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一种犬细小病毒基因工程抗体的制备 预览
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作者 李希辰 雷欢 +3 位作者 李雪 石晶 殷玉和 吴丛梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期3042-3051,共10页
本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体... 本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体的可变区序列,将可变区序列与鼠源抗体恒定区序列连接;分别构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H,将载体共转染HEK-293细胞,采用血凝抑制与中和试验的方法检测鼠源CPV基因工程抗体生物活性;采用HEK-293F细胞悬浮表达并用间接ELISA方法检测鼠源CPV基因工程抗体的表达量;用Protein A亲和层析柱纯化鼠源CPV基因工程抗体后进行SDS-PAGE鉴定;间接免疫荧光检测纯化后鼠源CPV基因工程抗体的活性。结果显示,CPV单克隆抗体亚型为IgG 2b,亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10^11 L/mol,只与CPV VLPs发生反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示,试验成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H;HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液血抑效价分别为1∶2^4和1∶2^6,中和试验结果显示,HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液中和效价分别为1∶152和1∶1 290;鼠源CPV基因工程抗体在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L,SDS-PAGE分析在55和25 ku处出现条带,表明鼠源CPV基因工程抗体成功在HEK-293F细胞中表达并纯化。间接免疫荧光检测结果表明,纯化后鼠源CPV基因工程抗体具有良好的生物活性。本研究在HEK-293F细胞中成功表达具有中和活性、纯度较高的鼠源CPV基因工程抗体,为今后CPV基因工程抗体药物的研发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒(CPV) 基因工程抗体 共转染 HEK-293F细胞
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基因工程抗体在微囊藻毒素检测分析中的应用研究 预览 被引量:1
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作者 徐重新 刘媛 +1 位作者 李建宏 刘贤金 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期372-378,共7页
微囊藻毒素是蓝藻水华过程中产生的一类小分子多肽生物毒素,能对人和动物的肝脏造成严重损伤,属于2B类致癌物质。由于全球性工业和生活废水的大量排放以及气候变暖等现实因素,蓝藻水华现象日趋频繁和加剧,使得微囊藻毒素在水体和土壤中... 微囊藻毒素是蓝藻水华过程中产生的一类小分子多肽生物毒素,能对人和动物的肝脏造成严重损伤,属于2B类致癌物质。由于全球性工业和生活废水的大量排放以及气候变暖等现实因素,蓝藻水华现象日趋频繁和加剧,使得微囊藻毒素在水体和土壤中大量蓄积,严重威胁生态环境和农产品质量安全。基于"抗体-抗原"识别原理的免疫学检测方法是当前生物毒素快速检测研究的热点,近年抗体创制技术突飞猛进,现已从传统的多克隆抗体和单克隆抗体逐渐发展到了新型的基因工程人工抗体创制阶段。该文系统阐述了微囊藻毒素产生的内外因素及其对生态系统、人和动物的主要危害风险;全面梳理了基因工程抗体创制技术及其在微囊藻毒素检测应用研究上的最新进展;并结合作者及所在科研团队最新研究成果,深入探讨了基因工程抗体在微囊藻毒素检测应用上的发展趋势、存在的问题以及拟解决的对策。 展开更多
关键词 基因工程抗体 微囊藻毒素 农产品 质量安全 免疫分析
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单克隆抗体和基因工程抗体在感染性疾病病原体检测中的应用 被引量:5
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作者 赵笑 张冬梅 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第8期I0003-I0004,F0003,F0004共4页
