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产肠毒素大肠杆菌感染IPEC-J2细胞后IL-17细胞因子表达变化及其功能初探 预览 被引量:1
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作者 罗雨 许佳 +4 位作者 张超颖 蒋春燕 何海健 余建国 章红兵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期830-839,共10页
产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)是引起新生和断奶仔猪腹泻(post-weaningdiarrhea,PWD)的最重要的病原之一。ETEC进入肠道后与肠上皮细胞的相互作用既是该细菌致病的前提条件,也是激发宿主免疫反应的基础。本研究旨在分... 产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)是引起新生和断奶仔猪腹泻(post-weaningdiarrhea,PWD)的最重要的病原之一。ETEC进入肠道后与肠上皮细胞的相互作用既是该细菌致病的前提条件,也是激发宿主免疫反应的基础。本研究旨在分析ETEC感染猪肠上皮细胞后IL^-17细胞因子表达变化,同时探索细胞因子在抵抗ETEC感染中的免疫防御机制。本研究采用猪肠上皮细胞系IPEC-J2和产肠毒素大肠杆菌标准株(C83901)为主要研究材料,通过RT-PCR、ELISA、免疫荧光及免疫印迹的方法分析了IL^-17细胞因子及肠黏膜免疫防御相关基因在感染前后的变化。同时,进一步研究了IPEC-J2细胞中相关IL^-17细胞因子刺激对肠黏膜防御相关基因的调控作用。结果表明,除IL^-17D未检测到外,C83901能促进所有IL^-17细胞因子mRNA的转录,尤其能显著上调IL^-17A、IL^-17C在基因和蛋白水平的表达。ETEC感染或者体外添加IL^-17A/IL^-17C有利于IPEC-J2细胞中黏蛋白(mucin-2)、紧密连接蛋白(claudin-1、claudin-2)及防御素pBD-2的表达。结果提示,ETEC感染后,肠上皮细胞通过调节IL^-17细胞因子的表达进而增强肠黏膜屏障功能以抵抗该细菌的入侵。 展开更多
关键词 IL-17 产肠毒素大肠杆菌 肠上皮细胞 先天免疫 宿主防御
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上海临港地区猪源ETEC毒力因子及耐药性调查 预览 被引量:1
2
作者 邢涛 郁星星 +5 位作者 朱爱军 张红飞 周光胜 张敏 王海根 李金贵 《中国动物传染病学报》 北大核心 2018年第1期55-59,共5页
为了解上海市畜源产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)的携带情况和耐药性本底数据,对上海市临港区域内致仔猪腹泻病原进行多重PCR鉴定以及药物敏感试验。结果显示,从上海市临港地区不同猪场240份样品中分离得到3株ETEC,... 为了解上海市畜源产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)的携带情况和耐药性本底数据,对上海市临港区域内致仔猪腹泻病原进行多重PCR鉴定以及药物敏感试验。结果显示,从上海市临港地区不同猪场240份样品中分离得到3株ETEC,检出率为1.25%。PCR结果表明成功分离到2株ST2型ETEC,1株LT1+ST2型ETEC,且其菌毛基因型均为F18ac。耐药性分析表明,这3株细菌均对羧苄青霉素敏感,对呋喃妥因、左氧氟沙星中度敏感,对庆大霉素、四环素耐药,对氨苄西林、恩诺沙星、多黏菌素B因菌株不同存在差异。结果表明上海市临港地区猪群中确实存在高耐药性ETEC,建议加强对ETEC的监控。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 毒力因子 耐药性 腹泻 仔猪
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乳酸杆菌S-层蛋白对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞的协同作用 预览 被引量:1
3
作者 李鹏成 杨倩 侯继波 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期共5页
