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下调miR-92a对非小细胞肺癌细胞增殖及血管生成因子表达的影响 预览
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作者 汤建华 冯平 +1 位作者 张志华 王布 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期38-42,共5页
目的探讨miR-92a下调对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖及血管生成的影响。方法将NSCLC中A549细胞分为三组培养:A549组(未转染A549细胞)、sc-siRNA组(转染sc-siRNA的A549细胞)、miR-92a-siRNA组(转染miR-92a-si... 目的探讨miR-92a下调对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖及血管生成的影响。方法将NSCLC中A549细胞分为三组培养:A549组(未转染A549细胞)、sc-siRNA组(转染sc-siRNA的A549细胞)、miR-92a-siRNA组(转染miR-92a-siRNA的A549细胞)。分别采用RT-PCR和Western blot检测A549细胞和正常人支气管上皮(human bronchial epithelial,HBE)细胞中miR-92a相对表达量、PTEN、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白相对表达水平。采用活细胞计数法和结晶紫染色实验检测各组A549细胞的增殖能力。结果miR-92a在A549组细胞中的相对表达量高于HBE细胞(P<0.05);A549组细胞中PTEN蛋白表达水平低于HBE细胞(P<0.05),VEGF蛋白表达水平高于HBE细胞(P<0.05);miR-92a-siRNA组细胞中miR-92a相对表达量降低(P<0.05),PTEN蛋白表达水平升高(P<0.05),VEGF蛋白表达水平降低(P<0.05);miR-92a-siRNA组细胞中PI3K和Akt蛋白表达水平均下降(P<0.05);miR-92a-siRNA组细胞数目减少,细胞增殖能力减弱。结论NSCLC中A549细胞的miR-92a表达明显上调,miR-92a基因沉默能明显抑制细胞增殖、血管生成,PTEN和VEGF相关PI3K/Akt信号通路可能在此过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 肺肿瘤 非小细胞肺癌 A549细胞 人支气管上皮细胞 miR-92a 细胞增殖 血管生成
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PM2.5对支气管上皮细胞凋亡基因表达水平的影响
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作者 王冰玉 郑凯 +3 位作者 徐新云 谢红卫 于军晖 龙鼎新 《职业与健康》 CAS 2019年第17期2332-2336,共5页
目的探讨PM2.5对支气管上皮(HBE)细胞凋亡基因表达的影响。方法用PM2.5低剂量10μg/m L和高剂量50μg/mL对HBE细胞染毒,用未染毒的细胞作为对照组,10μg/mL的Cr6+为阳性对照组,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)检测凋亡基因Caspa... 目的探讨PM2.5对支气管上皮(HBE)细胞凋亡基因表达的影响。方法用PM2.5低剂量10μg/m L和高剂量50μg/mL对HBE细胞染毒,用未染毒的细胞作为对照组,10μg/mL的Cr6+为阳性对照组,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)检测凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平变化情况,Western blot检测凋亡基因的蛋白质表达变化情况。结果 qRT-PCR结果显示,与对照组比较,PM2.510μg/mL和50μg/mL染毒以及阳性对照组染毒后,Caspase-3基因表达量分别升高193.0%、340.0%、214.0%,Caspase-8基因表达分别升高50.0%、84.0%、71.0%,Caspase-9基因表达分别升高94.0%、177.0%、117.0%,Bax基因表达分别升高8.0%、38.0%、57.0%,Bcl-2基因表达水平分别下降26.0%、46.0%、57.0%。Western blot结果显示,与对照组比较,Caspase-3蛋白在PM2.510μg/mL和50μg/mL染毒和Cr6+染毒后表达水平分别升高22.4%、48.6%、21.8%,Caspase-8蛋白表达水平分别升高54.7%、77.8%、64.3%,Caspase-9蛋白表达水平分别升高16.1%、82.7%、25.1%,Bax蛋白表达水平分别升高54.7%、90.4%、42.8%,Bcl-2蛋白表达量分别下降20.5%、41.8%、27.6%。结论 PM2.5染毒引起HBE细胞中凋亡基因表达升高,抑凋亡基因表达下降,提示雾霾对凋亡基因表达水平具有明显影响。 展开更多
关键词 PM2.5 雾霾 人支气管上皮细胞 凋亡 基因表达
甲苯二异氰酸酯诱导人支气管上皮细胞炎症反应及自噬
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作者 陈昱君 张玉 +4 位作者 于功昌 杨玉婷 赛林霖 薄存香 贾强 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2019年第1期1-7,共7页
