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Study on Optimizing Nutrition and Fermentation Conditions for Compound <i>Bacillus spp.</i> 预览
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作者 Yanyan Li Yuxiang Xu +5 位作者 Wenhao Li Yong Yang Lin Wang Jun Yu Changjun Wang Xihong Li 《美国分子生物学期刊(英文)》 2019年第2期75-84,共10页
In order to improve the spore yield of compound Bacillus spp. (B. amyloliquefaciens, B. laterosporus and B. megaterium), the effects of nutrient conditions including carbon source, nitrogen source, mineral salt and fe... In order to improve the spore yield of compound Bacillus spp. (B. amyloliquefaciens, B. laterosporus and B. megaterium), the effects of nutrient conditions including carbon source, nitrogen source, mineral salt and fermentation conditions including the inoculum age, inoculation amount, loading volume of liquid and initial pH on the spore yield were studied. The results indicated that the optimized medium was glucoses 20 g/L, soybean meal 30.0 g/L, K2HPO4 1.0 g/L;fermentation temperature is 37&#8451;, the inoculum age 12 h, initial pH 7.0, 2% inoculation amount, loading volume of liquid 20 mL/250 mL. Under the optimized conditions of culture medium and fermentation for compound Bacillus spp., spore yield was 10.24 times more than the initial medium, and the spore formation rate reached more than 90%. 展开更多
关键词 COMPOUND Bacillus spp. SPORE Yield Medium OPTIMIZATION FERMENTATION OPTIMIZATION
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氧化葡萄糖酸杆菌产2-酮基-D-葡萄糖酸的发酵过程优化 预览
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作者 蔡文 曾伟主 周景文 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期40-45,共6页
2-酮基- D -葡萄糖酸(2-keto-D-gluconic acid,2-KGA)可作为食品添加剂、照片显影剂、洗涤剂等,也是合成 D -异抗坏血酸的重要前体。为提高2-KGA的产量及转化率,对2-KGA发酵生产工艺条件进行优化。从5株野生菌株中筛选出最优菌株 Glucon... 2-酮基- D -葡萄糖酸(2-keto-D-gluconic acid,2-KGA)可作为食品添加剂、照片显影剂、洗涤剂等,也是合成 D -异抗坏血酸的重要前体。为提高2-KGA的产量及转化率,对2-KGA发酵生产工艺条件进行优化。从5株野生菌株中筛选出最优菌株 Gluconobacter japonicus CGMCC 1.49,在摇瓶上进行培养基以及培养条件的优化。在此基础上,在3 L发酵罐中进行发酵优化实验,提高2-KGA的产量。当葡萄糖质量浓度为100 g/L,玉米浆粉质量浓度为20 g/L,发酵温度为30 ℃时,摇瓶水平发酵产量为76.3 g/L,较优化前提高了120.0%。在3 L发酵罐上控制恒定pH值为6、溶氧浓度30%条件下,一次性补料发酵产量最高为122.1 g/L,较摇瓶水平提高了26.7%,转化率达75.5%。研究表明,发酵过程优化对提高野生菌株产2-KGA是一种行之有效的方法,优化结果可为后续的放大实验节省发酵成本,为氧化葡萄糖酸杆菌产2-KGA的工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 氧化葡萄糖酸杆菌 2-酮基-D-葡萄糖酸 过程控制 发酵优化 补料发酵
