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长链非编码RNA ZFAS1在非小细胞肺癌中的表达 预览
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作者 聂军 《中国继续医学教育》 2019年第25期174-176,共3页
目的检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer. NSCLC)患者癌组织中锌指结构反义转录本1( zine finger antisense 1, ZFAS1)表达水平,探讨ZFAS1 在NSCLC 进展中的生物学作用。旨在探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)... 目的检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer. NSCLC)患者癌组织中锌指结构反义转录本1( zine finger antisense 1, ZFAS1)表达水平,探讨ZFAS1 在NSCLC 进展中的生物学作用。旨在探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在非小细胞肺癌组织中的表达水平。方法通过RNA 提取及聚合酶链定量反应,质粒构建及细胞转染,细胞生长曲线和克隆形成和Western blot 检测RACI 蛋白表达等程序,研究60 例非小细胞肺癌组织及癌旁肺组织中ZFASl 的表达水平。结果锌指结构反义转录本1( zine finger antisense 1, ZFAS1)基因敲减后,A549 细胞增殖能力明显减弱(P < 0.01);A549 细胞周期G 期比例升高,S 期比例下降(P < 0.01);A549 细胞凋亡比例明显增加(P < 0.01);A549 细胞迁移和侵袭能力明显下降(P 均< 0.01);A549 细胞中CyclinDI、Bcl2、N-cadherin、ZEBI、Slug 和Twist 基因表达水平均降低(P均< 0.05)。结论 ZFAS1 在NSCLC 患者癌组织中呈高表达。ZFAS1基因敲减诱导细胞周期阻滞、凋亡和抑制上皮-间质转变(epithelialmesenchymaltransition, EMT),减弱NSCLC 细胞增殖、迁移和侵袭能力。与癌旁肺组织相比较之下,ZFASl 在非小细胞肺癌组织中的表达出现了明显的下调。且其表达水平与60 位患者的病例有显著的相关性,包括患者肿瘤的大小、分化程度、淋巴转移与远端转移等。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 非小细胞肺癌 ZFASl 体外试验 细胞周期 基因表达
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基于单链DNA开关调控的多功能生物电路
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作者 胡亚赛 郜艳敏 +1 位作者 郝敏 齐浩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1135-1144,共10页
合成生物电路在生物传感及生物计算方面成为了广泛应用的工具。工程化生物电路系统具有良好的灵活性,同时也具备模块化的特征。在本文中,研究了基于单链DNA开关调控的多功能生物电路的构建方法。通过将计算机辅助设计的单链DNA开关作为... 合成生物电路在生物传感及生物计算方面成为了广泛应用的工具。工程化生物电路系统具有良好的灵活性,同时也具备模块化的特征。在本文中,研究了基于单链DNA开关调控的多功能生物电路的构建方法。通过将计算机辅助设计的单链DNA开关作为核心控制元件,并利用长度为20 bp的toehold区域来激活单链DNA开关,驱动了简单的单向式、循环式以及级联的多层次的生物电路系统。在级联式电路系统中,通过调整单链DNA开关的结构,使信噪比从2.996变成5.274。同时,单链DNA开关作为长单链DNA(784 bp)的一部分,在无细胞蛋白质系统中实现了基因表达调控。因此,本文研究的工程化方法为今后复杂的人工生物电路的构建提供了坚实的技术基础。 展开更多
关键词 单链DNA开关 生物电路 级联 体外基因表达
体外受精-胚胎移植对早期胎盘黏着斑激酶信号通路的影响 预览
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作者 赵亮 孙丽芳 +7 位作者 郑秀丽 刘静芳 郑蓉 王颖 杨蕊 张蕾 于丽 张晗 《北京大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期151-158,共8页
