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超表达Notch胞内结构域对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化的影响
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作者 邱申彩 龙晏 +2 位作者 陈晓燕 舍玉秀 吴佩玲 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期315-321,共7页
目的探讨超表达Notch胞内结构域(Notch intracellular domain,NICD)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSC)增殖和成骨分化的影响,为牙周病骨缺损的治疗提供依据。方法以第3代稳定超表达NICD的hPDLSC为实验组... 目的探讨超表达Notch胞内结构域(Notch intracellular domain,NICD)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSC)增殖和成骨分化的影响,为牙周病骨缺损的治疗提供依据。方法以第3代稳定超表达NICD的hPDLSC为实验组,以正常hPDLSC为阴性对照组,转染空载体的hPDLSC为空白对照组,通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测超表达NICD对hPDLSC增殖能力的影响;通过茜素红染色和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测超表达NICD对hPDLSC成骨相关基因:牙骨质附着蛋白(cementum attachment proteins,CAP)、骨钙蛋白、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,RUNX2),Notch信号通路受体Notch1的影响;通过蛋白质免疫印迹法检测超表达NICD对hPDLSC成骨蛋白RUNX2和flag标记蛋白(用以标记NICD)的影响。结果CCK-8结果显示,3组1~2d的A值相比差异均无统计学意义(P>0.05);实验组3~7d的细胞数量(A值分别为0.203±0.016、0.364±0.014、0.449±0.020、0.549±0.020及0.570±0.020)与其他两组相比显著增加(P<0.05)。茜素红染色结果示,与空白对照组及阴性对照组相比,实验组染色的矿化结节形成范围小颜色浅;qPCR结果显示,实验组14及21dCAP基因表达量(0.751±0.058、0.887±0.025)、骨钙蛋白基因表达量(0.592±0.051、0.670±0.045)及RUNX2基因表达量(0.319±0.038、0.684±0.055),均较阴性对照组及空白对照组显著降低(P<0.05),但14及21d的Notch1表达水平(2.507±0.047、4.041±0.219)显著高于阴性对照组及空白对照组(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,实验组14及21dflag标记蛋白表达量(0.167±0.007、0.204±0.010)均显著高于阴性对照组及空白对照组(P<0.05),但RUNX2的蛋白表达量(0.075±0.006、0.074±0.013)均显著低于阴性对照组(0.092±0.003、0.118±0.008)及空白对照组(0.174±0.006、0.212±0.008)(P<0.05)。结论超表达NICD可以促进hPDLSC的增殖能力,同时抑制其成骨分化。 展开更多
关键词 细胞增殖 超表达 Notch胞内结构域 人牙周膜干细胞 成骨分化
高迁移率族蛋白B1对人牙周膜干细胞增殖、分化影响的体外研究 预览
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作者 徐贤寅 朱金晓 +1 位作者 朱文婷 李晓丹 《医学理论与实践》 2019年第10期1456-1458,共3页
目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对于人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、分化的影响。方法:选取年轻患者拔除的健康第三磨牙,采用胶原酶消化组织块培养得到牙周膜细胞,并利用有限稀释法筛选获得纯化的hPDLSCs。分别以浓度为0、100、200ng... 目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对于人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、分化的影响。方法:选取年轻患者拔除的健康第三磨牙,采用胶原酶消化组织块培养得到牙周膜细胞,并利用有限稀释法筛选获得纯化的hPDLSCs。分别以浓度为0、100、200ng/ml的HMGB1作用于hPDLSCs,于第3、5天采用MTT法检测细胞数目增殖情况;于第7天采用RT-PCR法检测细胞因子:增殖细胞核抗原(PCNA)、白细胞介素-1b(IL-1b)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的基因表达。结果:HMGB1在100、200ng/ml浓度时,在第3天和第5天hPDLSCs的OD值有明显升高,在第7天PCNA、IL-1 b、TNFα和TRAP的基因表达明显升高。结论:HMGB1对hPDLSCs的增殖具有促进作用,同时使其破骨功能加强,与牙周炎的发展有关。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白B1 人牙周膜干细胞 增殖分化