感染性疾病病原体的准确检测对于其有效防控极为重要,也是合理用药、有效治疗的前提。抗体因其高度的特异性和亲和力,已经成为免疫诊断中一个关键性的分子。其类型多样,从多克隆抗体到单克隆抗体,再发展到基因工程抗体,而基因工程... 感染性疾病病原体的准确检测对于其有效防控极为重要,也是合理用药、有效治疗的前提。抗体因其高度的特异性和亲和力,已经成为免疫诊断中一个关键性的分子。其类型多样,从多克隆抗体到单克隆抗体,再发展到基因工程抗体,而基因工程抗体又包括单链抗体、双特异性抗体和多特异性抗体等。各类型抗体在感染性疾病的免疫诊断方面均有应用。本文就单克隆抗体和基因工程抗体在感染性疾病免疫学诊断方面的应用作一综述。 展开更多
关键词 单克隆抗体 基因工程抗体 单链抗体 双特异性抗体 免疫诊断 感染性疾病 综述
利用基因工程抗体建立的新型双抗夹心 ELISA法检测Cry1Ac毒素 预览 被引量:1
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作者 张留圈 张霄 +6 位作者 刘媛 徐重新 张存政 谢雅晶 颜春荣 寇莉萍 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期634-639,共6页
为明确新型双抗夹心ELISA方法检测Cry1Ac毒素的效果,分别用纯化后的抗Cry1Ac单链抗体和an-ti-Cry1Ac兔多克隆血清(Anti-Cry1Ac-PAbs)作为捕获抗体和检测抗体,通过方阵滴定确定其最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA法。再用优化后的双抗夹... 为明确新型双抗夹心ELISA方法检测Cry1Ac毒素的效果,分别用纯化后的抗Cry1Ac单链抗体和an-ti-Cry1Ac兔多克隆血清(Anti-Cry1Ac-PAbs)作为捕获抗体和检测抗体,通过方阵滴定确定其最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA法。再用优化后的双抗夹心ELISA方法对检测Cry1Ac毒素的敏感性、特异性和回收率进行鉴定。结果表明,新型双抗夹心ELISA法最低检测限为0.91 ng/ml,线性检测范围为1.04 ng/ml~3.49μg/ml。5种稻米中Cry1Ac毒素的平均回收率为69.42%~87.95%,变异系数为1.19%~6.50%。 展开更多
关键词 基因工程抗体 Cry1Ac毒素
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基于基因突变的基因工程抗体亲和力成熟研究 预览 被引量:1
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作者 邓龙 周思 郭新东 《生物技术进展》 2014年第6期400-404,共5页
基因工程重组抗体可通过对基因序列的分析、修饰与修改,从而改进抗体特性.对基于基因突变的基因工程抗体亲和力成熟的方法进行总结,主要包括小分子有机物-抗体相互作用机制分析、抗体序列数据库及计算机模拟技术,以及新兴的分子模拟与... 基因工程重组抗体可通过对基因序列的分析、修饰与修改,从而改进抗体特性.对基于基因突变的基因工程抗体亲和力成熟的方法进行总结,主要包括小分子有机物-抗体相互作用机制分析、抗体序列数据库及计算机模拟技术,以及新兴的分子模拟与对接技术. 展开更多
关键词 基因工程抗体 分子模拟 基因突变 亲和力成熟
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重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体在昆虫杆状病毒中的表达 预览 被引量:1
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作者 马玲 邵帅 +4 位作者 潘汉世 陈凤莲 黄红梅 石胜 吴健敏 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期314-318,共5页
重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体是由一条短肽链将两个鼠源抗CD22mAb的scFv连接起来,再与人IgG1的CH3片段连接所获得重组基因工程抗体(cRFB4-CH3),是目前开发治疗B细胞系淋巴瘤的人源化基因工程抗体。为探讨该重组基因工程抗体高效... 重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体是由一条短肽链将两个鼠源抗CD22mAb的scFv连接起来,再与人IgG1的CH3片段连接所获得重组基因工程抗体(cRFB4-CH3),是目前开发治疗B细胞系淋巴瘤的人源化基因工程抗体。为探讨该重组基因工程抗体高效表达技术,本研究利用DNA重组技术将含有人IgG1的CH3段的抗人CD22四价基因工程抗体基因克隆到含信号肽的重组杆状病毒载体pAcSG2中,构建重组质粒pAcSG2-cRFB4-CH3并转染到Sf9细胞中,构建携带有重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体基因的重组杆状病毒AcNPV-cRFB4-CH3。通过对该重组毒进行PCR和IFA鉴定,证实获得了可以稳定表达抗人CD22四价基因工程抗体的重组杆状病毒。以蚀斑试验进一步纯化病毒,经过3次病毒蚀斑克隆,获得毒价达到4.5×10^7pfu/mL重组病毒,为治疗白血病药物的开发和应用打下了基础。 展开更多