目的:研究辅助生殖中体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)技术对早期胎盘滋养层细胞黏着斑激酶(focal adhension kinase,FAK)信号通路基因表达的影响,探讨IVF-ET技术对早期胎盘发育和功能的影响。方... 目的:研究辅助生殖中体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)技术对早期胎盘滋养层细胞黏着斑激酶(focal adhension kinase,FAK)信号通路基因表达的影响,探讨IVF-ET技术对早期胎盘发育和功能的影响。方法:收集IVF-ET来源的于7~8周经超声引导下减胎获得的胎盘绒毛组织作为研究组,对照组采用自然妊娠双胎7~8周人工流产术中获得的胎盘绒毛组织。利用美国Affymetrix HG-U133 Plus 2.0基因芯片对两组胎盘绒毛组织进行芯片杂交分析,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证其中8个差异表达基因,选取差异表达基因进行无监督聚类分析和生物信息学分析。结果:获得4例IVF-ET减胎绒毛组织和4例自然妊娠人工流产绒毛组织进行基因芯片检测。与自然妊娠组相比,IVF-ET组FAK信号通路中有32个基因差异表达,差异表达倍数≥2,其中12个基因上调,20个基因下调。经qRT-PCR验证,IVF-ET与自然妊娠早期胎盘绒毛中的8个FAK信号通路基因表达确实存在差异,与基因芯片检测结果一致。FAK信号通路基因定位显示,IVF-ET来源胎盘绒毛组织FAK信号通路上游基因表达受到影响,胎盘滋养层细胞通过基因表达代偿维持FAK信号通路功能基本正常。结论:IVF-ET来源和自然妊娠来源的早期胎盘FAK信号通路存在基因表达差异,差异表达基因涉及多种FAK信号通路关键功能,影响IVF-ET胎盘绒毛早期发育和功能,同时胎盘滋养层细胞通过改变相关基因表达来代偿IVF-ET技术本身的干扰,以维持FAK信号通路正常功能,满足胎盘绒毛和胎儿发育需要。 展开更多
关键词 受精 体外 胚胎移植 滋养层 黏着斑激酶 基因表达
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家蚕翅原基发育关联基因BmHMGS的鉴定与表达特征分析
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作者 蒋诗梦 钟杨生 +3 位作者 林碧敏 陈芳艳 严会超 林健荣 《蚕业科学》 CSCD 北大核心 2018年第2期242-248,共7页
家蚕幼虫的翅原基最终发育为成虫的翅,翅原基发育与家蚕的变态发育紧密关联。为了研究激素作用下家蚕翅原基发育的分子调控机制,以经过蜕皮激素20E体外诱导培养和未经诱导培养的家蚕5龄幼虫翅原基为材料分别提取总蛋白质,利用Shotgun质... 家蚕幼虫的翅原基最终发育为成虫的翅,翅原基发育与家蚕的变态发育紧密关联。为了研究激素作用下家蚕翅原基发育的分子调控机制,以经过蜕皮激素20E体外诱导培养和未经诱导培养的家蚕5龄幼虫翅原基为材料分别提取总蛋白质,利用Shotgun质谱分析在20E诱导组的翅原基中获得132种差异蛋白,在未经20E诱导组的翅原基中获得76种差异蛋白。进一步通过生物信息学技术及GO分类法在20E诱导组的翅原基的差异蛋白中,筛选到1个具有生物调节作用的酶类蛋白基因Bm HMGS作为翅原基发育相关的候选基因,设计引物并以上蔟1 d的蚕体翅原基总RNA反转录得到的c DNA为模板,克隆了该基因。通过qRT-PCR检测到Bm HMGS基因在幼虫5龄1 d、上蔟3 d、蛹期1 d蚕体内的表达量较高,其中在上蔟3 d的表达量达到峰值。构建重组载体进行Bm HMGS的原核表达并制备抗体后,采用Western blot技术在5龄1~7 d和上蔟1~3 d的蚕体翅原基、脂肪体中及上蔟1~3 d的生殖腺中都可以检测到Bm HMGS的表达,并且在翅原基中的表达没有发育时期特异性。研究结果表明,从20E诱导组的家蚕翅原基中鉴定的Bm HMGS与翅原基发育相关,其表达在5龄至上蔟阶段没有时期和组织的特异性,推测Bm HMGS是一个具有多种生物学功能的基因。 展开更多
关键词 家蚕翅原基 体外培养 蜕皮激素 Shotgun质谱 BmHMGS基因 表达特征
三七皂苷单体对成骨细胞增殖和矿化功能的影响 预览 被引量:1
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作者 林天骥 邵莉 +1 位作者 柳毅 陈建治 《口腔医学》 CAS 2018年第2期127-131,共5页
目的观察三七皂苷单体(Notoginsenoside R1,NGR1)和成骨细胞之间的相关性。方法将成骨前体细胞MC3T3-E1培养于含有10%FBS(GibcoTMInvitrogen)的α-MEM培养基中,通过在各培养孔中加入不同体积质量的三七皂苷单体来研究体外三七皂苷... 目的观察三七皂苷单体(Notoginsenoside R1,NGR1)和成骨细胞之间的相关性。方法将成骨前体细胞MC3T3-E1培养于含有10%FBS(GibcoTMInvitrogen)的α-MEM培养基中,通过在各培养孔中加入不同体积质量的三七皂苷单体来研究体外三七皂苷单体对成骨细胞的影响,检测方法为:荧光定量法检测细胞增殖情况;比色法检测细胞成骨分化的ALP活性情况;ELISA对各组OCN含量进行检测;RT-PCR检测,将β-actin表达作为内参照依据,校准各基因的临床表达水平情况。结果同一时间点各体积质量的三七皂苷单体均呈现开口向下的抛物线状作用趋势,即在50 mg/L时显著促进细胞增殖,随后效果下降,超过100 mg/L则抑制细胞增殖(P〈0.05);体积质量在50 mg/L时三七皂苷单体可显著促进ALP活性,随着体积质量的升高达到峰值后下降;早期三七皂苷单体上调OCN表达并无显著差异,7 d后其上调OCN表达量呈现体积质量依赖效应递增趋势;相关基因表达方面,三七皂苷单体在体积质量为50 mg/L时,对Runx2和OCN的基因表达均有较为明显促进作用,达到平台期后促进作用趋于稳定。结论从成骨细胞增殖数量、碱性磷酸酶活性、骨钙素表达量等方面证实了一定体积质量的三七总皂苷单体对成骨细胞增殖的促进作用。 展开更多
