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新狼毒素A对人肝癌Hep G2细胞糖酵解的影响 预览
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作者 丁杨芳 任博雪 +3 位作者 赵微 李德芳 陈小宇 郑秋生 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期377-381,共5页
目的研究新狼毒素A对Hep G2细胞糖酵解的影响。方法SRB法检测新狼毒素A对Hep G2细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞形态变化以及对细胞增殖的影响;试剂盒法检测新狼毒素A对Hep G2细胞三磷酸腺苷(ATP)含量的影响,试剂盒法检测新狼毒素... 目的研究新狼毒素A对Hep G2细胞糖酵解的影响。方法SRB法检测新狼毒素A对Hep G2细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞形态变化以及对细胞增殖的影响;试剂盒法检测新狼毒素A对Hep G2细胞三磷酸腺苷(ATP)含量的影响,试剂盒法检测新狼毒素A对细胞上清液中乳酸含量(LD)和葡萄糖含量的改变,以及新狼毒素A对细胞中己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响。结果新狼毒素A(0,20,40,80μg/m L)显著抑制Hep G2细胞的增殖且呈剂量依赖性;不同浓度的新狼毒素A作用48 h后,细胞中ATP含量逐渐降低,细胞上清液中葡萄糖含量逐渐增大和乳酸含量逐渐减小;糖酵解相关酶(PK和LDH)的活性也逐渐下降。结论新狼毒素A能够影响Hep G2细胞糖酵解水平,其机制可能与减少葡萄糖摄取,抑制糖酵解关键酶有关。 展开更多
关键词 新狼毒素A HEP G2细胞 糖酵解
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二苯乙烯苷对HepG2细胞胆固醇含量的影响及其作用机制研究 预览
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作者 林昶 李玉平 +6 位作者 齐建彤 郑曙光 朱璨 柴艺汇 徐昌君 王和生 杨长福 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第14期7-12,共6页
目的探索二苯乙烯苷对HepG2细胞胆固醇含量的影响及其作用机制。方法将细胞随机分为正常组、模型组(ox-LDL 50 mg/L)、A组(ox-LDL 50 mg/L+二苯乙烯苷250μmol/L)、B组(ox-LDL50 mg/L+二苯乙烯苷188μmol/L)、C组(ox-LDL 50 mg/L+二苯... 目的探索二苯乙烯苷对HepG2细胞胆固醇含量的影响及其作用机制。方法将细胞随机分为正常组、模型组(ox-LDL 50 mg/L)、A组(ox-LDL 50 mg/L+二苯乙烯苷250μmol/L)、B组(ox-LDL50 mg/L+二苯乙烯苷188μmol/L)、C组(ox-LDL 50 mg/L+二苯乙烯苷125μmol/L)及D组(ox-LDL50 mg/L+二苯乙烯苷62.5μmol/L)。细胞处理48 h后,采用油红O脂肪染色法观察、胆固醇测定试剂盒测定各组胆固醇的含量并用逆转录聚合酶链反应检测肝癌HepG2细胞ABCG1、ABCA1及SR-BI的表达水平。结果正常组、A、B、C和D组细胞内总胆固醇(TC)、细胞内游离胆固醇(FC)含量均低于模型组(P <0.05),同时A、B、C和D组上清TC和FC含量较正常组升高(P<0.05)。二苯乙烯苷能够降低HepG2细胞内胆固醇含量,增加胆固醇外流率(P<0.05),其中二苯乙烯苷浓度为125μmol/L时达最高值。模型组细胞ABCA1 mRNA表达水平较正常组下降(P<0.05)。A、B、C和D组ABCA1、ABCG1和SR-BI mRNA表达水平较模型组上升(P<0.05)。结论二苯乙烯苷能够降低HepG2细胞胆固醇的含量,其机制可能是通过上调ABCA1、ABCG1和SR-BI的表达水平而增加胆固醇外流。 展开更多
关键词 肝肿瘤 二苯乙烯苷/二苯乙烯类 HEPG2细胞 胆固醇 逆转录聚合酶链反应
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美洲大蠊含药血清对人肝癌HepG2细胞的抑制作用研究
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作者 吕鸿 王瑶 +2 位作者 张蕊 张鸿翰 彭芳 《辽宁中医杂志》 CAS 2019年第8期1690-1694,1790共6页
目的:探究美洲大蠊含药血清对人肝癌HepG2细胞的影响及可能的作用机制。方法:采用MTT法测量HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,酶联免疫吸附试验检测细胞上清中IFN-γ、IL-4、TNF-α的含量。结果:美洲大蠊含药血清组... 目的:探究美洲大蠊含药血清对人肝癌HepG2细胞的影响及可能的作用机制。方法:采用MTT法测量HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,酶联免疫吸附试验检测细胞上清中IFN-γ、IL-4、TNF-α的含量。结果:美洲大蠊含药血清组对肝癌HepG2细胞增殖均有不同程度的抑制作用,作用呈时间-浓度依赖性。其多肽PAP-2组的抑制率明显高于CⅡ-3及脱脂膏组,且PAP-2联用5-FU组抑制率明显高于单用PAP-2组,具协同作用。各血清组均能诱导HepG2细胞凋亡,并呈浓度依赖性,使细胞周期阻滞于S期或G2/M期。各血清组能下调IFN-γ表达,并呈浓度依赖性,并且联合5-FU用药具有协同作用;均能不同程度上调肝癌HepG2细胞IL-4、TNF-α的表达,与浓度呈负相关。结论:美洲大蠊含药血清能抑制HepG2细胞增殖,诱导HepG2细胞凋亡并抑制细胞周期的发展,且能够调节细胞因子,发挥免疫作用。 展开更多
关键词 美洲大蠊 HEPG2肝癌细胞 含药血清 细胞凋亡
银离子产品的含量特性及细胞毒性检测