设计3种黏附试验分别研究了嗜酸乳酸杆菌和S-层蛋白对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞的影响.结果显示:在置换试验中,嗜酸乳酸杆菌及S-层蛋白对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞没有影响;但在排斥试验和竞争试验中,嗜酸乳酸杆菌及S-层蛋... 设计3种黏附试验分别研究了嗜酸乳酸杆菌和S-层蛋白对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞的影响.结果显示:在置换试验中,嗜酸乳酸杆菌及S-层蛋白对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞没有影响;但在排斥试验和竞争试验中,嗜酸乳酸杆菌及S-层蛋白均对产肠毒素大肠杆菌黏附Caco-2细胞产生明显的协同作用,在排斥试验中嗜酸乳酸杆菌及S-层蛋白分别增加产肠毒素大肠杆菌的黏附数量 95.23%±4.22%(P<0.01)和 352.30%±2.26%(P<0.01),在竞争试验中分别增加 389.06%±3.35%(P<0.01)和 55.57%±5.81%(P<0.05);并且S-层蛋白在排斥试验中,对产肠毒素大肠杆菌的协同黏附作用大于竞争试验中的协同黏附作用.可见,乳酸杆菌对产肠毒素大肠杆菌的协同黏附作用关键在于S-层蛋白,S-层蛋白可能起到'连接桥'的作用. 展开更多
关键词 嗜酸乳酸杆菌 S-层蛋白 产肠毒素大肠杆菌 CACO-2细胞 协同作用
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产肠毒素性大肠杆菌菌毛的研究进展 预览 被引量:1
4
作者 张培晏 刘峻 《四川畜牧兽医》 2016年第1期32-34,共3页
产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)常引起仔猪腹泻,在世界范围内造成了严重的经济损失。ETEC的致病作用与其具有粘附性菌毛和肠毒素密切相关,ETEC菌株的菌毛可与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结合,并在局部组织定居、繁殖和产生毒素,损... 产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)常引起仔猪腹泻,在世界范围内造成了严重的经济损失。ETEC的致病作用与其具有粘附性菌毛和肠毒素密切相关,ETEC菌株的菌毛可与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结合,并在局部组织定居、繁殖和产生毒素,损伤小肠黏膜,使小肠吸收分泌功能失常而致腹泻。本文针对ETEC菌毛的生物学特性、表达条件、免疫原性等方面作一概述。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 菌毛 生物学特性 免疫原性
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大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立 预览 被引量:5
5
作者 孟相秋 袁超文 +6 位作者 刘文鑫 关玮琨 杜元策 李丹丹 赵姝静 唐杰 师东方 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期6-10,共5页
目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia ... 目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(elt-Ⅰ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法。结果用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229bp)、estB(480bp)、elt-Ⅰ(605bp)和elt-Ⅱ(300bp)基因片段,最低检出量分别为2.55×10^1 CFU/μL、2×10^1 CFU/μL、2×10^1 CFU/μL和2.47×10^3 CFU/μL。从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致。结论建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 耐热肠毒素 不耐热肠毒素 多重PCR
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猪源产肠毒素大肠杆菌eltA、flhD、fimA、faeG基因启动子的预测、克隆和鉴定 被引量:2
6
作者 胡会杰 周明旭 +3 位作者 许绵 张琪 羊扬 朱国强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1640-1645,共6页
