(miR)-30a.5p表达对裸鼠荷人脑胶质瘤细胞U87移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法建立裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤模型,采用随机数字表法将其分为对照组、无义序列治疗组和miR-30a-5p反义寡聚核苷酸(AS—miR-30a-5p)治疗组(每组8只)。分别给予相应治疗,隔日测量肿瘤大小以评估其疗效。治疗结束后处死动物,剥离肿瘤组织,提取RNA和蛋白,采用实时PCR方法检测治疗后miR.30a-5p表达水平,采用石蜡切片苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及Westernblot检测,评价治疗后肿瘤组织形态以及增殖、凋亡等生物学性状等相关指标的变化,包括隔蛋白7(SEFr7)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)以及凋亡相关因子P53、bcl-2、caspase3等;应用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。、结果AS—miR·30a·5p治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列组,差异有统计学意义(F=7.167,P〈0.05);其miR-30a-5p表达下调为对照组的0.297±0.051;肿瘤细胞恶性生物学表型相关蛋白PCNA、cyclinD1等表达明显下调,P53、SEFl7、caspase3等肿瘤生长抑制因子表达上调;细胞凋亡数明显增加。结论miR-30a-5p为靶点的治疗能有效抑制异种移植U87人脑胶质瘤生长,肿瘤恶性表型有明显逆转,可作为人脑胶质瘤靶向治疗的侯选靶点。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 寡核苷酸类 反义 药物疗法 miR-30a-5p
小儿原发性肾病综合征患者血清和尿液miR-30a-5p水平增加及临床意义 预览 被引量:5
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作者 时永辉 罗阳 +7 位作者 王成 陈熹 曾科 张辰宇 夏正坤 蔡晓懿 汪俊军 张春妮 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第3期14-18,共5页
目的 检测分析原发性肾病综合征(NS)患儿血清全基因组微小核糖核酸(miRNA)表达谱,验证其中表达上调的miR-30a-5p,探讨其作为NS分子诊断指标的可能性.方法 收集南京军区南京总医院2010~2011年期间33例住院NS患儿未经治疗前血清和尿... 目的 检测分析原发性肾病综合征(NS)患儿血清全基因组微小核糖核酸(miRNA)表达谱,验证其中表达上调的miR-30a-5p,探讨其作为NS分子诊断指标的可能性.方法 收集南京军区南京总医院2010~2011年期间33例住院NS患儿未经治疗前血清和尿液样本,同时以30例年龄、性别匹配的健康儿童作对照.用高通量的TaqMan低密度芯片技术分别检测NS患儿和健康儿童的混合血清全基因组miRNA的表达量,再用TaqMan实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对在患儿血清中表达上调的miR-30a-5p进行验证,同时测定miR-30a-5p在尿液中的含量.结果 低密度芯片结果显示,30种miRNA在患儿血清中的表达量是健康儿童的2倍以上,其中miR-30a-5p为正常对照的104倍.qRT-PCR检测证实,miR-30a-5p在患儿血清中的含量4.34±0.08,显著高于对照组1.00±0.02(Z=5.916,P〈0.000 1),在患儿尿液中的水平也明显升高(3.44±0.05 vs 1.00±0.04)(Z=3.312,P=0.001).用于诊断NS的血清miR-30a-5p ROC曲线下面积(AUCROC)为0.960(95% CI,0.915~1.000),敏感度和特异度均为98.3%.相关性分析显示,血清或尿液中的miR-30a-5p含量与患儿年龄、性别、肾功能及血脂水平均无明显关联(P〉0.05).结论 NS患儿血清miRNA表达谱与健康儿童有明显差异,miR-30a-5p在患儿血清及尿液中水平显著升高,与NS密切相关,是NS潜在的分子诊断指标. 展开更多
关键词 原发性小儿肾病综合征 血清 尿液 微小核糖核酸 miR-30a-5p
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反义miR-30a-5p抑制人脑胶质瘤细胞U87生长的体外实验研究 被引量:2
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作者 贾志凡 王坤 +3 位作者 张安玲 王广秀 郝建伟 浦佩玉 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2011年第8期851-854,共4页