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作者 苏雪荣 甘俊英 +1 位作者 薛玉英 李强 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期12-17,共6页
目的分析含银产品的银含量、均匀性及细胞毒性。方法(1)从市场上购买的5种含银产品A、B、C、D、E,其中前4种为液体或凝胶形式、含银产品E为敷料形式。采用火焰法测定各产品银含量及产品E的均匀性,样本数为3。(2)选用人肝癌细胞株(HepG2... 目的分析含银产品的银含量、均匀性及细胞毒性。方法(1)从市场上购买的5种含银产品A、B、C、D、E,其中前4种为液体或凝胶形式、含银产品E为敷料形式。采用火焰法测定各产品银含量及产品E的均匀性,样本数为3。(2)选用人肝癌细胞株(HepG2)作为评价模型,将A、B、C、D4种含银产品分别用DMEM高糖培养液进行1∶100、1∶200、1∶400、1∶800的倍比稀释后培养细胞,以含20μg/mL硝酸银的DMEM高糖培养液培养细胞为阳性对照、DMEM高糖培养液培养细胞为空白对照,采用噻唑蓝法测定细胞存活率,样本数均为5。(3)将含银产品A配制成0.0313、0.0625、0.1250、0.2500μg/mL4种质量浓度处理HepG2细胞,采用含294μg/mL重铬酸钾、胎牛血清的DMEM高糖培养液处理细胞为阳性对照、采用含胎牛血清的DMEM高糖培养液处理细胞为空白对照,采用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率,采用彗星实验检测细胞彗星尾矩、尾长及尾部DNA百分比判断DNA损伤,样本数均为3。对数据行单因素方差分析、LSD-t检验。结果(1)A、B、C、D含银产品的银含量依次为(256.5±1.5)μg/mL、(271.5±1.3)μg/mL、(652.4±2.6)μg/g、(330.0±2.1)μg/g,与标示含量吻合。含银产品E的银含量为(0.158±0.013)mg/g、单片产品E的银含量为(0.125±0.017)mg/g,均匀性良好。(2)与空白对照处理比较,产品A在稀释比1∶100、产品B在稀释比1∶100及产品C在稀释比1∶100、1∶200处理时细胞存活率均显著降低(t=35.506、8.914、37.594、30.693,P<0.01)。与阳性对照处理比较,产品A在稀释比1∶200、1∶400、1∶800及产品C在稀释比1∶400、1∶800与产品B、D在各稀释比处理时细胞存活率均显著升高(t=27.537、18.262、18.709,26.333、41.762,15.776、19.759、20.443、15.715,26.792、24.963、31.803、30.537,P<0.01)。(3)0.2500μg/mL产品A及阳性对照处理细胞的凋亡率分别为(6.1±0.4)%、(62.2±3.9)%,明显高于空白对照处理细胞的(3.3 展开更多
关键词 药物稳定性 毒性试验 HEPG2细胞
黑豆皮中花青素成分鉴定及细胞内抗氧化活性研究 预览
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作者 李玉英 白金晶 +1 位作者 李新 王转花 《山西农业科学》 2018年第6期899-904,共6页
以黑豆皮为研究材料,分析鉴定黑豆皮中所含花青素的成分及组成,并对纯化所得黑豆皮花青素(Black soybean coats anthocyanins,BSCA)的体内外抗氧化活性进行研究。高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析结... 以黑豆皮为研究材料,分析鉴定黑豆皮中所含花青素的成分及组成,并对纯化所得黑豆皮花青素(Black soybean coats anthocyanins,BSCA)的体内外抗氧化活性进行研究。高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析结果表明,BSCA的主要成分是矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G),占总样品含量的比例为64%,其含量为10.02 mg/g;所含其他成分分别是飞燕草素葡萄糖苷(D3G)占6.7%,矮牵牛素葡萄糖苷(Pt3G)占3.4%,矢车菊素占20.5%。体外化学方法检测结果表明,BSCA具有较强的DPPH与羟自由基的清除能力。细胞抗氧化活性(Cellular antioxidant activity,CAA)法研究表明,随着BSCA作用浓度的增加,Hep G2细胞内的荧光值降低,其抗氧化性增强,并且BSCA可不同程度的促进SOD,CAT,GSH-Px,GSH指标的升高和MDA含量的减少。MTT检测结果发现,BSCA对3种癌细胞都具有潜在的抗增殖作用,且呈一定的时间-剂量依赖性。可见黑豆皮花青素(BSCA)可作为抗氧化保健产品,对人体起到潜在的保护作用。 展开更多
关键词 黑豆皮 花青素 抗氧化性能 HEP G2细胞
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不同patatin样磷脂酶结构域蛋白3I148M基因型对肝癌细胞增殖的影响
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作者 颜雪梅 袁淑华 +2 位作者 许晓 艾鹤英 梁华 《中华医学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第34期2754-2759,共6页