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煅烧牙粉影响人牙周膜干细胞体外矿化的自噬机制研究 预览
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作者 李娜 闫明 +3 位作者 李泽汉 潘引 吴锦涛 于金华 《口腔医学》 CAS 2019年第4期300-305,共6页
目的探讨自噬在煅烧牙粉调节牙周膜干细胞体外矿化中的作用,为牙周膜干细胞的定向诱导分化和牙周病的治疗提供参考。方法选用成人完整的牙齿在300℃的条件下煅烧后,研磨成粉,与α-MEM混合制备成20μg/mL牙粉条件培养基,与人牙周膜干细... 目的探讨自噬在煅烧牙粉调节牙周膜干细胞体外矿化中的作用,为牙周膜干细胞的定向诱导分化和牙周病的治疗提供参考。方法选用成人完整的牙齿在300℃的条件下煅烧后,研磨成粉,与α-MEM混合制备成20μg/mL牙粉条件培养基,与人牙周膜干细胞共培养。采用流式细胞技术检测其对牙周膜干细胞凋亡的影响,通过Western blot检测、免疫荧光染色、茜素红染色和ALP染色观察检测其对牙周膜干细胞自噬活性及体外矿化的影响。结果流式细胞技术结果显示牙粉对牙周膜干细胞的凋亡无明显影响(P>0.05);Western blot结果显示煅烧牙粉显著上调人牙周膜干细胞的自噬相关蛋白Beclin1,ATG5的表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,以及明显下调了P62的蛋白水平(P<0.05);免疫荧光染色显示牙粉促进人牙周膜干细胞中LC3在胞质内点状聚集;茜素红染色显示牙粉促进牙周膜干细胞的体外矿化;ALP染色显示自噬活性抑制剂氯喹降低牙粉对牙周膜干细胞体外矿化的促进作用。结论煅烧牙粉通过激活自噬调节牙周膜干细胞的体外矿化作用。 展开更多
关键词 煅烧牙粉 牙周膜干细胞 自噬 矿化
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雌激素微环境下非经典Wnt/Ca^2+信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究 预览
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作者 吴晓玲 郑茜 +4 位作者 吕佳岭 赵娴 徐洁 余京泓 徐晓梅 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2019年第1期33-37,共5页
目的:探讨雌激素作用下非经典Wnt/Ca^2+信号通路对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells hPDLSCs)成骨分化的调控。方法:将第3代hPDLSCs分为空白组、对照组、雌激素组、抑制剂组,成骨诱导7d检测ALP活性,Real-time PCR... 目的:探讨雌激素作用下非经典Wnt/Ca^2+信号通路对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells hPDLSCs)成骨分化的调控。方法:将第3代hPDLSCs分为空白组、对照组、雌激素组、抑制剂组,成骨诱导7d检测ALP活性,Real-time PCR检测各组Wnt信号通路基因及成骨基因表达水平。结果:ALP检测结果示对照组较空白组ALP活性增加(P<0.05),雌激素组和抑制剂组较对照组ALP活性增加(P<0.05),但雌激素组和抑制剂组ALP活性差异无统计学意义(P>0.05)。Real-time PCR检测结果显示对照组较空白组Wnt信号通路基因β-catenin、CaMKⅡ、NLK及成骨基因RUNX2、OCN表达增加(P<0.05),雌激素组和抑制剂组较对照组Wnt信号通路基因β-catenin、CaMKⅡ、NLK及成骨基因RUNX2、OCN表达增加(P<0.05);抑制剂组较雌激素组β-catenin表达下降(P<0.05),而CaMKⅡ、NLK表达增加(P<0.05),但两组成骨基因RUNX2、OCN表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:雌激素可能通过增强非经典Wnt/Ca^2+信号通路的活化促进hPDLSCs的成骨分化。 展开更多
关键词 hPDLSCs 雌激素 非经典Wnt/Ca^2+信号通路 成骨分化
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肿瘤坏死因子α可激活NF-κB信号通路抑制牙周膜干细胞成骨分化 预览
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作者 张赟 常群安 +1 位作者 李生梅 张源 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期3993-3997,共5页
背景:既往研究大多侧重于炎症因子激活NF-κB信号通路对骨细胞的影响,关于微炎症环境对人牙周膜干细胞成骨分化及NF-κB信号通路的影响研究较少。目的:探讨肿瘤坏死因子α对人牙周膜干细胞骨向分化及NF-κB信号通路的影响。方法:通过酶... 背景:既往研究大多侧重于炎症因子激活NF-κB信号通路对骨细胞的影响,关于微炎症环境对人牙周膜干细胞成骨分化及NF-κB信号通路的影响研究较少。目的:探讨肿瘤坏死因子α对人牙周膜干细胞骨向分化及NF-κB信号通路的影响。方法:通过酶消化结合组织块法体外培养人牙周膜干细胞,免疫组织化学染色鉴定人牙周膜干细胞来源。该研究获得青海大学附属医院伦理委员会批准,患者均签署知情同意书。将人牙周膜干细胞分为2组,对照组用单纯成骨诱导液培养,肿瘤坏死因子α组用单纯成骨诱导液+10μg/L肿瘤坏死因子α培养。