猪源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原菌之一,其致病机制与染色体上特定的毒力岛以及毒力质粒上的某些毒力基因相关。基于对ETEC毒力因子的前期研究,本研究初步预测并鉴定了eltA基因(编码LT毒素A亚单位)、flhD基因... 猪源产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原菌之一,其致病机制与染色体上特定的毒力岛以及毒力质粒上的某些毒力基因相关。基于对ETEC毒力因子的前期研究,本研究初步预测并鉴定了eltA基因(编码LT毒素A亚单位)、flhD基因(编码鞭毛系统一级调控子)、fimA基因(编码I型菌毛主要结构亚基)和faeG基因(编码K88菌毛主要结构亚基)的启动子位置。通过构建含eltA、flhD、fimA、faeG基因启动子的LacZ报告质粒,利用β-半乳糖苷酶试验检测其活性,为进一步定位启动子、确定启动子序列,探索猪源ETEC毒力调控关系,了解细菌感染过程中各毒力因子的表达规律奠定试验基础。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 K88 启动子 LacZ报告质粒
改良分子信标多重荧光PCR快速检测产毒性大肠杆菌 被引量:1
7
作者 吴海娟 谢淑娴 +6 位作者 刘萍 李善清 温海辉 王春香 许丽娜 吴泽宏 张文花 《中国热带医学》 CAS 2015年第7期785-788,共4页
目的应用改良分子信标探针建立多重实时荧光PCR方法快速检测产毒性大肠杆菌。方法通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)下载产毒性大肠杆菌肠毒素基因Stp、Sth、Lt的基因序列,设计引物和探针,建立多重实时荧光PCR体系,应用于感染性腹... 目的应用改良分子信标探针建立多重实时荧光PCR方法快速检测产毒性大肠杆菌。方法通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)下载产毒性大肠杆菌肠毒素基因Stp、Sth、Lt的基因序列,设计引物和探针,建立多重实时荧光PCR体系,应用于感染性腹泻病原体中ETEC的快速筛查。结果改良分子信标多重荧光PCR反应体系,1管内同时检测ETEC的Stp、Sth、Lt三个毒素基因的方法具有简单、快速、省时、灵敏度高的特点,从核酸提取到检测结果仅需3h,最低检出限可达3×10^2CFU/m L,稳定性良好,且无交叉反应,与普通PCR相比,灵敏度和特异度分别为100%和99.92%,kappa值为0.87,一致性良好。结论本研究建立了一种用于检测产毒性大肠杆菌的方法,具有简便、快速和高效的特点,适合用于ETEC的临床诊断。 展开更多
关键词 产毒性大肠杆菌 多重荧光PCR 改良分子信标
一株宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的进化分析 预览 被引量:3
8
作者 周艳 包红朵 +2 位作者 张辉 张莉莉 王冉 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第6期71-76,共6页
裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大... 裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌。扩增分析gene18、gene 23序列,并根据gp18和gp23氨基酸序列构建系统进化树,分析JS09的遗传进化关系。结果表明噬菌体v B_Eco M_JS09基因组为ds DNA,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、T4-like噬菌体、T-evens亚群。其gp18氨基酸序列与大肠杆菌噬菌体RB69同源性最高,为100%;gp23氨基酸序列与大肠杆菌T4噬菌体同源性最高为96%。该结果为禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌的防控提供了生物学基础。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 产肠毒素大肠杆菌 宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体 T4-like噬菌体 进化分析
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产肠毒素大肠埃希菌 K99菌毛基因的克隆与原核表达 预览 被引量:8
9
作者 姜宣鹏 张焕容 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期12-16,共5页
