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转基因马铃薯外源基因插入位点分析及检测方法的建立 认领 被引量:1
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作者 闫建俊 白云凤 +3 位作者 左静静 李萌 左敏 裴成成 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第16期5361-5366,共6页
09-4为本实验室构建的抗马铃薯PRLV的RNAi基因和特异切割马铃薯PSTVd的核酶基因无标记双价表达载体p CAMBIA3301-DR-IS导入马铃薯中获得的转基因无性系。本研究通过染色体步移获取转基因无性系09-4的插入位点左边界旁侧序列,对获得的左... 09-4为本实验室构建的抗马铃薯PRLV的RNAi基因和特异切割马铃薯PSTVd的核酶基因无标记双价表达载体p CAMBIA3301-DR-IS导入马铃薯中获得的转基因无性系。本研究通过染色体步移获取转基因无性系09-4的插入位点左边界旁侧序列,对获得的左边界序列进行分析,扩增获得片段大小为382 bp,包括转化载体序列119 bp及转基因马铃薯的旁侧序列263 bp;依据转化马铃薯的RNAi基因和左旁侧序列分别设计引物,扩增出大小为300 bp的片段,建立了09-4转基因无性系特异性标识和特异PCR检测方法,为转基因马铃薯的检测和身份识别提供技术基础。 展开更多
关键词 转基因马铃薯 染色体步移 事件特异性检测
转基因水稻E1C9K-18的获得及其事件特异性检测方法的建立 认领
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作者 徐礼逵 邓力华 +1 位作者 李华 肖国樱 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2250-2260,共11页
抗除草剂、抗螟虫水稻在方便杂草治理、减少虫害损失方面具有重要的应用价值。事件特异性检测方法是监管转基因水稻的必需技术。本研究构建了损伤诱导启动子驱动抗螟虫基因杀虫蛋白基因(gene coding insecticidal crystal protein Cry1C... 抗除草剂、抗螟虫水稻在方便杂草治理、减少虫害损失方面具有重要的应用价值。事件特异性检测方法是监管转基因水稻的必需技术。本研究构建了损伤诱导启动子驱动抗螟虫基因杀虫蛋白基因(gene coding insecticidal crystal protein Cry1Ca,Cry1Ca#)和组成型启动子驱动抗除草剂基因5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶基因(gene coding 5-enolpyruvylshikimate 3-phosphate synthase,Epsps#)的植物表达载体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化籼稻(Oryza sativa subsp.indica)9K19-5,获得了单拷贝转化事件E1C9K-18,喷施草甘膦显示其具有良好的草甘膦抗性。利用高效热不对称交错PCR法(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR,hiTAIL-PCR)扩增获得了转基因水稻E1C9K-18外源基因插入位点的右旁侧序列420 bp,其插在水稻基因组第4号染色体长臂的33189510位核苷酸残基之后。根据水稻参考基因组序列和T-DNA的左侧序列,设计引物扩增得到了613 bp的左旁侧序列,其插在水稻基因组第4号染色体长臂的33189480位核苷酸残基之前。外源基因插入导致水稻基因组上缺失了29个核苷酸残基。基于左、右旁侧序列,建立了转基因水稻E1C9K-18的事件特异性定性PCR检测方法,以及快速鉴定转基因后代植株外源基因型的三引物PCR检测方法。事件特异性PCR和三引物PCR检测方法将为转基因水稻E1C9K-18的研究和应用提供技术支撑。 展开更多
关键词 转基因水稻 旁侧序列 事件特异性检测 基因型鉴定
转BtCry1Ac欧洲黑杨的外源基因插入位点分析及特异性检测 认领
3
作者 张磊 胡建军 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第10期45-52,共8页