目的前期发现miR-30a-5p在胶质瘤中表达明显上调,本实验探究敲低miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U87细胞生物学特征的影响。方法real—timePCR检测转染miR-30a-5pI(miR-30a-5p抑制物)后U87细胞的miR-30a-5p表达水平,流式细胞术、MTT、Tr... 目的前期发现miR-30a-5p在胶质瘤中表达明显上调,本实验探究敲低miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U87细胞生物学特征的影响。方法real—timePCR检测转染miR-30a-5pI(miR-30a-5p抑制物)后U87细胞的miR-30a-5p表达水平,流式细胞术、MTT、Transwell、AnnexinV法检测细胞周期、生长、侵袭及凋亡的改变;Western blot检测相关蛋白。结果real—timePCR结果显示miR-30a-5pI可有效降低U87细胞中miR-30a-5p表达,抑制细胞增殖活性,使细胞周期阻滞在G0/G1期,侵袭能力明显受抑,凋亡增加,促增殖蛋白PCNA、促细胞周期进展蛋白Cyclin D1及促侵袭蛋白MMP-9的表达明显下调,而抑制侵袭蛋白TIMP-1及凋亡相关蛋白p53表达明显上调。结论敲低U87细胞的miR-30a-5p表达可抑制胶质瘤的增殖及侵袭,诱导凋亡;miR-30a-5p可成为人脑胶质瘤基因治疗的潜在候选靶点。 展开更多
关键词 MiR-30a-5p 神经胶质瘤 细胞增殖 侵袭 细胞凋亡
rno-miR-30b-5p对葡萄膜炎大鼠Notch1和Dll4基因表达的调控作用 预览
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作者 殷学伟 刘滨 +3 位作者 魏慧霞 唐凯 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第1期12-16,共5页
目的探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6~8周龄健康L... 目的探讨rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法应用双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Notch1和Dll4基因表达的调控作用。6~8周龄健康Lewis大鼠12只,随机分为对照组和EAU模型组,EAU模型组大鼠建立EAU模型。于免疫后12 d分离大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测rno-miR-30b-5p、Notch1和Dll4基因的表达水平,ELISA检测Notch1和Dll4蛋白的表达变化;流式细胞仪检测两组大鼠脾脏和淋巴结中Th17和Treg细胞的表达水平。结果双荧光素酶检测结果表明,Notch1和Dll4为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。Q-PCR分析结果显示,相比于正常对照组(1.00),免疫后12 d,rno-miR-30b-5p基因在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中的相对表达水平分别为0.41±0.12、0.37±0.09和0.25±0.07,均呈显著下调表达,而Notch1和Dll4基因呈显著上调表达,且差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Notch1和Dll4蛋白的表达水平均明显高于对照组(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞因子的表达水平明显升高,而Treg细胞因子的表达水平明显降低。结论rno-miR-30b-5p可负调控Notch1和Dll4基因的表达。在EAU模型大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织中,rno-miR-30b-5p的下调表达可使Notch1和Dll4基因的表达水平显著升高,并使Th17/Treg比例发生紊乱,从而影响葡萄膜炎的发生发展。 展开更多
关键词 rno-miR-30b-5p NOTCH1 DLL4 实验性自身免疫性葡萄膜炎
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血浆微小RNA-30c-5p水平与稳定型心绞痛患者冠状动脉病变严重程度的相关性 预览
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作者 左红 侯文兵 《临床内科杂志》 CAS 2019年第1期32-35,共4页
目的 探讨血浆微小RNA(miR)-30c-5p水平与稳定型心绞痛(SAP)患者冠状动脉病变严重程度的相关性.方法 根据SYNTAX评分结果,将114例SAP患者分为轻度组42例、中度组40例及重度组32例,选择42例经冠状动脉造影证实无冠状动脉疾病的住院患者... 目的 探讨血浆微小RNA(miR)-30c-5p水平与稳定型心绞痛(SAP)患者冠状动脉病变严重程度的相关性.方法 根据SYNTAX评分结果,将114例SAP患者分为轻度组42例、中度组40例及重度组32例,选择42例经冠状动脉造影证实无冠状动脉疾病的住院患者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测4组患者血浆miR-30c-5p表达水平并进行比较.采用Spearman相关性分析评估血浆miR-30c-5p表达水平与SYNTAX评分的关系.采用多元线性回归分析和多元logistic回归分析评估SYNTAX评分的影响因素.结果 4组间有高脂血症病史、入院后使用氯吡格雷、β-受体阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)/血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)、他汀类药物患者比例及SYNTAX评分比较,差异均有统计学意义(P<0.05).