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文章速递固态发酵法制备罗非鱼皮胶原蛋白肽及其抗氧化活性研究 认领
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作者 邢瀚文 韩玮 +1 位作者 施文正 李晓晖 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第19期104-110,共7页
以罗非鱼鱼皮为原料,利用枯草芽孢杆菌固态发酵(solid-state fermentation,SSF)制备胶原蛋白肽。以胶原酶酶活力为评价指标,优化产酶发酵条件,并对发酵产物进行氨基酸组成分析、超滤分离及体外抗氧化活性的研究。结果表明,最佳发酵条件... 以罗非鱼鱼皮为原料,利用枯草芽孢杆菌固态发酵(solid-state fermentation,SSF)制备胶原蛋白肽。以胶原酶酶活力为评价指标,优化产酶发酵条件,并对发酵产物进行氨基酸组成分析、超滤分离及体外抗氧化活性的研究。结果表明,最佳发酵条件为培养基初始pH值为7,种子液菌龄为14 h,加水量为10 mL,发酵温度为35℃,发酵时间为24 h,在此条件下胶原酶酶活力为90.05 U/mL,水解度高达41.73%。经超滤分离得到3种不同分子质量(molecular weight,MW)范围的胶原蛋白肽组分:TSCP-a(M_W> 10 kDa)、TSCP-b(M_W5 k~10 kDa)、TSCP-c(M_W<5 kDa)。其中TSCP-c的抗氧化活性最高,其羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O_2~-)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1-diphenyl-2-picrylhydrazy,DPPH)自由基清除率的半抑制浓度(half inhhibitory concentration,IC_(50))分别为3.83、4.19和2.37 mg/mL。该新型制备工艺简单高效,为罗非鱼皮的深入开发利用和胶原蛋白肽的生物技术生产途径提供了理论指导。 展开更多
关键词 罗非鱼皮 固态发酵 胶原蛋白肽 胶原酶 抗氧化
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HL60-IL6法在注射用胶原酶和尿激酶热原检测中的应用研究 认领
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作者 王灿 王鸣人 +2 位作者 郑璐侠 邵泓 陈钢 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期455-459,共5页
目的探讨HL60-IL6单核细胞活化反应法在注射用胶原酶和尿激酶热原检测中的应用。方法参照中国药典2015年版通则1193,确定注射用胶原酶和尿激酶最小有效稀释浓度。通过细胞增殖抑制试验、热原干扰试验和白介素-6(interleukin-6,IL-6)干... 目的探讨HL60-IL6单核细胞活化反应法在注射用胶原酶和尿激酶热原检测中的应用。方法参照中国药典2015年版通则1193,确定注射用胶原酶和尿激酶最小有效稀释浓度。通过细胞增殖抑制试验、热原干扰试验和白介素-6(interleukin-6,IL-6)干扰试验探讨对HL60细胞生长,对热原和IL-6测定无影响的供试品浓度,进而确定适用于注射用胶原酶和尿激酶体外热原测定的HL60-IL6方法。用该方法对2批注射用胶原酶、19批注射用尿激酶供试品进行热原测定。结果注射用胶原酶最小有效稀释浓度为0.04U·mL^-1,当浓度≤60U·mL^-1时对HL60细胞生长无影响,浓度≤6 U·mL^-1时对IL-6和热原测定无影响。注射用尿激酶最小有效稀释浓度为100 U·mL^-1,当浓度≤1 000 U·mL^-1时对HL60细胞生长无影响,浓度≤500U·mL^-1时对IL-6和热原测定无影响。因此,适合HL60-IL6单核细胞活化反应法的注射用胶原酶和尿激酶浓度分别为6,500U·mL^-1。用该方法对供试品进行热原测定,结果均未检出热原。结论 HL60-IL6方法适用于注射用胶原酶和尿激酶热原测定。 展开更多
关键词 HL60-IL6单核细胞活化反应法 胶原酶 尿激酶
Modern treatment strategies for penile prosthetics in Peyronie’s disease:a contemporary clinical review 认领
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作者 Matthew J Ziegelmann M Ryan Farrell Laurence A Levine 《亚洲男性学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2020年第1期51-59,共9页
