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棉铃虫Ⅳ型几丁质酶的基因克隆、酶学性质及表达谱 预览
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作者 麦麦提艾力·阿卜杜纳斯尔 马纪 +5 位作者 刘宁 王威 李梦鸽 古新蓉 王新 刘小宁 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期170-180,共11页
【目的】昆虫几丁质酶(chitinase,CHT)主要参与蜕皮、围食膜的降解和机体免疫防御等重要生理生长发育过程。本研究旨在对棉铃虫Helicoverpa armigeraⅣ型(group)几丁质酶基因进行克隆和表达分析,为以该基因作为棉铃虫防控的分子靶标提... 【目的】昆虫几丁质酶(chitinase,CHT)主要参与蜕皮、围食膜的降解和机体免疫防御等重要生理生长发育过程。本研究旨在对棉铃虫Helicoverpa armigeraⅣ型(group)几丁质酶基因进行克隆和表达分析,为以该基因作为棉铃虫防控的分子靶标提供理论依据。【方法】采用RT-PCR和RACE技术从棉铃虫中肠中克隆Ⅳ型几丁质酶基因,分别运用DNAMAN和MEGA软件进行多序列比对和构建系统发育树。在大肠杆菌Escherichia coli(DE3)中诱导表达其体外重组蛋白,利用Western blot进一步验证;用Ni-NTA纯化柱纯化重组蛋白,之后研究该蛋白的酶学性质。qPCR分析该基因的在棉铃虫不同发育阶段和6龄幼虫不同组织中的表达谱。【结果】克隆获得棉铃虫几丁质酶基因HaCHT 4(GenBank登录号:MH500771),其cDNA长1 624 bp,ORF长1 527 bp,编码509个氨基酸,预测的分子量为55.2 kD。蛋白质序列的N末端具有信号肽,中间序列部分含有一个催化结构域(catalytic domain,CAD),C末端含有一个几丁质结合结构域(chitin binding domain,CBD)。多序列比对显示,HaCHT4具有几丁质酶的保守区域;系统发育分析表明,HaCHT4属于Ⅳ型几丁质酶。重组蛋白His-HaCHT4在大肠杆菌中成功表达。纯化的重组蛋白对胶体几丁质底物具有降解活性,最适温度和pH分别为50℃和7,动力学参数K m和V max值分别为1.76±0.35 mg/mL和0.0220±0.0012μg/mL·s。qPCR分析表明,HaCHT 4在1龄和2龄幼虫期的表达量显著高于其他幼虫龄期及预蛹期;主要在中肠和脂肪体中高度表达,体壁和头部中低表达。【结论】结果提示棉铃虫HaCHT4可能参与围食膜中几丁质降解过程。这些结果为深入研究HaCHT4的功能奠定了基础,并为害虫防治提供了有用的信息。 展开更多
关键词 棉铃虫 几丁质 Ⅳ型几丁质酶 酶学性质 基因表达分析
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Alkalibacterium sp.SL3中α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达和性质研究
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作者 邱聪花 罗蒙 +2 位作者 林娟 叶秀云 王国增 《福州大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第1期136-142,共7页
以大布苏盐碱湖分离菌Alkalibacterium sp.SL3的DNA为模板,利用PCR扩增α-半乳糖苷酶基因(galSL3),构建重组质粒pET-22b-galSL3,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达重组酶(rGalSL3).通过镍柱亲和层析分离纯化重组酶,并对纯化的重组酶进行... 以大布苏盐碱湖分离菌Alkalibacterium sp.SL3的DNA为模板,利用PCR扩增α-半乳糖苷酶基因(galSL3),构建重组质粒pET-22b-galSL3,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达重组酶(rGalSL3).通过镍柱亲和层析分离纯化重组酶,并对纯化的重组酶进行性质研究.研究表明,纯酶rGalSL3最适pH值为5.5,最适温度为55℃;该酶在pH值5.0~10.0保持90%以上的剩余酶活,在50℃有非常好的热稳定性.在0~1.5mol·L^-1 NaCl溶液中该酶的酶活基本不受影响,在3.0mol·L^-1 NaCl溶液中有很好的稳定性.Pb^2+、Ca^2+、Co^2+、Li^+、Na^+、K^+、Triton-100和β-mercaptoethanol等对重组酶的活性有明显的促进作用.该酶水解对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷的Km、vmax和kcat分别为(2.64±0.02)μmol·mL^-1、(454.55±0.59)μmol·(mg·min)^-1和(347.73±1.27)s^-1.重组酶可水解蜜二糖和棉籽糖,不能水解瓜尔豆胶. 展开更多