目的 探讨含patatin样磷脂酶结构域蛋白3(PNPLA3)野生型148I/I及突变型148M/M对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及相关机制.方法 构建PNPLA3148I/I及148M/M慢病毒稳定过表达及阴性对照细胞株即过表达PNPLA3野生型148I/I HepG2细胞、过表... 目的 探讨含patatin样磷脂酶结构域蛋白3(PNPLA3)野生型148I/I及突变型148M/M对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及相关机制.方法 构建PNPLA3148I/I及148M/M慢病毒稳定过表达及阴性对照细胞株即过表达PNPLA3野生型148I/I HepG2细胞、过表达PNPLA3突变型148M/M HepG2细胞和阴性病毒对照(NC)HepG2细胞.细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK8)检测不同细胞株的活力,5-乙炔基-2′脱氧尿苷(EdU)法检测细胞增殖情况,Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路的蛋白水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测与增殖相关的PNPLA3代谢产物花生四烯酸(AA)、溶血磷脂酸(LPA),实时荧光定量PCR检测PNPLA3相关增殖指标前列腺素过氧化物合酶2(PTGS2)和过氧化物酶体增殖物激活受体 γ辅助活化因子1α(PGC1α)mRNA表达水平.结果 过表达PNPLA3148M/M组比过表达PNPLA3148I/I组细胞活力高,差异有统计学意义[(98.02±1.29)%比(71.51±2.89)%,P〈0.001],与NC相比差异无统计学意义[(98.02±1.29)%比(100±2.61)%,P=0.181].过表达PNPLA3148M/M组细胞增殖活性较过表达PNPLA3148I/I组高,差异有统计学意义(46.46±1.83比35.96±2.65,P=0.001),与NC组相比差异无统计学意义(46.46±1.83比46.64±7.33,P=0.965).过表达PNPLA3148M/M组较过表达PNPLA3148I/I组PGC1αmRNA表达水平,总PI3K、PThr-308蛋白激酶B(PThr-308 AKT)、PSer2448-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PSer2448-mTOR)、PGC1α蛋白表达水平增高,但AA和LPA水平以及PTGS2 mRNA表达水平两组差异无统计学意义.结论 PNPLA3148M/M细胞增殖作用较PNPLA3148I/I强. 展开更多
关键词 脂肪肝 非酒精胜 HEPG2细胞 基因型 patatin样磷脂酶结构域蛋白3 细胞增殖
异槲皮苷对HepG2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用 预览
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作者 蒋国君 刘天旭 +3 位作者 黄桂红 巫亭 陶丽群 朱钊铭 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2017年第10期1382-1387,共6页
目的研究异槲皮苷对Hep G2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用。方法采用异槲皮苷(0、40、80、160、320μmol·L(-1))作用于Hep G2细胞,MTT法检测异槲皮苷对Hep G2细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察24、48 h后,细胞形态及生长... 目的研究异槲皮苷对Hep G2细胞中Raf/MEK/ERK信号通路的干预作用。方法采用异槲皮苷(0、40、80、160、320μmol·L(-1))作用于Hep G2细胞,MTT法检测异槲皮苷对Hep G2细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察24、48 h后,细胞形态及生长情况;流式细胞术检测异槲皮苷(0、40、80、160μmol·L(-1))作用Hep G2细胞48 h后细胞周期情况;荧光定量PCR及Western blot检测异槲皮苷作用Hep G2细胞后Ras、Raf、MEK、ERK mRNA及相关蛋白的表达。结果MTT检测发现异槲皮苷对Hep G2细胞生长有明显抑制作用,且与异槲皮苷的浓度及作用时间呈正相关;不同浓度的异槲皮苷作用Hep G2细胞24、48 h后,倒置显微镜下观察发现随着浓度的增高及作用时间的延长,细胞生存数量逐渐减少,且细胞形态发生明显变化;流式细胞术检测发现随着异槲皮苷浓度的增高,细胞被阻滞在G1期的数量逐渐增加;荧光定量PCR及Western blot结果均表明,与空白组相比,异槲皮苷(80μmol·L(-1))作用Hep G2细胞后Ras、Raf、MEK、ERK mRNA及其相关蛋白的表达均明显降低(P〈0.05),差异有统计学意义。结论异槲皮苷有诱导Hep G2细胞凋亡的作用,其作用机制可能与对Raf/MEK/ERK信号通路中相关因子的干预有关。 展开更多
关键词 异槲皮苷 诱导 HEP G2细胞 Raf/MEK/ERK 信号通路 凋亡
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基于“单细胞移植-成瘤性验证”模式鉴定肝癌干细胞 预览
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作者 贾微 岑妍慧 +4 位作者 包鹃 杨瑞 何国珍 吴晓君 李熠毅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第9期1324-1328,共5页
背景:目前尚无较有效的肝癌干细胞的鉴定方法。目的:探索更为简单有效并适用于鉴定肝癌肿瘤细胞株中干细胞的方法。方法:首先利用单细胞分离技术获得单个细胞,逐个种入96孔板中,经筛选获得单细胞克隆(即成瘤性克隆)来源的细胞亚株... 背景:目前尚无较有效的肝癌干细胞的鉴定方法。目的:探索更为简单有效并适用于鉴定肝癌肿瘤细胞株中干细胞的方法。方法:首先利用单细胞分离技术获得单个细胞,逐个种入96孔板中,经筛选获得单细胞克隆(即成瘤性克隆)来源的细胞亚株,细胞亚株移植到裸鼠前肢腋下观察其成瘤作用。结果与结论:利用单细胞分离技术获得单细胞/孔的孔数为371个,成功率为96.4%;按照单细胞克隆的生长情况,筛选获得的来源于成瘤性克隆的细胞亚株移植到裸鼠前肢腋下,成瘤率为100%。结果证实"单细胞移植-成瘤性验证"具有鉴定肝癌干细胞的有效性,为后续的研究奠定技术和方法基础。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 肿瘤干细胞 组织工程 干细胞 单细胞移植-成瘤性 肝癌干细胞 干细胞鉴定 HEPG2肝癌细胞 裸鼠 细胞移植 国家自然科学基金