关键词 三七皂苷单体 体外培养 成骨细胞 基因表达
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外源NO对棉胚珠离体培养色素积累和纤维发育的影响 预览
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作者 孙旭 张雷 +5 位作者 苏雪强 樊洪泓 郭宁 高俊山 蔡永萍 林毅 《核农学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期690-699,共10页
为探究外源NO对棉花色素合成和纤维发育的影响,以棕色棉和白色棉花后2 d的胚珠为材料,利用NO供体硝普钠(SNP)处理棉纤维,测定纤维发育中的相关生理生化指标及与色素合成相关基因的表达量。结果表明,100μmol·L-1SNP处理促进了棕... 为探究外源NO对棉花色素合成和纤维发育的影响,以棕色棉和白色棉花后2 d的胚珠为材料,利用NO供体硝普钠(SNP)处理棉纤维,测定纤维发育中的相关生理生化指标及与色素合成相关基因的表达量。结果表明,100μmol·L-1SNP处理促进了棕色棉胚珠鲜质量的增加和白色棉纤维的伸长;DMACA染色显示,原花青素(PAs)分布在棕色棉胚珠种皮和纤维中,而白色棉则仅在种皮中存在;外源NO促进了白色棉和棕色棉胚珠纤维中总黄酮和PAs的合成,但抑制了棕色棉纤维素的合成;色素合成关键酶基因(Gh CHS、Gh F3H、Gh DFR、Gh ANS、Gh ANR)在离体过程中整体呈下降趋势,但SNP处理上调了棕色棉中各基因的表达;外源NO促进了棕色棉胚珠纤维中Gh TT12的表达;外源NO在纤维发育早期(10 DAC、15 DAC)抑制了棕色棉胚珠纤维中Gh Exp1的表达,促进了白色棉胚珠纤维中Gh Exp1的表达。本研究结果为进一步揭示外源NO对棉花色素合成和纤维发育提供了参考。 展开更多
关键词 NO 离体培养 色素合成 纤维发育 基因表达
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光质对白芨组培苗生理特性及酶基因表达的影响 预览 被引量:1
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作者 王自布 杨维 +1 位作者 陈建 彭风梅 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期665-670,共6页
为探讨光质对白芨(Bletilla striata)组培苗生长发育的影响,对不同光质下白芨组培苗的生长特征、抗氧化酶活性以及酶基因表达进行了研究。结果表明,蓝光和红光对白芨生长有显著促进作用,绿光的作用不明显。除了CAT外,不同光质处理白芨... 为探讨光质对白芨(Bletilla striata)组培苗生长发育的影响,对不同光质下白芨组培苗的生长特征、抗氧化酶活性以及酶基因表达进行了研究。结果表明,蓝光和红光对白芨生长有显著促进作用,绿光的作用不明显。除了CAT外,不同光质处理白芨的APX、POD、SOD活性均呈上升趋势,且黄光处理的白芨SOD和APX活性最高,红光处理的POD活性最高,绿光处理的抗氧化酶活性比其他光质的低,蓝光处理35-45 d对抗氧化酶基因表达具有促进作用。因此,红光和黄光促进白芨生根组培苗的长高和生根;不同光质处理总体上提高了白芨氧化酶活性;白芨抗氧化酶基因的表达在蓝光处理下最大。 展开更多
关键词 白芨 组培苗 抗氧化酶 基因表达
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光质对离体培养条件下绿色棉纤维发育及黄酮合成的影响 预览
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作者 洪亮 张雷 +5 位作者 钱森和 孙旭 蔡永萍 林毅 高俊山 郭宁 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期300-309,共10页
为探讨光质对绿色棉纤维生长发育和黄酮合成的影响,以绿色棉品种绿絮棉1号为材料进行离体培养,比较红光、黄光、蓝紫光、白光和暗处理条件下绿色棉胚珠鲜物质质量、纤维长度、纤维素含量、黄酮含量等生理和分子指标的差异。结果表明:... 为探讨光质对绿色棉纤维生长发育和黄酮合成的影响,以绿色棉品种绿絮棉1号为材料进行离体培养,比较红光、黄光、蓝紫光、白光和暗处理条件下绿色棉胚珠鲜物质质量、纤维长度、纤维素含量、黄酮含量等生理和分子指标的差异。结果表明:光处理能够促进胚珠鲜物质质量的增加,但抑制了纤维的伸长。在纤维发育前期,各光处理抑制了蔗糖合成酶活性和蔗糖合成酶基因表达;纤维发育后期,白光处理提高了蔗糖合成酶活性,促进了蔗糖合成酶基因表达。红光、黄光和蓝紫光处理显著提高了β-1,3-葡聚糖酶活性(10~20 DAC(Days after culture));红光、黄光和白光均能提高β-1,3-葡聚糖基因表达量,而蓝光则抑制了基因的表达。白光促进了纤维素的合成,而蓝紫光抑制了纤维素的合成。在纤维发育初期(10 DAC),蓝紫光抑制了黄酮合成及其关键酶基因表达;而在发育后期(30~40 DAC),白光处理能够促进黄酮的合成及其关键酶基因表达。可见,光质对绿色棉纤维发育及黄酮合成具有一定的影响。 展开更多