关键词 嗜盐嗜碱菌 Α-半乳糖苷酶 基因克隆 表达 性质分析
宏基因组来源耐Mn^2+、热稳定细菌漆酶的分子克隆及酶学特性
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作者 董冰雪 夏敏 +3 位作者 蔡心清 李鹏 押玉柯 毛润乾 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1190-1199,共10页
【背景】漆酶和锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)是木质素降解的主要酶,二者有协同效应。Mnp活性依赖于Mn^2+,而Mn^2+是大多数漆酶的抑制剂。【目的】获得耐Mn^2+的细菌漆酶用于木质素降解。【方法】构建许昌市某污水河污... 【背景】漆酶和锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)是木质素降解的主要酶,二者有协同效应。Mnp活性依赖于Mn^2+,而Mn^2+是大多数漆酶的抑制剂。【目的】获得耐Mn^2+的细菌漆酶用于木质素降解。【方法】构建许昌市某污水河污泥宏基因组文库,通过活性筛选获得细菌漆酶基因lac1542。使用大肠杆菌异源表达Lac1542,研究纯化后的重组蛋白酶学性质并进一步检测了含Lac1542复合酶系降解木质素能力。【结果】测序结果显示lac1542编码一个含513个氨基酸的蛋白。以ABTS为底物Lac1542最适反应pH为4.0,在pH 3.0-6.5范围内酶活性稳定。最适反应温度是75°C,在70°C以下酶活性稳定;100 mmol/L的Mn^2+仍能提高酶的活性。动力学参数研究发现,该酶的最适底物顺序为:ABTS〉丁香醛联氮〉儿茶酚〉2,6-DMP〉愈创木酚。Lac1542/Mnp复合酶系对木质素降解率为47.8%,比单独使用Mnp木质素降解率(22.4%)提高25.4%。Lac1542/Mnp/灰盖鬼伞过氧化物酶(Coprinus cinereus Peroxidase,CIP)复合酶系木质素降解高达71.5%,比Mnp/CIP酶系木质素降解率(48.9%)提高22.6%,加入Lac1542后的复合酶系能明显提高木质素的降解率。【结论】Lac1542的可溶性表达、耐受高浓度Mn^2+、热稳定性使得Lac1542可以替代一些经典的真菌漆酶应用于制浆、造纸、纤维素乙醇生产、染料脱色等工业。 展开更多
关键词 细菌漆酶 Mn^2+耐受 酶学特性 宏基因组 木质素降解
短小芽孢杆菌LC01的鉴定及其芽孢漆酶性质的研究
4
作者 王佳懿 李泰仑 +1 位作者 王天女 卢磊 《南京林业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第5期113-120,共8页
【目的】对前期获得的1株具有较高漆酶活性的细菌菌株LC01进行鉴定及相关酶学性质研究,以开发具有较好工业应用特性的细菌漆酶。【方法】通过形态观察和生理生化实验,结合16S r DNA序列分析对菌株进行鉴定,测定其芽孢漆酶在不同条件下... 【目的】对前期获得的1株具有较高漆酶活性的细菌菌株LC01进行鉴定及相关酶学性质研究,以开发具有较好工业应用特性的细菌漆酶。【方法】通过形态观察和生理生化实验,结合16S r DNA序列分析对菌株进行鉴定,测定其芽孢漆酶在不同条件下的催化性质及染料降解能力。【结果】经鉴定菌株LC01为短小芽孢杆菌,该菌株的芽孢漆酶氧化底物2,2'-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)、丁香醛连氮和2,6-二甲氧基苯酚的最适p H分别为3. 0、6. 6和8. 6,以丁香醛连氮为底物的最适催化温度为80℃,在p H 9. 0放置10 d或50℃处理10 h后均有较高活性。在p H 9. 0时,芽孢漆酶-介体系统能有效脱色不同结构的染料。对染料活性黑5和靛红反应1 h后脱色率达90%以上,对RB亮蓝的脱色6 h后也达到了90%。【结论】短小芽孢杆菌LC01的芽孢漆酶能有效脱色染料且在碱性和高温条件下具有良好稳定性,表明其在多种工业领域具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 短小芽孢杆菌 漆酶 酶学性质 染料脱色
嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、表达及功能分析 预览
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作者 吴京 王文文 +4 位作者 熊蓉露 吴振 潘道东 曾小群 郭宇星 《食品科学》 CSCD 北大核心 2018年第4期76-81,共6页