Peyronie's disease is a common condition resulting in penile deformity,psychological bother,and sexual dysfunction.Erectile dysfunction is one common comorbid condition seen in men with Peyronie’s disease,and its... Peyronie's disease is a common condition resulting in penile deformity,psychological bother,and sexual dysfunction.Erectile dysfunction is one common comorbid condition seen in men with Peyronie’s disease,and its presence significantly impacts treatment considerations.In a man with Peyronie's disease and significant erectile dysfunction who desires the most reliable treatment,penile prosthesis placement should be strongly considered.In some instances,such as those patients with relatively mild curvature,prosthesis placement alone may result in adequate straightening.However,many patients will require additional straightening maneuvers such as manual modeling,penile plication,and tunica albuginea incision with or without grafting.For patients with severe penile shortening,penile length restoration techniques may also be considered.Herein,we provide a comprehensive clinical review of penile prosthesis placement in men with Peyronie's disease.Specifically,we discuss preoperative indications,intraoperative considerations,adjunctive straightening maneuvers,and postoperative outcomes. 展开更多
关键词 COLLAGENASE GRAFTING PENILE length PENILE PROSTHESIS Peyronie's
蜡样芽孢杆菌胶原蛋白酶基因的异源表达与活性分析 认领
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作者 刘丽莉 杨陈柳 +2 位作者 尤晓颜 李玉 梁严予 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期69-75,共7页
研究采用降解骨胶原蛋白的蜡样芽孢杆菌MBL13-U作为原菌种,并对蜡样芽孢杆菌MBL13-U进行全基因组测序,克隆获得胶原蛋白酶(ColM13)基因。将目的基因与大肠杆菌的表达载体pET30a进行连接,转入大肠杆菌宿主菌株BL21,获得降解骨胶原蛋白的... 研究采用降解骨胶原蛋白的蜡样芽孢杆菌MBL13-U作为原菌种,并对蜡样芽孢杆菌MBL13-U进行全基因组测序,克隆获得胶原蛋白酶(ColM13)基因。将目的基因与大肠杆菌的表达载体pET30a进行连接,转入大肠杆菌宿主菌株BL21,获得降解骨胶原蛋白的工程菌pET30a-ColM13/BL21。通过SDS-PAGE测定异源表达的重组蛋白酶ColM13的分子质量,并测定不同诱导时间和诱导浓度对ColM13酶活性的影响,最终确定重组蛋白酶ColM13的酶活最适条件:6‰异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,100 mmol/L),37℃诱导6 h,优化后酶活力最高为64.99 U/mL,较优化前提高4.24倍。通过水解圈试验、紫外光谱和扫描电子显微镜等方式验证,表明工程菌构建成功,这为我国畜禽骨骼资源的深度开发和综合利用提供了新的研究思路。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌MBL13-U 胶原蛋白酶 大肠杆菌 异源表达 活性分析
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射频消融术联合小剂量胶原酶化学溶解术治疗神经根型颈椎病的疗效评价 认领
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作者 幸泽艇 王梅 +3 位作者 张春元 章勇 张学学 张达颖 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期758-764,共7页
目的:观察射频消融术联合小剂量胶原酶化学溶解术(collagenase chemonucleolysis, CC,下文简称RC)治疗神经根型颈椎病(cervical spondylotic radiculopathy, CSR)的效果及安全性。方法:纳入CSR病人25例行RC(RC组)、30例行胶原酶化学溶解... 目的:观察射频消融术联合小剂量胶原酶化学溶解术(collagenase chemonucleolysis, CC,下文简称RC)治疗神经根型颈椎病(cervical spondylotic radiculopathy, CSR)的效果及安全性。方法:纳入CSR病人25例行RC(RC组)、30例行胶原酶化学溶解术(M组),采用视觉模拟评分法(visual analogue scale, VAS)和MRI测量的椎间孔孔径(intervertebral foramen diameter, IFD)、椎间盘高度(intervertebral disc height, IDH)、突出物的长度(protrusions length, PL)、宽度(width, PW)、面积(protrusion area, PA)以及Odom标准作为评价指标,比较两组术前、术后的情况。结果:与VAS1比较,两组VAS2~VAS5均显著降低(P<0.001);与IDH1、PL1、PW1、S1比较,两组IDH2、PL2、PW2、PA2均显著降低(P<0.001);与术前IFD1比较,两组IFD2显著增大(P <0.001);与M组比较,RC组VAS更小、IDH下降更少,术后优良率更高(均P <0.05)。结论:该手术治疗CSR是安全有效的,集消融和溶解的优点,明显缓解疼痛,减压效果好,保留责任椎间盘高度。 展开更多