本试验采用产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)K99菌毛基因完整编码框的特异性引物,以牛源大肠埃希菌 C83912基因组 DNA 为模板,扩增出大小为498 bp 的 ETEC K99菌毛基因完整编码框,克隆至pMD19-T 载体,阳性重组质粒 pMD19-T-K99经 PCR、... 本试验采用产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)K99菌毛基因完整编码框的特异性引物,以牛源大肠埃希菌 C83912基因组 DNA 为模板,扩增出大小为498 bp 的 ETEC K99菌毛基因完整编码框,克隆至pMD19-T 载体,阳性重组质粒 pMD19-T-K99经 PCR、双酶切鉴定和测序正确后,双酶切产物与 pET-32a (+)载体连接,构建原核表达载体 pET-32a(+)-K99,转化原核表达工程菌 BL21(DE3),阳性转化子经IPTG 诱导获高效表达,Western blot 证明原核表达的 K99重组蛋白能与 K99单因子血清发生特异性反应,重组蛋白免疫家兔后可产生特异性抗体,证明重组蛋白具有良好的抗原性。ETEC K99原核表达质粒的构建和表达产物抗原性研究,为进一步研究 K99亚单位疫苗以及制备 K99特异性抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠埃希菌 K99 菌毛 克隆 原核表达 抗原性
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猪产肠毒素大肠杆菌多重PCR快速检测试剂盒的研制及应用 预览
10
作者 程福亮 陈甜甜 +4 位作者 姜艳萍 聂兆晶 刘洋庆 夏晓飞 谷巍 《畜禽业》 2013年第11期12-15,共4页
为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌LT、STl、ST2保守基因序列分别设计合成了l对引物.建立了快速检测产肠毒素大肠杆菌的多重PCR方法,并对反应条件进行优化,组装成快速检测试剂盒。... 为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌LT、STl、ST2保守基因序列分别设计合成了l对引物.建立了快速检测产肠毒素大肠杆菌的多重PCR方法,并对反应条件进行优化,组装成快速检测试剂盒。特异性检验表明参考菌株均可扩增出LT(282bp)或STl(183bp)或ST2(360bp)的特异性条带,而非大肠杆菌均未扩增出任何条带。检测灵敏度达66CFU,而且稳定性良好,保质期可达12个月以上。,通过对临床样品的检测,证实该试剂盒具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 多重聚合酶链式反应 试剂盒
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K88菌毛及其在仔猪断奶腹泻预防制剂开发中的应用 预览 被引量:4
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作者 张磊 李永明 +1 位作者 徐子伟 李芳 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期 879-883,共5页
K88大肠杆菌是引起仔猪断奶后腹泻(PWD)的主要病原。现有商业疫苗通过母猪免疫能有效控制新生仔猪大肠杆菌性腹泻,而对PWD却难以奏效。口服疫苗能诱导肠粘膜产生局部抗体,阻止致病性大肠杆菌的粘附,进而预防PWD。从分子水平认识K88菌... K88大肠杆菌是引起仔猪断奶后腹泻(PWD)的主要病原。现有商业疫苗通过母猪免疫能有效控制新生仔猪大肠杆菌性腹泻,而对PWD却难以奏效。口服疫苗能诱导肠粘膜产生局部抗体,阻止致病性大肠杆菌的粘附,进而预防PWD。从分子水平认识K88菌毛及其受体的生物学特性,对口服疫苗的研制具有重要意义。文章概述国内外关于K88菌毛基本特性、蛋白亚基及受体的研究,就K88菌毛在PWD预防制剂研发中的应用的进展作了综述,并探讨分析了口服基因工程细菌疫苗和植物疫苗的前景。 展开更多
关键词 断奶后腹泻 肠毒性大肠杆菌 K88 菌毛
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LAMP技术快速检测产肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素 被引量:2
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作者 占利 叶菊莲 +3 位作者 罗芸 程苏云 梅玲玲 杨婷婷 《中国卫生检验杂志》 2009年第11期2572-2574,共3页