关键词 绿色棉 离体培养 光质 基因表达 纤维发育 黄酮合成
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疏风宣肺方和解表清里方体外干预甲型流感病毒H1N1诱导炎性细胞因子分泌作用的研究 预览 被引量:1
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作者 葛世杰 刘晓婷 +6 位作者 张沂 卢娜娜 顾立刚 吴珺 邱泽计 张洪春 晁恩祥 《河北中医》 2015年第6期863-866,891共5页
目的:研究疏风宣肺方和解表清里方对甲型流感病毒H1 N1感染的人肺腺癌上皮细胞(A549)中炎性细胞因子的影响。方法培养 A549,甲型流感病毒 H1N1感染 A549后,分为细胞对照组、H1V1感染组、奥司他韦对照组、疏风宣肺组及解表清里组。... 目的:研究疏风宣肺方和解表清里方对甲型流感病毒H1 N1感染的人肺腺癌上皮细胞(A549)中炎性细胞因子的影响。方法培养 A549,甲型流感病毒 H1N1感染 A549后,分为细胞对照组、H1V1感染组、奥司他韦对照组、疏风宣肺组及解表清里组。采用实时定量聚合酶链式反应(RT -PCR)和Western blotting 法检测各组细胞中炎症相关的白细胞介素(IL)1、肿瘤坏死因子α(TNF -α)、IL -6、IL -10、单核细胞趋化蛋白1(MCP -1)、调节活化正常 T 细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)的 mRNA 及蛋白表达的变化。结果基因芯片结果提示,与细胞对照组比较,H1N1感染组差异表达基因 Il1β、Thf、Ccl5、Il10、Il6、Ccl2明显上调。与 H1N1感染组比较,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组差异基因 Thf、Il1β、Ccl5、Il10、Il6、Ccl2表达显著下调。 RT -PCR 结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组 IL -1、TNF -α、IL -6、IL-10、MCP -1、RANTES 的 mRNA 表达均显著升高(P <0.01)。与 H1N1感染组比较,疏风宣肺组 IL -1、TNF-α、IL -6、IL -10、MCP -1的 mRNA 表达均明显降低(P <0.01,P <0.05),解表清里组 IL -1、TNF -α、IL -6、MCP -1的 mRNA 表达均明显降低(P <0.01,P <0.05)。 Western blotting 结果显示,H1N1感染组 IL -1、TNF -α、IL -6、IL -10、MCP -1、RANTES 蛋白表达较细胞对照组显著升高(P <0.05);与 H1N1感染组比较,疏风宣肺组及解表清里组 IL -1、TNF -α、IL -6、IL -10、MCP -1、RANTES 蛋白表达均显著降低(P <0.05,P<0.01)。结论疏风宣肺方和解表清里方均可抑制流感病毒感染后炎性细胞因子 IL -1、TNF -α、IL -6、MCP -1的 mRNA 过表达及蛋白分泌,减轻炎症反应,并恢复机体免疫功能的稳定和平衡。 展开更多
关键词 流感病毒A型 H1N1亚型 抗病毒药(中药) 炎症趋化因子类 体外研究 基因表达调控 病毒
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人脐带间充质干细胞体外传代遗传特性的研究 被引量:1
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作者 岑双庆 刘宇 +7 位作者 高雪华 李晓瑞 邓银 郑东明 田奕 李江林 胡忠国 张蓉 《现代医学》 2015年第9期1093-1098,共6页
目的:研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)体外传代过程中生物学特性及遗传特性的变化,为hUC-MSCs临床应用的安全性提供理论依据。方法:观察无血清培养基培养的1、3、5、7、10、13、17和20代hUC-MSCs的细胞形态,对细胞周期、表面标记... 目的:研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)体外传代过程中生物学特性及遗传特性的变化,为hUC-MSCs临床应用的安全性提供理论依据。方法:观察无血清培养基培养的1、3、5、7、10、13、17和20代hUC-MSCs的细胞形态,对细胞周期、表面标记物、染色体核型进行分析,并对相关基因和细胞因子作定量分析。结果:hUC-MSCs传代至第7代后细胞生长速度开始明显减慢;细胞形态无明显变化,呈长梭形。细胞周期分析发现,处于G2期和S期的细胞百分比保持稳定;染色体核型无明显缺失、易位和倒位等变化。待测基因表达量略有差异,各代细胞培养基中分泌的细胞因子保持稳定。结论:利用无血清培养基培养的hUCMSCs在体外培养10代以内基本安全。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 体外培养 细胞因子 基因表达