关键词 CD22 人源化 基因工程抗体 杆状病毒 表达
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基因工程抗体研究进展 预览 被引量:7
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作者 王秀红(综述) 周素芳(审校) 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期 304-306,共3页
临床治疗中人抗鼠抗体反应的出现使鼠源性单克隆抗体的应用受到了极大的限制。为降低其免疫原性,人们利用基因工程技术对鼠源抗体进行改造,以减少其鼠源成分。简要概述了目前研究比较多的几种基因工程抗体及其临床应用。
关键词 基因工程抗体 嵌合抗体 CDR移植抗体
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基因工程抗体亲和力成熟的策略 预览 被引量:7
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作者 胡晓林(综述) 张春明(审校) 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期 702-704,共3页
近年来,抗体因其高度的特异性在诊断和药物的靶向治疗上备受青睐,相关行业的发展也极为迅猛。在体内诊断和治疗上,基因工程抗体具有众多鼠源性单克隆抗体无可比拟的优势,但前者亲和力低是制约其实际应用的瓶颈问题。作者将就基因工... 近年来,抗体因其高度的特异性在诊断和药物的靶向治疗上备受青睐,相关行业的发展也极为迅猛。在体内诊断和治疗上,基因工程抗体具有众多鼠源性单克隆抗体无可比拟的优势,但前者亲和力低是制约其实际应用的瓶颈问题。作者将就基因工程抗体亲和力成熟的策略及其应用进行综述。 展开更多
关键词 亲和力成熟 基因工程抗体 突变
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人源抗—HAV全分子抗体在CHO细胞中的表达 被引量:1
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作者 于长明 徐静 +4 位作者 童贻刚 陈薇 刘国奇 徐志凯 王海涛 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第3期176-178,共3页
目的:构建人源抗-HAV全分子抗体的CHO细胞表达体系.方法:将抗-HAV抗体轻链全分子(信号肽与VL-CL)基因克隆至表达载体pCI-neo中;将重链信号肽、重链(γ)VH-CH1和Fc基因进行重组形成重链全分子基因,再将其克隆到真核表达载体pCdhfr1中.将... 目的:构建人源抗-HAV全分子抗体的CHO细胞表达体系.方法:将抗-HAV抗体轻链全分子(信号肽与VL-CL)基因克隆至表达载体pCI-neo中;将重链信号肽、重链(γ)VH-CH1和Fc基因进行重组形成重链全分子基因,再将其克隆到真核表达载体pCdhfr1中.将轻、重链全分子表达载体共转染CHO/dhfr-细胞,用G-418和甲氨蝶呤(MTX)筛选细胞克隆,ELISA法检测细胞培养上清中的抗-HAV活性,增加MTX浓度进行加压筛选.用蛋白L亲和层析柱从培养上清中纯化重组抗体.结果:构建的真核表达载体可实现抗-HAV全分子抗体在CHO细胞中的分泌表达,纯化的重组抗体在还原SDS-PAGE中表现为相对分子质量约25000、50000两条带;Western印迹表明,重组抗体全分子和重链分子均可和羊抗人Fc抗体发生特异性免疫反应.结论:抗-HAV全分子抗体在CHO细胞中表达,为基因工程生产具有完整功能的全分子抗体奠定了基础. 展开更多
关键词 基因工程抗体 甲型肝炎病毒 哺乳动物细胞 真核表达
Pichia pastoris酵母中表达人源中和性抗甲型肝炎病毒scFv-Fc融合抗体的研究 预览
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作者 曹经瑗 De Jaeger Geert +6 位作者 李川 孟庆玲 Terryn Nancy Depicker Ann 毕胜利 李德新 梁米芳 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 343-348,共6页
为了探讨人源抗甲型肝炎(甲肝)病毒scFv-Fc融合抗体在酵母中的表达特性,将获得的人源抗甲肝病毒中和性单链可变区抗体(scFv抗体)基因克隆入含信号肽及人IgG1Fc抗体基因的酵母细胞表达载体中,获得了一株中和性人源抗甲肝病毒pPiscFv-FcH... 为了探讨人源抗甲型肝炎(甲肝)病毒scFv-Fc融合抗体在酵母中的表达特性,将获得的人源抗甲肝病毒中和性单链可变区抗体(scFv抗体)基因克隆入含信号肽及人IgG1Fc抗体基因的酵母细胞表达载体中,获得了一株中和性人源抗甲肝病毒pPiscFv-FcHA16融合抗体的分泌表达,并对表达产物进行了纯化.同时对表达产物的生物学特性进行了一系列鉴定.表达的pPiscFv-FcHA16融合抗体为具有不同糖基化形式的同源二聚体,与相应的CHO细胞表达的IgG抗体相比,pPiscFv-FcHA16融合抗体仍保持很好的抗原结合活性,以及与中和性鼠抗甲肝病毒单克隆抗体的竞争抑制能力.同时也保持了对甲肝病毒的体外中和活性.这些结果表明,在酵母中表达的单链可变区(scFv)与IgG1Fc区的融合抗体具有很好的生物学活性,有希望用做体外诊断,用纯化相应的抗原,或者可能用于体内预防与治疗. 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒 人源基因工程抗体 scFv-Fc融合抗体 酵母细胞表达系统