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典型工业发酵过程环境变化下的细胞自适应行为与系统优化
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作者 丁健 罗洪镇 史仲平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1986-2002,共17页
工业发酵过程中,当细胞遭受到极端环境胁迫或剧烈环境变化时,细胞必须要作出必要的举动来适应环境的剧烈变化。细胞的自适应行为有可能不能应对剧烈的环境变化,导致发酵失败;但也有可能产生意想不到的效果,改善发酵性能。文中以毕赤酵母... 工业发酵过程中,当细胞遭受到极端环境胁迫或剧烈环境变化时,细胞必须要作出必要的举动来适应环境的剧烈变化。细胞的自适应行为有可能不能应对剧烈的环境变化,导致发酵失败;但也有可能产生意想不到的效果,改善发酵性能。文中以毕赤酵母Pichia pastoris生产异源蛋白和丁醇发酵过程为例,阐述了环境变化条件下的细胞自适应行为及其基于自适应行为的发酵过程优化方法和策略,为利用基于细胞自适应行为的发酵过程优化提供参考。 展开更多
关键词 细胞自适应行为 环境变化 发酵过程优化 异源蛋白生产 丁醇发酵
抗番茄灰霉病菌的内生短短芽孢杆菌W4菌株发酵条件优化 预览
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作者 杨从军 《中国蔬菜》 北大核心 2019年第6期64-69,共6页
为提高内生短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)W4 菌株发酵液对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑菌活性,采用单因素试验与正交试验设计相结合,优化发酵培养基及发酵条件。结果表明,最佳发酵培养基为蛋白胨 2.0%、果糖 1.0%、NaCl 0.... 为提高内生短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)W4 菌株发酵液对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑菌活性,采用单因素试验与正交试验设计相结合,优化发酵培养基及发酵条件。结果表明,最佳发酵培养基为蛋白胨 2.0%、果糖 1.0%、NaCl 0.25%;最佳发酵条件为初始pH 8.0、接种种龄20 h、接种量5%、装液量50 mL(250 mL 三角瓶)、发酵温度35 ℃、摇床转速150 r·min-1、发酵时间24 h。产生的发酵液稀释25 倍对番茄灰霉病菌的抑制率达92.8%,比未经优化得到的发酵液提高26.9 个百分点。通过培养基和发酵条件优化,显著提高了短短芽孢杆菌W4 发酵液活性,为进一步提取分离抗番茄灰霉病菌的活性成分奠定了基础。 展开更多
关键词 短短芽孢杆菌W4菌株 发酵条件优化 番茄灰霉病菌 抑菌活性
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嗜热网球菌纤维二糖差向异构酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵优化
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作者 王鑫淼 张康 +1 位作者 陈晟 吴敬 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期24-31,共8页
通过化学方法合成嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)来源的纤维二糖差向异构酶基因ce,将其引入到载体pBSuL3-ce,构建重组质粒pBSuL3-ce并转化进枯草芽孢杆菌,发酵48h后测定胞内酶活为7. 5U/ml。酶学性质结果表明:该酶的最适pH为8.... 通过化学方法合成嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)来源的纤维二糖差向异构酶基因ce,将其引入到载体pBSuL3-ce,构建重组质粒pBSuL3-ce并转化进枯草芽孢杆菌,发酵48h后测定胞内酶活为7. 5U/ml。酶学性质结果表明:该酶的最适pH为8. 5;最适温度为85℃,85℃的半衰期为120min。为降低发酵成本,对发酵培养基进行优化:以35g/L豆粕粉为氮源、5g/L甘油为碳源时,酶活力最高可达12. 3U/ml。依据摇瓶优化的条件在3L发酵罐中扩大培养,胞内酶活达到56U/ml,比摇瓶培养酶活提高了8倍。利用发酵所得酶制备乳果糖,在乳糖浓度为400g/L、反应温度为85℃、初始pH 8. 5、加酶量为20U/ml的条件下,乳果糖转化率可达51%。 展开更多