【目的】分析转BtCry1Ac欧洲黑杨外源基因插入位点,从而进一步完善抗虫转基因杨树的背景信息,推进抗虫转基因杨树的安全评价及应用。【方法】以转BtCry1Ac欧洲黑杨株系n12、n222为试验材料,使用高效热不对称交错PCR法(hiTAIL-PCR)分离... 【目的】分析转BtCry1Ac欧洲黑杨外源基因插入位点,从而进一步完善抗虫转基因杨树的背景信息,推进抗虫转基因杨树的安全评价及应用。【方法】以转BtCry1Ac欧洲黑杨株系n12、n222为试验材料,使用高效热不对称交错PCR法(hiTAIL-PCR)分离外源基因插入位点侧翼序列,比对毛果杨基因组序列确定插入位点。根据插入位点处的侧翼序列设计2对特异性PCR检测引物,建立转BtCry1Ac欧洲黑杨外源基因特异性PCR检测方法,并利用实时荧光定量PCR技术分析插入位点周边基因表达情况。【结果】PCR及半定量PCR结果表明,转基因欧洲黑杨株系的BtCry1Ac基因稳定表达。通过比对毛果杨基因组序列确定转基因杨n12 T-DNA插入基因组Chr15的10162773位点即Potri.015G076600第2个内含子,其碱基组成AT含量为65%;n222整合位点为基因组Chr01基因间隔区41596184位点,其碱基组成AT含量为69%。特异性PCR检测显示,n12能扩增出709 bp(转基因)和1159 bp(非转基因)特异性条带,n222及其与丹红杨杂交子代能扩增出1265 bp(转基因)和1827 bp(非转基因)特异性条带,而对照仅能扩增非转基因特异性片段。n12 T-DNA插入造成插入位点的丝氨酸蛋白激酶(SPK)Potri.015G076600基因表达量上调4.3倍,而附近的共济失调毛细血管扩张症突变蛋白(ATM)Potri.015G076700表达量下调20倍,从而可能调节杨树生长速度。n222插入位点上下游基因异黄酮-7-O-β-葡萄糖苷6″-O-丙二酰转移酶(IBG)Potri.001G395700和光敏色素互作因子解旋酶(PIF)Potri.001G395800表达量均上调。【结论】转BtCry1Ac欧洲黑杨T-DNA偏好插入富含AT区域,同时T-DNA载体边界序列缺失,并引起插入位点附近基因表达量变化。建立转BtCry1Ac欧洲黑杨特异性检测方法,为转BtCry1Ac欧洲黑杨的管理与监测提供参考。 展开更多
关键词 欧洲黑杨 抗虫基因 BtCry1Ac 转基因 hiTAIL-PCR 侧翼序列 事件特异性检测
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进口转基因大豆品系检测及分析 认领 被引量:2
4
作者 潘广 杨帆 +4 位作者 章桂明 刘新娇 卢小雨 向才玉 凌杏园 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期298-305,共8页
用17种大豆品系特异性检测方法对我国进口自美国、巴西、加拿大和阿根廷四个国家的41批转基因大豆进行检测。分析检测结果显示:在41批进口大豆中仅17个品系中的7种批准大豆品系被检出,分别是MON89788、GTS40-3-2、MON87701、MON87708、A... 用17种大豆品系特异性检测方法对我国进口自美国、巴西、加拿大和阿根廷四个国家的41批转基因大豆进行检测。分析检测结果显示:在41批进口大豆中仅17个品系中的7种批准大豆品系被检出,分别是MON89788、GTS40-3-2、MON87701、MON87708、A2704-12、A5547-127和FG72,检出率分别为90.24%、87.80%、43.90%、41.46%、36.59%、17.07%和2.44%;不同批次样品检出品系不同,其中6批样品检出1种品系,其余样品均能检出2~5种品系;各国大豆检出品系也不同,其中美国检出7种,而巴西、加拿大和阿根廷分别检出6、5和3种;尽管不同国家大豆检出品系和含量不同,但4大转基因大豆出口国均有GTS40-3-2和MON89788两种品系检出,且含量高。期待以上结果为我国进境转基因大豆检测提供参考,并作为进口转基因大豆安全监管的依据。 展开更多
关键词 进口大豆 转基因大豆 品系检测
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转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因整合分析与品系特异性检测 认领 被引量:1
5
作者 金永梅 马瑞 +1 位作者 于志晶 林秀峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期6-12,共7页
利用染色体步移方法分离获得转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因旁侧序列及其水稻基因组中的插入位点,并建立了吉生粳3号品系特异性PCR检测方法。通过对吉生粳3号外源基因左、右边界旁侧序列分别与水稻基因组序列和T-DNA序列的比对... 利用染色体步移方法分离获得转cry1C基因抗虫水稻吉生粳3号外源基因旁侧序列及其水稻基因组中的插入位点,并建立了吉生粳3号品系特异性PCR检测方法。通过对吉生粳3号外源基因左、右边界旁侧序列分别与水稻基因组序列和T-DNA序列的比对分析确定其插入位点,发现T-DNA在水稻基因组(日本晴)2号染色体上的基因间区2790685-2790589位点(GenBank登记号:NC029257.1)。根据T-DNA插入位点,在插入位点两侧基因组区域和T-DNA左边界设计特异性引物,建立了吉生粳3号事件特异性PCR检测方法,为吉生粳3号的身份识别提供了准确、快速的检测技术手段。 展开更多
关键词 转Cry1C基因抗虫水稻 旁侧序列 插入位点 事件特异性检测
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转基因水稻U41三引物检测方法的建立 认领 被引量:1
6