人脂肪间充质干细胞体外传代的遗传特性分析 预览
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作者 李晓瑞 邓银 +9 位作者 陈思翔 郑东明 马明 刘宇 高雪华 刘大成 赵令卉 岑双庆 张蓉 李俊 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第11期1514-1519,共6页
目的研究人脂肪间充质干细胞(ADSCs)在体外传代过程中生物学特性及遗传特性的变化,为脂肪间充质干细胞的基础研究及临床应用安全性提供理论依据和新的细胞来源。方法利用无血清培养基培养ADSCs,对1、3、5、7、10、14和15代体外培养细... 目的研究人脂肪间充质干细胞(ADSCs)在体外传代过程中生物学特性及遗传特性的变化,为脂肪间充质干细胞的基础研究及临床应用安全性提供理论依据和新的细胞来源。方法利用无血清培养基培养ADSCs,对1、3、5、7、10、14和15代体外培养细胞进行了形态观察,流式细胞术分析细胞周期及免疫表型,G显带法分析染色体核型,实时荧光定量分析相关基因表达量,ELISA定量分析细胞因子的表达量。结果 ADSCs传代至第7代后,细胞增殖速度开始减慢,10代后细胞增殖速度显著减慢。细胞形态为长梭形并保持稳定。处于G2期和S期细胞百分比基本保持稳定。染色体细胞核型没有明显易位和缺失等变化,相关基因表达量略有差异,培养基内分泌的细胞因子保持稳定。结论利用无血清培养基培养的脂肪间充质干细胞在体外培养5代以内基本安全。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 体外培养 细胞因子 基因表达
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枇杷试管苗2个CAT基因成员的克隆及表达分析 预览
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作者 李丽秀 赖钟雄 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期542-550,共9页
以早钟6号枇杷试管苗叶片为试验材料.采用同源克隆方法从叶片mRNA中分离得到C471基因的2个成员Ej-CAT1和Ej-CAT2,Ej-CAT1cDNA序列全长1738bp,包括1479bpORF和257bp3’-UTR;Ej-CAT2序列全长1742bp.包含1479bpORF及261bp3’UTR。2个... 以早钟6号枇杷试管苗叶片为试验材料.采用同源克隆方法从叶片mRNA中分离得到C471基因的2个成员Ej-CAT1和Ej-CAT2,Ej-CAT1cDNA序列全长1738bp,包括1479bpORF和257bp3’-UTR;Ej-CAT2序列全长1742bp.包含1479bpORF及261bp3’UTR。2个CAT基因成员的核苷酸序列相似性为98.04%,其开放阅读框推导的氨基酸序列具有97.32%的相似性。生物信息学分析结果表明:2个蛋白均编码492个氨基酸,是亲水蛋白,不含信号肽,不存在螺旋卷曲结构,是非跨膜蛋白,亚细胞定位于过氧化物酶体;Ei—CAT1及Ei—CAT2蛋白分别有18、17个功能位点,22、19个磷酸化位点。CAT基因在枇杷试管苗离体保存过程中不同时期具有不同的表达量.整体趋势呈“W”形状.在离体保存1个月时表达量最高.保存7个月时表达量最低。CAT表达量变化可能跟枇杷试管苗的生长发育模式有关。 展开更多
关键词 枇杷 试管苗 CAT 基因克隆 表达分析
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猪精原干细胞体外分离培养及诱导分化的研究 预览 被引量:1
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作者 陈庭锋 王霄燕 +6 位作者 李东 施青青 张蕾 邱峰龙 刘志永 庄勋 卞桂华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1104-1112,共9页
本研究旨在建立猪精原干细胞(Porcine spermatogonial stem cells,pSSCs)体外分离和诱导分化,并探索pSSCs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况。采用差速贴壁法分离pSSCs和支持细胞(Sertoli),采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性... 本研究旨在建立猪精原干细胞(Porcine spermatogonial stem cells,pSSCs)体外分离和诱导分化,并探索pSSCs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况。采用差速贴壁法分离pSSCs和支持细胞(Sertoli),采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性;传至3代后通过添加不同诱导剂,诱导SSCs向脂肪细胞、神经元样细胞和成骨细胞分化,并通过生化染色、qRT-PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。