目的:建立环介导恒温扩增快速检测肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素的方法。方法:采用环介导恒温扩增反应(LAMP)技术扩增肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素特异性基因,优化反应条件,并与传统PCR比较。结果:与传统的PCR技术相比,LAMP法更... 目的:建立环介导恒温扩增快速检测肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素的方法。方法:采用环介导恒温扩增反应(LAMP)技术扩增肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素特异性基因,优化反应条件,并与传统PCR比较。结果:与传统的PCR技术相比,LAMP法更加简便快速,且在等温条件下进行,具有更高的灵敏性及特异性。结论:该方法灵敏度高,特异性强,操作简便快速,不需要复杂仪器设备,为检测产肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素提供了一个快速简便的新方法。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠埃希菌 环介导恒温扩增技术(LAMP) 不耐热肠毒素(LT)
猪源大肠杆菌(ETEC、STEC、AEEC)毒力基因及其与O抗原型的关系 预览 被引量:24
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作者 陈祥 赵李祥 +3 位作者 高崧 苗晓青 焦新安 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期 857-862,共6页
【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定,毒力基因采用PCR方法检测。【结果】通过对这30... 【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定,毒力基因采用PCR方法检测。【结果】通过对这300个分离株的O血清型及其毒素、紧密素和黏附素基因进行鉴定,结果显示除50株未定型、17株自凝外,测定出233个分离株的血清型,这些分离株覆盖了45个血清型,其中以O149、O107、O139、O93和O91为主,共133株,占定型菌株的57.1%;拥有estⅠ、estⅡ、elt、stx2e和eaeA基因的菌株分别为102(34.0%)、190(63.3%)、81(27.0%)、57(19.0%)和54(18.0%)株;分离株中有51株K88基因阳性(其中菌毛表达率为100%),75株F18基因阳性(其中菌毛表达率为50.7%),在K88菌株中,O149血清型与estI或estⅡ+elt密切相关,在F18菌株中,O107血清型与estⅠ或estⅡ、O139血清型与stx2e紧密相关。依其毒力特征可将这些分离株分为以下6种类型:ETEC、STEC、AEEC、ETEC/STEC、AEEC/ETEC和AEEC/ETEC/STEC,分别拥有190、24、36、32、17和1个菌株,占分离株的63.3%、8.0%、12.0%、10.7%、5.7%和0.3%。通过分析这些分离株的O血清型、毒素类型和黏附素型之间的相关性:猪源ETEC以O149、O107、O93和O98等血清型为主,O149:K88菌株主要与estⅡ或estⅡ+elt肠毒素相关,O107:F18菌株主要与estⅡ相关,O93和O98血清型菌株主要与estⅡ肠毒素相关;STEC菌株以O139:F18血清型为主,拥有stx2e;AEEC菌株拥有紧密素,无明显优势血清型;ETEC/STEC菌株以O107:F18和O116:F18血清型为主,主要与estⅠ+stx2e或estⅡ+stx2e密切相关,ETEC/AEEC菌株以O91和O107血清型为主,全部拥有肠毒素estⅠ和紧密素基因。【结论】我国至少存在6种病原型的猪肠道致病性大 展开更多
关键词 仔猪 大肠杆菌 血清型 毒力基因 产肠毒素大肠杆菌 产志贺毒素大肠杆菌 黏附与脱落性大肠杆菌
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K88菌毛基因的克隆及ST表位序列在菌毛基因上的融合 预览 被引量:1
14
作者 胡建军 陈创夫 祝建波 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第21期 8949-8951,共3页
[目的]为了建立用于细胞表面展示的载体系统。[方法]利用PCR技术,以大肠杆菌质粒为模板扩增K88菌毛操纵子的结构基因faeC~faeH,并克隆到pBR322质粒载体中。合成一段替换序列,在菌毛抗原基因的超变区引入酶切位点ApaI和NcoI,合成耐热肠... [目的]为了建立用于细胞表面展示的载体系统。[方法]利用PCR技术,以大肠杆菌质粒为模板扩增K88菌毛操纵子的结构基因faeC~faeH,并克隆到pBR322质粒载体中。合成一段替换序列,在菌毛抗原基因的超变区引入酶切位点ApaI和NcoI,合成耐热肠度素STII表位编码序列,并引入菌毛抗原基因的超变区。[结果]经PCR鉴定和限制性内切酶酶切证明,重组质粒pBR-fae插入片断大小为6.6kb,与预期相符。核苷酸序列分析证明,所得faeC~faeH序列正确。PCR筛选和测序验证证明,构建了K88菌毛-耐热肠度素STII的融合基因。[结论]试验成功获得了重组质粒pBR-fae-ST。 展开更多
关键词 肠毒素大肠杆菌 K88菌毛 ST表位表位