作者 张斌 阮颖 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期1308-1314,共7页
对于研究转基因农作物来说,建立其检测方法至关重要。本研究利用TAIL-PCR法,获得了转基因水稻U41的右旁侧序列,结果显示T—DNA插入位点在水稻1号染色体第22013~22014之间。通过设计引物扩增左旁侧序列,建立了U41转化事件特异性检... 对于研究转基因农作物来说,建立其检测方法至关重要。本研究利用TAIL-PCR法,获得了转基因水稻U41的右旁侧序列,结果显示T—DNA插入位点在水稻1号染色体第22013~22014之间。通过设计引物扩增左旁侧序列,建立了U41转化事件特异性检测的方法,可以从含0.1%目的基因中扩增出529bp的特异性条带;还建立了三引物检测的方法,能快速和准确地鉴定U41的纯合株系。这些方法的建立,缩短了获得U41纯合体的时间,对U41的检测、研究和利用具有实用价值。 展开更多
关键词 纯合子鉴定 转基因水稻 三引物检测法 旁侧序列 事件特异性检测
转基因水稻BPL9K-2事件特异性检测方法的建立 认领 被引量:2
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作者 崔帅 王作平 +1 位作者 于江辉 肖国樱 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期32-41,共10页
利用hiTAIL-PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR)法扩增获得了转基因水稻BPL9K-2的外源基因插入位点的左旁侧序列450bp,与水稻参考基因组数据比对发现其左边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 765 位核苷... 利用hiTAIL-PCR(high efficient thermal asymmetric interlaced PCR)法扩增获得了转基因水稻BPL9K-2的外源基因插入位点的左旁侧序列450bp,与水稻参考基因组数据比对发现其左边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 765 位核苷酸残基之后。根据水稻参考基因组序列和外源基因右边界序列,设计引物扩增得到485bp的特异片段,通过数据库比对发现其右边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1 037 825 位核苷酸残基之前。因为外源基因插入和非正常重组,水稻基因组上缺失了59个核苷酸。基于左右旁侧序列,建立了转基因水稻BPL9K-2的事件特异性定性PCR检测方法,可以分别扩增到片段大小为449bp和485bp的特异条带。该方法特异性好,灵敏度高,能够在BPL9K-2基因组DNA相对含量为0.1%的模板中检测出转基因成分。依据旁侧序列,建立了快速鉴定转基因后代植株外源基因型的三引物PCR检测方法。这些方法的建立,为转基因水稻BPL9K-2的应用和检测提供了技术支持。 展开更多
关键词 转基因水稻 旁侧序列 事件特异性检测 基因型鉴定
抗病转基因大豆事件B4J8049外源T-DNA整合位点分析及特异性检测 认领 被引量:1
8
作者 包婉莹 仲晓芳 +2 位作者 杜茜 赵倩倩 杨向东 《东北农业科学》 北大核心 2018年第5期21-26,共6页
大豆疫霉根腐病是由卵菌纲病原菌—疫霉菌(Phyt0phthora sojae)引起的大豆毁灭性病害之一。本研究前期利用农杆菌介导转化技术,将广谱抗病基因hrpZm导入栽培大豆Williams 82,获得高抗疫霉根腐病转基因大豆新品系B4J8049,并已进入环境... 大豆疫霉根腐病是由卵菌纲病原菌—疫霉菌(Phyt0phthora sojae)引起的大豆毁灭性病害之一。本研究前期利用农杆菌介导转化技术,将广谱抗病基因hrpZm导入栽培大豆Williams 82,获得高抗疫霉根腐病转基因大豆新品系B4J8049,并已进入环境释放试验阶段。为进一步推进该转化事件的生物安全评价及应用,本研究采用热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)方法分析外源T-DNA整合位点右边界序列,并依据其序列特征,建立该转化事件特异性检测方法。Southern杂交检测结果表明,转基因大豆事件B4J8049外源T-DNA插入拷贝数为1个。根据外源T-DNA插入片段序列设计3条嵌套特异性检测引物,与简并引物组合进行TAIL-PCR扩增反应,获得外源TDNA插入位点右边界序列。BLAST分析(https://soybase.org/)表明,外源T-DNA片段以单拷贝形式反向插入的方式整合到大豆基因组中第8号染色体的187 824位点。在此基础上,依据插入位点右边界序列设计检测引物,建立转基因大豆事件B4J8049特异性检测方法。本研究为该抗病转基因事件B4J8049及其衍生产品特异性检测提供依据。 展开更多
关键词 hrpZm 转基因大豆 整合位点 侧翼序列 事件特异性检测
转基因鲑鱼AquAdvantage品系特异性实时荧光聚合酶链式反应检测方法的建立 认领 被引量:1