目的探讨甲苯二异氰酸酯(TDI)对人支气管上皮细胞(16HBE)自噬的活化及炎性因子人白细胞介素(IL)-4、IL-6表达的影响。方法①制备TDI-人血清白蛋白(HSA),测定TDI-HAS中TDI的质量浓度。②分别以剂量为0.00~400.00 mg/L的TDI-HSA和HSA处理... 目的探讨甲苯二异氰酸酯(TDI)对人支气管上皮细胞(16HBE)自噬的活化及炎性因子人白细胞介素(IL)-4、IL-6表达的影响。方法①制备TDI-人血清白蛋白(HSA),测定TDI-HAS中TDI的质量浓度。②分别以剂量为0.00~400.00 mg/L的TDI-HSA和HSA处理细胞12 h后,以CCK-8实验测定细胞存活率,选择后续实验的TDI-HSA和HSA处理剂量。③分别以剂量为0.00~120.00 mg/L的TDI-HSA和HSA处理细胞12 h后,以流式细胞仪检测细胞中活性氧(ROS)水平,以酶联免疫吸附法检测细胞上清液中IL-4和IL-6的水平。④以剂量为0.00~120.00 mg/L的TDI-HSA处理细胞12 h后,在透射电子显微镜下观察细胞自噬活动,以蛋白免疫印迹法测定酵母自噬相关基因6 (Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3β)和泛素结合蛋白P62的蛋白相对表达水平。结果①40.00、80.00、120.00 mg/L TDI-HSA组中TDI的质量浓度分别为0.44、0.89、1.33 mg/L。②CCK-8实验结果显示,剂量为120.00 mg/L以下的TDI-HSA和HSA不影响细胞存活率,选择0.00~120.00 mg/L为后续实验的TDI-HSA和HAS处理剂量。③40.00、80.00、120.00 mg/L TDI-HSA组16HBE细胞中ROS水平和细胞上清液中IL-4、IL-6的水平均高于同剂量HSA组(P<0.01);16HBE细胞中ROS水平和细胞上清液中IL-4、IL-6的水平均随着TDI-HSA剂量的增加而增加(P<0.01)。④透射电镜观察显示,与0.00 mg/L组比较,40.00、80.00、120.00 mg/L TDI-HSA组16HBE细胞内自噬溶酶体数量明显增多,线粒体空泡化数量增加。随着TDI-HSA剂量的增加,16HBE细胞上清液中Beclin1蛋白相对表达水平及LC3β-Ⅱ/Ⅰ比值逐渐升高(P<0.05),P62蛋白相对表达水平逐渐下降(P<0.01)。结论 TDI-HSA可诱导16HBE细胞ROS及炎性因子表达水平升高并诱导自噬的活化;细胞自噬可能是TDI诱导职业性哮喘发生中气道炎症反应的重要因素。 展开更多
关键词 甲苯二异氰酸酯 人支气管上皮细胞 活性氧 炎性因子 自噬
血管内皮生长因子在六价铬诱导的肺支气管上皮细胞Beas-2B恶性转化中的作用 预览
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作者 刘意 闫庆韬 +1 位作者 万斯傲 陆健 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2019年第5期369-374,共6页
目的:探究在六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells-2B,Beas-2B)恶性转化过程中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在迁移、侵袭及血管生成等方面的生物学作用及其可能机制... 目的:探究在六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells-2B,Beas-2B)恶性转化过程中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在迁移、侵袭及血管生成等方面的生物学作用及其可能机制。方法:通过对VEGF高表达的恶转细胞Cr(Ⅵ)-Beas-2B转染重组VEGF质粒和siRNA,分别上调和下调VEGF的表达,利用蛋白免疫印迹检测VEGF表达及迁移侵袭相关蛋白表达,划痕实验、Transwell实验、免疫荧光实验检测细胞迁移、侵袭等运动能力的改变,以及小管生成实验检测细胞血管生成能力的变化。结果:重组质粒过表达VEGF上调了恶转细胞中VEGF、基质金属蛋白酶-9、磷酸化黏着斑激酶和磷酸化Src蛋白的表达,下调了钙黏蛋白的表达;重组质粒过表达VEGF增强迁移、侵袭及血管生成能力;siRNA干扰处理结果相反。结论:VEGF通过影响迁移、侵袭相关蛋白的表达从而调控细胞迁移、侵袭以及血管生成,参与六价铬致癌过程。 展开更多
关键词 人支气管上皮细胞 六价铬 血管内皮生长因子 迁移侵袭 血管生成
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PM2.5对支气管上皮细胞DNA损伤作用研究 预览
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作者 王冰玉 郑凯 +3 位作者 徐新云 谢红卫 于军晖 龙鼎新 《癌变.畸变.突变》 CAS 2019年第6期469-473,497,共6页
目的:探讨大气细颗粒物(PM2.5)染毒对人支气管上皮细胞(HBE)DNA损伤的作用。方法:分别用8、20、50μg/mL的PM2.5水溶液染毒HBE细胞24 h后,单细胞凝胶电泳实验(SCGE)检测DNA损伤情况。10和50μg/L的PM2.5水溶液染毒HBE细胞,以未染毒细胞... 目的:探讨大气细颗粒物(PM2.5)染毒对人支气管上皮细胞(HBE)DNA损伤的作用。方法:分别用8、20、50μg/mL的PM2.5水溶液染毒HBE细胞24 h后,单细胞凝胶电泳实验(SCGE)检测DNA损伤情况。10和50μg/L的PM2.5水溶液染毒HBE细胞,以未染毒细胞作为阴性对照组,10μmol/L的Cr6+水溶液为阳性对照组,实时荧光定量PCR(qPCR)检测DNA损伤修复基因hOGG1、hMTH1的mRNA表达水平的变化,Western blot检测hOGG1、hMTH1蛋白表达变化。结果:单细胞凝胶电泳检测8、20和50μg/mL PM2.5水溶液染毒组HBE细胞的尾部DNA含量、尾长、尾距较阴性对照组明显增加(P<0.05或P<0.01)。qPCR结果显示,与阴性对照组比较,HBE细胞hOGG1 mRNA表达水平在10和50μg/mL PM2.5水溶液染毒以及阳性对照Cr6+水溶液染毒后分别升高75.0%、132.0%、214.0%;hMTH1 mRNA分别升高61.0%、144.0%、75.0%。Western blot结果显示,与阴性对照组比较,H BE细胞hOGG1蛋白表达水平在10和50μg/mL PM2.5水溶液染毒以及Cr6+水溶液染毒后分别升高47.6%、64.0%、47.0%;hMTH1蛋白分别升高20.5%、49.8%、20.9%。结论:PM2.5水溶液染毒对HBE细胞DNA具有明显的损伤作用,并引起HBE细胞DNA损伤修复基因hOGG1、hMTH1表达水平升高。 展开更多