关键词 嗜热网球菌 纤维二糖差向异构酶 枯草芽孢杆菌 酶学性质 发酵优化
一株产木聚糖酶菌株的筛选及产酶条件优化 预览
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作者 刘维 徐璐 +2 位作者 陈晓倩 向丽蓉 林元山 《湖南农业科学》 2019年第8期5-9,共5页
以木聚糖为唯一碳源,采用刚果红平板显色法从土壤中筛选出一株产木聚糖酶活性较高的菌株,经形态学和16S rDNA序列分析确定其为芽孢杆菌属,命名为Bacillus subtilis.YH169。通过单因素和正交试验优化了培养基配方和发酵条件,结果表明:最... 以木聚糖为唯一碳源,采用刚果红平板显色法从土壤中筛选出一株产木聚糖酶活性较高的菌株,经形态学和16S rDNA序列分析确定其为芽孢杆菌属,命名为Bacillus subtilis.YH169。通过单因素和正交试验优化了培养基配方和发酵条件,结果表明:最佳培养基配方为麸皮5.0%、氯化铵0.3%、Mg2+浓度0.03%,初始pH值为5.0,在37℃条件下培养72 h,Bacillus subtilis.YH169产木聚糖酶活性较高,达24.40 IU/mL。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 木聚糖酶 筛选 鉴定 培养基 发酵条件
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粘红酵母RG-31产虾青素发酵条件优化 预览
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作者 罗秀针 林燕燕 +1 位作者 陈雅静 郑金华 《福建农业科技》 2019年第9期16-21,共6页
以粘红酵母RG-31为研究对象,通过单因素试验和正交试验对其合成虾青素的培养基和发酵条件进行初步的研究。试验结果表明:粘红酵母RG-31最适培养基为葡萄糖10 g·L^-1、牛肉膏3g·L^-1、酵母粉5 g·L^-1、K 2HPO 41.5 g·... 以粘红酵母RG-31为研究对象,通过单因素试验和正交试验对其合成虾青素的培养基和发酵条件进行初步的研究。试验结果表明:粘红酵母RG-31最适培养基为葡萄糖10 g·L^-1、牛肉膏3g·L^-1、酵母粉5 g·L^-1、K 2HPO 41.5 g·L^-1、MgSO 40.5 g·L^-1、CaCl 20.2 g·L^-1;最适培养条件为pH 6,培养温度28℃,转速240 r·min^-1,培养时间60 h后,虾青素含量为7.41μg·mL^-1,是优化前(2.84μg·mL^-1)的2.61倍,生物量为20.5g·L-1,是优化前(10.8g·L^-1)的1.90倍。 展开更多
关键词 虾青素 粘红酵母 培养基 发酵优化
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面向工业生物技术的系统生物学
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作者 郑小梅 郑平 孙际宾 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1955-1973,共19页
工业生物技术是以微生物细胞工厂利用可再生的生物原料来生产能源、材料与化学品等的生物技术,在解决资源、能源与环境等问题方面起着越来越重要的作用。系统生物学是全面解析微生物细胞工厂及其发酵过程从“黑箱”到“白箱”的重要研... 工业生物技术是以微生物细胞工厂利用可再生的生物原料来生产能源、材料与化学品等的生物技术,在解决资源、能源与环境等问题方面起着越来越重要的作用。系统生物学是全面解析微生物细胞工厂及其发酵过程从“黑箱”到“白箱”的重要研究方法。系统生物学借助基因组、转录组、蛋白质组、代谢组以及代谢流组等多组学数据,可解析微生物细胞工厂在RNA、蛋白与代谢物等不同水平上的变化规律与调控机制。目前,系统生物学在微生物细胞工厂的设计创建与发酵工艺优化中起着越来越重要的指导作用,许多成功应用实例不断涌现,推动着工业生物技术的快速发展。文中重点综述基因组、转录组、蛋白质组、代谢组与代谢流组以及基因组规模的网络模型等各组学技术的最新发展及其在工业生物技术尤其是菌株改造与发酵优化中的应用,并就工业生物技术中系统生物学的未来发展方向进行展望。 展开更多
关键词 工业生物技术 系统生物学 多组学 菌株设计 发酵优化
重组Bacillus subtilis产麦芽四糖淀粉酶的发酵优化及麦芽四糖制备 预览
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作者 杨亚楠 宿玲恰 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期44-49,56共7页