在成骨诱导不同时间点,进行茜素红染色定量分析、碱性磷酸酶活性检测,实时定量RT-PCR检测Osterix、Runx2基因表达水平,Western Blot检测NF-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果与结论:①免疫组织化学染色结果显示人牙周膜干细胞抗波形丝蛋白染色表达阳性,抗角蛋白表达阴性;②茜素红染色后肿瘤坏死因子α组形成的矿化结节比对照组数量少、范围小、染色浅;③肿瘤坏死因子α组碱性磷酸酶活性明显低于对照组(P <0.05);④肿瘤坏死因子α组Osterix、Runx2基因表达水平均显著低于对照组(P <0.05);⑤肿瘤坏死因子α组p-IκBα蛋白表达量显著高于对照组(P <0.05),p65、IκBα蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05);⑥结果表明,肿瘤坏死因子α能够通过激活NF-κB信号通路抑制人牙周膜干细胞成骨分化。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 肿瘤坏死因子Α 成骨分化 NF-ΚB信号通路 碱性磷酸酶活性 成骨基因
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p38 MAPK通路调控BMP9诱导hPDLSCs成骨分化的体外研究
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作者 张奕 胡婷 +2 位作者 叶国 向学熔 胡娜 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期596-601,共6页
目的:检测骨形成发生蛋白9(bone morphogenetic proteins9,BMP9)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨诱导分化能力,并探讨p38MAPK通路在该成骨分化中的作用。方法:培养hPDLSCs,腺病毒载体(Ad-BMP9)... 目的:检测骨形成发生蛋白9(bone morphogenetic proteins9,BMP9)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨诱导分化能力,并探讨p38MAPK通路在该成骨分化中的作用。方法:培养hPDLSCs,腺病毒载体(Ad-BMP9)感染hPDLSCs后,通过碱性磷酸酶(alkalinephos phatase,ALP)活性测定与染色、定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、钙盐沉积等方法,分别检测ALP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达及钙盐沉积量,评价BMP9诱骨分化的能力。在Ad-BMP9感染hPDLSCs36h后,检测BMP9作用hPDLSCs后对p38及MKK3/6磷酸化(p-p38,p-MKK3/6)的影响,以及p38MAPK通路抑制剂SB203580预处理后BMP9-p38-MAPK通路对hPDLSCs成骨分化的影响。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:在Ad-BMP9作用下,ALP活性、OPN和OCN的表达均显著高于对照组(P<0.01),ALP染色与钙盐沉积结果与之吻合。Western印迹法检测发现,BMP9可增强p-p38、p-MKK3/6的表达。加入p38MAPK通路抑制剂后,ALP、及OPN、OCN的表达均显著降低(P<0.01),钙盐沉积、基质矿化也显著减弱。结论:在hPDLSCs的分化过程中,BMP9对其具有诱骨分化能力。MKK3/6-p38MAPK通路参与了该成骨分化过程且具有正向调节作用。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 BMP9 成骨分化 P38MAPK
姜黄素对人牙周膜干细胞增殖及炎症因子表达的影响 预览
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作者 贾斌 董颖韬 +1 位作者 苗莉 祖斌 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2018年第3期131-135,共5页
目的:探讨姜黄素对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖及炎性因子表达水平的影响。方法:体外培养hPDLSCs并对其进行鉴定。模型组为α-MEM培养液(含10μg/mL脂多糖)中培养的hPDLSCs体系,干预组为姜黄素预处理后加入α-MEM培养液(含10μg/mL脂多... 目的:探讨姜黄素对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖及炎性因子表达水平的影响。方法:体外培养hPDLSCs并对其进行鉴定。模型组为α-MEM培养液(含10μg/mL脂多糖)中培养的hPDLSCs体系,干预组为姜黄素预处理后加入α-MEM培养液(含10μg/mL脂多糖)中培养的hPDLSCs体系,对照组为α-MEM培养液(不含10μg/mL脂多糖)进行培养的hPDLSCs体系。MTT法测定各组hPDLSCs的增殖能力,RT-PCR法测定hPDLSCs中IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA的表达水平。结果:hPDLSCs培养2~7 d时,3组间OD值为对照组<干预组<模型组(P<0.05);与对照组相比,模型组及干预组hPDLSCs中IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平均显著增加(P<0.05),但干预组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论:姜黄素对脂多糖介导下的hPDLSCs增殖具有一定的抑制作用,可降低炎性因子表达。 展开更多