结果表明:分离得到的pSSCs在饲养层上生长良好,碱性磷酸酶(AKP)及SOX2、integrinα6、SSEA1、Dazl抗体鉴定均呈阳性,表明SSCs处在未分化状态。诱导8d后,甲苯胺蓝染色及NSE抗体鉴定成阳性,成功诱导SSCs为神经元样细胞;诱导16d后,ALP、Von Kossa染色及Collagon l抗体鉴定均呈阳性,诱导SSCs为成骨细胞;诱导22d后,油红O染色可见脂滴被染成红色,诱导SSCs成为脂肪细胞。在SSCs诱导过程中,qRT-PCR结果显示,Nestin和β-tubulin在6d左右表达量最高,Cbfα1和Osterix在12d左右表达量最高,PPARγ和C/EBPα在18d左右表达量最高。本研究成功分离获得pSSCs,并且pSSCs可分别定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,表达细胞特有标记基因。 展开更多
关键词 精原干细胞 体外培养 诱导分化 基因表达
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碘-125粒子照射人胃癌细胞株后的全基因组表达 被引量:1
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作者 邹雷 罗开元 +1 位作者 乔鸥 许建彪 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期612-616,共5页
目的 探讨胃癌细胞接受碘-125 (^125I)粒子照射后的基因表达变化.方法 用^125I粒子分别照射高分化(BGC-823)、中分化(AGS)以及低分化(NCI-N87)人胃癌细胞株.每个细胞株分为实验组(接受100 cGy^125I粒子照射)和对照组(不接受... 目的 探讨胃癌细胞接受碘-125 (^125I)粒子照射后的基因表达变化.方法 用^125I粒子分别照射高分化(BGC-823)、中分化(AGS)以及低分化(NCI-N87)人胃癌细胞株.每个细胞株分为实验组(接受100 cGy^125I粒子照射)和对照组(不接受照射).应用微阵列芯片检测3株细胞株被照射后全基因表达变化情况,设定检验水准(P<0.05及表达倍数变化大于2)以筛选差异表达的基因.应用实时定量(qRT)-PCR验证差异基因表达情况,应用BisoGenet重建蛋白-蛋白相互作用网络,用Cytoscape复杂网络分析和形象化平台进行基因网络关系分析.应用DAVID进行GO及KEGG通路分析.结果 高、中、低3个不同分化细胞株经相同剂量率的^125I粒子照射后,基因芯片的层次聚类分析结果显示,3株胃癌细胞株的对照组和实验组从细胞聚类分析上看是属于同一聚类,NCI-N87细胞经^125I粒子照射后,有895个基因表达上调,786个基因表达下调;AGS细胞经^125I粒子照射后,有124个基因表达上调,161个基因表达下调;BGC-823细胞经^125I粒子照射后,有2 412个基因表达上调,3 243个基因表达下调.电离辐射后会引起非常复杂的转录调控变化,KEGG通路分析说明这些差异表达基因在特定的细胞通路中有重叠.经qRT-PCR验证其中具有相似动力学特性的差异表达基因TRAF3IP2-AS1、SDC1、RABL2B和NOM1 4个基因,与对照组相比均出现了差异表达(P<0.05).结论 ^125I粒子照射胃癌细胞株后会导致较多基因表达上调或下调,其中TRAF3IP2-AS1、SDC1、RABL2B和NOM1在3株细胞株均发生显著变化,推测可能是^125I粒子治疗胃癌的作用点,为将来研制治疗胃癌靶向药物提供参考. 展开更多
关键词 胃肿瘤 体外研究 近距离放射疗法 碘放射性同位素 基因表达
拟南芥不定芽发生早期的数字基因表达谱分析 被引量:5
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作者 王兴春 杨致荣 +2 位作者 张树伟 李红英 李生才 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期189-202,共14页
目前,有关不定芽发生的研究主要集中在单基因的调控方面,缺乏转录组方面的系统研究。利用RNA-seq高通量测序技术在全基因组范围内检测了不定芽发生早期的基因表达谱,共检测到2457个差异表达基因。这些基因参与了激素代谢和信号转导... 目前,有关不定芽发生的研究主要集中在单基因的调控方面,缺乏转录组方面的系统研究。利用RNA-seq高通量测序技术在全基因组范围内检测了不定芽发生早期的基因表达谱,共检测到2457个差异表达基因。这些基因参与了激素代谢和信号转导、愈伤组织和侧根的形成、茎顶端分生组织的发育和光合作用等过程。进一步的途径富集分析表明,不定芽发生早期苯丙氨酸代谢和苯丙胺素合成等途径相关的基因显著富集。并且苯丙氨酸可以显著抑制不定芽的发生,暗示了苯丙氨酸代谢和苯丙胺素的合成可能在不定芽发生过程起着重要的作用。 展开更多
关键词 拟南芥 离体器官发生 不定芽形成 转录组 数字基因表达谱
体外传代培养兔关节软骨细胞的去分化现象 预览 被引量:12
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作者 徐磊 叶朝阳 +1 位作者 周燕 谭文松 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第20期3626-3634,共9页