关键词 射频消融术 化学溶解术 神经根型颈椎病 胶原酶
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单独及混合胶原酶消化小鼠乳腺癌移植瘤组织获取细胞活性比较 认领
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作者 郭婷婷 王方芳 +2 位作者 黄巧容 陈正举 孟文彤 《生物技术》 CAS 2019年第4期387-390,共4页
[目的]比较单独及混合胶原酶消化小鼠乳腺癌移植瘤组织后获取的细胞活性。[方法]用4T1细胞建立小鼠乳腺癌动物模型,待成瘤后取乳腺癌肿瘤组织。比较4种消化酶(Ⅰ型胶原酶、Ⅳ型胶原酶、Ⅰ+Ⅳ型混合胶原酶和商用胶原酶),两种消化方法:单... [目的]比较单独及混合胶原酶消化小鼠乳腺癌移植瘤组织后获取的细胞活性。[方法]用4T1细胞建立小鼠乳腺癌动物模型,待成瘤后取乳腺癌肿瘤组织。比较4种消化酶(Ⅰ型胶原酶、Ⅳ型胶原酶、Ⅰ+Ⅳ型混合胶原酶和商用胶原酶),两种消化方法:单酶或多酶单次消化30 min;单酶或多酶分次消化30 min。用碘化丙啶(PI)染色各组消化后的细胞悬液,流式细胞仪检测细胞活率。[结果]不同酶单次消化后的细胞活率分别为:Ⅰ型胶原酶为55. 5±7. 2%、Ⅳ型胶原酶为26. 9±7. 6%、Ⅰ+Ⅳ型混合胶原酶为43. 5±10%、商用胶原酶为30. 4±10. 6%;在分次消化后分别为:Ⅰ型胶原酶为70. 6±4. 1%、Ⅳ型胶原酶为65. 5±17. 2%,Ⅰ+Ⅳ型混合胶原酶为78. 3±2. 2%,商用胶原酶为48. 5±11. 6%。[结论]使用Ⅰ+Ⅳ型混合胶原酶分次消化得到的乳腺癌移植瘤细胞活性最高,并为小鼠乳腺癌移植瘤组织消化提供了一种有效的新方法。 展开更多
关键词 乳腺癌 胶原酶 消化 细胞活性
Bacillus cereus胶原蛋白酶功能基因分析与结构预测 认领 被引量:1
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作者 刘丽莉 代晓凝 +2 位作者 陈珂 孟圆圆 郝威铭 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期29-35,共7页
以一株降解骨胶原蛋白的菌种蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)MBL13-U作为出发菌种,通过对菌全基因组测序,针对胶原蛋白酶功能基因进行了定位和结构预测。结果表明,从全基因组序列中得到胶原蛋白酶的功能基因序列长度为2916bp;该功能基因... 以一株降解骨胶原蛋白的菌种蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)MBL13-U作为出发菌种,通过对菌全基因组测序,针对胶原蛋白酶功能基因进行了定位和结构预测。结果表明,从全基因组序列中得到胶原蛋白酶的功能基因序列长度为2916bp;该功能基因中α螺旋占总氨基酸的37.1%,β转角占12.8%,无规则卷曲占26.0%,且该酶的三维结构预测为镊子状结构。将胶原蛋白酶基因转入大肠杆菌宿主菌株BL21,构建出工程菌pET30a-ColM13/BL21。对工程菌所产的重组蛋白酶ColM13酶解Ⅰ型骨胶原蛋白的结构进行分析表明,酶解作用使骨胶原蛋白产生多肽和大量游离氨基酸,其微观结构发生显著变化,表明ColM13在工程菌中已成功表达。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌MBL13-U 胶原蛋白酶 克隆与表达 结构预测
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一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法 认领
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作者 张秀莉 郭红云 +3 位作者 张永东 王涛 梁涛 苏海翔 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第9期1469-1472,共4页
目的:寻找一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法。方法:在Seglen两步胶原酶灌注法的基础上加以改进,按门静脉灌注法分离培养大鼠肝细胞,重复10次分离肝细胞实验,观察各项指标结果。采用胰酶、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注,大鼠肝脏肝门部结... 目的:寻找一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法。方法:在Seglen两步胶原酶灌注法的基础上加以改进,按门静脉灌注法分离培养大鼠肝细胞,重复10次分离肝细胞实验,观察各项指标结果。采用胰酶、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注,大鼠肝脏肝门部结构、肝上及肝下腔静脉封闭保留胶原酶消化分离获取肝细胞,经80目和200目的筛网依次过滤细胞后,细胞悬液分别以1000、500、300r/min离心各5min以纯化肝细胞,以台盼蓝排染法测定细胞活性,HE染色鉴定肝细胞纯度。结果:平均每只成年Wistar雄性大鼠可以获得(1.53±0.31)×10^8个肝细胞,平均获得肝细胞活率可达到94.63%,平均获得肝细胞纯度为96.7%。结论:本实验介绍的方法简便易行,且肝细胞产量较高,活力好,纯度高,适宜在一般条件的实验室推广和应用。 展开更多