关键词 姜黄素 脂多糖 人牙周膜干细胞 IL-6 TNF-α IL-1Β
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转化生长因子-β1对人牙周膜干细胞生物学行为的影响
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作者 龙晏 邱申彩 +4 位作者 李淑慧 舍玉秀 王娜 陈晓燕 吴佩玲 《中华实用诊断与治疗杂志》 2018年第11期1044-1046,共3页
目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法对数生长期人PDLSCs随机分为TGF-β1组(培养液+10μg/L TGF-... 目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法对数生长期人PDLSCs随机分为TGF-β1组(培养液+10μg/L TGF-β1)和对照组(培养液),采用CCK-8法检测2组培养第1、2、3、4、5、6、7天细胞增殖能力;培养48h,采用Transwell小室法检测2组细胞迁移能力,Western blot法检测2组Notch1胞内段(Notch1intracellular domain,NICD)蛋白相对表达量。结果 TGF-β1组培养第1天细胞吸光度值(0.45±0.02)与对照组(0.45±0.03)比较差异无统计学意义(P〉0.05),培养第2、3、4、5、6、7天细胞吸光度值(0.81±0.08、1.82±0.07、2.14±0.09、2.49±0.11、2.69±0.12、2.78±0.08)均高于对照组(0.61±0.04、1.17±0.05、1.47±0.10、1.99±0.11、2.20±0.03、2.29±0.08)(P〈0.05);培养48h,TGF-β1组迁移细胞数目[(61.40±2.30)%]较对照组[(31.80±1.48)%]多,NICD蛋白相对表达量(0.49±0.01)较对照组(0.35±0.01)高(P〈0.05)。结论 TGF-β1可激活Notch1信号通路,促进人PDLSCs增殖和迁移。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 转化生长因子-Β1 细胞增殖 细胞迁移
AGEs和TNF-α 对人牙周膜干细胞骨向分化能力的协同抑制作用
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作者 杨晓红 杨琨 +2 位作者 崔晓霞 刘琪 金岩 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第12期5648-5653,共6页
本实验旨在研究糖基化终末产物(AGE-BSA)和TNF-α对人牙周膜干细胞增殖及骨向分化能力的影响。本实验通过体外组织块酶消化法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,使用流式细胞仪检测细胞表型分子stro-1、CD146、CD44、CD90的表达而对... 本实验旨在研究糖基化终末产物(AGE-BSA)和TNF-α对人牙周膜干细胞增殖及骨向分化能力的影响。本实验通过体外组织块酶消化法和有限稀释法克隆化培养牙周膜干细胞,使用流式细胞仪检测细胞表型分子stro-1、CD146、CD44、CD90的表达而对其进行干细胞鉴定后,取第3代人牙周膜干细胞在100μg/mLAGE-BSA及10ng/mLTNF-α刺激下进行增殖能力检测;同时矿化诱导,设A组(AGE-BSA刺激组),T组(TNF-α刺激组),AT组(AGE-BSA/TNF-α共同刺激组),不含AGE-BSA/TNF-α的常规矿化诱导组作为对照;于诱导的21d茜素红染色观察钙结节形成情况,诱导7d,碱性磷酸酶染色观察ALP活性、实时定量聚合酶链反应(realtimePCR)和Western blotting检测成骨相关基因及蛋白表达情况。流式细胞仪显示细胞阳性表达STRO-1、CD146、CD44、CD90;成骨诱导21d后茜素红染色和定量分析显示,AT组骨结节形成量最低,A组及T组相对于对照组骨结节形成量存在下降;差异均有统计学意义(p<0.05)。成骨诱导7d后ALP染色,ALP活性变化趋势与茜素红定量分析相同。成骨诱导7d后RT-PCR检测成骨相关基因BSP、OCN、ALPmRNA表达,AT组表达水平最低,A组及T组有下降趋势,差异均有统计学意义(p<0.05)。Western blotting检测显示,各组总蛋白BSP蛋白表达趋势与RT-PCR趋势相同。AGEs与TNF-α均具有对HPDLSC的骨向分化能力的抑制作用,两者共同刺激对HPDLSC骨向分化能力存在协同抑制作用。 展开更多
关键词 糖基化终末产物 肿瘤坏死因子 人牙周膜干细胞 骨向分化
人牙周膜干细胞与人牙髓干细胞的表型及生长特性比较 预览 被引量:2
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作者 蔡洪桢 贺慧霞 +1 位作者 王飞翔 张绍清 《中华老年口腔医学杂志》 2017年第2期91-96,共6页