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人源抗狂犬病毒单克隆抗体Fab段基因的获得和表达 预览 被引量:4
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作者 张世珍 梁米芳 +2 位作者 董关木 郑海法 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期 11-16,共6页
运用噬菌体表面呈现(phagedisplay)技术获得了人源抗狂犬病毒糖蛋白基因工程单克隆抗体Fab段基因及其表达。从狂犬病毒PM株Vero细胞疫苗免疫的人抗凝血中分离获得外周淋巴细胞,提取细胞总RNA,通过RT-PCR方法,用一组人IgGFab基因... 运用噬菌体表面呈现(phagedisplay)技术获得了人源抗狂犬病毒糖蛋白基因工程单克隆抗体Fab段基因及其表达。从狂犬病毒PM株Vero细胞疫苗免疫的人抗凝血中分离获得外周淋巴细胞,提取细胞总RNA,通过RT-PCR方法,用一组人IgGFab基因特异性引物,从合成的cDNA中扩增了一组轻链和重链Fab段基因,将轻链和重链先后克隆入噬菌体载体pComb3,成功地建立了抗狂犬病毒噬菌体抗体库,并用纯化的狂犬病毒颗粒和几株抗狂犬病毒鼠单克隆抗体(单抗)捕捉狂犬病毒抗原的方法,对此抗体库进行富积筛选表达,成功地获得了抗狂犬病毒的人源单抗Fab段基因及其在大肠杆菌中的有效表达。对其中一株单抗G10进行了较为系统的分析,发现它与一株鼠源中和性狂犬病毒糖蛋白特异性单抗存在竞争,证实该单抗能识别狂犬病毒糖蛋白。其序列资料分析表明,该单抗为一株新的抗狂犬病毒人源基因工程抗体。 展开更多
关键词 狂犬病毒 噬菌体 表面呈现 人源基因工程抗体 FAB段 单克隆抗体
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牛冠状病毒4H12/1D4单链基因片段在大肠杆菌中的表达 预览
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作者 李学伍 陈焕春 《河南农业科学》 CSCD 1997年第1期 38-40,共3页
用EcoRI酶切PR5B4质粒,采用“V”字形内槽电洗脱法回收约0.804Kb牛冠状病毒基因工程抗体4H12/1D4单链基因片段,并将其插入载体质粒PET-17b的EcoRI位点构成重组质粒PET-D4,将重组质粒转... 用EcoRI酶切PR5B4质粒,采用“V”字形内槽电洗脱法回收约0.804Kb牛冠状病毒基因工程抗体4H12/1D4单链基因片段,并将其插入载体质粒PET-17b的EcoRI位点构成重组质粒PET-D4,将重组质粒转化DH5α感受态细胞,在IPTG的诱导下表达,细菌裂解物经SDS-PAGE电泳筛选,发现含PET-D4细菌经诱导新增一条约28KDα蛋白带,该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符,经光密度扫描,表达量约占菌体总蛋白的14% 展开更多
关键词 牛冠状病毒 病毒 大肠杆菌 表达
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融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤BJAB细胞杀伤作用及其机制研究
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作者 范冬梅 杨圆圆 +8 位作者 姜琳琳 熊冬生 杨铭 陶欣勇 周珊 刘红芹 屈浩 韩博文 石釧 《中国肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期54-60,共8页
[目的]探讨融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤细胞株BJAB细胞的杀伤作用及其机制研究。[方法]利用流式细胞分析技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM与BJAB细胞的结合活性。MTT法检测融合蛋白anti-C... [目的]探讨融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤细胞株BJAB细胞的杀伤作用及其机制研究。[方法]利用流式细胞分析技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM与BJAB细胞的结合活性。