关键词 肝细胞 原代培养 胶原酶 胰酶
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一株产胶原蛋白酶细菌的鉴定及产酶条件优化 认领
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作者 李茂琳 谭军 +4 位作者 王红英 王迪 张宇 徐桐 钱斯日古楞 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第14期118-126,共9页
采用形态学特征、生理生化特征结合16SrDNA对一株产胞外胶原蛋白酶的菌株AL-13进行鉴定。获得安全、高效、高产量的生产胶原蛋白酶工艺。以胶原蛋白酶活性为指标,采用单因素实验优化温度、pH、接种量等产酶培养条件后,利用单因素结合响... 采用形态学特征、生理生化特征结合16SrDNA对一株产胞外胶原蛋白酶的菌株AL-13进行鉴定。获得安全、高效、高产量的生产胶原蛋白酶工艺。以胶原蛋白酶活性为指标,采用单因素实验优化温度、pH、接种量等产酶培养条件后,利用单因素结合响应曲面法优化产酶培养基。结果表明,AL-13鉴定为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus),最适产酶培养条件为:培养时间48h、培养温度25℃、初始pH8.0、接种量6%(v/v),最适产酶培养基为:葡萄糖8.14g/L、牛肉膏11.63g/L、氯化钙0.17g/L、磷酸氢二钾2.08g/L、氯化钠9.48g/L,在该产酶条件下胶原蛋白酶活力预测值为154.89U/mL,验证结果显示酶活为(153.06±3.73)U/mL,此结果与预测值接近,相对误差为0.04%。本实验成功优化了一株产胶原蛋白酶细菌的产酶条件,产酶条件优化后的酶活(153.06U/mL)较优化前(16.14U/mL)提高了9.5倍。 展开更多
关键词 菌种鉴定 胶原蛋白酶 侧孢短芽孢杆菌 响应面法 产酶条件
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Ovarian Follicle Disaggregation to Assess Granulosa Cell Viability 认领
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作者 Mohammad Asaduzzaman Daniela Figueroa Gonzalez Fiona Young 《临床医学国际期刊(英文)》 2018年第5期377-399,共23页
Background: Mammalian ovaries contain follicles containing an oocyte enclosed by layers of granulosa cells (GC). Follicle growth and oocyte maturation are largely dependent on GC numbers and viability, but there is no... Background: Mammalian ovaries contain follicles containing an oocyte enclosed by layers of granulosa cells (GC). Follicle growth and oocyte maturation are largely dependent on GC numbers and viability, but there is no established, reliable method for assessing the number of viable GC within an isolated follicle. Methods: Centrifugation conditions and the Trypan Blue (TB) Exclusion assay were optimised for low cell densities compatible with the numbers of GC in follicles. Mouse ovarian follicles were disaggregated to produce a single cell suspension of GC which were examined by TB (n = 4), but also by crystal violet assay in a 96-well plate format after 24 h in vitro (n = 3). GC viability in vitro was characterised further by using enzyme-linked immunoassays to quantify GC production of anti-Mullerian hormone (AMH) and estrogen. Results: The centrifugation and low