麦芽四糖淀粉酶可水解淀粉或麦芽糊精生成麦芽四糖,在食品领域有着广泛应用。为降低生产成本,对前期构建的生产麦芽四糖淀粉酶的重组枯草芽孢杆菌进行发酵优化。通过对培养基的氮源和碳源进行优化,以5%的接种量,在33℃、200r/min条件下... 麦芽四糖淀粉酶可水解淀粉或麦芽糊精生成麦芽四糖,在食品领域有着广泛应用。为降低生产成本,对前期构建的生产麦芽四糖淀粉酶的重组枯草芽孢杆菌进行发酵优化。通过对培养基的氮源和碳源进行优化,以5%的接种量,在33℃、200r/min条件下发酵48h,发现以25g/L豆粕粉和25g/L工业蛋白胨为氮源,5g/L甘油为碳源时,重组酶酶活力最高可达236U/mL。利用发酵所得重组麦芽四糖淀粉酶制备麦芽四糖并进行酶反应条件优化,使用高效液相色谱检测产物含量。发现当酶转化反应温度为50℃,反应pH为7.0,加酶量为30U/g底物,底物麦芽糊精的质量浓度为250g/L时,反应12h,麦芽四糖转化率可达73.2%,为降低生产成本和工业制备麦芽四糖提供了理论依据。 展开更多
关键词 麦芽四糖淀粉酶 发酵优化 酶转化反应 麦芽四糖
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酵母浸粉对枯草芽孢杆菌发酵生产尿苷的影响 预览
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作者 张悦 蒋帅 +2 位作者 吴鹤云 陈宁 徐庆阳 《发酵科技通讯》 CAS 2019年第1期29-32,共4页
尿苷用途广泛,发酵法是尿苷研究和生产的主流。以枯草芽孢杆菌F126为实验菌株,首先通过PB实验确定了培养基中影响尿苷产量的最显著因素是酵母浸粉。然后采用单因素实验的方法对不同厂家和型号的酵母浸粉进行了筛选,发现Springer公司所产... 尿苷用途广泛,发酵法是尿苷研究和生产的主流。以枯草芽孢杆菌F126为实验菌株,首先通过PB实验确定了培养基中影响尿苷产量的最显著因素是酵母浸粉。然后采用单因素实验的方法对不同厂家和型号的酵母浸粉进行了筛选,发现Springer公司所产的2506型号的酵母浸粉最有利于尿苷发酵,并确定其最佳的使用量为20 g/L。最后比较了酵母浸粉使用方法对尿苷发酵结果的影响,结果表明采用随糖流加酵母浸粉的方式更有利于尿苷的发酵生产,在最优条件下,枯草芽孢杆菌F126在5 L发酵罐上发酵40 h后可积累尿苷26.2 g/L,产量较出发条件提高了101.5%。研究结果可以为发酵法生产尿苷提供借鉴和指导。 展开更多
关键词 尿苷 枯草芽孢杆菌 酵母浸粉 PB实验 发酵优化
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遗传算法优化CGXⅡ培养基提高谷氨酸棒状杆菌产L-精氨酸 预览
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作者 王震 张豪 郑穗平 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第3期149-153,共5页
L-精氨酸作为一种半必需氨基酸,在食品医药等行业有着极为重要的作用。培养基作为谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)生产L-精氨酸的基础,其成分及其成分之间的配比对L-精氨酸生产影响很大。利用遗传算法,以CGXⅡ初始培养基为... L-精氨酸作为一种半必需氨基酸,在食品医药等行业有着极为重要的作用。培养基作为谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)生产L-精氨酸的基础,其成分及其成分之间的配比对L-精氨酸生产影响很大。利用遗传算法,以CGXⅡ初始培养基为基础,不断优化培养基成分之间的配比,L-精氨酸的积累量从0.61g/L提高至2.37g/L,提高了288.5%。通过数据分析,发现遗传算法不断优化CGXⅡ培养基的成分比例的过程中,伴随着L-精氨酸产量的大幅提升,谷氨酸棒状杆菌的生长模式发生了改变。在进一步的代谢水平分析中,发现CGXⅡ培养基的成分优化导致了谷氨酸棒状杆菌的三羧酸循环(TCA)增强。 展开更多
关键词 谷氨酸棒状杆菌 L-精氨酸 遗传算法 发酵优化 代谢工程
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产碱性β-甘露聚糖酶重组毕赤酵母发酵条件优化及酶学特性研究 预览
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作者 钱娟娟 曹世源 +2 位作者 王克芬 王兴吉 刘文龙 《中国饲料添加剂》 2019年第5期11-14,20共5页