分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用。为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异,以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板,构建分选酶A(sortase A,SrtA)重组表达载体p ET28a-SrtAΔN48,转入大肠杆菌感受态细胞Transetta... 分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用。为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异,以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板,构建分选酶A(sortase A,SrtA)重组表达载体p ET28a-SrtAΔN48,转入大肠杆菌感受态细胞Transetta(DE3)内表达,使用Dabcyl-QALPTTGEE(Edans)探究其酶活特性。结果发现:嗜酸乳杆菌ATCC4356 SrtA(Lap-SrtAΔN48)分子质量为20 k Da左右;Mg^2+、Zn^2+、Mn^2+可提高Lap-SrtAΔN48的转肽能力;Ca^2+不会影响SrtAΔN48的活性,明显区别于致病菌;且分选酶抑制剂查尔酮会抑制Lap-SrtAΔN48的活性。进一步通过蛋白质同源建模分析发现Lap-SrtA由8条中心β桶状结构互相折叠而成,属于经典的分选酶结构,Lap-SrtA的活性位点为His137、Cys198、Arg205。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 分选酶A 基因克隆 酶学特性 结构特性
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槟榔果仁多酚氧化酶分离纯化及其酶特性研究
6
作者 郭宇婷 潘永贵 +1 位作者 张正科 张伟敏 《食品科技》 北大核心 2018年第11期235-239,245共6页
以槟榔果仁为试材,经pH6.8磷酸缓冲溶液(PBS)提取多酚氧化酶(PPO)粗酶液,采用(NH4)2SO4分级沉淀后,进一步通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow柱层析,获得PPO纯化酶液。经鉴定其纯度达到电泳纯,相对分子质量为2... 以槟榔果仁为试材,经pH6.8磷酸缓冲溶液(PBS)提取多酚氧化酶(PPO)粗酶液,采用(NH4)2SO4分级沉淀后,进一步通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow柱层析,获得PPO纯化酶液。经鉴定其纯度达到电泳纯,相对分子质量为29.2 ku。在此基础上,对提取的PPO进行酶学特性研究,结果表明,槟榔果仁中PPO最适温度为20℃,最适pH为7.0;以邻苯二酚为底物,该酶的最大反应速度(Vmax)为140.84 U/mL·min,Km为3.22 mmol/L。 展开更多
关键词 槟榔果仁 PPO 分离纯化 酶特性
人粪便宏基因组α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质及其对芦丁的生物转化
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作者 史云璐 李彬春 李艳琴 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1307-1316,共10页
HFM-rha78是本实验室从健康人体粪便宏基因组DNA中获得的新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶基因。该基因全长2 166 bp,编码蛋白质分子质量为83 kD,等电点5.58,其二级结构以α螺旋和无规卷曲为主,整体表现出亲水性,其氨基酸序列与GenBank收录的... HFM-rha78是本实验室从健康人体粪便宏基因组DNA中获得的新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶基因。该基因全长2 166 bp,编码蛋白质分子质量为83 kD,等电点5.58,其二级结构以α螺旋和无规卷曲为主,整体表现出亲水性,其氨基酸序列与GenBank收录的序列一致性仅为48%。系统进化树表明,该酶被分类至亚家族Ⅱ,其催化广义酸和广义碱均为谷氨酸,催化残基高度保守。为明确其酶学性质,以对硝基苯酚-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside,pNPR)为底物,通过紫外-可见分光光度法测定产物对硝基苯酚的生成量,得到HFM-Rha78的最适反应温度为50℃,最适pH为6.5,且在30~46℃下保温30 min,不影响活力。