cell density TB protocol could accurately measure the viability of 78 GC in 10 &mu;L, with an intra-assay coefficient of variation (CoV) 22%, and inter-assay CoV 7%. The best follicle disaggregation method (30 min 37°C exposure to 2 mg/mL collagenase prior to 30 min exposure to 0.025% hyaluronidase) yielded (656 &plusmn;87) GC per antral follicle of which 82% &plusmn;5% were viable. Culturing 312 - 20,000 GC per well for 24 hours and assessing viability by crystal violet assay generated a linear correlation between OD value and viable GC number (R2 = 0.98) and estrogen concentration per well (R2 = 0.92). 20,000 GC per well produced 143 &plusmn;16 pg/mL estrogen during 24 hours in vitro, but no detectable AMH. Conclusion: This is the first report describing the isolation of viable, estrogen-producing GC from murine follicles, and their subsequent culture. These procedures are transferrable to other species including humans and can be applied to screening the reproductive toxicity of pharmaceutical agents. 展开更多
关键词 OVARIAN Follicle GRANULOSA Cells VIABILITY COLLAGENASE HYALURONIDASE
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Testing of a New Collagenase Blend for Pancreatic Islet Isolation Produced by <i>Clostridium histolyticum</i> 认领
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作者 Zuzana Berková Franti?ek Saudek +2 位作者 Ivan Leontovy? Martin Bene?ík Dana ?tveráková 《生命科学与技术进展(英文)》 2018年第1期26-35,共10页
Clostridium histolyticum is used for production of several proteolytic enzymes such as elastase, neutral proteases, clostripain and in particular collagenase. Besides industrial applications, collagenase has been indi... Clostridium histolyticum is used for production of several proteolytic enzymes such as elastase, neutral proteases, clostripain and in particular collagenase. Besides industrial applications, collagenase has been indispensable for medical purposes including isolation of pancreatic islets for diabetes treatment. The aim of this study was to optimize the method for production and partial purification of a new collagenase blend and to test its suitability for successful pancreatic islets isolation in a rat model. Bacterial strain of C. histolyticum was sequenced for presence of the collagenase genes. Different fermentation conditions were tested and the process of collagenase extraction was modified and optimized. Samples of collagenases were taken for western blot detection, activity assessment, and ability for dissociation of pancreatic tissue. Findings