本研究通过对本公司一株表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌LD023,对其发酵条件和酶学特性进行研究,根据研究结果,其发酵诱导阶段最适pH为5.5、最适移种量为10%、最适碳源为甘油、最适诱导阶段前菌体湿重为220g/L,而该酶的最适反应pH范... 本研究通过对本公司一株表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌LD023,对其发酵条件和酶学特性进行研究,根据研究结果,其发酵诱导阶段最适pH为5.5、最适移种量为10%、最适碳源为甘油、最适诱导阶段前菌体湿重为220g/L,而该酶的最适反应pH范围为9.5~10.5、最适反应温度范围为45~50℃,并且具有良好的热稳定性。 展开更多
关键词 毕赤酵母 Β-甘露聚糖酶 耐碱 发酵优化
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芽胞杆菌属产α-淀粉酶的研究进展 预览
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作者 徐挺亮 唐诗哲 +4 位作者 彭晶 陈行钢 朱玉玲 周凯燕 周洪波 《生命科学研究》 CAS CSCD 2019年第1期65-72,共8页
α-淀粉酶是一种重要的淀粉水解酶,可以从动物、植物或微生物中获得。但应用于工业生产的α-淀粉酶绝大多数来自芽胞杆菌。自α-淀粉酶工业化生产以来,研究人员针对其生产菌株芽胞杆菌进行了一系列的诱变选育和基因工程等分子生物学育种... α-淀粉酶是一种重要的淀粉水解酶,可以从动物、植物或微生物中获得。但应用于工业生产的α-淀粉酶绝大多数来自芽胞杆菌。自α-淀粉酶工业化生产以来,研究人员针对其生产菌株芽胞杆菌进行了一系列的诱变选育和基因工程等分子生物学育种,使得菌种的产酶能力不断得到提高。另外,优化芽胞杆菌发酵培养基及发酵参数也是提高α-淀粉酶工业化生产产量的重要方法。 展开更多
关键词 Α-淀粉酶 芽胞杆菌属 改良育种 发酵优化
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缬氨酸生产菌株的定向改造及发酵优化 预览
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作者 石拓 刘晓倩 +1 位作者 范晓光 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期19-24,共6页
缬氨酸是人体必需氨基酸之一,具有重要的生理生化作用。为进一步提高缬氨酸产量及优化发酵过程的温度控制,从谷氨酸棒杆菌细胞壁肽聚糖合成途径的2个关键基因murA(cgl0352)和murB(cgl0353)入手,从1株缬氨酸生产菌中敲除murA和murB基因... 缬氨酸是人体必需氨基酸之一,具有重要的生理生化作用。为进一步提高缬氨酸产量及优化发酵过程的温度控制,从谷氨酸棒杆菌细胞壁肽聚糖合成途径的2个关键基因murA(cgl0352)和murB(cgl0353)入手,从1株缬氨酸生产菌中敲除murA和murB基因构建出重组工程菌株C.glutamicumA301。摇瓶发酵结果显示,该菌株具有温度敏感性,在变温发酵的条件下,能从生长型状态转化为产酸型状态,促进缬氨酸的积累。在5L发酵罐中采用分段控温策略发酵,即前15h控温33℃,15h之后提温至39℃,重组工程菌株的缬氨酸产量达到35.5g/L,与全程33℃发酵相比提高了55.7%。研究为缬氨酸发酵过程温度控制提供了经验,同时对于谷氨酸棒杆菌的定向改造提供了一种思路。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 缬氨酸 定向改造 发酵优化
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重组毕赤酵母生产β-葡萄糖苷酶发酵条件优化及固定化研究 预览
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作者 汪飞 吴敬 陈晟 《食品科学技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期41-47,共7页
为了实现绿色木霉菌Trichoderma viride来源的β-葡萄糖苷酶在重组毕赤酵母中的高效表达,对重组菌P.pastorisKM71/pPIC9K-bgl1/pPICZA-pdi进行3.6L罐发酵培养条件优化。结果表明,当诱导温度28℃,初始诱导菌体浓度50g/L,诱导阶段甲醇体... 为了实现绿色木霉菌Trichoderma viride来源的β-葡萄糖苷酶在重组毕赤酵母中的高效表达,对重组菌P.pastorisKM71/pPIC9K-bgl1/pPICZA-pdi进行3.6L罐发酵培养条件优化。结果表明,当诱导温度28℃,初始诱导菌体浓度50g/L,诱导阶段甲醇体积分数1.0%时,酶活力最高,能达到1452U/mL。同时以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂,采用吸附交联法对β-葡萄糖苷酶进行固定化。结果表明,当壳聚糖质量浓度0.03g/mL,戊二醛质量浓度0.008g/mL,游离酶添加量400U/g(1g壳聚糖微球加酶量为400U),固定化吸附时间20h时,固定化酶酶活回收率最高,达到65.4%。以800g/L葡萄糖为底物,优化的转化条件下连续转化6次,低聚龙胆糖产率仍达到15.2%,显示出该固定化酶具有较好的持续利用性及较高的低聚龙胆糖生产能力。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 毕赤酵母 发酵优化 固定化 低聚龙胆糖