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纳米银对人肺癌和肝癌细胞毒性的差异 预览 被引量:2
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作者 张帮勇 李婷竹 +5 位作者 孙晋都 沈埝秋 张婷 孔璐 薛玉英 唐萌 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2016年第3期195-199,204共6页
目的:研究纳米银对人肺癌(A549)和人肝癌(HepG2)细胞系增殖和凋亡的影响,并探讨纳米银对两种细胞系毒效应的差异及其机制。方法:用20、40、80、160、320、640μg/mL的纳米银分别染毒A549和HepG2细胞,染毒时长均为24和48 h,以细胞... 目的:研究纳米银对人肺癌(A549)和人肝癌(HepG2)细胞系增殖和凋亡的影响,并探讨纳米银对两种细胞系毒效应的差异及其机制。方法:用20、40、80、160、320、640μg/mL的纳米银分别染毒A549和HepG2细胞,染毒时长均为24和48 h,以细胞培养液为对照,采用MTT法检测各组细胞的存活率;谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测细胞内GSH含量和SOD活力。除上述各染毒组,两种细胞均另设置N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后160μg/mL纳米银染毒组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:与对照组比较,染毒24和48 h后,≥40μg/mL剂量组A549细胞和所有剂量组HepG2细胞存活率均降低(P〈0.05或P〈0.01);与相同染毒条件下的A549细胞比较,40~640μg/mL剂量组HepG2细胞的存活率较高(P〈0.05或(P〈0.01)。SOD活力和GSH含量检测发现,纳米银染毒A549细胞24 h后,40 pg/mL剂量组SOD活力与对照组比较显著降低(P〈0.05),而GSH含量上升(P〈0.05);染毒48 h后,SOD活力和GSH含量在40~160μg/mL剂量组下降,其中80μg/mL剂量组GSH含量与对照组间的差异显著(P〈0.05)。纳米银染毒HepG2细胞24、48 h后,SOD活力和GSH含量都表现为上升,其中40、80μg/mL组SOD活力和20μg/mL组GSH含量与对照组间的差异显著(P〈0.05)。细胞凋亡率检测发现,染毒24 h时,各剂量组A549细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P〉0.05),而各剂量组HepG2细胞凋亡率均显著增加(P〈0.05或P〈0.01);染毒48 h时,≥40μg/mL剂量组A549细胞和160μg/mL剂量组HepG2细胞凋亡率均高于对照组(P〈0.05或P〈0.01)。使用NAC预处理细胞后,160μg/mL剂量组两种细胞系凋亡率均显著下降(P〈0.01)。结论:纳米银可以引起A549和HepG2细胞表现不同程度的增殖抑制和凋亡,而细胞内不同的SOD和GSH改变可能是纳米银引起两种细胞系不同毒作用的原因之一。 展开更多
关键词 纳米银 A549细胞 HEP G2细胞 氧化应激
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胞质分裂阻滞微核法的优化探讨
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作者 廖静 鲁文清 +1 位作者 王春香 李小峰 《中国热带医学》 CAS 2016年第9期866-868,共3页
目的改进胞质分裂阻滞微核法(cytokinesis-block micronucleus test,CBMNT),并检验改进后的方法在微核检测中的可行性。方法培养人肝肿瘤细胞Hep G2,分别以苯并芘和二甲基亚砜为阳性对照和溶剂对照,以二溴乙腈染毒,细胞松弛素B阻滞,... 目的改进胞质分裂阻滞微核法(cytokinesis-block micronucleus test,CBMNT),并检验改进后的方法在微核检测中的可行性。方法培养人肝肿瘤细胞Hep G2,分别以苯并芘和二甲基亚砜为阳性对照和溶剂对照,以二溴乙腈染毒,细胞松弛素B阻滞,收集细胞,氯化钾低渗,反复固定,滴片,显微镜下阅片。结果伴随低渗时间的延长,显微镜下Hep G2细胞体积逐渐增大,胞浆染色逐渐变淡,进而细胞膜破裂和部分细胞内容物丢失。伴随传代次数的增多,Hep G2细胞出现不良的生长状态和异常的细胞生长动力学,影响微核试验的重现性。鉴于此,试验中应选择最佳低渗时间60 s和传代2代的Hep G2细胞。在改进后的CBMNT中,与溶剂对照比较,30μmol/L二溴乙腈可诱导Hep G2细胞微核率增加,核分裂指数(NDI)降低,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论改进后CBMNT实验体系可有效检出化学毒物的遗传毒性,适于染色体断裂作用的筛检。 展开更多
关键词 微核 微核试验 乙腈 人肝肿瘤细胞Hep G2细胞 细胞松弛素B
表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌细胞增殖的抑制作用研究 预览 被引量:2
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作者 王帅 尚志梅 +4 位作者 黄利敏 刘亮 武中林 赵阳 祝敬燕 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期199-203,共5页