indicate that concentrated trypton growth medium with pepton was the most suitable for Clostridium growth and collagenase production. Whole genome sequencing revealed two genes for collagenase and also gene for clostripain. Western blot specific detection helped to select useful production modifications. Following these modifications was also improved the yield, morphology and in vitro function of intact pancreatic islets which were finally comparable or better than those achieved using standard blends of collagenase. The results support the use of the new collagenase blend for islet isolation giving thus the opportunity to choose an alternative product. Our next steps would lead to further enzyme purification through scaling up of the production method for a wider use. 展开更多
关键词 CLOSTRIDIUM histolyticum Fermentation COLLAGENASE PANCREATIC ISLETS Islet Isolation
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肺孢子菌肺炎的致病因子纤维连接蛋白作为蛇毒胶原蛋白酶作用位点的预测 认领
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作者 张雪薇 李锴 +2 位作者 邹晓毅 陆合 张静 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期769-773,共5页
目的 分析和预测纤维连接蛋白与胶原蛋白具有功能相似性,从而预测蛇毒胶原蛋白酶可以水解破坏纤维连接蛋白。方法 利用NCBI,BLAST,ProtParam,ExPAsy,BioEdit,TMHMM,Signalp3.0,COILS,SWISS-MODEL等生物信息学软件对纤维连接蛋白的序列,... 目的 分析和预测纤维连接蛋白与胶原蛋白具有功能相似性,从而预测蛇毒胶原蛋白酶可以水解破坏纤维连接蛋白。方法 利用NCBI,BLAST,ProtParam,ExPAsy,BioEdit,TMHMM,Signalp3.0,COILS,SWISS-MODEL等生物信息学软件对纤维连接蛋白的序列,理化性质,疏水性,跨膜区,空间结构等进行分析和预测。结果 纤维连接蛋白与胶原蛋白具有功能相似性,两者有共同的保守结构域。构成纤维连接蛋白的氨基酸中苏氨酸所占比例最高,而甲硫氨酸所含比例最低。纤维连接蛋白在0-50位氨基酸之间有一个疏水区,在2200-2300位氨基酸之间有一个亲水区。通过信号肽软件分析,预测纤维连接蛋白为分泌蛋白,存在信号肽,可能在跨膜运输中起信号识别作用,其分泌通路为s型。纤维连接蛋白的第231-270位氨基酸之间是个高度保守的结构功能域。结论 纤维连接蛋白和胶原蛋白的结构功能具有相似性,可以预测蛇毒胶原蛋白酶能够水解破坏纤维连接蛋白。 展开更多
关键词 肺孢子菌肺炎 纤维连接蛋白 胶原蛋白酶 生物信息学 蛇毒
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B.cereus MBL13-U产牛骨胶原蛋白酶工艺优化 认领
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作者 刘丽莉 李丹 +2 位作者 杨陈柳 梁严予 李玉 《河南科技大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2018年第1期68-72,8-9共6页
为了获得能够高效降解牛骨胶原蛋白的新型胶原蛋白酶,以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus MBL13-U)为出发菌种,以胶原蛋白酶活力为检测指标,对影响发酵的4个因素(菌种接种量、发酵温度、p H、发酵时间)进行单因素试验。通过四元二次正交旋... 为了获得能够高效降解牛骨胶原蛋白的新型胶原蛋白酶,以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus MBL13-U)为出发菌种,以胶原蛋白酶活力为检测指标,对影响发酵的4个因素(菌种接种量、发酵温度、p H、发酵时间)进行单因素试验。通过四元二次正交旋转组合试验,确定了B.cereus MBL13-U菌株发酵制备胶原蛋白酶的最佳工艺。当菌种接种量4%(体积分数)、发酵温度35℃、初始p H6.4、发酵时间46 h时,胶原蛋白酶活力达(92.31±1.13)U/m L。将其作用于牛骨胶原蛋白,通过扫描电子显微镜对酶解过程中的牛骨胶原蛋白进行结构分析。分析结果表明:酶解破坏了牛骨胶原蛋白原本完整的表面结构,使其所含的Ⅰ型胶原蛋白更多地暴露在表面,加快水解。 展开更多
关键词 BACILLUS CEREUS MBL13-U 发酵 胶原蛋白酶 工艺优化 牛骨胶原蛋白