关键词 大气细颗粒物 人支气管上皮细胞 DNA损伤 单细胞凝胶电泳实验
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基于Notch通路研究化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞MRP1的影响
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作者 李妮妮 蒋成君 +1 位作者 郭艳 汪电雷 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1442-1448,共7页
目的基于Notch通路探讨化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞(16HBE)中多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达和外排功能的影响。方法根据血清药理学的方法制备化痰降气胶囊含药血清和空白血清,然后将含药血清分为5%、10%、15%、20%4个浓度对1... 目的基于Notch通路探讨化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞(16HBE)中多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达和外排功能的影响。方法根据血清药理学的方法制备化痰降气胶囊含药血清和空白血清,然后将含药血清分为5%、10%、15%、20%4个浓度对16HBE细胞进行干预,CCK-8法检测细胞增殖率筛选出最佳作用浓度;细胞分为空白血清组、香烟烟雾提取物(CSE)+空白血清组、CSE+含药血清组、化痰降气胶囊含药血清组、Notch通路抑制剂DAPT+空白血清组、DAPT+含药血清组,用Western Blot法检测各组Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达;以5-羧基二乙酸荧光素(5-CFDA)为底物,采用流式细胞术检测细胞内荧光强度的变化评价MRP1的外排功能;免疫荧光法检测Notch1的胞内段(NICD)核移位活性。结果化痰降气胶囊含药血清的最佳作用浓度为15%。与空白血清组比较,含药血清组Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达呈浓度依赖性升高(P<0.05,P<0.01),MRP1转运体的外排能力明显提高(P<0.01),细胞核内NICD的荧光强度有所增强;而CSE+空白血清组蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与CSE+空白血清组比较,CSE+化痰降气胶囊含药血清组的Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01);与化痰降气胶囊含药血清组比较,DAPT+化痰降气胶囊含药血清组的Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),MRP1的外排能力也降低(P<0.01),胞质胞核荧光强度均减弱。结论化痰降气胶囊含药血清可能通过Notch通路上调16HBE细胞中MRP1的表达和外排功能,这可能是其治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用机制之一。 展开更多
关键词 化痰降气胶囊含药血清 慢性阻塞性肺疾病 多药耐药相关蛋白1 Notch信号通路 人支气管上皮细胞
PM2.5对HBE细胞癌基因表达水平的影响
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作者 郑凯 王冰玉 +2 位作者 徐新云 耿红 龙鼎新 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期561-566,共6页
目的探讨大气细颗粒物(PM2.5)对人支气管上皮细胞(HBE细胞)癌基因表达水平的影响.方法以HBE细胞为研究对象,设PM2.5处理组(10 μg/ml和50 μg/ml)、阴性对照组和阳性对照组(10 μmol/L Cr6+).用CCK8实验检测PM2.5半数抑制浓度(IC50);应... 目的探讨大气细颗粒物(PM2.5)对人支气管上皮细胞(HBE细胞)癌基因表达水平的影响.方法以HBE细胞为研究对象,设PM2.5处理组(10 μg/ml和50 μg/ml)、阴性对照组和阳性对照组(10 μmol/L Cr6+).用CCK8实验检测PM2.5半数抑制浓度(IC50);应用荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测c-myc、c-fos、k-ras和p53基因和蛋白表达水平变化.结果 PM2.5的IC50为70.12 μg/ml.与阴性对照组比较,10和50 μg/ml PM2.5组以及阳性对照组HBE细胞c-myc基因表达水平分别升高500.1%、780.7%、305.3%,c-fos基因表达水平分别升高34.0%、76.7%、131.3%,k-ras基因表达水平分别升高50.3%、107.0%、49.7%,p53基因表达水平分别下降28.3%、28.7%、59.7%,差异均有统计学意义(P<0.05).与阴性对照组比较,50 μg/ml PM2.5组和阳性对照组HBE细胞c-myc蛋白表达水平分别升高29.7%、77.3%,c-fos蛋白表达水平分别升高200.3%、137.0%,差异均有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组比较,10和50 μg/ml PM2.5组以及阳性对照组HBE细胞k-ras蛋白表达水平分别升高106.3%、130.3%、116.7%,p53蛋白表达水平分别下降43.7%、53.3%、52.1%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论大气PM2.5对HBE细胞中癌基因表达具有明显促进作用,PM2.5致癌可能与其促进癌基因表达存在密切关系. 展开更多