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河北省仔猪黄白痢流行病学调查及致病菌的分离与鉴定 预览 被引量:3
15
作者 宋杰 柏佳宁 赵宝华 《河北师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2007年第4期 522-526,共5页
仔猪黄白痢是危害养猪业的一种常见疾病.通过对河北省不同地区17家猪场的走访调查,探讨仔猪黄白痢大规模爆发的原因和防治对策,并从某猪场发病仔猪的排泄物中分离得到1株菌,经形态学、生物化学和分子生物学实验鉴定,该分离株为革兰氏阴... 仔猪黄白痢是危害养猪业的一种常见疾病.通过对河北省不同地区17家猪场的走访调查,探讨仔猪黄白痢大规模爆发的原因和防治对策,并从某猪场发病仔猪的排泄物中分离得到1株菌,经形态学、生物化学和分子生物学实验鉴定,该分离株为革兰氏阴性菌,克氏三糖铁培养产酸产气,LTB与M17873核苷酸序列同源性为100%,该菌株确定为产肠毒素型大肠杆菌. 展开更多
关键词 仔猪黄白痢 产肠毒素型大肠埃希氏菌 伤亡率 LTB基因 同源性
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O型口蹄疫病毒VP1T细胞、B细胞表位双拷贝基因与大肠杆菌LTB基因融合表达产物的免疫应答 预览 被引量:4
16
作者 庄娟 尤永进 +2 位作者 陈波 饶忠 潘洁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第33期 10622-10623,10631,共3页
[目的]为预防口蹄疫与幼畜腹泻、生产安全高效的基因工程联合疫苗提供试验依据。[方法]通过基因工程技术,把O型口蹄疫病毒VP1双拷贝21-40(20aa)与141-160(20aa)表位肽基因——2020VP1与产肠毒素大肠杆菌LTB连接到表达载体上,在大肠... [目的]为预防口蹄疫与幼畜腹泻、生产安全高效的基因工程联合疫苗提供试验依据。[方法]通过基因工程技术,把O型口蹄疫病毒VP1双拷贝21-40(20aa)与141-160(20aa)表位肽基因——2020VP1与产肠毒素大肠杆菌LTB连接到表达载体上,在大肠杆菌中表达出具有抗O型口蹄疫病毒与产肠毒素大肠杆菌双重作用的融合蛋白。[结果]运用基因工程技术构建了融合表达载体r2020-B-2020。转化宿主菌BL21(DE3)RIL后的表达产物经SDS-PAGE分析,结果显示,重组融合蛋白的分子量约为41 kD,表达量较高。动物实验表明,融合蛋白能够诱发兔体产生较强的抗FMDV中和抗体,免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明融合蛋白可以诱导机体产生有效的抗FMDV细胞及体液免疫反应。融合蛋白能够与霍乱毒素CTB抗体特异结合,免疫雌鼠能够抵抗一定强度的大肠杆菌毒株攻击。[结论]融合蛋白可以同时诱导机体产生较好的抗FMDV及ETEC免疫应答反应,具有开发成为FMDV与ETEC基因工程疫苗的应用价值。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1 细胞表位 产肠毒素大肠杆菌 LTB 免疫应答
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不同培养基对肠毒素大肠杆菌载体疫苗株免疫原性的影响 预览
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作者 郑继平 郭桂英 +2 位作者 韦双双 周海龙 张兆山 《海南大学学报:自然科学版》 2007年第2期 141-143,146,共4页
分别采用固体CFA培养基和液体LB培养基培养,全菌ELISA,口服免疫Balb/c抗体测定,评价肠毒素大肠杆菌抗原CFA/I,CS6和载体志贺氏痢疾杆菌LPS的免疫原性.结果表明:LB培养基培养不影响疫苗株抗原免疫原性.由此提示,LB培养基对肠... 分别采用固体CFA培养基和液体LB培养基培养,全菌ELISA,口服免疫Balb/c抗体测定,评价肠毒素大肠杆菌抗原CFA/I,CS6和载体志贺氏痢疾杆菌LPS的免疫原性.结果表明:LB培养基培养不影响疫苗株抗原免疫原性.由此提示,LB培养基对肠毒素大肠杆菌载体疫苗生产是行之有效的. 展开更多
关键词 肠毒素大肠杆菌 载体疫苗 培养基 免疫
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产肠毒素大肠杆菌K88-STII-LTA2/LTB融合基因在烟草中的表达 预览 被引量:4
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作者 张金波 祝建波 +1 位作者 彭晓明 陈创夫 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期 135-140,154,共7页