目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法采用不同浓度(0、25、50、100、200、400mg/L)EGCG作用于Hep G2细胞,于24、48h后采用MTT方法检测细胞增殖抑制率。以不同浓度(0、50、... 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法采用不同浓度(0、25、50、100、200、400mg/L)EGCG作用于Hep G2细胞,于24、48h后采用MTT方法检测细胞增殖抑制率。以不同浓度(0、50、100、200mg/L)EGCG作用于Hep G2细胞,24h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞周期、细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)及Smad3蛋白的表达,RT-PCR检测CDC25A和Smad3 m RNA的表达。结果MTT检测结果显示,不同浓度EGCG对Hep G2细胞均有生长抑制作用,且具有时间和剂量依赖性(P〈0.01)。随着EGCG浓度升高,细胞增殖指数(PI)明显降低(P〈0.01),细胞凋亡率明显增高(P〈0.01),CDC25A蛋白和m RNA表达水平下降(P〈0.05),Smad3蛋白和m RNA表达水平上升(P〈0.05)。结论 EGCG可能通过下调CDC25A、上调Smad3的表达,抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡,从而对肝癌细胞起到生长抑制作用。 展开更多
关键词 HEP G2细胞 没食子酸丙酯 细胞凋亡 细胞增殖
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三氯乙烯致细胞氧化应激及与热休克蛋白70的关系 被引量:1
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作者 林大枫 杨光涛 +2 位作者 李培茂 易娟 张艳芳 《职业与健康》 CAS 2016年第14期1915-1918,共4页
目的探讨三氯乙烯(TCE)致细胞氧化应激反应,以及热休克蛋白70(HSP 70)在其中的可能作用。方法用二甲亚砜配制不同浓度TCE溶液(0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mmol/L)染毒体外培养的人Hep G2细胞,24 h后用噻唑蓝(MTT)... 目的探讨三氯乙烯(TCE)致细胞氧化应激反应,以及热休克蛋白70(HSP 70)在其中的可能作用。方法用二甲亚砜配制不同浓度TCE溶液(0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mmol/L)染毒体外培养的人Hep G2细胞,24 h后用噻唑蓝(MTT)试验检测细胞活力,酶联免疫吸附试验检测细胞内的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、HSP 70水平,分析TCE浓度与MDA、GSH、HSP 70水平间的关系。结果 TCE浓度≤8.00 mmol/L时Hep G2细胞活力与TCE浓度为0 mmol/L时比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。随着TCE浓度增高,MDA水平呈上升趋势(β=20.59,P〈0.01),GSH水平呈下降趋势(β=-0.98,P〈0.01);TCE浓度≥2.00 mmol/L时MDA水平高于TCE浓度为0 mmol/L时的水平,GSH水平低于TCE浓度为0 mmol/L时的水平,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。HSP 70水平随TCE浓度增高未呈明显趋势变化。结论 TCE在不显著影响细胞活力的剂量范围内可导致细胞发生氧化应激和脂质过氧化损伤,而HSP 70可能不参与此过程。 展开更多
关键词 三氯乙烯 氧化应激 丙二醛 谷胱甘肽 热休克蛋白70 HEP G2细胞
Effect of Fanbaicao (Herba Potentillae Discoloris) oil on the expres- sion of p21 and CDK4 in HepG2 cells
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作者 Liu Lei Chen Guang +8 位作者 Wang Baixin Chen Liping Wang Shuqiu Liu Zhixin Ma Xiaoru Wang Fangfang Liang Yan-feng Wu Jiamei Yang Zhiwei 《中医杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第4期496-503,共8页
OBJECTIVE:To research the anti-cancer mechanism of the Traditional Chinese Medicine Fanbaicao(Herba Potentillae Discoloris) oil in the human hepatoma cell line Hep G2.METHODS:Gas chromatography was used to analyze the... OBJECTIVE:To research the anti-cancer mechanism of the Traditional Chinese Medicine Fanbaicao(Herba Potentillae Discoloris) oil in the human hepatoma cell line Hep G2.METHODS:Gas chromatography was used to analyze the components of Fanbaicao(Herba Potentillae Discoloris).We tested the inhibitory effect of Fanbaicao(Herba Potentillae Discoloris) oil on the human hepatoma cell line Hep G2 in vitro using 3-(4,5-Dimet hylt hiazol-2-yl)-2,5-dip henyltetrazoliumbromide assays.Fluorescence activating cell sorter analysis was