9
作者 刘二龙 卢丽 +5 位作者 吕英姿 蒋湘 李立霞 李嘉琪 杜雅萍 郑高彬 《中国食品卫生杂志》 2017年第5期576-580,共5页
目的实现转基因鲑鱼AquAdvantage的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对转基因鲑鱼的品系特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因鲑鱼实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重... 目的实现转基因鲑鱼AquAdvantage的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对转基因鲑鱼的品系特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因鲑鱼实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的转基因鲑鱼实时荧光PCR方法特异性强,在600 000-60拷贝范围内呈良好的线性关系,其线性回归方程为y=-3.2194x+40.805,R2=0.997,检测限为60拷贝,检测重复性良好。结论建立的品系特异性实时荧光PCR方法可应用于转基因鲑鱼AquAdvantage的鉴定。 展开更多
关键词 转基因鲑鱼 AquAdvantage 实时荧光聚合酶链式反应 品系特异性 检测
转基因水稻BarKasalath-01事件特异性检测 认领 被引量:7
10
作者 郭超 何行健 +1 位作者 邓力华 肖国樱 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2017年第11期4466-4475,共10页
利用hi TAIL-PCR方法研究了转基因水稻Bar Kasalath-01中外源基因在基因组上插入位点的序列特征,获得了外源基因T-DNA右边界旁侧序列511 bp,与水稻基因组数据库比对发现,外源基因插入位点位于水稻基因组第8号染色体的第3 326 720处。根... 利用hi TAIL-PCR方法研究了转基因水稻Bar Kasalath-01中外源基因在基因组上插入位点的序列特征,获得了外源基因T-DNA右边界旁侧序列511 bp,与水稻基因组数据库比对发现,外源基因插入位点位于水稻基因组第8号染色体的第3 326 720处。根据整合位点水稻基因组序列和外源基因T-DNA左边界序列设计引物,扩增得到了左旁侧序列783 bp。基于左右旁侧序列,建立了转基因水稻Bar Kasalath-01的事件特异性定性PCR检测方法,扩增片段分别为783 bp和411 bp。该方法特异性强、灵敏度高,能够在Bar Kasalath-01基因组DNA含量为0.1%的模板中检测出转基因成份。依据旁侧序列,还建立了快速鉴定转基因后代植株基因型的3引物PCR检测方法。这些方法的建立,实现了对转基因水稻Bar Kasalath-01转化事件的特异性检测。 展开更多
关键词 转基因水稻 旁侧序列 事件特异性检测 基因型鉴定
三引物法鉴定转基因水稻U5纯合体 认领 被引量:3
11
作者 张斌 何福林 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2017年第11期4476-4482,共7页
转基因水稻纯合体性状稳定,在水稻基因组功能研究中具有重要的作用。本研究利用TAIL-PCR法获得了T-DNA旁侧序列,序列比对显示插入位点在水稻第8号染色体的7 821 534-7 821 535之间;通过扩增旁侧序列,建立了转基因水稻U5的事件特异性检... 转基因水稻纯合体性状稳定,在水稻基因组功能研究中具有重要的作用。本研究利用TAIL-PCR法获得了T-DNA旁侧序列,序列比对显示插入位点在水稻第8号染色体的7 821 534-7 821 535之间;通过扩增旁侧序列,建立了转基因水稻U5的事件特异性检测方法;以旁侧序列为基础,还建立了能快速、准确鉴定U5纯合株系的三引物PCR检测法。这些纯合体的鉴定,缩短了获得U5转基因纯合体的时间,对加快水稻Os PUT1基因的功能研究和育种进程具有实用价值。 展开更多
关键词 纯合子鉴定 转基因水稻 潮霉素基因 旁侧序列 事件特异性检测
荧光PCR和数字PCR法检测转基因DAS-44406-6品系大豆 认领 被引量:16
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作者 于晓帆 高宏伟 +2 位作者 孙敏 肖西志 李荣贵 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期235-241,共7页