融合保护性抗原的LT类全毒素具有传输抗原载体和免疫佐剂两重功效。利用基因工程技术,构建了带有信号肽的Pr1as-K88ac-STII-LTA 2/UP-LTB融合基因的双价植物表达载体。双价植物表达载体通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101,并利用农杆菌... 融合保护性抗原的LT类全毒素具有传输抗原载体和免疫佐剂两重功效。利用基因工程技术,构建了带有信号肽的Pr1as-K88ac-STII-LTA 2/UP-LTB融合基因的双价植物表达载体。双价植物表达载体通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101,并利用农杆菌介导技术叶盘法转化模式植物烟草。转基因烟草经PCR和RT-PCR初步检测,证明外源基因已经整合到受体植物基因组中,同时表明融合基因在转录水平上有表达。转基因烟草的获得,为进一步研制新型的抗腹泻植物口服疫苗奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 K88-STII-LTA2/LTB 融合基因 LT类全毒素
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3种食源性致病菌的多重PCR快速检测方法的建立 预览 被引量:14
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作者 蔡亦红 姚余有 《中国卫生检验杂志》 2007年第11期 1959-1962,共4页
目的:建立快速检测食源性致病菌的多重PCR方法。方法:本研究根据肠毒性大肠埃希菌(enterotoxigenicE.coli,ETEC)的大肠杆菌不耐热毒素(Heat labileenterotoxin,LT)的B亚单位(LTB)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)的侵袭蛋白A(... 目的:建立快速检测食源性致病菌的多重PCR方法。方法:本研究根据肠毒性大肠埃希菌(enterotoxigenicE.coli,ETEC)的大肠杆菌不耐热毒素(Heat labileenterotoxin,LT)的B亚单位(LTB)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)的侵袭蛋白A(invasion protein A,invA)、福氏志贺菌(Shigella flexneri)侵袭性质粒抗原H基因(invasion plasmid antigen H,ipaH),分别设计了三对引物,预计PCR扩增的目的基因片段为194、279和435 bp。对单个基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件如引物浓度、dNTP浓度和Tm值等的优化,建立了快速检测肠毒性大肠埃希菌、伤寒沙门菌和福氏志贺菌的稳定的单管多重PCR方法。结果:该方法检测的灵敏度分别为:145 pg/ml肠毒性大肠埃希菌的基因组DNA、100 ng/ml伤寒沙门菌的基因组DNA、7 ng/ml福氏志贺菌的基因组DNA,与单基因PCR检测的灵敏度相同。并且模拟检测食品中的细菌,结果很稳定。结论:该方法操作简单、检验周期短、特异性和灵敏度高,能够快速地实现对食品中的多种致病菌的诊检和监控。 展开更多
关键词 多重PCR 食品检验 肠毒性大肠埃希菌 伤寒沙门菌 福氏志贺菌
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究 预览 被引量:4
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作者 田文标 邹全明 张卫军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 115-118,共4页
目的研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因工程菌的发酵工艺.方法先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件,并进一步对发酵工艺进行改良优化.... 目的研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因工程菌的发酵工艺.方法先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件,并进一步对发酵工艺进行改良优化.结果经试验确定了rLTB基因工程菌发酵罐培养的各项条件的最佳组合,优化后工程菌菌体产量平均可达40.5 g/L,目的蛋白的表达率平均为30.6%.结论建立了稳定、高效的工程菌发酵工艺. 展开更多
关键词 产毒素性大肠杆菌 不耐热肠毒素B亚单位 发酵
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