对照组、轻度组、中度组、重度组miR-30c-5p表达水平分别为1.02±0.22、0.95±0.23、0.72±0.21、0.65±0.18,中度组和重度组均低于轻度组和对照组(P<0.05),余两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).Spearman相关性分析结果显示,SAP患者血浆miR-30c-5p表达水平与SYNTAX评分呈正相关(r=0.48,P=0.01).多元线性回归分析结果显示,年龄、糖尿病病史、血浆miR-30c-5p水平与SYNTAX评分独立相关(P<0.05).多元logistic回归分析结果显示,血浆miR-30c-5p水平是SYNTAX评分的独立预测因素(P<0.05).结论 血浆miR-30c-5p水平与SYNTAX评分相关,有望成为评估SAP患者冠脉病变严重程度的生物标志物. 展开更多
关键词 血浆miR-30c-5p 稳定型心绞痛 冠状动脉疾病
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rno-miR-30b-5p调控Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用 预览
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作者 刘滨 孙园园 +4 位作者 殷学伟 唐凯 王慧 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 北大核心 2018年第4期301-305,共5页
目的探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控... 目的探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法双荧光素酶检测rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用。Lewis大鼠随机分为正常对照组和EAU组,每组各6只,EAU组诱导EAU模型,两组大鼠每天用Genesis-D眼底相机观察眼底情况。免疫后12 d,取眼球观察睫状体、视网膜的病理学表现;分离大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测rno-miR-30b-5p、Atg5、Atg12和Becn1 mRNA的表达情况;ELISA方法检测Atg5、Atg12和Becn1蛋白的表达水平。结果双荧光素酶检测结果证实Atg5、Atg12和Becn1为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。免疫后12 d,EAU组大鼠眼底血管严重肿胀,病理学检测可见睫状体、视网膜内大量炎性细胞浸润。Q-PCR检测结果示,与正常对照组相比,免疫后12 d EAU组大鼠脾脏和淋巴结中rno-miR-30b-5p mRNA水平分别为0.46±0.01和0.29±0.17,均呈下调表达(均为P<0.01);Atg5、Atg12和Becn1 mRNA水平均呈上调表达,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA检测结果示,EAU组大鼠脾脏和淋巴结中Atg5、Atg12和Becn1蛋白表达水平均明显高于正常对照组大鼠(均为P<0.05)。结论rno-miR-30b-5p可调控Atg5、Atg12和Becn1的表达。在EAU大鼠脾脏和淋巴结中,rno-miR-30b-5p的下调表达使Atg5、Atg12和Becn1基因和蛋白的表达水平均明显升高,从而影响葡萄膜炎的发展进程。 展开更多
关键词 rno-miR-30b-5p Atg5 Atg12 Becn1 葡萄膜炎
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miR-30b-5p抑制胆固醇合成和结直肠癌细胞增殖 预览 被引量:1
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作者 张亚珍 何贵省 +2 位作者 吴晓明 宋杰峰 吴煌福 《安徽医科大学学报》 北大核心 2018年第7期1057-1062,共6页
目的探索miR-30b-5p在结直肠癌中的作用及机制。方法收集结直肠癌患者的癌及癌旁组织、患者及正常人血清,提取RNA,实时荧光定量PCR检测miR-30b-5p表达。将miR-30b-5p的inhibitors转入HT-29细胞中;将miR-30b-5p的mimics转入HCT-116细胞中... 目的探索miR-30b-5p在结直肠癌中的作用及机制。方法收集结直肠癌患者的癌及癌旁组织、患者及正常人血清,提取RNA,实时荧光定量PCR检测miR-30b-5p表达。将miR-30b-5p的inhibitors转入HT-29细胞中;将miR-30b-5p的mimics转入HCT-116细胞中;CCK-8试剂盒检测细胞活力;胆固醇试剂盒检测细胞中胆固醇含量;实时荧光定量PCR检测低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达,Western blot检测LDLR蛋白表达;在转入miR-30b-5p inhibitors的HT-29细胞中应用siRNA敲低LDLR,检测LDLR蛋白表达、细胞胆固醇含量及细胞增殖。结果与正常人相比,miR-30b-5p在结直肠癌患者组织及血清中表达降低,且其在结直肠癌细胞系HT-29、Caco-2及HCT-116中的表达量低于正常结直肠细胞系NCM460;在HT-29细胞中转入miR-30b-5p的inhibitors,细胞增殖加快,胆固醇含量增加,LDLR表达上调;在HCT-116细胞中转入miR-30b-5p的mimics,细胞增殖减慢,胆固醇降低,LDLR表达被抑制;此外,在miR-30b-5p沉默的HT-29细胞中敲低LDLR,胆固醇含量减少,细胞增殖减慢。结论 miR-30b-5p在结直肠癌中是一种抑癌microRNA,它通过抑制LDLR和胆固醇合成抑制结直肠癌细胞增殖。 展开更多