背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可.目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象.方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7... 背景:兔是软骨组织工程研究中应用非常广泛的实验动物模型,关节软骨细胞的去分化现象已经被广泛认可.目的:观察体外传代培养过程中兔关节软骨细胞的去分化现象.方法:将从新西兰大白兔膝关节分离获取的原代软骨细胞进行传代培养至第7代,对细胞生长、形态、基质分泌以及基因表达等方面分别采用细胞计数,显微镜观察,F机动蛋白染色、番红O染色,糖胺聚糖定量测定以及半定量聚合链式反应进行鉴定和比较.结果与结论:光学显微镜下,兔关节软骨细胞在体外传代培养过程中细胞形态由小且圆形或多角形,逐步转变大且为成纤维细胞样的梭形形态,对F机动蛋白的染色进一步佐证了这样的形态变化.细胞计数结果表明,细胞增殖能力随代次增加显著下降,特别是第3代以后的软骨细胞基本无明显增殖;经过番红 O 染色以及定量测定糖胺聚糖的含量,发现软骨特性胞外基质分泌量从第2代细胞开始就呈现显著的降低.半定量聚合链式反应检测结果表明,随着传代次数的增加,特别是第3代以后,软骨相关特征分子(包括Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白和SOX9等)基因表达水平下调;而与去分化相关的特征分子Ⅰ型胶原和多能蛋白聚糖基因表达水平上调,同时,细胞表面分子CD90基因表达上调,而CD14基因表达未见明显变化.结果证实,兔软骨细胞在体外传代过程中可出现快速地去分化现象,呈现出特征基因表达水平的变化,第3代以内的软骨细胞适合应用于软骨组织再生修复. 展开更多
关键词 组织构建 软骨组织构建 关节软骨损伤 软骨组织工程 软骨细胞 传代培养 去分化 细胞形态 细胞生长 组织学染色 基因表达 部级基金
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羊水干细胞体外培养早期和后期基因表达谱分析 预览
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作者 焦扬 刘建军 +2 位作者 冯国华 于明 赵洪波 《昆明医科大学学报》 2013年第5期18-22,共5页
目的探讨羊水干细胞(amnioticfluidstemcells,AFSCs)体外培养早期和后期全基因组表达规律.方法在公共基因芯片数据库GEO中找到羊水干细胞相关的基因芯片数据,使用R和Bioconductor软件包对其进行统计学分析,筛选差异表达基因,并进... 目的探讨羊水干细胞(amnioticfluidstemcells,AFSCs)体外培养早期和后期全基因组表达规律.方法在公共基因芯片数据库GEO中找到羊水干细胞相关的基因芯片数据,使用R和Bioconductor软件包对其进行统计学分析,筛选差异表达基因,并进行GO分析和KEGG通路分析.结果通过线性模型没有找到差异表达基因,而通过秩积法找到217个上调探针,278个下调探针.对这些差异表达基因进行功能富集,上调的生物过程是胶原纤维组织相关过程、细胞外基质组织、胞外结构组织、骨骼系统发育、细胞粘附等.下调过程最显著的是核分裂过程,有丝分裂以及细胞周期相关过程.上调的通路为ECM受体交互通路和焦点粘附通路.下调通路分别是细胞周期,细胞因子受体交互通路,p53信号通路和卵母细胞减数分裂通路.结论体外培养中AFSCs能很好地维持基因的表达. 展开更多
关键词 羊水干细胞 体外培养 基因表达
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天使综合征致病基因UBE3a在大鼠神经元细胞中的克隆和表达检测 预览
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作者 蒋玉萌 赵雪 +3 位作者 王宁 王洪才 张惊宇 杨子超 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期 344-346,350,共4页
目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进... 目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行酶切构建pEGFP-UBE3a的真核表达重组质粒。用磷酸钙转染方法将重组质粒转染入体外培养的神经元细胞,分别在体外培养8天和14天时通过倒置荧光显微镜观察重组蛋白的表达和定位情况。结果:PCR扩增获得人胎脑组织cDNA文库中UBE3a cDNA全长2559 bp,构建真核表达重组质粒pEGFP-UBE3a成功,经DNA测序与Gen-Bank中的人UBE3a cDNA序列一致。经倒置荧光显微镜观察重组质粒的表达情况,结果显示转染重组质粒的细胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白表达,且UBE3a在早期神经元的细胞质和细胞核中广泛表达,并弥散在轴突和树突,而在成熟神经元细胞核中的表达明显富集。结论:本实验成功构建了pEGFP-UBE3a真核表达质粒,EGFP-UBE3a蛋白在体外培养的神经元细胞中能够有效表达,且随着神经元的成熟逐步向核内富集,为进一步研究UBE3a基因在天使综合征发生发展中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 UBE3a基因 天使综合征 体外神经元培养 基因表达与定位