used to examine the levels of apoptosis,and western blot and immunofluorescence were used to detect the expression of p21,p-p21 and CDK4 proteins.RESULTS:Fanbaicao(Herba Potentillae Discoloris)oil contains 45 ingredients,and L-ascorbic acid 2,6-bispalmitate was the main component and accounted for 44.96% of total drive-off peak area.Other components included(Z)-14-met hyl-8-exadecenal-acetal(8.56%),phytol(7.74%) and lauric acid(6.31%).Fanbaicao(Herba Potentillae Discoloris)oil treatment reduced the proliferation of Hep G2 cells and the half growth inhibition concentration(IC50) was 2.03 mg/m L.Furthermore,we also observed significantly increased Hep G2 cell apoptosis in a dose-dependent manner(P < 0.05).Fanbaicao(Herba Potentillae Discoloris) oil significantly increased the expression of p21 and p-p21 and significantly decreased the expression of CDK4 in Hep G2 cells compared with controls(P < 0.01).CONCLUSION:Our results showed that Fanbaicao(Herba Potentillae Discoloris) oil has anti-cancer activities in Hep G2 cells,which is probably related to the upregulation of p21 and p-p21 and downregulation of CDK4 expression. 展开更多
关键词 Potentilla Discolor CARCINOMA HEPATOCELLULAR HepG2 Cells CDKN1A protein human
人HNF4α基因真核表达载体的构建与鉴定 预览
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作者 丁宁 张明香 《实用肝脏病杂志》 CAS 2016年第2期156-159,共4页
目的体外构建人肝细胞核因子4α(HNF4α)基因真核表达载体,并初步鉴定其在Hep G2细胞的表达。方法从肝癌手术患者获得肝组织,分离得到肝组织总RNA,将其逆转录合成c DNA,经特异性引物扩增HNF4α基因片段,将其定向连接到pc DNA3.1(+... 目的体外构建人肝细胞核因子4α(HNF4α)基因真核表达载体,并初步鉴定其在Hep G2细胞的表达。方法从肝癌手术患者获得肝组织,分离得到肝组织总RNA,将其逆转录合成c DNA,经特异性引物扩增HNF4α基因片段,将其定向连接到pc DNA3.1(+)真核表达载体,经抗生素筛选后,酶切及测序鉴定其序列正确。提取质粒,转染Hep G2细胞,48 h后裂解细胞,应用抗HNF4α行Western blot检测目的蛋白。结果从临床肝癌患者肝组织中成功分离得到总RNA,扩增出HNF4α基因,经筛选、酶切鉴定和测序,确认pc DNA3.1-4α真核表达载体构建成功。在转染Hep G2细胞48 h后,检测显示53 k Da位置有明显融合蛋白条带。结论我们成功构建了HNF4α基因真核表达载体,体外转染Hep G2细胞成功表达HNF4α蛋白,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 肝细胞核因子4Α 真核表达 细胞因子
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HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立及盐酸小檗碱改善胰岛素抵抗的实验研究 预览 被引量:8
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作者 龚菂 李芬 +3 位作者 邹欣 王定坤 陆付耳 王开富 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1750-1754,共5页
目的建立HepG2(人肝胚胎瘤细胞)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,并在该模型上研究小檗碱改善IR的效应。方法用25 mmol·L^-1高糖,并分别用10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol·L^-1胰岛素处理,诱导He... 目的建立HepG2(人肝胚胎瘤细胞)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,并在该模型上研究小檗碱改善IR的效应。方法用25 mmol·L^-1高糖,并分别用10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol·L^-1胰岛素处理,诱导HepG2细胞产生IR;对2-NBDG(荧光素标记葡萄糖)与Hep G2细胞孵育浓度设定为:50、100、200、400、600、800μmol·L^-1、孵育时间设定为:20、40、60、80、100 min,拟筛选最佳胰岛素处理浓度、2-NBDG与HepG2最佳孵育浓度和最佳孵育时间,通过检测细胞培养液中葡萄糖的消耗量及细胞对葡萄糖的摄取量作为判定模型成功的标志;用二甲双胍、盐酸小檗碱干预模型细胞,研究盐酸小檗碱在细胞水平上改善IR的效应。