目的:比较人牙周膜干细胞(human Periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)和牙髓干细胞(human Dental pulp stem cells,hDPSCs)的表型及生长特性,为深入研究这两种细胞生物学特性提供依据。方法:组织块法培养获得原代人牙周膜... 目的:比较人牙周膜干细胞(human Periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)和牙髓干细胞(human Dental pulp stem cells,hDPSCs)的表型及生长特性,为深入研究这两种细胞生物学特性提供依据。方法:组织块法培养获得原代人牙周膜细胞和牙髓细胞,采用有限稀释法分别对两者克隆化培养、分离纯化得到hPDLSCs和hDPSCs,采用倒置相差显微镜观察细胞形态、CCK8法检测细胞生长活性并绘制两者生长曲线、流式细胞技术检测干细胞表面标志物,分析比较两种细胞集落形成率(colony formation ratio,CFR)。结果:hPDLSCs和hDPSCs镜下形态相似,生长曲线均呈"S"形,牙周膜细胞中STRO-1表达hPDLSCs阳性率为15.88±0.48%,牙髓细胞中STRO-1表达hDPSCs阳性率为11.86±0.43%,两者无显著性差异。两种干细胞均阳性表达间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)表面标志物STRO-1、CD29、CD44、CD90、CD73和血管内皮标志物CD105,其中STRO-1、CD29、CD90、CD73、CD105及CD166百分率达90%以上,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45。hDPSCs的集落形成率(4.31±0.08%)显著高于hPDLSCs的集落形成率(2.68±0.06%)(P〈0.05)。结论:hPDLSCs和hDPSCs细胞的形态相似,均高表达MSCs表面特异性标志物,hDPSCs的集落形成率显著高于hPDLSCs,说明hDPSC自我更新能力较hPDLSCs强,可为深入研究这两种干细胞提供实验依据。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 人牙髓干细胞 表型
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钛基材料表面等离子喷涂技术处理对人牙周膜干细胞生长的影响 预览 被引量:1
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作者 蔡洪桢 贺慧霞 +2 位作者 王飞翔 张绍清 杨伟峰 《中华老年口腔医学杂志》 2017年第1期27-32,共6页
目的:对比观察钛基材料表面经等离子喷涂技术改性的钽、钛涂层对其生物特性的影响。方法:厚度为1mm的钛板,经喷砂、等离子钽喷涂和等离子钛喷涂表面改性,制备成直径1.5cm样品。分为钽涂层试件、钛涂层试件和喷砂钛试件共三组,样品无... 目的:对比观察钛基材料表面经等离子喷涂技术改性的钽、钛涂层对其生物特性的影响。方法:厚度为1mm的钛板,经喷砂、等离子钽喷涂和等离子钛喷涂表面改性,制备成直径1.5cm样品。分为钽涂层试件、钛涂层试件和喷砂钛试件共三组,样品无菌处理后,分别接种分离纯化的人牙周膜干细胞培养3天,扫描电镜观察各组材料表面细胞粘附和生长情况并拍片,采用Image J图形软件分析材料表面细胞被覆面积占比,评价材料的生物相容性。结果:与无细胞空白对照组比较,钽涂层、钛涂层及喷砂钛各组试件表面均有细胞粘附生长,但粘附细胞形态、数量、增殖及细胞状态有所不同。钽涂层试件组材料表面细胞在低倍镜下观察呈片状生长,突起链接形成雪花样,平均密度高于喷砂钛和钛涂层试件组,高倍镜见细胞在材料表面伸展充分,分泌基质样颗粒,并伸出伪足进入材料微孔内,Image J图像分析细胞面积平均百分比为33.05±1.48,显著高于喷砂钛试件组;钛涂层试件组材料表面也有细胞粘附生长,细胞形态与钽涂层试件组无明显差别,但细胞面积平均百分比为21.92±1.39,虽不及钽涂层试件组但明显多于喷砂钛试件组14.86±1.13;方差齐性检验显示钛涂层试件组与另两组试件的组间有差异(P〈0.05),喷砂钛与钽涂层试件组间具有显著性差异(P〈0.01)。三者占比面积结果显示:钽涂层试件组〉钛涂层试件组〉喷砂钛试件组。结论:等离子喷涂表面改性促进了钛基材料表面生物活性;等离子钽喷涂表面改性较钛涂层及钛喷砂处理具有更好的生物相容性。 展开更多
关键词 钽涂层 钛涂层 喷砂钛 等离子喷涂 人牙周膜干细胞
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Notch1信号通路对人牙周膜干细胞应力分化过程的调控 预览
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作者 周述作 秦凡 +2 位作者 崔嘉玺 董立 周继祥 《局解手术学杂志》 2017年第4期240-243,共4页
目的 探究Notch1信号通路在人牙周膜干细胞(PDLSCs)应力分化过程中的调控作用。方法 体外分离培养鉴定PDLSCs,以化学药物方式调控Notch1通路;进行体外细胞应力试验并检测Notch1通路关键指标Notch蛋白胞内段(NICD)以及早期成骨标志... 目的 探究Notch1信号通路在人牙周膜干细胞(PDLSCs)应力分化过程中的调控作用。方法 体外分离培养鉴定PDLSCs,以化学药物方式调控Notch1通路;进行体外细胞应力试验并检测Notch1通路关键指标Notch蛋白胞内段(NICD)以及早期成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)、骨形成蛋白2(BMP2)。应力参数为形变率0~12%,频率0.1 Hz;加载时间分组为0 h、6 h、12 h、24 h。结果 激活Notch1通路,ALP、BMP2的表达呈下降趋势(P〈0.05);抑制Notch1通路,ALP、BMP2的表达水平随加力时间明显升高(P〈0.05)。结论 激活Notch1信号通路将抑制人PDLSCs应力分化。 展开更多
关键词 NOTCH1 人牙周膜干细胞 JAGGED1 DAPT 动态张应力 成骨分化
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β-catenin对人牙周膜干细胞应力成骨调控作用的研究 预览