关键词 细颗粒物 雾霾 人支气管上皮细胞 癌基因 基因表达
GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中LINC00472的表达及其意义 预览
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作者 谢广云 郭浩然 +4 位作者 王全凯 马顺鹏 宋佳阳 乌瀚宝栎尔 许建宁 《癌变.畸变.突变》 CAS 2019年第6期449-453,共5页
目的:探讨在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中长链非编码RNA LINC00472的表达特征及其生物学意义。方法:以DMSO作为溶剂对照组,实验组采用8μg/mL的GMA染毒处理72 h,重复染毒3次,传代培养,收获两组细... 目的:探讨在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中长链非编码RNA LINC00472的表达特征及其生物学意义。方法:以DMSO作为溶剂对照组,实验组采用8μg/mL的GMA染毒处理72 h,重复染毒3次,传代培养,收获两组细胞的第10、20和30代(分别代表前、中、后期)16HBE细胞,采用Arraystar人类LncRNA芯片(v4.0)分析细胞中LINC00472的表达改变,实时荧光定量PCR(qPCR)检测LINC00472和预测靶基因miR-24-3p的相对表达水平。结果:芯片检测结果显示,与同代龄DMSO对照组相比,GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中LINC00472在转化第10代和第20代分别下调2.30倍和3.57倍,第30代上调2.32倍。qPCR检测结果表明,与同代龄对照组相比,LINC00472在早期的相对表达水平差异无统计学意义,而在中期和后期的相对表达水平的变化情况与芯片结果基本一致,其可能的靶基因miR-24-3p在不同时期相对表达水平的差异均具有统计学意义(P<0.05),但差异倍数均<2。结论:LINC00472在GMA诱导16HBE细胞恶性转化的前期表达水平未发生明显改变,而在细胞恶性转化的中期低表达、后期高表达,推测LINC00472可能在GMA诱导16HBE细胞恶性转化后期发挥作用,但LINC00472和miR-24-3p在此过程中是否存在相互作用以及其作用机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 长链非编码RNA LINC00472 甲基丙烯酸环氧丙酯 人支气管上皮细胞 细胞恶性转化
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不同浓度百草枯对人支气管上皮细胞自噬的影响 预览
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作者 李晶 雷雯 +6 位作者 邓树豪 樊都 普玲 杨冬梅 赵晓远 李洋 董昭兴 《昆明医科大学学报》 CAS 2019年第1期10-13,共4页
目的研究不同浓度百草枯(PQ)对人支气管上皮细胞(16HBE)自噬的影响。方法不同浓度(50μM,150μM,500μM)的百草枯作用16HBE,分别在0h、12h、24h通过Western Blot检测细胞中LC3-Ⅱ蛋白、LC3-Ⅰ蛋白及P62蛋白的表达,电镜观察染毒组及对照... 目的研究不同浓度百草枯(PQ)对人支气管上皮细胞(16HBE)自噬的影响。方法不同浓度(50μM,150μM,500μM)的百草枯作用16HBE,分别在0h、12h、24h通过Western Blot检测细胞中LC3-Ⅱ蛋白、LC3-Ⅰ蛋白及P62蛋白的表达,电镜观察染毒组及对照组自噬小体变化。结果在实验中,PQ染毒组观察到细胞质中出现广泛大量自噬小体,相较对照组,自噬小体明显增多。50μMPQ染毒组WesternBlot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白浓度24h组最高,12h组次之,对照组表达水平最低(P<0.05),P62蛋白浓度24h最低,12h次之,对照组表达水平最高(P<0.05)。150μMPQ染毒组Western Blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白浓度各干预组与对照组相比无明显统计学意义,P62蛋白浓度各干预组与对照组相比统计学意义(P >0.05)。500μMPQ染毒组WesternBlot检测LC3-II/LC3-I蛋白浓度各干预组与对照组相比无明显统计学意义(P >0.05),P62蛋白浓度各干预组与对照组相比无统计学意义(P >0.05)。结论PQ作用人支气管上皮细胞调节自噬具有时间和浓度依赖性。 展开更多
关键词 百草枯 自噬 人支气管上皮细胞
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薄荷醇通过mTOR活化促进人支气管上皮细胞气道炎症相关因子的表达 预览
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作者 陈海博 李敏超 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1344-1349,共6页