结果 6种浓度的胰岛素均可不同程度诱导HepG2产生IR,虽然10^-5、10^-4mol·L^-1剂量最明显,但细胞死亡较多,以10^-6mol·L^-1剂量制模有效且细胞成活率高,与正常组比较差异具有统计学意义;当2-NBDG与HepG2细胞孵育浓度大于100μmol·L^-1时,细胞荧光强度与正常组差异有显著性,孵育时间超过20 min荧光强度与正常组比较有明显差异,超过100 min,细胞内荧光有明显淬灭衰减现象;盐酸小檗碱、二甲双胍能明显增加细胞培养上清液中葡萄糖的消耗及细胞对葡萄糖的摄取,与模型组比较差异具有统计学意义。结论用HepG2制作IR细胞模型时,选择10^-6mol·L^-1剂量的胰岛素;2-NBDG孵育浓度选择为200μmol·L^-1、2-NBDG孵育时间选择为80min较为适宜,盐酸小檗碱及二甲双胍对HepG2细胞IR具有明显的改善作用。 展开更多
关键词 盐酸小檗碱 HEPG2细胞 胰岛素抵抗 细胞模型 葡萄糖摄取 实验研究
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二氯化钴所致缺氧对HepG2细胞增殖抑制和凋亡的影响 预览 被引量:2
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作者 王敏 薛同敏 +3 位作者 刘伟 张攀 肖路 张培建 《中华普通外科学文献(电子版)》 2016年第5期346-349,共4页
目的探讨二氯化钴(CoCl2)所致缺氧对HepG2细胞增殖抑制和凋亡的影响以及可能机制。方法采用CoCl2模拟低氧环境处理细胞,Western Blotting法测定胞质蛋白Caspase-3蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况;Annexin V-FITC/PI双... 目的探讨二氯化钴(CoCl2)所致缺氧对HepG2细胞增殖抑制和凋亡的影响以及可能机制。方法采用CoCl2模拟低氧环境处理细胞,Western Blotting法测定胞质蛋白Caspase-3蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况;Annexin V-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测不同CoCl2浓度作用使缺氧肿瘤细胞的凋亡情况。结果低氧处理后胞质Caspase-3的活性增加,表达呈现浓度依赖性;细胞增殖抑制作用表现出浓度依赖性抑制作用;流式细胞仪检测结果显示,正常对照组以及50、100、200、300、500μmol/L CoCl2模拟低氧组的细胞生长抑制率分别为(0.42±0.21)%、(1.22±0.41)%、(7.61±0.66)%、(13.31±0.97)%、(20.41±0.78)%和(28.56±0.96)%。结论 Caspase-3在肝癌发生发展过程中扮演重要的角色,在低氧情况下对Hep G2细胞生长和分化具有调控作用。CoCl2可能通过上调Caspase-3的表达,从而对肝癌细胞发挥抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 二氯化钴 缺氧 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
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抗增殖蛋白过表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响 预览 被引量:1
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作者 翟嵩 孙明珠 +4 位作者 王文俊 李亚萍 张欣 李梅 党双锁 《实用肝脏病杂志》 CAS 2016年第4期408-412,共5页
目的探讨抗增殖蛋白(PHB)过表达对人肝癌细胞系HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法在已构建的PHB真核表达质粒pEGFP-N1-PHB瞬时转染HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测HepG2细胞增殖;使用流式细胞仪检测HepG2细胞周期... 目的探讨抗增殖蛋白(PHB)过表达对人肝癌细胞系HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法在已构建的PHB真核表达质粒pEGFP-N1-PHB瞬时转染HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测HepG2细胞增殖;使用流式细胞仪检测HepG2细胞周期和凋亡。结果转染pEGFP-N1-PHB细胞增殖明显低于pEGFP-N1空载转染细胞或未转染细胞(P〈0.05);在转染后48h,转染组G2/M期细胞比例为(27.84±0.47)%,显著高于空载转染组的(17.21±0.64)%或未转染组的(22.67±0.33)%(P〈0.001);转染组细胞凋亡率为(31.72±0.35)%,显著高于空载转染组的(18.66±0.56)%或未转染组的(13.47±0.94)%(P〈0.001)。结论PHB过表达可抑制人肝癌HepG2细胞增殖,诱导细胞进入G2/M期后被阻滞,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 抗增殖蛋白 细胞凋亡 细胞增殖
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17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响 预览
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作者 陈美霓 郭巍 +1 位作者 赵菊梅 魏晓丽 《中国临床保健杂志》 CAS 2015年第1期48-51 113,共5页