为初步研究其对芦丁的水解能力,首先对HFM-Rha78的有机溶剂耐受性进行了研究。结果表明,该酶能普遍耐受1%的有机溶剂,甚至1%~5%的异丙醇和1%的β巯基乙醇,有提高其活性的能力。当DMSO浓度为10%时,仍能保持79%的酶活性。HFMRha78对底物pNPR的Vmax为129.9 μmol min^-1 mg^-1,HFM-Rha78的KM较大,为26.0 mmol L^-1。转换数kcat为185.1 s^-1,催化效率kcat/KM为7.1×10^3 s^-1 mol^-1 L。采用高效液相色谱仪检测HFM-Rha78水解芦丁的能力。结果表明,37℃条件下,随着酶浓度和水解时间增加,芦丁转化率增大。反应10 h时,芦丁转化率达41.8%。本研究获得了HFM-Rha78的最适反应条件,并确定其可特异性生物转化芦丁为异槲皮素。 展开更多
关键词 α-L-鼠李糖苷酶 酶学性质 芦丁 高效液相色谱
核桃壳木质素的结构研究 预览 被引量:1
8
作者 付跃进 杨昇 +1 位作者 王方骏 袁同琦 《林业工程学报》 北大核心 2018年第3期88-94,共7页
核桃加工过程会产生大量核桃壳,而核桃壳中木质素含量较高,可作为潜在商业木质素的来源。为充分利用核桃壳中的木质素,必须了解核桃壳木质素的结构特点。用不同浓度的碱溶液对核桃壳中的木质素进行逐级提取,得到了4种碱木质素,并... 核桃加工过程会产生大量核桃壳,而核桃壳中木质素含量较高,可作为潜在商业木质素的来源。为充分利用核桃壳中的木质素,必须了解核桃壳木质素的结构特点。用不同浓度的碱溶液对核桃壳中的木质素进行逐级提取,得到了4种碱木质素,并探索了各浓度梯度下木质素的得率。随后,通过深度酶水解得到了酶解残渣木质素。利用凝胶色谱(GPC)、红外光谱(FT-IR)和二维核磁共振(2DHSQC)技术对分离所得木质素样品的结构进行定性和定量表征。对各木质素样品的纯度及分子结构特点进行综合分析后发现,通过逐级碱提核桃壳得到的碱木质素总得率仅为27.25%,但碱提核桃壳残渣酶水解后得到的酶解残渣木质素的得率却高达62.44%。研究中木质素总得率达到了89.69%,代表性良好。4种碱提木质素样品的相对分子质量(1930~2330g/mol)明显低于酶水解木质素样品的相对分子质量(3190g/mol),且所有木质素样品的分子质量分布都相对较窄(Mw/Mn〈1.5)。核桃壳木质素为典型的SGH型木质素,该木质素分子中S型单元与G型单元比例相近,且含量远高于H型结构单元。核桃壳木质素中主要联结键为β-O-4’醚键结构、卢胡’树脂醇结构及β-5’苯基香豆满结构。研究结果可为核桃壳木质素的高效分离和高值化利用提供理论指导。 展开更多
关键词 核桃壳 木质素 分离 酶水解 结构表征
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一种新型α-甘露糖苷酶的异源表达及酶学性质表征 预览 被引量:1
9
作者 杨帆 李鹤 +1 位作者 杨兰 李宪臻 《大连工业大学学报》 北大核心 2018年第5期320-325,共6页
从一株性能优良的黄原胶降解菌Microbacterium sp.XT11中克隆出α-甘露糖苷酶的编码基因MiMan。该基因大小为3 042 bp,编码理论分子质量为112.4 ku的蛋白质,该酶204~1 006 aa为糖苷水解酶GH38家族催化域。融合His亲和纯化标签的Mi Man... 从一株性能优良的黄原胶降解菌Microbacterium sp.XT11中克隆出α-甘露糖苷酶的编码基因MiMan。该基因大小为3 042 bp,编码理论分子质量为112.4 ku的蛋白质,该酶204~1 006 aa为糖苷水解酶GH38家族催化域。融合His亲和纯化标签的Mi Man能够在大肠杆菌中高水平可溶性表达,纯化回收率达8.96%。酶学性质分析结果表明,该酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为7.0。该酶在碱性环境具有很强的耐受力,能够耐受的最高pH达12.0。 展开更多
关键词 α-甘露糖苷酶 黄原胶修饰 酶学性质
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嗜热地芽胞杆菌(Geobacillus kaustophilus)DY115普鲁兰酶基因的克隆、表达和酶学性质 预览
10
作者 陈逍遥 董彬彬 周梅先 《生物资源》 CAS 2017年第6期434-440,共7页