目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)气道炎症相关因子表达的影响及其机制。方法将细胞分为4组:正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧... 目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)气道炎症相关因子表达的影响及其机制。方法将细胞分为4组:正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测瞬时受体电位蛋白-8(TRPM8)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达,Western blot检测BEAS-2B中磷酸化的mTOR(p-mTOR)、TRPM8、TNF-α和IL-1β的蛋白表达。用流式细胞术检测胞内Ca2+荧光强度。结果与正常对照组相比,薄荷醇组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达升高,p-mTOR蛋白表达升高,胞内Ca2+浓度升高(P<0.05)。与正常对照组相比,雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达均无差异(P>0.05),p-mTOR蛋白表达降低(P<0.05),胞内Ca2+浓度无差异(P>0.05)。与薄荷醇组相比,薄荷醇+雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1βmRNA及蛋白表达降低,p-mTOR蛋白表达降低,胞内Ca2+浓度降低(P<0.05)。结论薄荷醇可能通过活化mTOR诱导胞内Ca2+浓度升高,进而促进气道炎症相关因子IL-1β和TNF-α的表达。 展开更多
关键词 人支气管上皮细胞 薄荷醇 瞬时受体电位蛋白-8 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 气道炎症
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香烟烟雾提取物对人支气管上皮细胞SIRT6、Caspase-9表达的影响
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作者 陈耀丰 吴东 +2 位作者 赖天文 李炎玉 吴斌 《国际呼吸杂志》 2018年第13期983-986,共4页
目的观察香烟烟雾提取物(CSE)对人支气管上皮细胞(16HBE)中人沉默信息调节因子6(SIRT6)、Caspase-9表达的影响。方法体外培养16HBE,加入不同浓度新鲜CSE诱导细胞,通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法及Western blotting方法检... 目的观察香烟烟雾提取物(CSE)对人支气管上皮细胞(16HBE)中人沉默信息调节因子6(SIRT6)、Caspase-9表达的影响。方法体外培养16HBE,加入不同浓度新鲜CSE诱导细胞,通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法及Western blotting方法检测SIRT6及Caspase-9的表达量。比较(0%、5%、7.5%、10%)的CSE对16HBE中SIRT6、Caspase-9表达的影响。结果16HBE经过不同浓度(0%、5%、7.5%、10%)的CSE处理后,SIRT6mRNA表达差异有显著统计学意义(P〈0.01)。两两比较,各组间除5%CSE组和7.5%CSE组比较差异无统计学意义外(P〉O.05),其余各组两两比较差异均有显著统计学意义(P〈0.01)。Caspase-9mRNA表达差异有显著统计学意义(P〈O.01)。两两比较,各组间差异均有显著统计学意义(P〈0.01)。16HBE经过不同浓度(0%、5%、7.5%、10%)的CSE处理后。SIRT6蛋白、Caspase-9蛋白表达差异有显著统计学意义(P〈0.01)。两两比较,各组间差异均有显著统计学意义(P〈0.01或〈O.05)。结论CSE可引起16HBESIRT6、Caspase-9表达的改变。 展开更多
关键词 香烟烟雾提取物 人支气管上皮细胞 人沉默信息调节因子6
支气管上皮中GULP1蛋白的表达与慢性阻塞性肺疾病严重程度的关系研究 预览 被引量:2
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作者 张扬帆 郝尧 《临床肺科杂志》 2018年第4期670-673,共4页
目的 探讨支气管上皮中GULP1蛋白的表达与慢性阻塞性肺疾病患者严重程度的关系。方法 选取2015年1月-2016年1月期间我院收治的100例慢性阻塞性肺疾病患者作为研究对象,设为观察组,根据其疾病进展分为轻中度组(n=64)和重度组(n=36),选取... 目的 探讨支气管上皮中GULP1蛋白的表达与慢性阻塞性肺疾病患者严重程度的关系。方法 选取2015年1月-2016年1月期间我院收治的100例慢性阻塞性肺疾病患者作为研究对象,设为观察组,根据其疾病进展分为轻中度组(n=64)和重度组(n=36),选取同期非慢性阻塞性肺疾病患者作为对照组(n=50),比较不同组患者的GULP1蛋白表达阳性率,并对GULP1蛋白表达与慢阻肺分级以及肺泡巨噬细胞数量相关性进行分析。结果 观察组患者支气管上皮中GULP1蛋白的表达阳性率(69.0%)显著高于对照组(2.0%)(P<0.05);重度组患者的支气管上皮中GULP1蛋白的表达阳性率(97.2%)显著高于轻中度组(53.1%)(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示支气管上皮中GULP1蛋白的表达评分与慢阻肺分级呈显著正相关(r=0.145,P=0.003);Spearman相关性分析结果显示慢阻肺患者支气管上皮中GULP1蛋白的表达与肺泡巨噬细胞数量呈显著正相关(r=0.432,P=0.015)。结论 慢阻肺疾病患者支气管上皮中GULP1蛋白的表达水平显著增加,且与疾病的严重程度呈正相关,GULP1蛋白参与慢阻肺疾病调控过程可能与肺泡巨噬细胞相关,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 支气管上皮 GULP1蛋白 慢性阻塞性肺 肺气肿 肺泡巨噬细胞
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糖原合成酶激酶3参与尼古丁调控支气管上皮细胞促纤维因子的分泌
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作者 邹威凤 盛青 +2 位作者 周晓婷 黎希 刘锐强 《国际呼吸杂志》 2018年第14期1057-1060,共4页