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外源胶原酶对牛肉嫩度的影响 认领 被引量:1
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作者 李殿鑫 刘智钧 杨承鸿 《肉类工业》 2018年第8期41-45,共5页
嫩度是肉最为重要的食用品质,与肌原纤维蛋白、结缔组织、肌间脂肪以及肌肉持水性紧密相关。研究从鲜活鲫鱼中提取到一种胶原酶粗酶,首先研究了pH值、盐浓度、胶原酶添加量对胶原酶活性的影响:接着以pH值、盐浓度、胶原酶添加量为三... 嫩度是肉最为重要的食用品质,与肌原纤维蛋白、结缔组织、肌间脂肪以及肌肉持水性紧密相关。研究从鲜活鲫鱼中提取到一种胶原酶粗酶,首先研究了pH值、盐浓度、胶原酶添加量对胶原酶活性的影响:接着以pH值、盐浓度、胶原酶添加量为三个因子,分别设定三个水平,以剪切力为测定指标进行L9(3^3)正交设计,研究其对牛肉嫩度的影响。研究结果表明:胶原酶最适pH值为6.5、最适盐浓度为0.2mol/L、胶原酶添加量与酶促反应速度呈正相关关系;胶原酶添加量、盐浓度对牛肉嫩度有显著影响,因子影响排序为胶原酶添加量〉盐浓度〉pH值;正交设计最适条件为pH值6.5、盐浓度4.1%、酶添加量0.3%。 展开更多
关键词 胶原酶 提取 牛肉 嫩度
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柚皮苷对牙本质中胶原酶活性的影响 认领
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作者 刘正雅 余昊翰 +3 位作者 许荣宸 余凡 陈吉华 李芳 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2018年第7期373-377,共5页
目的:检测柚皮苷(Ng)对游离型和牙本质结合型胶原酶活性的影响.方法:用荧光定量法检测125、250、500μg/mLNg对游离型胶原酶活性的影响.制备牙本质胶原样本24个,随机分为3组(n=8):去离子水处理组(空白组);500μg/mLNg处理组,2... 目的:检测柚皮苷(Ng)对游离型和牙本质结合型胶原酶活性的影响.方法:用荧光定量法检测125、250、500μg/mLNg对游离型胶原酶活性的影响.制备牙本质胶原样本24个,随机分为3组(n=8):去离子水处理组(空白组);500μg/mLNg处理组,2g/L氯已定处理组;各组分别处理10min后,将牙本质胶原样本分别置于老化液中15d,检测胶原的干重变化、羟脯氨酸释放量.另制备牙本质片6个,经100g/LH3PO4处理60s后,随机分为2组(n=3),实验组为500μg/mLNg处理10min;空白组不做任何处理,用原位明胶酶实验评估Ng对牙本质结合型胶原酶活性的影响.结果:500μg/mLNg的酶抑制率(83.17%)高于125、250μg/LNg;500μg/LNg处理老化15d后的牙本质胶原样本,其胶原干重丢失比例、羟脯氨酸释放量均显著低于空白组(P〈0.05);原位明胶酶实验结果显示,500μg/mLNg处理后的样本荧光释放量显著低于空白组(P〈0.05).结论:500μg/mLNg对游离型和牙本质结合型胶原酶均有抑制作用. 展开更多
关键词 柚皮苷(Ng) 胶原酶 牙本质胶原
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不同胶原酶对中国供者胰岛分离作用的比较 认领
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作者 刘尧娟 邹家琦 +7 位作者 王贯乔 王乐 刘腾丽 王树森 王智平 裴广辉 王金山 沈中阳 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期720-724,共5页
目的对国际用于人胰岛制备的两种胶原酶(Serva NB1胶原酶和VitacyteGOLD胶原酶)在中国供者胰岛分离中的效果进行比较。探讨适合中国人的胰岛分离方法。方法入选17例供者胰腺均来自死亡后器官捐献,其中12例使用Serva NB1胶原酶消化,5例使... 目的对国际用于人胰岛制备的两种胶原酶(Serva NB1胶原酶和VitacyteGOLD胶原酶)在中国供者胰岛分离中的效果进行比较。探讨适合中国人的胰岛分离方法。方法入选17例供者胰腺均来自死亡后器官捐献,其中12例使用Serva NB1胶原酶消化,5例使用Vitacyte GOLD胶原酶消化。在百级层流实验室中进行胰腺分离,经过修整,分别应用不同胶原酶充分灌注,利用Ricordi方法消化并记录消化时间,利用连续密度梯度法纯化胰岛,然后检测胰岛产率、活性和葡糖糖刺激的胰岛素分泌能力,以评估分离胰岛的数量和质量。结果Vitacyte GOLD胶原酶比Serva NB1胶原酶所需的消化时间更短(P<0.05)。纯化后直径在50~100 μm之间的胰岛,Vitacyte GOLD胶原酶组明显多于ServaNB1胶原酶组(P<0.05),直径在251~300 μm、301~350 μm之间的胰岛,Vitacyte GOLD胶原酶组明显少于ServaNB1胶原酶组(P<0.05)。两种胶原酶分离获得总胰岛数量差异无统计学意义(P>0.05)。两种胶原酶分离胰岛的活性检测和GSI结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论Serva NB1胶原酶和Vitacyte GOLD胶原酶均可用于临床分离制备中国人胰岛。 展开更多
关键词 胰岛移植 胰岛分离 胶原酶
幽门螺杆菌定植因子HpPrtC胶原蛋白酶的异源表达及其功能活性研究 认领 被引量:1