目的:建立实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定性检测方法和使用数字PCR检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定量检测方法。方法:针对转基因DAS-44406-6大豆品系,进行5’-RACE,... 目的:建立实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定性检测方法和使用数字PCR检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定量检测方法。方法:针对转基因DAS-44406-6大豆品系,进行5’-RACE,测定该品系转基因大豆外源片段与大豆染色体重组的边界序列,并根据该边界序列设计引物和探针。使用23种非DAS-44406-6品系转基因植物作为阴性对照测试实时荧光PCR引物和探针的特异性,以DAS-44406-6品系样品制备6个含量梯度的样品进行检测低限实验。使用数字PCR技术进行定量检测,并确定定量检测的低限。结果:建立的转基因DAS-44406-6大豆品系的实时荧光PCR特异性检测方法品系鉴定特异性较强,实时荧光PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为100 ng/反应时,为0.01%的转基因大豆含量,约为16.6个拷贝的DAS-44406-6基因组DNA;数字PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为0.5 ng/反应、转基因大豆含量为1%时,相对标准偏差为0.7%。因此,建立的转基因DAS-44406-6大豆品系实时荧光PCR和数字PCR特异性检测方法符合转基因检测的要求。 展开更多
关键词 转基因大豆 DAS-44406-6品系 品系鉴定 实时荧光PCR 数字PCR
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应用单管巢式和半巢式PCR检测转基因玉米MON89034 认领 被引量:4
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作者 闫伟 李葱葱 +2 位作者 夏蔚 邵改革 李飞武 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期56-60,共5页
根据MON89034t米的5’端和3’端边界序列分别设计1组转化体特异性的巢式PCR引物,采用中途进退式PcR策略建立MON89034玉米的转化体特异性检测方法,扩增产物分别为491bp和188bp。以转基因玉米MON89034及8种其他转基因作物为材料,证明... 根据MON89034t米的5’端和3’端边界序列分别设计1组转化体特异性的巢式PCR引物,采用中途进退式PcR策略建立MON89034玉米的转化体特异性检测方法,扩增产物分别为491bp和188bp。以转基因玉米MON89034及8种其他转基因作物为材料,证明此方法对MON89034玉米具有高度特异性。灵敏度测试结果表明,此方法的相对检出限达到0.01%,绝对检出限为4个单倍体基因组拷贝数,比普通PCR提高了5倍。建立的单管巢式和半巢式PCR方法可准确、高效地检测转基因玉米MON89034及其产品。 展开更多
关键词 转基因玉米 巢式PCR 中途进退式PCR 转化体特异性检测
转G2-EPSPS基因玉米D-3侧翼序列分析与转化体特异性检测方法 认领 被引量:2
14
作者 郭翠 张维 +5 位作者 余桂容 周正富 李亮 冯帅 陈明 王劲 《作物杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期69-75,共7页
通过一次3’端高效热不对称交互PCR(hiTAIL-PCR)和一次长链PCR扩增方法获得了转抗草甘膦基因(G2-EPSPS)玉米品系D-3的外源DNA插入片段的全DNA序列(T-DNA)及两端侧翼序列,并建立了转化体特异性PCR检测方法。结果显示:T-DNA插入... 通过一次3’端高效热不对称交互PCR(hiTAIL-PCR)和一次长链PCR扩增方法获得了转抗草甘膦基因(G2-EPSPS)玉米品系D-3的外源DNA插入片段的全DNA序列(T-DNA)及两端侧翼序列,并建立了转化体特异性PCR检测方法。结果显示:T-DNA插入片段全长4318bp,由一个G2-EPSPS基因的表达盒构成。根据T-DNA5’、3’端侧翼序列设计引物,建立了转化体特异性检测方法,并分析了该方法的灵敏度以及检出限,研究结果表明,3’端定性PCR检测方法特异性强,灵敏度高,检出极限为每100ng模板量的0.05%。本研究结果对转抗草甘膦外源基因检测和生物安全评价及监管具有重要意义。 展开更多
关键词 转基因玉米 G2-EPSPS 侧翼序列 转化体特异性检测
利用多重PCR技术快速检测五个转基因大豆品系 认领 被引量:10
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作者 董立明 李葱葱 +4 位作者 邢珍娟 邵改革 夏蔚 闫伟 李飞武 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1002-1007,共6页