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重组果聚糖蔗糖酶的发酵优化及应用 预览
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作者 唐煜 陈晟 +2 位作者 段绪果 吴敬 吴丹 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期97-103,共7页
为了研究不同条件下重组短小芽孢杆菌产果聚糖蔗糖酶的最适条件以及利用重组酶转化蔗糖-乳糖制备低聚乳果糖的最适转化条件。以前期构建的产果聚糖蔗糖酶重组短小芽孢杆菌Brevibacillus brevis/pNCMO2-lsc作为菌种,通过单因素试验以及... 为了研究不同条件下重组短小芽孢杆菌产果聚糖蔗糖酶的最适条件以及利用重组酶转化蔗糖-乳糖制备低聚乳果糖的最适转化条件。以前期构建的产果聚糖蔗糖酶重组短小芽孢杆菌Brevibacillus brevis/pNCMO2-lsc作为菌种,通过单因素试验以及正交试验确定其最适产酶的发酵培养基为:葡萄糖20 g/L、氮源(工业酵母粉∶棉籽粉=2∶1,质量比)为40 g/L、CaCl20.5 mmol/L,最适产酶温度30℃。在最优条件下发酵培养,果聚糖蔗糖酶的酶活可达62.1 U/mL,是优化前的3.69倍。利用该重组果聚糖蔗糖酶转化蔗糖-乳糖制备低聚乳果糖,在蔗糖和乳糖质量浓度均为200 g/L情况下,确定其最适转化条件:反应温度35℃,pH 6.0,加酶量为2 U/g底物,反应8 h后低聚乳果糖转化率可达39.1%。 展开更多
关键词 果聚糖蔗糖酶 发酵优化 低聚乳果糖
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乳糖诱导E.coli发酵生产FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶 预览
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作者 张玲 宋祖坤 +2 位作者 林荣 王男 杨海麟 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1879-1886,共8页
黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH,EC1.1.5.9),具有辅基结合紧密、催化效率高的优点,可替代目前诊断用葡萄糖氧化酶应用于血糖指标的临床生化检测。本文选取Burkholderia cepacia的葡萄糖脱氢酶基因(gdh)构建表达质... 黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH,EC1.1.5.9),具有辅基结合紧密、催化效率高的优点,可替代目前诊断用葡萄糖氧化酶应用于血糖指标的临床生化检测。本文选取Burkholderia cepacia的葡萄糖脱氢酶基因(gdh)构建表达质粒pTrc99a-gdh,转化E. coli BL21(DE3)。异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导发酵,通过酶活测定及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得可溶性表达的FAD-GDH,分子量约为60000。利用乳糖替代IPTG作为诱导剂,摇瓶水平初步探索诱导条件,酶活达到994U/L。7.5L发酵罐放大培养该菌,采用梯度流加补料策略,分阶段温度控制,并采用不同的乳糖流加速率进行诱导。当采用0.3mL/min的乳糖流加速率时,酶活达22200U/L,菌体量达69.48g/L。经过镍柱层析,最终获得纯酶的比酶活104.5U/mg。为医用诊断原料用酶葡萄糖脱氢酶新酶种的工业化生产提供借鉴。 展开更多
关键词 黄素腺嘌呤二核苷酸 葡萄糖脱氢酶 乳糖诱导 发酵优化 层析分离
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共表达N-乙酰转移酶提高Aspergillus nidulans α-葡糖苷酶在毕氏酵母中的表达研究
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作者 任莉琼 吴敬 陈晟 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期75-81,共7页