采用基因工程方法对嗜热地芽胞杆菌(Geobacillus kaustophilus)DY115的普鲁兰酶基因pulA在大肠杆菌中进行了克隆表达。该基因ORF全长为2 157bp,编码718个氨基酸。重组PulA在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中能够有效表达,经... 采用基因工程方法对嗜热地芽胞杆菌(Geobacillus kaustophilus)DY115的普鲁兰酶基因pulA在大肠杆菌中进行了克隆表达。该基因ORF全长为2 157bp,编码718个氨基酸。重组PulA在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中能够有效表达,经Ni-Sepharose亲和层析获得纯化的重组PulA蛋白。PulA最适作用温度为70℃,最适pH为8.0,在65℃和碱性条件下具有良好的热稳定性;K^+和Mn^2+对PulA活性有明显促进作用,Cu^2+和Zn^2+则强烈抑制PulA活性;PulA对普鲁兰糖水解能力最强,且其水解支链淀粉和糯米淀粉的能力明显高于直链淀粉;PulA可水解普鲁兰糖的α-(1,6)糖苷键生成麦芽三糖,属于I型普鲁兰酶。这是首次对来源于地芽胞杆菌属(Geobacillus)的高温碱性普鲁兰酶进行报道,由于PulA具有较好的水解淀粉支链的能力,因此其在淀粉加工业以及洗涤业上应用前景良好。 展开更多
关键词 嗜热地芽胞杆菌 普鲁兰酶 异源表达 酶学性质
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一种新型黄原胶裂解酶的异源表达及酶学性质表征 预览
11
作者 杜元元 郭小宇 +3 位作者 李鹤 王亚芳 杨帆 李宪臻 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期175-181,共7页
黄原胶裂解酶是一种黄原胶修饰酶,对黄原胶的改性及新型黄原胶寡糖的制备具有十分重要的意义。本实验从一株性能优良的黄原胶降解菌Microbacterium sp.XT11中首次克隆出黄原胶降解酶编码基因z打。该基因编码理论分子量为122027U的蛋... 黄原胶裂解酶是一种黄原胶修饰酶,对黄原胶的改性及新型黄原胶寡糖的制备具有十分重要的意义。本实验从一株性能优良的黄原胶降解菌Microbacterium sp.XT11中首次克隆出黄原胶降解酶编码基因z打。该基因编码理论分子量为122027U的蛋白质,其N端含有一条35aa的分泌信号肽,C端含有一段392aa的碳水化合物结合域CBM。随后,在去除分泌信号肽及CBM的截短酶的N端融合了谷胱甘肽巯基转移酶亲和纯化标签(GST),所形成的融合蛋白XLY—GST能够在大肠杆菌BL21(DE3)中高水平可溶表达。纯化的XLY—GST表现出与天然黄原胶裂解酶一致的酶学性质,其最适作用温度为40℃,最适pH为6.0,对碱性环境具有一定的耐受力(最高耐受pH10.5)。Ca^2+和Mn^2+对该裂解酶有显著地激活作用,而Cu^2+则对该酶有一定的抑制作用。XLY—GST对黄原胶侧链的乙酰基和丙酮酸基团修饰程度表现出较高的特异性。本实验所取得的研究结果对黄原胶裂解酶的制备及黄原胶侧链修饰的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 黄原胶裂解酶 黄原胶修饰 酶学性质
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耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析 预览 被引量:1
12
作者 廖思明 孙靓 +6 位作者 王青艳 申乃坤 朱婧 黄桂媛 黄纪民 陈东 黄日波 《广西科学》 CAS 2017年第1期92-99,共8页
【目的】筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征。【方法】以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3。根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进... 【目的】筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征。【方法】以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3。根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进行PCR扩增,然后对目标序列进行步移扩增,获得淀粉酶基因AmyGX。将AmyGX与表达载体pQE30连接,导入大肠杆菌M15中表达,对重组酶进行分离纯化和酶学性质分析。【结果】AmyGX基因长1 515 bp,编码505个氨基酸残基,前23个氨基酸残基为信号肽序列;重组质粒pQE30-AmyGX编码的蛋白分子量为58.04kDa,对可溶性淀粉催化水解反应的最适温度为60℃,最适pH值为8.0,Vmax、Km值分别为0.19U/mg、3.14mg/mL,热半失活温度T5030值为65.2℃;Zn2+、Cu2+、Co2+、Fe3+、Ba2+对该酶具有明显的抑制作用,Na+、K+对该酶有激活作用,Mg2+、Ca2+的影响则不明显。【结论】AmyGX是一种中等耐温碱性酶,在造纸、洗涤剂生产和有毒废弃物去除等方面具有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 ANOXYBACILLUS sp.GXS-3菌株 重组淀粉酶 AmyGX 克隆与表达 酶学性质