目的观察17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对肝癌Hep G2细胞增凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色,通过荧光显微镜观察Hep G2细胞凋亡情况;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化;逆转录聚合酶链反应检... 目的观察17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对肝癌Hep G2细胞增凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色,通过荧光显微镜观察Hep G2细胞凋亡情况;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化;逆转录聚合酶链反应检测17-AAG处理肝癌Hep G2细胞前后bax和bcl-2的mRNA蛋白表达。结果 AO/EB荧光染色结果显示对照组呈均匀绿色荧光,实验组随着药物浓度的增加,呈红色荧光凋亡细胞逐渐增多;流式细胞仪结果显示17-AAG促进肝癌Hep G2细胞凋亡;RT-PCR结果显示17-AAG能使bax的mRNA蛋白表达水平升高、bcl-2的mRNA蛋白表达水平下降,其作用呈剂量效应关系。结论 17-AAG具有促进肝癌Hep G2凋亡作用,其机制可能与其上调bax、下调bcl-2蛋白表达有关。 展开更多
关键词 肝肿瘤 HEP G2细胞 细胞凋亡 BCL-2相关X蛋白质 bcl-X蛋白质
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微小RNA-152靶向DcR3对HepG2细胞相关信号通路的作用 预览 被引量:1
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作者 谢优 史振鸿 +4 位作者 熊货杰 谭忠 罗义欢 陈罡 党裔武 《实用医技杂志》 2015年第9期915-918,共4页
目的研究微小RNA-152(mi R-152)与其潜在靶基因Dc R3在肝癌组织中表达的关系及mi R-152在肝癌细胞系Hep G2中对Dc R3及相关信号通路的影响。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测89例肝癌组织中的mi R-152表达水平,并使... 目的研究微小RNA-152(mi R-152)与其潜在靶基因Dc R3在肝癌组织中表达的关系及mi R-152在肝癌细胞系Hep G2中对Dc R3及相关信号通路的影响。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测89例肝癌组织中的mi R-152表达水平,并使用免疫组织化学检测其Dc R3蛋白表达水平,对比二者相关性;使用生物信息学软件对二者潜在靶向关系进行预测;将mi R-152抑制剂及模拟物转染至肝癌细胞系Hep G2中,使用蛋白印迹法测Dc R3蛋白及相关基因Wnt-1,DNMT-1,ERK1/2及AKT表达情况。结果肝癌组织中,mi R-152与Dc R3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.347,P=0.002);软件预测发现mi R-152与Dc R3 3′-UTR序列呈互补关系;使用mi R-152模拟物后,Dc R3蛋白水平明显下降,同时Wnt-1,DNMT-1,p-ERK1/2及p-AKT表达也明显下降。结论在肝癌中,Dc R3可能为mi R-152的靶基因,mi R-152可通过靶向Dc R3而影响相应的增殖及凋亡通路。 展开更多
关键词 肝细胞 微RNAS HEP G2细胞 受体 肿瘤坏死因子 成员6b
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氯胺酮对HepG2细胞线粒体功能的影响
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作者 王雁 汤纳平 +5 位作者 惠涛涛 富欣 李华 杨琛懋 周国民 马璟 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期71-75,共5页
目的评价氯胺酮的线粒体毒性,从而探讨氯胺酮可能的毒性机制。方法 Hep G2细胞培养基中分别加入齐多夫定10~2000μmol·L-1培养7 d,或加入氯胺酮50~3000μmol·L-1培养24 h,CCK8细胞计数法测定细胞存活率。Hep G2细胞培养基中... 目的评价氯胺酮的线粒体毒性,从而探讨氯胺酮可能的毒性机制。方法 Hep G2细胞培养基中分别加入齐多夫定10~2000μmol·L-1培养7 d,或加入氯胺酮50~3000μmol·L-1培养24 h,CCK8细胞计数法测定细胞存活率。Hep G2细胞培养基中分别加入齐多夫定100μmol·L-1培养7 d后,或加入氯胺酮100和1200μmol·L-1培养24 h,化学发光法检测胞内ATP合成水平,荧光探针法检测胞内钙离子浓度、活性氧及线粒体膜电位(ΔΨm)的变化,同时设齐多夫定1000μmol·L-1用于实时荧光定量PCR检测线粒体DNA(mt DNA)表达水平的变化。结果与正常对照组相比,齐多夫定10~2000μmol·L-1可以抑制细胞存活,IC50为100μmol·L-1;氯胺酮1000~3000μmol·L-1抑制细胞存活,IC50为1200μmol·L-1。与正常对照组相比,齐多夫定100μmol·L-1组线粒体ATP合成水平显著下降(P〈0.05),胞内钙离子浓度明显升高(P〈0.05),活性氧水平显著升高(P〈0.05),ΔΨm显著下降(P〈0.05),而1000μmol·L-1可以明显干扰mt DNA表达水平(P〈0.05)。氯胺酮100μmol·L-1组ATP合成水平明显下降(P〈0.05),其他指标均无显著性差异;氯胺酮1200μmol·L-1组ATP合成水平显著下降(P〈0.01),活性氧水平和胞内钙离子浓度显著升高(P〈0.01),ΔΨm显著下降(P〈0.05),mt DNA水平无明显改变。结论氯胺酮可以通过干扰线粒体代谢功能而诱导线粒体损伤。 展开更多
关键词 氯胺酮 HEP G2细胞 线粒体 药物毒性
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