目的本研究旨在探讨尼古丁是否通过糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的活性变化及其对β-连环素信号的影响调控气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血小板衍生生长因子AB(PDGF—AB)和PDGF-BB分泌。方法尼古丁(6×10μmol/L)刺... 目的本研究旨在探讨尼古丁是否通过糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的活性变化及其对β-连环素信号的影响调控气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血小板衍生生长因子AB(PDGF—AB)和PDGF-BB分泌。方法尼古丁(6×10μmol/L)刺激人气道上皮细胞株(16HBE),采用Western blotting方法检测刺激24h后细胞中GSK3β和抑制性磷酸化GSK3β(P—GSK3β)的表达水平。预先加入10μmol/LGSK3~特异性抑制剂SB216763孵育1h,再加入尼古丁刺激16HBE24h,细胞免疫荧光和Western blotting方法检测D-连环素胞浆和胞核的表达,用酶联免疫吸附试验检测MMP-9、PDGF-AB和PDGF-BB分泌。结果尼古丁刺激24h后P—GSK313的表达较未予尼古丁刺激的正常对照组明显升高,GSK3β的表达下降。加入SB216763后尼古丁刺激24h组,β-连环素胞浆和胞核的表达较尼古丁组明显增加,同时MMP-9、PDGF-AB和PDGF—BB分泌量显著增加。结论GSK3β/β-连环素信号通路参与了尼古丁调控支气管上皮细胞MMP-9、PDGF—AB和PDGF-BB分泌。 展开更多
关键词 人气道上皮细胞株 尼古丁 糖原合成酶激酶3β/β连环素 促纤维因子
LncRNA RMST在GMA诱导16HBE人支气管上皮细胞恶性转化过程中的表达及意义
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作者 王全凯 郭浩然 +4 位作者 谢广云 马顺鹏 温亚男 朱宝立 许建宁 《毒理学杂志》 CSCD 2018年第6期457-460,461共5页
目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)横纹肌肉瘤相关转录物-2(RMST)在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中的表达特征及生物学意义。方法收集GMA转化组和DMSO对照组的第10、20和30代细胞,高通量芯片分析LneRNA... 目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)横纹肌肉瘤相关转录物-2(RMST)在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中的表达特征及生物学意义。方法收集GMA转化组和DMSO对照组的第10、20和30代细胞,高通量芯片分析LneRNA RMST在转化不同时期的表达改变,对其进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测LncRNA RMST和可能相互作用的miRNA相对表达量。结果芯片结果显示,与对照组相比,LncRNA RMST在转化的前期(P10)、中期(P20)和后期(P30)分别上调4.75倍、上调1.90倍和下调2.53倍,且相对表达量呈下降趋势。LneRNA RMST表达变化趋势的qPCR验证结果与芯片结果一致,而3个时期miR-135a-2相对表达量的差异均无统计学意义(P >0.05)。结论LncRNA RMST在GMA诱导16HBE细胞恶性转化的早、中期高表达,在转化完成时低表达,并呈下降的趋势;LncRNA RMST可以作为GMA诱导16HBE细胞恶性转化的相关分子标志物,其功能和作用机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 横纹肌肉瘤相关转录物-2 甲基丙烯酸环氧丙酯 人支气管上皮细胞 细胞恶性转化
人支气管上皮细胞表达的斯钙素-1在上皮间充质转化中的作用研究 被引量:1
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作者 许家艳 孟亚奇 +1 位作者 贾嫚 姚欣 《南京医科大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第9期1198-1203,共6页
目的:明确斯钙素-1(stanniocalcin-1,STC1)对支气管上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,以及香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对支气管上皮细胞STC1表达调控的效应,探讨STC1在慢性阻塞性... 目的:明确斯钙素-1(stanniocalcin-1,STC1)对支气管上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,以及香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对支气管上皮细胞STC1表达调控的效应,探讨STC1在慢性阻塞性肺疾病气道EMT中的可能作用。方法:采用转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)处理人支气管上皮(16HBE)细胞72 h诱导EMT模型:外源加入STC1重组蛋白(rh STC1),Western blot及免疫荧光法检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)表达。采用CSE刺激16HBE细胞24 h:实时定量PCR及Western blot检测STC1 m RNA和蛋白表达差异,外源加入NF-κB抑制剂JSH23,Western blot检测STC1表达差异。结果:TGF-β可诱导16HBE细胞由典型的多边铺路石样变为长梭形,上皮细胞标志物E-cadherin表达下降,间质细胞标志物α-SMA表达增加,rh STC1可逆转上述改变。CSE可刺激16HBE细胞STC1表达增高,且呈浓度依赖性增加,外源加入NF-κB抑制剂JSH23可抑制上述效应。结论:STC1在慢性阻塞性肺疾病形成过程中,是抑制气道EMT的保护性因素。CSE局部刺激支气管上皮细胞,通过NF-κB信号导致STC1反应性增加可能是其主要来源之一。 展开更多