转基因大豆305423、MON89788、CV127、GTS40-3—2、356043作为商品化应用最为广泛的大豆品系,种植面积占世界转基因大豆总种植面积的80%以上。根据大豆内标准基因Lectin和5种转基因大豆品系的边界序列设计特异性引物。通过验证引物的... 转基因大豆305423、MON89788、CV127、GTS40-3—2、356043作为商品化应用最为广泛的大豆品系,种植面积占世界转基因大豆总种植面积的80%以上。根据大豆内标准基因Lectin和5种转基因大豆品系的边界序列设计特异性引物。通过验证引物的适用性、特异性和灵敏度,优化多重PCR检测体系中不同引物的用量及反应退火温度,建立了能同时扩增大豆内源基因Lectin和5个转基因大豆品系的六重PCR检测体系。结果表明:确定的大豆内源基因和5个转基因大豆品系的引物具有很好的特异性,引物之间无交叉扩增和非特异性扩增,多重PCR方法的检测灵敏度达到0.1%。该方法可作为转基因大豆及其产品成分检测的辅助手段,快速检测转基因大豆及其产品中的相应品系。 展开更多
关键词 转基因大豆 多重PCR 品系特异性检测
转基因水稻吉生粳2号的外源基因旁侧序列分离及事件特异性PCR检测方法 认领 被引量:4
16
作者 金永梅 马瑞 +1 位作者 于志晶 林秀峰 《东北农业科学》 2016年第1期14-19,共6页
利用染色体步移方法从转基因水稻吉生粳2号基因组中分离了外源基因T-DNA整合左边界旁侧序列,长度为297 bp。通过对左边界旁侧序列的同源性比对分析定位了外源基因T-DNA在吉生粳2号基因组中的整合位点,为水稻基因组第1号染色体的第41 607... 利用染色体步移方法从转基因水稻吉生粳2号基因组中分离了外源基因T-DNA整合左边界旁侧序列,长度为297 bp。通过对左边界旁侧序列的同源性比对分析定位了外源基因T-DNA在吉生粳2号基因组中的整合位点,为水稻基因组第1号染色体的第41 607 441 bp处(Gen Bank sequence ID:NC_008394.4)。依据整合位点右侧设计的1条引物和TDNA右边界设计的3条引物分别进行PCR扩增分离到了右边界旁侧序列。根据左边界旁侧序列和T-DNA整合位点,建立了吉生粳2号事件特异性定性PCR检测方法,该方法为转基因水稻吉生粳2号的身份识别提供了有效手段。 展开更多
关键词 转基因水稻 旁侧序列 事件特异性检测
转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法的建立 认领 被引量:8
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作者 刘欣 张国丛 +2 位作者 周兴虎 祝长青 黄明 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期193-197,共5页
为实现转基因大豆MON89788的标识管理,针对转基因大豆MON89788的品系特异性序列设计引物和Taq Man探针,建立转基因大豆MON89788实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进... 为实现转基因大豆MON89788的标识管理,针对转基因大豆MON89788的品系特异性序列设计引物和Taq Man探针,建立转基因大豆MON89788实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果显示:建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法能扩增出127 bp的产物,特异性强,灵敏度达到0.1%,约为40个单倍体基因组拷贝,检测重复性好,可成功应用于实际样品检测。因此,建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法可以应用于转基因大豆MON89788大豆及其制品的检测。 展开更多
关键词 转基因大豆 MON89788品系 实时荧光PCR 品系特异性检测 转基因标识
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转基因油菜W-4 T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测 认领
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作者 陈松 申爱娟 +1 位作者 周晓婴 戚存扣 《农业科学与技术:英文版》 CAS 2014年第7期1089-1094,共6页
W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.为建立W-4的转基因事件特异性PCR检测技术,应用温度不对称PCR(TAIL-PCR)扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧... W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.为建立W-4的转基因事件特异性PCR检测技术,应用温度不对称PCR(TAIL-PCR)扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列.