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作者 秦凡 周述作 +4 位作者 罗金英 寇婷婷 崔岳 蔡江文 周继祥 《局解手术学杂志》 2017年第3期162-166,共5页
目的 探讨β-catenin对人牙周膜干细胞应力下成骨的影响。方法 体外分离培养人牙周膜干细胞,以β-catenin为靶点的激动剂和抑制剂上调或下调其β-catenin蛋白的表达,用Western blot检测不同时段(0、6、12、24 h)的应力作用下,激动剂... 目的 探讨β-catenin对人牙周膜干细胞应力下成骨的影响。方法 体外分离培养人牙周膜干细胞,以β-catenin为靶点的激动剂和抑制剂上调或下调其β-catenin蛋白的表达,用Western blot检测不同时段(0、6、12、24 h)的应力作用下,激动剂或抑制剂处理后PDLSCs中β-catenin的表达水平及相关成骨标志物ALP、BMP2、Runx2的表达。结果 在外源性张应力作用下,成骨相关标志物ALP、Runx2较无张力组的表达水平增加(P〈0.05);β-catenin激动剂WAY-262611作用后的PDLSCs,在外源性张应力条件下,成骨相关标物ALP的表达在加力0~12 h时段较DMSO加力组(对照组)明显增强(P〈0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号通路参与了PDLSCs早期的应力条件下成骨。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 WNT/Β-CATENIN信号通路 成骨分化 外源性张应力
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脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎症因子表达的影响 预览 被引量:5
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作者 黄飞 丁洁 +2 位作者 张明烨 王峰 林松杉 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2017年第2期86-88,110共4页
目的:探讨脂多糖(LPS)对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)增殖及炎症因子表达水平的影响。方法:体外分离培养h PDLSCs,并将其随机分为A、B、C组,A、B组分别用含LPS终浓度为10μg/m L和10 ng/m L的α-MEM进行培养,C组用不含LPS的α-MEM进... 目的:探讨脂多糖(LPS)对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)增殖及炎症因子表达水平的影响。方法:体外分离培养h PDLSCs,并将其随机分为A、B、C组,A、B组分别用含LPS终浓度为10μg/m L和10 ng/m L的α-MEM进行培养,C组用不含LPS的α-MEM进行培养作为对照;分别于培养12、24、48、72 h后,用MTT法检测各组细胞的增殖情况,同时取培养72 h后的各组细胞,用RT-PCR检测其IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平。结果:MTT检测结果显示,各组在各时间点的A490值由高到底依次为:B组〉C组〉A组,3组间两两相比均有统计学差异(P〈0.05);RT-PCR检测结果显示,与C组相比,A、B组的IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平均显著升高,且以A组升高更明显,3组间两两相比均有统计学差异(P〈0.05)。结论:低浓度LPS对h PDLSCs的增殖具有一定的促进作用,而高浓度的LPS对h PDLSCs的增殖则具有一定的抑制作用,并能促进炎症因子的表达。 展开更多
关键词 脂多糖 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) 增殖 炎症因子
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骨髓间充质干细胞来源的外泌体促进牙周再生的体外研究 被引量:1
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作者 朱斌 李楠 +2 位作者 田自锋 张红梅 刘世宇 《中国实用口腔科杂志》 CAS 2016年第12期709-713,共5页
目的 研究人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMMSCs)分泌的外泌体(exosome)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖和分化功能的影响,为进一步明确hBMMSCs促进牙周... 目的 研究人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMMSCs)分泌的外泌体(exosome)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖和分化功能的影响,为进一步明确hBMMSCs促进牙周组织再生的机制提供实验基础和证据。方法 分别用酶消化法和离心法培养hPDLSCs和hBMMSCs,并用流式细胞术检测其间充质表面标志物。收集培养的第3代hBMMSCs上清液,利用试剂盒提取exosome,电镜下观察其结构,Western Bolt法检测其CD63表达水平。