关键词 斯钙素-1 人支气管上皮细胞 上皮间充质转化 慢性阻塞性肺疾病
IKBKE在烟气凝集物诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中的作用
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作者 周继红 洪磊 +7 位作者 蒋鹏 袁娜娜 李勤 陈余清 王效静 朱茂祥 杨陟华 李伟 《第三军医大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第13期1221-1228,共8页
目的 探讨核因子κB抑制蛋白E抗体(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon,IKBKE)在卷烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用及其分子机制。方法 CS... 目的 探讨核因子κB抑制蛋白E抗体(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon,IKBKE)在卷烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用及其分子机制。方法 CSC慢性染毒BEP2D细胞至P70代(0.001支烟/m L),裸鼠皮下成瘤实验观察染毒细胞是否发生恶性转化;采用Western blot检测各代细胞以及CSC急性染毒BEP2D细胞(0.006支烟/mL)4、8、12、24 h和48 h后IKEBE的表达;免疫组化检测烟熏1、3、9个月A/J小鼠外周小气道和瘤体组织IKBKE的表达;慢病毒IKBKE-siRNA感染P70细胞,观察其对细胞增殖、细胞克隆形成和凋亡的影响;观察敲减IKBKE对STAT3信号通路分子表达的影响及STAT3信号通路激活剂IL-6对细胞恶性转化的影响。结果 与P0、P50细胞相比,P70细胞具有恶性转化表型;IKBKE显著高表达于P70细胞(P〈0.05),亦是CSC诱导的早期分子事件;在烟气暴露A/J小鼠肺肿瘤组织中IKBKE表达显著增高(P〈0.01);siRNA沉默IKBKE可显著抑制细胞增殖和细胞克隆形成,诱导细胞凋亡;该作用与抑制STAT3磷酸化有关。结论 IKBKE可能通过调控STAT3通路抑制细胞凋亡,促进其增殖,参与吸烟诱导肺癌发生。 展开更多
关键词 肺癌 核因子κB抑制蛋白E抗体 卷烟烟气凝集物 人支气管上皮细胞
Lyn对屋尘螨诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响及其机制 预览
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作者 王孝芸 蓝楠 +3 位作者 唐红梅 袁谢芳 王星 李国平 《吉林大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第2期211-215,共5页
目的:探讨Lyn对屋尘螨(HDM)诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响,并初步阐明其可能的相关作用机制。方法:选取人支气管上皮16HBE细胞,将其分为PBS组(给予PBS)和HDM组(给予1μg·L-1 HDM),采用脂质体转染法将Lynsi... 目的:探讨Lyn对屋尘螨(HDM)诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响,并初步阐明其可能的相关作用机制。方法:选取人支气管上皮16HBE细胞,将其分为PBS组(给予PBS)和HDM组(给予1μg·L-1 HDM),采用脂质体转染法将LynsiRNA分别转至PBS组和HDM组细胞。构建人MUC5AC启动子荧光素酶报告基因,采用Promega双荧光素酶报告基因试剂盒检测相对荧光素酶活性(RLU),采用免疫荧光法检测16HBE细胞中MUC5AC的表达,并在共聚焦显微镜下观察。采用Western blotting法检测16HBE细胞中STAT6的表达水平。结果:双荧光素酶报告基因检测,HDM组16HBE细胞中MUC5AC启动子的RLU高于PBS组(P<0.05);与未干扰时比较,LynsiRNA干扰后HDM组RLU明显升高(P<0.05)。免疫荧光法检测,HDM组MUC5AC表达水平高于PBS组(P<0.05);与未干扰时比较,LynsiRNA干扰后HDM组MUC5AC表达水平升高(P<0.05)。Western blotting法检测,LynsiRNA干扰后,HDM组细胞中STAT6表达水平升高(P<0.05)。结论:Lyn缺失能增加人支气管上皮细胞中MUC5AC的表达,其机制可能与Lyn调控STAT6信号途径有关。 展开更多
关键词 LYN 屋尘螨 人支气管上皮细胞 MUC5AC STAT6
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Caveolin-1在TGF-β1诱导人支气管上皮细胞间质化中的作用 预览 被引量:1
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作者 钟长江 李建华 +3 位作者 岳喜磊 许继德 杨春涛 邓莉婷 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期1091-1097,共7页