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阻滞和非阻滞品系小鼠体外发育2-细胞胚基因表达水平的比较 预览
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作者 林翠英 史河秀 +3 位作者 张燕琴 姜雨飞 初晨凤 王世鄂 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 48-52,共5页
检测阻滞品系昆明小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠体外发育2-细胞胚内基因表达水平的差异,探讨昆明小鼠植入前胚体外发育阻滞与哪些基因表达调控有关。方法:分别收集昆明小鼠和B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚,运用基因芯片分析和Real-timePC... 检测阻滞品系昆明小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠体外发育2-细胞胚内基因表达水平的差异,探讨昆明小鼠植入前胚体外发育阻滞与哪些基因表达调控有关。方法:分别收集昆明小鼠和B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚,运用基因芯片分析和Real-timePCR验证。结果:基因芯片检测共筛出差异表达基因303个,其中昆明小鼠2-细胞胚表达上调基因有168个;下调基因有135个。昆明小鼠2-细胞胚表达上调的基因以信号转导、细胞周期、细胞结构和运动、细胞增殖和分化以及发育进程等为主;而下调基因与电子转移、蛋白质代谢和修饰、氨基酸代谢以及蛋白质靶向运输和定位等相关。结论:胚内能量供应不足和蛋白质合成障碍可能是昆明小鼠植入前胚体外发育出现2-细胞阻滞的重要原因。 展开更多
关键词 植入前胚 2-细胞阻滞 体外培养 小鼠 基因表达
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SIRT1经p53和NF—κB的相关蛋白途径调控软骨细胞凋亡的体外研究 被引量:4
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作者 刘弼 肖德明 +6 位作者 雷鸣 王大平 熊建义 马经野 许蕴 史敦云 张晓丽 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期883-888,共6页
目的探讨S1RT1经p53/bax和NF-κB/过氧化物酶体增殖物受体1共激活因子-1α(PGC.1a)途径调控软骨细胞凋亡的作用机制。方法常规培养新西兰兔关节软骨细胞,分为3组(n:10):SIRTI激活剂(白藜芦醇)组、对照组、SIRT1抑制剂(尼... 目的探讨S1RT1经p53/bax和NF-κB/过氧化物酶体增殖物受体1共激活因子-1α(PGC.1a)途径调控软骨细胞凋亡的作用机制。方法常规培养新西兰兔关节软骨细胞,分为3组(n:10):SIRTI激活剂(白藜芦醇)组、对照组、SIRT1抑制剂(尼克酰胺)组,用硝普钠诱导细胞凋亡。采用噻唑蓝法俭测各组软骨细胞活性及增殖、4',6-二脒基-2-苯幕吲哚(DAPI)染色和流式细胞术检测各组细胞捌亡,采用WesternBlot技术检测各组细胞SIRT1、p53、NF-κB、bax、PGC-α的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞SIRTⅠ、Ⅱ型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖mRNA的表达。结果SIRT1激活剂组、对照组、SIRT1抑制剂组OD值平均分别为0.139±0.016、0.098±0.006、0.079±0.002,细胞凋亡率平均分别为9.8%±0.7%、27.3%±1.6%、41.9%±2.0%,以上项目3组间两两比较差异均有统计学意义(P〈0。05)。SIRT1激活剂组细胞SIRT1、PGC-1α的表达较对照组增高,而SIRT1抑制剂组较对照组降低;SIRTI激活剂组p53、NF。KB、bax的表达较对照组降低,而SIRT1抑制剂组较对照组升高。SIRT1激活剂组细胞SIRTI、Ⅱ型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖mRNA的表达最高,对照组次之,SIRT1抑制剂组最低。结论SIRT1可通过调控p53、NF-κB的表达改变其下游bax、PGC-1α的表达,从而调控软骨细胞的凋亡。 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞凋亡 体外研究 基因表达调控
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