关键词 结直肠癌 miR-30b-5p LDLR 胆固醇 增殖
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miR-30e-5p调控口腔鳞癌细胞增殖和迁移的实验研究 预览
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作者 朱雪琴 叶冬霞 +1 位作者 秦星 陈万涛 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2018年第3期135-141,共7页
目的:研究miR-30e-5p对口腔鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响,探讨其在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法:实时荧光定量PCR检测miR-30e-5p在人口腔鳞癌组织、癌旁组织、正常口腔黏膜上皮细胞和HN6细胞系中的表达水平。应用miR-30e-5p mimics... 目的:研究miR-30e-5p对口腔鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响,探讨其在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法:实时荧光定量PCR检测miR-30e-5p在人口腔鳞癌组织、癌旁组织、正常口腔黏膜上皮细胞和HN6细胞系中的表达水平。应用miR-30e-5p mimics、miR-30e-5p inhibitor、mimics NC、inhibitor NC分别转染HN6细胞,实时荧光定量PCR检测转染后miR-30e-5p的表达变化;采用细胞增殖实验、平板克隆形成实验、划痕实验分别检测miR-30e-5p对HN6细胞生长和迁移的影响。结果:相对于癌旁正常组织,miR-30e-5p在口腔鳞癌组织中的表达显著下调(P<0.05)。相对于正常口腔黏膜上皮细胞,miR-30e-5p在口腔鳞癌细胞中的表达显著下调(P<0.05)。转染miR-30e-5p mimics后,HN6细胞的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力显著降低,而转染miR-30e-5p inhibitor后,HN6细胞的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力则明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-30e-5p在口腔鳞癌组织中低表达,与口腔鳞癌细胞的生长和迁移密切相关,提示miR-30e-5p在口腔鳞癌的发生、发展过程中可能起抑癌基因的作用。 展开更多
关键词 miR-30e-5p 口腔鳞癌 增殖 迁移
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miR-30b-5p在乳腺癌中的表达及靶基因预测与生物信息学分析 预览
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作者 王莎莎 朱君 +2 位作者 孙雷涛 刘伟先 王晓红 《滨州医学院学报》 2017年第6期407-411,共5页
目的为深入研究miR-30b-5p在乳腺癌形成和发展中的作用提供理论依据。方法原位杂交法(ISH)检测乳腺癌与癌旁组织中miR-30b-5p的表达。探针荧光定量PCR比较乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况。软件预测miR-30b-5p的靶基因,进行KEGG及GO... 目的为深入研究miR-30b-5p在乳腺癌形成和发展中的作用提供理论依据。方法原位杂交法(ISH)检测乳腺癌与癌旁组织中miR-30b-5p的表达。探针荧光定量PCR比较乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况。软件预测miR-30b-5p的靶基因,进行KEGG及GO富集分析。结果 ISH显示乳腺癌组织中miR-30b-5p表达明显下调,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P〈0.01);miR-30b-5p的表达水平与TNM分期及远处转移等有关(P〈0.01),而与年龄和淋巴结转移无关(P〉0.05)。比较MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-415,MDA-MB-453,和MDA-MB-468这5株乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况,发现较正常乳腺组织呈不同程度的低表达,并且以侵袭性最强的MDA-MB-231细胞的表达最低(P〈0.01)。在乳腺癌中,KEGG分析显示miR-30b-5p的靶基因参与了Pathways in cancer、P53signaling pathway、Wnt signaling pathway、Cell cycle等通路,GO分析显示miR-30b-5p具有细胞代谢调控、基因表达调控、RNA代谢调控等生物功能。结论 miR-30b-5p在乳腺癌中表达明显下调,可能通过参与Pathways in cancer、P53signaling pathway、Wnt signaling pathway、Cell cycle等通路,对乳腺癌细胞的代谢、基因表达等功能具有重要影响。 展开更多