目的:探究小窝蛋白1(caveolin-1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE细胞)上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法:以16HBE细胞株为研究对象,免疫荧光、RT-q PCR和Western blot实验检测16HBE细胞EMT过程中c... 目的:探究小窝蛋白1(caveolin-1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE细胞)上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法:以16HBE细胞株为研究对象,免疫荧光、RT-q PCR和Western blot实验检测16HBE细胞EMT过程中caveolin-1的mRNA和蛋白表达;Western blot检测siRNA干扰caveolin-1对16HBE细胞EMT的影响。结果:Caveolin-1广泛存在于16HBE细胞膜上,TGF-β1刺激后,caveolin-1的mRNA和蛋白表达减少(P〈0.05)。与TGF-β1组比较,caveolin-1 siRNA和TGF-β1共同作用促进了细胞形态的转化,抑制了E-钙黏蛋白的蛋白表达而促进了α-SMA的蛋白表达(P〈0.05)。TGF-β1刺激16HBE细胞后,AKT和Smad3在30 min磷酸化水平最高,与0 min对照组比较显著增加(P〈0.05);用siRNA干扰caveolin-1基因后再用TGF-β1刺激16HBE细胞30 min,下游信号蛋白分子AKT和Smad3的磷酸化水平增高,与TGF-β1组比较显著增加(P〈0.05)。结论:TGF-β1能下调16HBE细胞的caveolin-1表达水平;caveolin-1可能参与了TGF-β1诱导的16HBE细胞EMT过程中TGF-β1/Smad通路和PI3K-AKT通路的活化。 展开更多
关键词 转化生长因子β1 人支气管上皮细胞 上皮-间充质转化 小窝蛋白1 气道重塑
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埃兹蛋白在转化生长因子-β诱导的支气管上皮细胞间充质转化中的作用
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作者 贾嫚 闫小逸 +3 位作者 姜洁 孟亚奇 许家艳 姚欣 《中国呼吸与危重监护杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期280-286,共7页
目的 探讨埃兹蛋白(ezrin)在支气管上皮细胞(16HBE)间充质转化(EMT)中的作用。方法 建立转化生长因子-β(TGF-β)诱导的16HBE的EMT模型;RT-PCR和Western blot法检测16HBE中ezrin m RNA和蛋白表达;通过慢病毒sh RNA抑制ezrin表达... 目的 探讨埃兹蛋白(ezrin)在支气管上皮细胞(16HBE)间充质转化(EMT)中的作用。方法 建立转化生长因子-β(TGF-β)诱导的16HBE的EMT模型;RT-PCR和Western blot法检测16HBE中ezrin m RNA和蛋白表达;通过慢病毒sh RNA抑制ezrin表达,观察细胞形态,检测细胞EMT的生物标志分子上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和α-平滑肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)的m RNA和蛋白表达水平;加入外源性ezrin蛋白,细胞免疫荧光、RT-PCR及Western blot法检测其对EMT标志物的影响。结果 TGF-β能下调16HBE中ezrin的m RNA和蛋白表达。经ezrin敲减后,同TGF-β刺激表现相同,16HBE也由典型的铺路石样变为梭形,同时其E-cadherin表达下降,vimentin和α-SMA表达增加;加入重组蛋白ezrin后,16HBE的E-cadherin表达增多,vimentin和α-SMA表达下降。结论 TGF-β可能通过下调ezrin表达促进16HBE发生EMT。 展开更多
关键词 支气管上皮细胞 上皮间充质转化 转化生长因子-Β 埃兹蛋白
寒冷刺激支气管上皮细胞产生外泌体促肺成纤维细胞表达气道重塑相关因子 被引量:1
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作者 朱芮 李敏超 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期1070-1075,共6页
外泌体可由多种细胞分泌,是具有多种生物学功能的细胞外囊泡,但其在气道重塑中的作用尚不明确。为探讨经寒冷刺激的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)分泌的外泌体对人胚肺成纤维细胞(HLF1)气道重塑相关因子表达的影响,收集BEAS-2B细胞株... 外泌体可由多种细胞分泌,是具有多种生物学功能的细胞外囊泡,但其在气道重塑中的作用尚不明确。为探讨经寒冷刺激的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)分泌的外泌体对人胚肺成纤维细胞(HLF1)气道重塑相关因子表达的影响,收集BEAS-2B细胞株培养液提取外泌体,利用透射电镜及Western印迹对外泌体进行其大小、形态及标志性蛋白的检测;提取的外泌体与HLF1共同培育,分别设置空白对照组、正常对照组(加入未作干预的BEAS-2B细胞所产的外泌体)及寒冷刺激组(加入经寒冷刺激后的BEAS-2B细胞所产的外泌体)。运用Real-time PCR及Western印迹技术,分别检测各组HLF1表达FGF-2、TNF-α、MMP-9的mRNA及蛋白情况。结果显示,提取BEAS-2B细胞分泌的外泌体为直径小于100 nm的圆形或椭圆形结构,并表达外泌体标志性蛋白CD9、TSG101、ALIX;寒冷刺激组24 h后,其FGF-2、TNF-α、MMP-9的mRNA及蛋白表达均显著高于空白对照组及正常对照组(均P〈0.05)。本研究结果表明,BEAS-2B细胞能够释放外泌体;经寒冷刺激后的BEAS-2B细胞所释放的外泌体可以携带并传递生物信号,诱导HLF1表达气道重塑相关因子。 展开更多
关键词 寒冷刺激 外泌体 气道重塑 人支气管上皮细胞 人胚肺成纤维细胞
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