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黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定 预览 被引量:3
13
作者 张帅 曹庸 +1 位作者 梁晓莹 林婉如 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期142-146,共5页
采用中空纤维膜超滤和葡聚糖凝胶层析相结合的方法对黑曲霉N5-5单宁酶进行纯化,然后对纯酶性质进行测定。结果显示,黑曲霉N5-5单宁酶用该方法纯化后,可纯化近20倍,酶活力可回收23.30%。对纯酶作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳... 采用中空纤维膜超滤和葡聚糖凝胶层析相结合的方法对黑曲霉N5-5单宁酶进行纯化,然后对纯酶性质进行测定。结果显示,黑曲霉N5-5单宁酶用该方法纯化后,可纯化近20倍,酶活力可回收23.30%。对纯酶作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可知黑曲霉N5-5单宁酶为分子质量64.2kD的单肽链蛋白。纯酶的酶促反应最适温度为45℃,且在25~45℃范围内热稳定性良好;酶促反应最适pH值为5.0,且在pH5.0~5.5范围内酸碱稳定性良好。另外,反应动力学测定结果表明,该酶对底物没食子酸丙酯的米氏常数Km为0.916mmol/L,最大反应速率vmax为0.877mmol/(L?min)。 展开更多
关键词 单宁酶 黑曲霉 纯化 纯酶 性质测定
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1株耐高温酸性脂肪酶产生菌的筛选鉴定与其酶学特性研究 预览
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作者 张月月 汪燕 +2 位作者 彭青春 羊秀美 马振刚 《食品与发酵工业》 CSCD 北大核心 2017年第10期96-101,共6页
以菜籽油为唯一碳源,经过富集、驯化、平板分离初筛和复筛,从长期淤积油污的食堂下水道中筛选获得1株脂肪酶产生菌CQNU 3-3。利用16S r DNA序列系统发育分析,结合形态学与生理生化特征确定CQNU 3-3为代尔夫特菌,并将其命名为Delftia tsu... 以菜籽油为唯一碳源,经过富集、驯化、平板分离初筛和复筛,从长期淤积油污的食堂下水道中筛选获得1株脂肪酶产生菌CQNU 3-3。利用16S r DNA序列系统发育分析,结合形态学与生理生化特征确定CQNU 3-3为代尔夫特菌,并将其命名为Delftia tsuruhatensis strain CQNU 3-3。研究发酵条件对菌株产酶的影响发现,该菌株在初始pH为2的酸性条件下,发酵酶活力最高;发酵第1天酶活力即可达到最大,发酵温度为32~37℃较为适宜。对其产生脂肪酶的酶学特性进行分析,表明该酶最适反应pH为7.0,最适反应温度为50℃,Cu~(2+)、尿素、Mg~(2+)和Na+对酶活力有显著的抑制作用,而Zn~(2+)和EDTA可以显著提高酶活力。油脂降解率实验表明该菌株对样品中油脂的降解率可高达73.54%。 展开更多
关键词 脂肪酶产生菌 筛选鉴定 耐高温酸性脂肪酶 酶学性质 代尔夫特菌
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Paraconiothyium variable GHJ-4木质素降解酶的酶学性质 预览 被引量:1
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作者 王凤娟 李伟庆 +3 位作者 牟志美 王彦文 刘庆信 高绘菊 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第1期94-100,共7页