MTT法检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对BJAB细胞的体外杀伤活性。彗星电泳实验检测融合蛋白anti-CD19 (Fab)-LDM对BJAB细胞DNA的损伤。FACS检测不同浓度融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM处理BJAB细胞后细胞周期的变化。[结果] FACS和激光共聚焦显微镜技术实验结果表明,融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM能与BJAB细胞结合。MTT法实验结果表明,融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对BJAB细胞杀伤活性较单用力达霉素或阿霉素强,IC50值分别为(0.15±0.02)nmol/L、(0.38±0.03)nmol/L和(57.15±2.30)nmol/L。彗星电泳实验结果表明,用5pmol/L的融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM及力达霉素处理BJAB细胞后,可引起细胞不同程度的DNA损伤,由于融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM具有靶向性和细胞内化的特性,对DNA造成的损伤较力达霉素组明显。FACS结果显示,随着融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM浓度的增加,S期的比例从53.78%升高至77.29%,呈剂量依赖性。[结论]融合蛋白anti-CD19 (Fab)-LDM可以靶向杀伤B细胞淋巴瘤细胞株BJAB,引起细胞周期阻滞,在B细胞淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 基因工程抗体 融合蛋白 力达霉素 B细胞淋巴瘤 细胞周期
融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤BJAB细胞杀伤作用及其机制研究
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作者 范冬梅 杨圆圆 +8 位作者 姜琳琳 熊冬生 杨铭 陶欣勇 周珊 刘红芹 屈浩 韩博文 石釧 《中国肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期220-226,共7页
[目的]探讨融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤细胞株BJAB细胞的杀伤作用及其机制研究。[方法]利用流式细胞分析技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM与BJAB细胞的结合活性。MTT法检测融合蛋白anti-C... [目的]探讨融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤细胞株BJAB细胞的杀伤作用及其机制研究。[方法]利用流式细胞分析技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM与BJAB细胞的结合活性。MTT法检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对BJAB细胞的体外杀伤活性。彗星电泳实验检测融合蛋白anti-CD19 (Fab)-LDM对BJAB细胞DNA的损伤。FACS检测不同浓度融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM处理BJAB细胞后细胞周期的变化。[结果] FACS和激光共聚焦显微镜技术实验结果表明,融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM能与BJAB细胞结合。MTT法实验结果表明,融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对BJAB细胞杀伤活性较单用力达霉素或阿霉素强,IC50值分别为(0.15±0.02)nmol/L、(0.38±0.03)nmol/L和(57.15±2.30)nmol/L。彗星电泳实验结果表明,用5pmol/L的融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM及力达霉素处理BJAB细胞后,可引起细胞不同程度的DNA损伤,由于融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM具有靶向性和细胞内化的特性,对DNA造成的损伤较力达霉素组明显。FACS结果显示,随着融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM浓度的增加,S期的比例从53.78%升高至77.29%,呈剂量依赖性。[结论]融合蛋白anti-CD19 (Fab)-LDM可以靶向杀伤B细胞淋巴瘤细胞株BJAB,引起细胞周期阻滞,在B细胞淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 基因工程抗体 融合蛋白 力达霉素 B细胞淋巴瘤 细胞周期