关键词 miR-30b-5p 乳腺癌 生物信息学 KEGG通路分析 GO功能富集分析
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rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-10和Toll样受体4表达的调控作用 预览 被引量:4
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作者 孙园园 郭大东 +4 位作者 陈美清 李少玉 刘滨 唐凯 毕宏生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第4期330-334,共5页
目的探讨rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的调控作用。方法构建IL-10、TLR4基因的3’端非编码区域(3’UTR)荧光素酶质粒载体以及结合位点突变质... 目的探讨rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的调控作用。方法构建IL-10、TLR4基因的3’端非编码区域(3’UTR)荧光素酶质粒载体以及结合位点突变质粒载体,将rno-miR-30b-5p模拟物(mimic)与构建好的报告基因载体共转染293T细胞,通过报告基因相对荧光值的表达改变检测rno-miR-30b-5p对IL-10、TLR4表达的调控作用;制备实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)模型,通过注射视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白乳糜液,在造模后12 d分离EAU大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR检测rno-miR-30b-5p和IL-10、TLR4基因的表达情况;ELISA检测IL-10和TLR4蛋白的表达情况。结果双荧光素酶报告基因表达结果表明,经rno-miR-30b-5p mimic干预后IL-10、TLR4野生型的报告荧光有明显的下调作用,对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光也存在明显的下调作用,与阴性对照相比,差异均有统计学意义(均为P〈0.01)。实时荧光定量PCR检测结果发现rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结中的表达均较对照组明显降低(均为P〈0.01),而IL-10 mRNA、TLR4 mRNA表达明显升高(均为P〈0.01);ELISA检测发现IL-10、TLR4蛋白表达升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P〈0.05)。结论rno-miR-30b-5p对带有IL-10、TLR4基因片段3’UTR基因表达的调控作用可能不是通过预测到的位点起作用而是通过其他的调控结合位点发挥作用;rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结的下调表达导致IL-10和TLR4的表达水平升高,进而调控葡萄膜炎的发展。本研究为进一步探索microRNA在葡萄膜炎发生发展进程中的调控作用、治疗葡萄膜炎奠定了基础。 展开更多
关键词 rno—miR-30b-5p 荧光素酶质粒载体 白细胞介素-10 TOLL样受体4 葡萄膜炎
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MicroRNA-30e-5p通过下调泛素特异性蛋白酶22抑制非小细胞肺癌的发生和发展 被引量:1
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作者 徐高俊 蔡捷 +2 位作者 黄健兵 梅举 丁芳宝 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1410-1417,共8页