其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G+C含量为31.27%、A+T含量为68.73%;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G+C含量为32.6%、A+T含量为67.4%,表明该T-DNA整合在富含AT区.序列比对结果发现,该转基因事件中,T-DNA左边界序列完全整合到油菜基因组中,仅有1个碱基由G转换成了A.而右边界则缺失了包括RBborder在内的62个碱基.结果表明:转基因高油酸油菜T-DNA的整合是一次无载体序列的整合.依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计了2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485和405 bp的预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术.应用该检测技术可以从含有0.1% W-4基因组DNA的混合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达0.1%.可对W-4的转基因事件进行特异性检测. 展开更多
关键词 转基因油菜 旁侧序列 事件特异性检测
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转基因油菜W-4 T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测 认领 被引量:8
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作者 申爱娟 陈松 +1 位作者 周晓婴 戚存扣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期14-20,共7页
W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.本研究应用温度不对称PCR (TAIL-PCR)技术扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列.其中右边界旁侧序列长度为... W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.本研究应用温度不对称PCR (TAIL-PCR)技术扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列.其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G+C含量为31.27%、A+T含量为68.73%;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G+C含量为32.6%、A+T含量为67.4%,表明该T-DNA整合在富含A/T区.依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计的2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485 bp和405 bp预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术.应用该检测技术可以从含有0.1% W-4基因组DNA的昆合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达到0.1%.表明应用该技术可对W-4转基因事件进行特异性检测. 展开更多
关键词 转基因油菜 旁侧序列 事件特异性检测
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酶连接探针杂交芯片特异性检测转基因水稻品系 认领 被引量:1
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作者 张明哲 陈吴健 +3 位作者 张晓峰 陈笑梅 陈曦 吴蓉 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期222-225,共4页
酶连接探针杂交芯片是一种基于连接酶催化的探针杂交芯片技术,其原理是采用硫代引物保护法,利用Lambda DNA外切酶将多重聚合酶链式反应产物切割成单链.在氨基修饰的芯片上固定5'端探针,并与制备的产物单链进行杂交,加入荧光修饰的第2... 酶连接探针杂交芯片是一种基于连接酶催化的探针杂交芯片技术,其原理是采用硫代引物保护法,利用Lambda DNA外切酶将多重聚合酶链式反应产物切割成单链.在氨基修饰的芯片上固定5'端探针,并与制备的产物单链进行杂交,加入荧光修饰的第2个探针与之前的探针进行酶连接反应,从而实现高特异性、高通量检测.结果表明:酶连接探针杂交芯片技术检测4种转基因水稻品系特异性好,灵敏度可达0.1%(m/m),可以应用于进出口检验检疫、食品安全监测等领域. 展开更多
关键词 酶连接探针杂交芯片 转基因水稻 品系检测
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