抗猫细小病毒嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 预览
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作者 薛雨佳 宋彩玲 +4 位作者 赵爽爽 李彤彤 王文静 张云 刘明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期632-636,共5页
为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb(3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质... 为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb(3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质粒,经昆虫杆状病毒表达系统对重组嵌合抗体进行表达。SDS-PAGE和western blot试验显示鼠-犬嵌合抗体重链为55ku、轻链为25ku。间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗犬IgG和FPV特异性结合。上述结果表明,嵌合抗体保留了原MAb3EB对病毒特异结合能力的基础上,将鼠源恒定区替换为犬源NAb的恒定区。病毒中和试验表明嵌合抗体保留了3EB对FPV、CPV的中和活性。本研究首次通过昆虫杆状病毒表达系统表达了抗FPV、CPV的嵌合抗体,降低了原MAb的免疫原性,对FPV、CPV病临床治疗用抗体药物的研制具有重要指导意义。 展开更多
关键词 基因工程嵌合抗体 猫细小病毒 昆虫杆状病毒表达系统
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新型小分子纳米抗体药物与靶向治疗的研究进展 预览
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作者 吴鹏 武文 《实用医药杂志》 2018年第5期458-461,466共5页
基因工程抗体研究通过抗体结构改造、抗体作用新靶点以及新型小分子抗体药物研发等方法 ,使抗体药物逐渐趋于人源化、小型化、高效化,已在临床诊断、治疗等方面得到广泛应用,是肿瘤靶向治疗的重要手段。故着重介绍一种小型化基因工程抗... 基因工程抗体研究通过抗体结构改造、抗体作用新靶点以及新型小分子抗体药物研发等方法 ,使抗体药物逐渐趋于人源化、小型化、高效化,已在临床诊断、治疗等方面得到广泛应用,是肿瘤靶向治疗的重要手段。故着重介绍一种小型化基因工程抗体——纳米抗体。纳米抗体由于其技术的先进性和独特性,与普通抗体药物相比,具有相对分子质量小、易于表达、在血液中半衰期相对较短、穿透力强、免疫原性弱等特点,在抗肿瘤、抗病毒等领域具有广阔前景。 展开更多
关键词 基因工程抗体 纳米抗体 靶向药物
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针对猪瘟病毒E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体的表达及抗病毒活性鉴定
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作者 陈姝承 孙慧敏 +3 位作者 李素 刘平黄 马吉飞 仇华吉 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1235-1243,共9页
猪瘟(Classical swine fever,CSF)是严重危害养猪业的一种烈性传染病,常造成巨大的经济损失,是世界动物卫生组织要求必须申报的动物疫病之一。猪瘟的病原是猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),CSFV的结构蛋白由衣壳蛋白(... 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是严重危害养猪业的一种烈性传染病,常造成巨大的经济损失,是世界动物卫生组织要求必须申报的动物疫病之一。猪瘟的病原是猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),CSFV的结构蛋白由衣壳蛋白(C)和囊膜糖蛋白(E~(rns)、E1、E2)构成。E2蛋白是CSFV主要的保护性抗原,可以诱导机体产生中和抗体,从而抵抗CSFV的感染。此前,本团队制备了一株针对CSFV E2蛋白的鼠源单克隆抗体HQ06。文中将HQ06抗体重链和轻链可变区基因与猪源恒定区基因嵌合后克隆至真核表达载体,利用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞制备一株针对CSFV E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体c HQ06。应用ELISA、Western blotting试验证实了c HQ06与CSFV E2蛋白具有良好的反应性;中和试验结果表明c HQ06可以中和CSFV。综上所述,本研究应用CHO细胞稳定表达了具有良好反应性和中和活性的针对CSFV E2蛋白的嵌合猪源化单克隆抗体c HQ06,为研究CSFV E2蛋白结构、功能以及开发新型的CSFV诊断和治疗制剂奠定基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 单克隆抗体 基因工程抗体 嵌合表达 悬浮培养