目的 探讨microRNA-30e-5p(miR-30e-5p)是否可通过下调泛素特异性蛋白酶22(USP22)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)的发生和发展。方法 采用qPCR、蛋白质印迹法和免疫组织化学染色法检测miR-30e-5p、USP22在NSCLC组织和癌旁组织中的表达。... 目的 探讨microRNA-30e-5p(miR-30e-5p)是否可通过下调泛素特异性蛋白酶22(USP22)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)的发生和发展。方法 采用qPCR、蛋白质印迹法和免疫组织化学染色法检测miR-30e-5p、USP22在NSCLC组织和癌旁组织中的表达。NSCLC细胞株H460转染miR-30e-5p模拟物或miR-30e-5p抑制物后,利用qPCR和蛋白质印迹法检测细胞中miR-30e-5p、USP22的表达。构建USP22突变载体,采用荧光素酶报告基因检测miR-30e-5p在USP22基因中的结合位点。采用MTT法检测转染后H460细胞的增殖情况,并采用异种移植法检测裸鼠体内肿瘤生长情况。流式细胞术检测转染后H460细胞的周期阻滞和凋亡情况。结果 MiR-30e-5p、USP22在肿瘤组织中的表达均高于癌旁组织(P均〈0.01)。在H460细胞中过表达miR-30e-5p后USP22 mRNA和蛋白的表达均下调(P均〈0.01),而抑制miR-30e-5p表达后USP22mRNA和蛋白的表达均上调(P均〈0.01)。NSCLC组织中miR-30e-5p与USP22的表达呈负相关(P〈0.01)。miR-30e-5p可通过结合在3′UTR的特异序列负调控USP22的表达。过表达miR-30e-5p可抑制H460细胞的增殖、诱导细胞周期阻滞和凋亡,并抑制裸鼠体内肿瘤的生长(P〈0.05,P〈0.01);而抑制miR-30e-5p的表达可促进H460细胞的增殖、抑制细胞周期阻滞和凋亡(P〈0.05,P〈0.01)。结论 MiR-30e-5p可以下调USP22的表达,从而抑制NSCLC的发生和发展,提示其可作为NSCLC患者的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 肺肿瘤 非小细胞肺癌 miR-30e-5p 泛素特异性蛋白酶22 癌基因 肿瘤抑制基因
miR-30 c-5p在肿瘤中表达和功能的研究进展 预览 被引量:3
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作者 杨晓冬 陈力 +4 位作者 金玉麟 王琳 詹成 时雨 王群 《复旦学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期362-367,共6页
miR-30 c-5p是miR-30家族的重要成员,研究表明其在肺癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌等多种肿瘤组织以及患者血浆、血清中表达异常,并且其作用于肿瘤的增殖、侵袭和迁移以及多种肿瘤相关基因和通路等,暗示其在肿瘤诊断、治疗、监测和... miR-30 c-5p是miR-30家族的重要成员,研究表明其在肺癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌等多种肿瘤组织以及患者血浆、血清中表达异常,并且其作用于肿瘤的增殖、侵袭和迁移以及多种肿瘤相关基因和通路等,暗示其在肿瘤诊断、治疗、监测和预后预测等方面有一定的应用价值。本文就miR-30 c-5p在肿瘤中表达和功能的研究进展进行简要综述。 展开更多
关键词 miR-30 c-5p 肿瘤 上皮间质内转化 耐药
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尿液miR-30a-5p预测激素治疗局灶节段性肾小球硬化的疗效 被引量:1
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作者 张婉芬 陈慧梅 +2 位作者 张昌明 施少林 刘志红 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期517-522,共6页
目的:前期研究已经证实尿液miR-30a-5p、miR-196a及miR-490的水平与局灶节段性肾小球硬化(FSGS)的关系密切,本研究旨在探讨尿液miRNAs水平与FSGS患者激素治疗反应间的关系. 方法:同时回顾性和前瞻性分析接受激素治疗的原发性FSGS患... 目的:前期研究已经证实尿液miR-30a-5p、miR-196a及miR-490的水平与局灶节段性肾小球硬化(FSGS)的关系密切,本研究旨在探讨尿液miRNAs水平与FSGS患者激素治疗反应间的关系. 方法:同时回顾性和前瞻性分析接受激素治疗的原发性FSGS患者,分别观察治疗前后和随访过程中尿液中miRNAs水平和尿蛋白定量,分析尿液miRNAs与尿蛋白变化之间的规律关系. 结果:回顾性分析139例FSGS患者,68例经激素治疗后完全缓解(CR组),71例患者经治疗未完全缓解(non-CR组).治疗前两组患者的性别、年龄和尿蛋白、血清肌酐、总胆固醇水平相似,尿miR-196a和miR-490水平在两组之间亦无显著差异,CR组的尿miR-30a-5p水平显著低于non-CR组(P=0.03).尿miR-30a-5p的水平能预测FSGS患者对激素治疗的反应(AUC=0.628,P=0.03).前瞻性观察了55例FSGS患者,激素治疗8周后33例获得CR,尿miR-30a-5p的表达水平随着蛋白尿的缓解而显著下降(P<0.001);而经激素治疗non-CR患者的尿miR-30a-5p水平则与激素治疗无显著关系.进一步前瞻性观察了22例初治的FSGS患者证实,CR组的尿miR-30a-5p的水平随激素治疗逐渐下降(P<0.001);其下降幅度在4周时即与non-CR组即存在显著差异(P=0.003),同期二组尿蛋白的变化尚无明显差异(P=0.29). 结论:尿miR-30a-5p的水平与FSGS激素治疗反应直接相关,并在治疗过程中于尿蛋白之前出现显著变化,可作为预测FSGS激素治疗效果和预后的标志物. 展开更多
关键词 局灶节段性肾小球硬化 激素
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