【目的】研究木质素降解子囊菌Paraconiothyrium variabile GHJ-4分泌的漆酶(laccase)、锰过氧化物酶(MnP)和木质素过氧化物酶(LiP)3种木质素降解酶的酶活性变化规律及其酶学性质,为利用该菌株进行木质素降解酶的工业化生产和应... 【目的】研究木质素降解子囊菌Paraconiothyrium variabile GHJ-4分泌的漆酶(laccase)、锰过氧化物酶(MnP)和木质素过氧化物酶(LiP)3种木质素降解酶的酶活性变化规律及其酶学性质,为利用该菌株进行木质素降解酶的工业化生产和应用提供依据。【方法】分别以愈创木酚、2,6-二甲基苯酚和黎芦醇为底物测定laccase,MnP和LiP的酶活性,研究3种酶的最适反应温度和pH、温度和pH稳定性及金属离子对其活性的影响。【结果】GHJ-4菌株发酵18,15和21天后,分别获得laccase,MnP和LiP最高酶活为1 390.3,30.3和52.5 U·mL^-1。laccase的最适反应温度为55℃左右,最适反应pH为5.5左右,在55℃以下、pH 4.0-7.0的范围内较为稳定;MnP的最适反应温度为60℃左右,最适反应pH为5.0左右,在55℃以下、pH 4.0-9.0的范围内较为稳定;LiP的最适反应温度为40℃左右,最适反应pH为3.0左右,在40℃以下、pH 2.0-4.0的范围内较为稳定。Mg^2+,Zn^2+,Cu^2+,K^+对laccase起促进作用,Na^+和Zn^2+对LiP起促进作用,Mn^2+对MnP起激活作用,而Fe^3+,Ca^2+,Pb^2+,Co^2+,Al^3+对3种酶均起抑制作用,其中尤以5 mmol·L^-1Fe^3+对3种酶的抑制作用最强。【结论】温度、pH及金属离子对Paraconiothyrium variabile GHJ-4 3种木质素降解酶的酶学特性均有着不同程度的影响。 展开更多
关键词 Paraconiothyrium variabile GHJ-4 漆酶 锰过氧化物酶 木质素过氧化物酶 酶学性质
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褐藻胶裂解酶基因的克隆表达及重组酶酶学性质 被引量:6
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作者 韩伟 林娟 +2 位作者 谢勇 徐凡 叶秀云 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2017年第5期1074-1080,共7页
【目的】克隆交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)BYS-2的褐藻胶裂解酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源表达,对分离纯化的重组酶进行酶学性质研究。【方法】以交替假单胞菌BYS-2菌株基因组DNA为模板,克隆得到褐藻胶裂解酶基因alg738... 【目的】克隆交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)BYS-2的褐藻胶裂解酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源表达,对分离纯化的重组酶进行酶学性质研究。【方法】以交替假单胞菌BYS-2菌株基因组DNA为模板,克隆得到褐藻胶裂解酶基因alg738,构建重组基因工程菌BL21(DE3)/p ET22b-alg738,诱导表达,表达产物通过Ni-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究。【结果】重组酶的最适反应p H为8.0,在p H 6.0-9.0范围内37°C保温1 h仍能保持84%以上的相对酶活力,具有较好的p H稳定性;最适反应温度为45°C,热稳定性实验显示在37°C下保温60 min其残余酶活力仍达66.6%;在5 mmol/L浓度下,Na∽+、Mg∽(2+)、Mn∽(2+)对该酶具有明显的促进作用,Ni∽(2+)、Co∽(2+)、Cu∽(2+)、Hg∽(2+)、Zn∽(2+)、EDTA、β-巯基乙醇、SDS具有明显的抑制作用。动力学参数Km、Vmax分别为1.11 g/L和0.011 g/(L·min),底物特异性分析表明该重组酶为偏好聚甘露糖醛酸钠(Poly M)裂解作用的双功能酶。【结论】重组褐藻胶裂解酶具有良好的酶学特性,为褐藻胶裂解酶的开发应用打下基础。 展开更多
关键词 褐藻胶裂解酶 交替假单胞菌 克隆表达 重组酶 酶学性质
解糖热纤维菌木糖苷酶的分离纯化及其酶学性质 预览 被引量:3
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作者 王月皎 夏乾竣 +3 位作者 周佩 张瑜 王飞 李迅 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第3期1041-1046,共6页