用hBMMSCs分泌的exosome处理hPDLSCs设为实验组,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测hPDLSCs的增殖情况,克隆形成率检测多克隆形成能力,成骨诱导后碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色并定量,同时实时荧光定量PCR(qPCR)检测成骨相关基因表达。结果 流式细胞术检测,hPDLSCs阳性表达CD29、CD44、CD90、CD146和Stro-1,hBMMSCs阳性表达CD29、CD44、CD90和CD106,两者均阴性表达CD14、CD34和CD45。hBMMSCs分泌的exosome电镜下呈小球状,Western Bolt法检测其强表达CD63。实验组hPDLSCs经MTT法检测其增殖速率和克隆形成能力显著高于对照组(P〈0.05)。实验组hPDLSCs成骨诱导后ALP染色、茜素红染色定量表达显著强于对照组(P〈0.05)。qPCR检测成骨基因Runx2、OCN、ALP、BSP和Col-Ⅰ的表达,实验组显著高于对照组(P〈0.05)。结论 hBMMSCs分泌的exosome可促进牙周膜干细胞的体外增殖和成骨分化能力。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 人牙周膜干细胞 外泌体 成骨分化 牙周再生
雌激素对人牙周膜干细胞干性维持的影响 预览
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作者 戴旭彬 王萧萧 +4 位作者 杨凡巧 欧乾民 姚斯琦 王彦 林雪峰 《中华口腔医学研究杂志(电子版)》 CAS 2016年第2期104-111,共8页
目的研究雌激素对人牙周膜干细胞(h PDLSC)干性维持的影响。方法分离、培养原代h PDLSC并完成其干细胞鉴定;雌激素处理48 h,采用流式细胞术检测雌激素对h PDLSC细胞周期的影响;定量聚合酶链反应(q-PCR)检测人端粒酶逆转录酶(h TER... 目的研究雌激素对人牙周膜干细胞(h PDLSC)干性维持的影响。方法分离、培养原代h PDLSC并完成其干细胞鉴定;雌激素处理48 h,采用流式细胞术检测雌激素对h PDLSC细胞周期的影响;定量聚合酶链反应(q-PCR)检测人端粒酶逆转录酶(h TERT)基因、干性相关基因Oct4、Sox2、c-Myc以及衰老相关基因p16和p53的变化;雌激素长期处理后观察细胞克隆形成能力及骨向分化能力的改变。应用SPSS 17.0软件,利用配对样本t检验对组间均数进行统计学分析,P〈0.05为差异具有统计学意义。结果实验获得的h PDLSC符合间充质干细胞鉴定标准。流式细胞术结果显示,雌激素处理48 h后h PDLSC增殖能力(29.730±1.845)较对照组(23.587±2.905)明显提高,差异有统计学意义(t=9.913,P=0.010)。q-PCR结果显示雌激素处理48 h后,h TERT表达量(1.958±0.338)较对照组(1.000±0.018)明显提高(t=7.00,P=0.001);Oct4表达量(2.539±0.493)较对照组(1.000±0.011)明显提高(t=6.26,P=0.001);Sox2表达量(2.234±0.255)较对照组(1.016±0.221)明显提高(t=6.26,P=0.003);c-Myc表达量(1.328±0.091)较对照组(1.003±0.088)明显提高(t=5.67,P=0.002);而衰老相关基因p16表达量(0.460±0.085)较对照组(1.009±0.163)明显降低(t=12.24,P=0.007);p53表达量(0.301±0.041)较对照组(1.004±0.115)明显降低(t=7.77,P=0.016)。雌激素长期处理后,雌激素处理组的克隆形成率(0.058±0.008)显著高于对照组(0.013±0.008),差异有统计学意义(t=5.60,P=0.028),成骨能力显著强于对照组(A_(对照组)=1.238±0.084;A_(E2)=2.460±0.182,t=16.41,P〈0.001)。结论雌激素能提高h TERT和Oct4、Sox2、c-Myc的基因表达量,维持细胞增殖,抑制细胞衰老。雌激素长期处理能维持体外扩增时h PDLSC的干性。 展开更多
关键词 雌激素 人牙周膜干细胞 干性 人端粒酶逆转录酶
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低氧对人牙周膜干细胞骨向分化的影响 预览
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作者 刘衍钊 孙世林 +3 位作者 顾旷 刘雨 邹多宏 王元银 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第7期965-969,共5页
目的探讨低氧对人牙周膜干细胞(PDLSCs)骨向分化的影响。方法采用组织块法体外分离培养PDLSCs,分别在常氧和低氧条件下培养PDLSCs,低氧组在2%O2浓度下培养6、12、24、48 h后检测其碱性磷酸酶(ALP)活性,并通过荧光定量PCR检测低氧培... 目的探讨低氧对人牙周膜干细胞(PDLSCs)骨向分化的影响。方法采用组织块法体外分离培养PDLSCs,分别在常氧和低氧条件下培养PDLSCs,低氧组在2%O2浓度下培养6、12、24、48 h后检测其碱性磷酸酶(ALP)活性,并通过荧光定量PCR检测低氧培养的PDLSCs中骨钙素(OCN)、低氧诱导因子1α(Hif-1α)、碱性磷酸酶(ALP)以及成骨相关基因核心结合因子(Runx-2)等基因的表达变化;通过Western blot法检测低氧培养的PDLSCs中Runx-2、Hif-1α等蛋白的表达变化。结果低氧组的PDLSCs的ALP水平高于常氧组,但低氧48h开始抑制ALP水平,荧光定量PCR和Western blot结果显示低氧培养48h内的PDLSCs的成骨能力高于常氧组,但低氧培养48h则抑制其成骨能力。结论48h内低氧可显著增强PDLSCs骨向分化作用,48h则开始抑制其成骨能力。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 低氧 骨向分化