α-葡糖苷酶以低聚寡糖为底物,通过切割非还原末端α-1,4糖苷键以获得葡萄糖基,同时转苷生成α-1,6糖苷键,广泛应用于低聚异麦芽糖生产、代谢生理研究、疾病预防治疗等各个领域。Aspergillus nidulans来源的α-葡糖苷酶在毕氏酵母中外... α-葡糖苷酶以低聚寡糖为底物,通过切割非还原末端α-1,4糖苷键以获得葡萄糖基,同时转苷生成α-1,6糖苷键,广泛应用于低聚异麦芽糖生产、代谢生理研究、疾病预防治疗等各个领域。Aspergillus nidulans来源的α-葡糖苷酶在毕氏酵母中外源表达时存在酶活较低、蛋白质降解等问题,为进一步提高α-葡糖苷酶表达量,共表达N-乙酰转移酶(Mpr1)以降低发酵过程细胞受到的氧化胁迫,提高酶活。以实验室保藏的P.pastoris KM71/pPIC9K-AgbB为出发菌株,构建共表达菌株Pichia pastoris KM71/pPIC9K-AgbB/pPICZA-Mpr1,经过摇瓶发酵120h,α-葡糖苷酶转苷酶酶活和蛋白质含量可达22.56U/ml和0.52mg/ml,分别是出发菌株摇瓶产酶的1.92倍和1.27倍。在此基础上进行3.6L罐发酵温度和甲醇诱导浓度优化,在25℃,以1%的甲醇浓度诱导发酵最高酶活和蛋白质含量可达128.12U/ml和1.81mg/ml,分别是起始菌株上罐产酶的1.96倍和1.50倍。 展开更多
关键词 N-乙酰转移酶(Mpr1) Α-葡糖苷酶 毕氏酵母 共表达 发酵优化
重组大肠杆菌生产多形拟杆菌肝素酶Ⅰ的发酵优化
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作者 张川 刘敏敏 +4 位作者 刘耀天 张悦 李中媛 宋亚囝 罗学刚 《食品科技》 CAS 北大核心 2019年第6期1-8,共8页
以实验室前期构建的N端融合SUMO标签的多形拟杆菌肝素酶Ⅰ(SUMO-Bt-Hep Ⅰ)生产菌株重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pE-SUMO-Bt-HepⅠ为研究对象,通过单因素确定其最佳表达条件:诱导温度25℃、诱导剂浓度0.4mmol/L、诱导时间12 h;首先通过Pla... 以实验室前期构建的N端融合SUMO标签的多形拟杆菌肝素酶Ⅰ(SUMO-Bt-Hep Ⅰ)生产菌株重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pE-SUMO-Bt-HepⅠ为研究对象,通过单因素确定其最佳表达条件:诱导温度25℃、诱导剂浓度0.4mmol/L、诱导时间12 h;首先通过Plackett-Burman试验,筛选出培养基中3个主要影响酶活的因素:葡萄糖、酵母提取物和蛋白胨。并通过响应面试验确定最佳培养基为:葡萄糖9.52g/L,酵母提取物9.61g/L,蛋白胨19.92g/L,硫酸铵4g/L,磷酸氢二钠18g/L,磷酸二氢钾3g/L,硫酸镁5g/L。在此最佳培养基下发酵酶活预测可达55133IU/L,3次验证试验获得的SUMO-Bt-HepI酶活力平均为56961 IU/L,与理论预测值接近,比优化前(24215.9 IU/L)提高了2.3倍。通过5L发酵罐的分批补料扩大培养得到的最高发酵酶活为3.937×10^5IU/L,比摇瓶提高了6.91倍,这是目前报道发酵生产肝素酶I的最高水平,对工业化应用具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 多形拟杆菌 肝素酶Ⅰ 响应面 发酵优化
基于2-酮基-D-葡萄糖酸高产的发酵条件优化研究 预览
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作者 罗秋玲 刘佳 +3 位作者 张权 杨彬 陈修来 刘立明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期22-27,共6页
为了实现异维生素C前体2-酮基-D-葡萄糖酸在沙雷氏菌Serratia sp. FMME043中的高效生产,在30 L发酵罐中对补料策略和发酵条件进行了优化,建立了补料分批发酵工艺。最终确定发酵策略为:溶氧控制在40%,在发酵16、22 h及28 h时分别补加64、... 为了实现异维生素C前体2-酮基-D-葡萄糖酸在沙雷氏菌Serratia sp. FMME043中的高效生产,在30 L发酵罐中对补料策略和发酵条件进行了优化,建立了补料分批发酵工艺。最终确定发酵策略为:溶氧控制在40%,在发酵16、22 h及28 h时分别补加64、80 g和96 g硫酸铵,并且当残糖浓度降至15~25 g/L时,分五次等量补加801 g葡萄糖,优化后,发酵44 h,2-KGA的产量和转化率分别达到268.5 g/L和1.04 g/g,分别比优化前提高了58.4%和9.9%。本研究结果为目前报道的产量和转化率在国内外属领先水平,为2-酮基-D-葡萄糖酸及异维生素C工业化生产打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 沙雷氏菌属 2-酮基-D-葡萄糖酸 发酵优化 溶氧
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