通过生物信息学分析,确定厌氧孢子菌Caldicellulosiruptor saccharolyticus编码的木糖苷酶(XYL39B)属于糖苷水解酶第2家族,是极端耐热的水解低聚木糖为木糖的关键酶。将XYL39B基因(xyl39B)导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过热处... 通过生物信息学分析,确定厌氧孢子菌Caldicellulosiruptor saccharolyticus编码的木糖苷酶(XYL39B)属于糖苷水解酶第2家族,是极端耐热的水解低聚木糖为木糖的关键酶。将XYL39B基因(xyl39B)导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过热处理和镍柱亲和层析获得纯酶。对纯化的重组XYL39B进行酶学性质的表征,结果表明该酶的最适反应温度为70℃,最适反应p H为6.0。在p H 6.0,70℃条件下保温2h后残留相对酶活仍达90%以上,在55-75℃范围内酶活较高且比较稳定。Zn2+、Cu2+、SDS对酶活力的抑制作用较明显,其他金属离子和化学试剂对该酶的酶活力影响不显著。在以4-对硝基苯酚-β-D-木糖苷(p NPX)为底物,该酶的表观活化能为14.52k J/mol,其Km值为11.47mmol/L,Vmax为29.4U/g,Kcat为20.60s–1,木糖对其反馈抑制较弱(抑制常数Ki为306.87mmol/L),综上结果显示该酶是活性较高且抑耐木糖抑制的细菌源极端耐热木糖苷酶。研究结果为其后续的基因改造和实际应用奠定理论基础。 展开更多
关键词 极端耐热 Β-木糖苷酶 解糖热纤维菌 亲和层析 酶学性质
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海参肠组织蛋白酶D的提取及酶学特性研究 预览
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作者 郭晓坤 李傲婷 +5 位作者 韩佳润 杜椅楠 郭天民 于翠平 唐越 吴海涛 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2017年第18期135-139,144共6页
本研究以海参肠为原料,采用p H3.0 50 mmol/L甘氨酸-盐酸缓冲体系,按1∶6(w/v)的料液比,在4℃浸提1 h,获得海参肠组织蛋白酶D的粗酶液。以酸变性牛血红蛋白为底物,进行酶活测定,并研究了该酶的酶学性质。结果表明,海参肠组织蛋白酶D... 本研究以海参肠为原料,采用p H3.0 50 mmol/L甘氨酸-盐酸缓冲体系,按1∶6(w/v)的料液比,在4℃浸提1 h,获得海参肠组织蛋白酶D的粗酶液。以酸变性牛血红蛋白为底物,进行酶活测定,并研究了该酶的酶学性质。结果表明,海参肠组织蛋白酶D粗酶的最适p H为3.0,在p H3.0~7.0之间稳定性较好;最适反应温度为50℃,在4~40℃具有较高稳定性。5 mmol/L的金属离子Mg~(2+)、Ca~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)、Cd~(2+)和K~+对该酶有激活作用,而Fe~(3+)和Fe~(2+)则对其有抑制作用。天冬氨酸蛋白酶抑制剂Pepstatin A对该酶活性有较强的抑制作用。上述结果说明,在本研究条件下提取获得的海参肠组织蛋白酶D粗酶是一种酸性蛋白酶,其组成以天冬氨酸蛋白酶为主。 展开更多
关键词 海参肠 组织蛋白酶D 提取 酶学特性
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酶抑制剂镰孢菌酸的合成工艺 预览
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作者 周石洋 陈玲 杨善彬 《沈阳大学学报:自然科学版》 CAS 2017年第2期99-102,共4页
以2-甲基吡啶为起始原料,经氧化、酯化、烷基化和水解等反应步骤,合成目标产物镰孢菌酸.实验重点研究了烷基化反应过程,并对该反应条件进行了优化.目标产物及中间产物结构经~1H NMR、~(13)C NMR、MS和元素分析法进行表征.
关键词 酶抑制剂 镰孢菌酸 优化 合成工艺
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酶凝固天然橡胶硫化特性及力学性能的研究 预览 被引量:1
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作者 刘彦妮 刘宏超 +3 位作者 王启方 王永周 程原 余和平 《科学技术与工程》 北大核心 2016年第31期66-70,共5页
采用溶菌酶和碱性蛋白酶凝固天然胶乳,考察了凝固方法对天然橡胶硫化特性、力学性能等的影响。结果表明,溶菌酶和碱性蛋白酶均能使新鲜天然胶乳顺利凝固;采用溶菌酶凝固新鲜天然胶乳,得到的天然橡胶蛋白质含量较高,硫化速率较慢,硫化胶... 采用溶菌酶和碱性蛋白酶凝固天然胶乳,考察了凝固方法对天然橡胶硫化特性、力学性能等的影响。结果表明,溶菌酶和碱性蛋白酶均能使新鲜天然胶乳顺利凝固;采用溶菌酶凝固新鲜天然胶乳,得到的天然橡胶蛋白质含量较高,硫化速率较慢,硫化胶具有较高的交联密度和力学性能,以及较高的玻璃化转变温度和压缩生热;而采用碱性蛋白酶处理新鲜胶乳,部分蛋白质被水解,导致天然橡胶中蛋白质含量下降,硫化速率加快,硫化胶具有较低的交联密度和力学性能。 展开更多
关键词 酶凝固 天然橡胶 硫化特性 力学性能
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