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miR-26a修饰的人牙周膜干细胞成骨分化能力的研究 被引量:1
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作者 米修奎 李彦 +1 位作者 余善超 胡文军 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第3期445-448,456共5页
目的:研究人牙周膜干细胞(hPDLSCs)在转染miR-26a后成骨分化的促进效果。方法:从因正畸拔除的无龋坏、无牙周疾病离体牙的牙根中部牙周膜组织中分离、胶原酶消化,进行人牙周膜干细胞的体外培养。使用脂质体2000进行miRNA转染,采用... 目的:研究人牙周膜干细胞(hPDLSCs)在转染miR-26a后成骨分化的促进效果。方法:从因正畸拔除的无龋坏、无牙周疾病离体牙的牙根中部牙周膜组织中分离、胶原酶消化,进行人牙周膜干细胞的体外培养。使用脂质体2000进行miRNA转染,采用激光共聚焦观察转染效果;MTT方法检测转染后的细胞活力;成骨诱导后使用实时定量PCR技术检测miRNA修饰的hPDLSCs成骨分化相关基因的表达;采用BCIP/NBT、天狼星红、茜素红S分别对碱性磷酸酶、胶原以及钙化进行染色观察。结果:采用脂质体2000能够成功转染hPDLSCs,且转染效率较高;转染后的细胞活力有所下降,但仍在80%以上;转染后的细胞在经成骨诱导分化过程中骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)基因表达显著上调,同时碱性磷酸酶活性、胶原分泌以及钙化能力均得到显著提升。结论:miR-26a可以用于修饰hPDLSCs以提高其成骨分化能力。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 成骨分化 miR-26a 细胞培养
乏氧微环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响 预览 被引量:1
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作者 许悦 李璐 徐艳 《口腔医学》 CAS 2016年第5期478-480,共3页
人牙周膜干细胞是牙周组织中具有自我更新和多向分化潜能的一类成体干细胞,在特定诱导条件下可以成骨分化。牙周膜处于一个相对乏氧的环境,人牙周膜干细胞在牙周膜中承载着多种机械应力。探讨乏氧环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分... 人牙周膜干细胞是牙周组织中具有自我更新和多向分化潜能的一类成体干细胞,在特定诱导条件下可以成骨分化。牙周膜处于一个相对乏氧的环境,人牙周膜干细胞在牙周膜中承载着多种机械应力。探讨乏氧环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响更接近于体内环境,更有助于获得真实的牙周组织改建的实验室资料。该文对乏氧微环境下机械应力对人牙周膜干细胞成骨分化的影响做一系统性回顾。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 乏氧 机械应力 成骨分化
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转化生长因子β1在骨形态发生蛋白2诱导的人牙周膜干细胞成骨分化中的作用 预览 被引量:2
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作者 刘彩宏 王军强 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2016年第6期332-337,共6页
目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导人牙周膜干细胞(h PDLSCs)成骨分化中的作用。方法:体外分离、培养h PDLSCs,经流式细胞术鉴定后随即分为4组:空白对照组、单纯BMP-2(50 ng/m L)诱导组、BMP-2... 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导人牙周膜干细胞(h PDLSCs)成骨分化中的作用。方法:体外分离、培养h PDLSCs,经流式细胞术鉴定后随即分为4组:空白对照组、单纯BMP-2(50 ng/m L)诱导组、BMP-2+TGF-β1(20 ng/m L)联合处理组、BMP-2+LY364947(10μmol/L)联合处理组,分别于诱导培养后3、6、9、12 d时,用实时定量PCR检测各组细胞中成骨相关基因ALP、Col-1、Runx2、OCN mRNA的表达水平;诱导培养12 d后,用Western blot法检测各细胞中上述各成骨相关基因的蛋白表达水平;诱导培养28 d后,Von Kossa染色观察各组的矿化结节形成情况。结果:单纯BMP-2诱导能显著提高h PDLSCs中ALP、Col-1、Runx2、OCN mRNA及蛋白的表达水平(P〈0.05),并能显著促进其矿化结节的形成。当在BMP-2诱导液中加入TGF-β1后,可显著促进BMP-2的上述效果(P〈0.05);而加入LY364947后则会显著抑制BMP-2的上述效果。结论:TGF-β1可显著促进BMP-2诱导h PDLSCs的成骨分化。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 成骨分化 转化生长因子Β1
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