双特性抗体技术演进与作用模式的研究进展
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作者 吕一甫 王志明 《中国新药杂志》 CSCD 北大核心 2017年第20期2431-2438,共8页
双特异性抗体(Bs Ab)融合2种单抗的特异性,能够同时与不同的抗原或抗原表位结合,这种特殊的作用机制使其成为引人注目的治疗药物。经过多年的研究与发展,第一个双特异性抗体于2009年进入市场,另一个于2014年上市,还有众多双特异性抗... 双特异性抗体(Bs Ab)融合2种单抗的特异性,能够同时与不同的抗原或抗原表位结合,这种特殊的作用机制使其成为引人注目的治疗药物。经过多年的研究与发展,第一个双特异性抗体于2009年进入市场,另一个于2014年上市,还有众多双特异性抗体处于临床试验阶段。自然状态下不存在双特异性抗体,只能通过特殊方法进行制备。随着生命科学基础与应用研究的飞速发展,双特异性抗体的分子模式与制备技术在不断的演进,作用机制也在不断创新,应用范围更从肿瘤与炎症疾病,拓展到了遗传疾病。双特异性抗体有望成为未来抗体药物中的重要一员。 展开更多
关键词 双特异抗体 基因工程抗体 Fc区 T细胞 信号传导
基因工程抗体在食品安全检测中应用进展研究 预览 被引量:6
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作者 何扩 张秀媛 +2 位作者 杜欣军 王俊平 王硕 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期124-128,共5页
基因工程抗体是近年来发展起来的一种新型抗体,将其应用于食品安全检测是目前食品学科领域研究的热点之一.因基因工程抗体具有分子小、免疫原性低、可塑性强、成本低以及可大批量生产等诸多优点,所以在食品污染物检测方面具有潜在的巨... 基因工程抗体是近年来发展起来的一种新型抗体,将其应用于食品安全检测是目前食品学科领域研究的热点之一.因基因工程抗体具有分子小、免疫原性低、可塑性强、成本低以及可大批量生产等诸多优点,所以在食品污染物检测方面具有潜在的巨大应用价值.本文综述了基因工程抗体的分类、对污染物的检测原理、展示技术以及目前基因工程抗体在食品污染物检测方面应用的一些最新进展和存在的不足之处. 展开更多
关键词 基因工程抗体 噬菌体抗体库 食品污染物 SCFV
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基因工程抗体抗CD19(Fab)-LDM的制备及生物学活性研究 预览 被引量:4
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作者 姜琳琳 张孝云 +4 位作者 马莉 颜次慧 齐怀丰 熊冬生 范冬梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1363-1368,共6页
目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti—CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌... 目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti—CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达产物经ProteinG亲和层析柱纯化后,进行SDS—PAGE分析和Westernblot鉴定;采用流式细胞检测技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白与B淋巴瘤Raji细胞的结合活性;采用间接免疫荧光法,检测CD19介导细胞内化的情况;采用MTT法检测强化融合蛋白anti—CD19(Fab)-LDM对CD19‘Raji细胞的靶向杀伤活性;采用彗星电泳的方法,检测强化融合蛋白对Raji细胞DNA的损伤程度。结果用基因工程方法成功的构建、表达融合蛋白anti—CD19(Fab).LDP,ProteinG亲和层析柱纯化后在SDS—PAGE上表现为相对分子质量约60ku蛋白条带,且融合蛋白可与Raji细胞特异结合,并能介导细胞的内化;强化融合蛋白对Raji细胞具有较强的细胞毒性,并能引起细胞DNA损伤。结论强化融合蛋白anti—CD19(Fab)-LDM可以靶向作用于B淋巴瘤细胞,并具有较强的抗肿瘤活性,在恶性B淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 CD19 力达霉素 B性恶性淋巴瘤 基因工程抗体 DNA损伤 强化融合蛋白
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