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作者 赵慧琳 吴玉龙 +6 位作者 荣倩玉 徐正 丁雲飞 张玉梅 乔媛媛 李波清 季晓飞 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期958-962,共5页
目的异源表达幽门螺杆菌HpPrtC胶原蛋白酶,并检测其对胶原蛋白的降解活性。方法根据幽门螺杆菌基因组信息中编号hp0169基因的序列设计引物,PCR扩增HpPrtC基因的核苷酸序列,经NdeI和XhoI酶切后构建原核表达载体pET-22b(+)-HpPrtC,转化... 目的异源表达幽门螺杆菌HpPrtC胶原蛋白酶,并检测其对胶原蛋白的降解活性。方法根据幽门螺杆菌基因组信息中编号hp0169基因的序列设计引物,PCR扩增HpPrtC基因的核苷酸序列,经NdeI和XhoI酶切后构建原核表达载体pET-22b(+)-HpPrtC,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用亲和层析法纯化重组蛋白,通过检测重组酶处理胶原蛋白后L-亮氨酸的产生量表征其胶原蛋白降解活性。结果 HpPrtC基因编码422个氨基酸,与已知PrtC家族蛋白酶氨基酸序列比对最高相似性〈40%。克隆HpPrtC基因连接入表达质粒pET-22b(+),将测序正确的表达质粒pET-22b(+)-HpPrtC转化至感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达相对分子质量约为47×10^3的可溶性蛋白,与预期相符。经亲和层析纯化后的重组蛋白酶降解热变性I型胶原蛋白(可溶、不可溶)和天然I型胶原蛋白的活性分别为922.2±36.2、1168.8±65.6和674.0±13.4,与幽门螺杆菌培养液中胶原蛋白酶对可溶热变性I型胶原蛋白、不可溶热变性I型胶原蛋白和天然I型胶原蛋白活性分别为205.6±21.5、228.4±19.3和123.2±14.5一致。结论幽门螺杆菌定植因子HpPrtC为胶原蛋白酶。通过大肠埃希菌异源表达的重组HpPrtC蛋白具有胶原蛋白酶解活性,为探索该酶在幽门螺杆菌感染定植中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 胶原蛋白酶 异源表达 胶原蛋白
两种脱矿液在粘接前表面处理牙本质时的脱矿动力学曲线比较及其对胶原酶解的影响 认领
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作者 寇婷婷 熊宇 +3 位作者 崔岳 蔡江文 朱璨 周继祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1155-1160,共6页
目的比较37%磷酸和17% EDTA对人牙本质的脱矿效率,并评价不同脱矿时间对人牙本质中Ⅰ型胶原基质降解速率的影响。方法制取等量人牙本质粉,分别以37%磷酸(Pi)与17% EDTA脱矿处理0 s(对照组)、10 s、15 s、30 s、60 s、120 s、72 h... 目的比较37%磷酸和17% EDTA对人牙本质的脱矿效率,并评价不同脱矿时间对人牙本质中Ⅰ型胶原基质降解速率的影响。方法制取等量人牙本质粉,分别以37%磷酸(Pi)与17% EDTA脱矿处理0 s(对照组)、10 s、15 s、30 s、60 s、120 s、72 h后离心荡洗。检测计算两种脱矿液的脱矿效率及胶原溶脱率并绘制动力学曲线。1 g/L Ⅰ型胶原酶溶液300 μL酶解样本沉淀,于1、7 d用羟脯胺酸(HYP)试剂盒测定并绘制胶原降解变化趋势图。利用Pearson相关系数分析脱矿总量与胶原溶脱、酶解1 d胶原降解量、酶解7 d胶原降解量及增量之间的相关性。结果磷酸组15 s即脱矿显著,胶原溶脱30 s明显增高(P〈0.05),胶原降解量各时间点差异无统计学意义,降解增量15 s开始降低(P〈0.05),脱矿量与胶原溶脱量及降解增量呈显著相关(r=0.864,r=-0.713,P〈0.05)。EDTA组30 s明显脱矿,胶原溶脱较少,且120s内各时间点差异无统计学意义,胶原降解量30 s达峰值,随后各时间点胶原降解量明显降低(P〈0.05),降解增量60s开始降低(P〈0.05),脱矿量与胶原溶脱量呈显著相关(r=0.894,P〈0.05)。结论磷酸脱矿效率迅速、高效,胶原溶脱率较高,稳定性较好;EDTA脱矿效率缓慢、持续,胶原溶脱率较低,稳定性尚可。临床进行牙本质粘结前表面处理牙本质时,以37%磷酸酸蚀10~15 s或17% EDTA表面处理60~90 s为较合理。 展开更多
关键词 酸蚀 脱矿 胶原酶解 动力学曲线 牙本质
计算机断层扫描术引导下靶点低温等离子联合胶原酶治疗腰椎间盘突出症的疗效分析 认领 被引量:1
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作者 赵丽 王立奎 朱本藩 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2018年第9期836-840,共5页
目的探讨CT引导下低温等离子射频消融术联合胶原酶治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法对58例腰椎间盘突出症患者行CT引导下靶点低温等离子射频消融术合并胶原酶治疗。采用VAS评分标准及MacNab评定标准评估手术前后疼痛程度的变化,记... 目的探讨CT引导下低温等离子射频消融术联合胶原酶治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法对58例腰椎间盘突出症患者行CT引导下靶点低温等离子射频消融术合并胶原酶治疗。采用VAS评分标准及MacNab评定标准评估手术前后疼痛程度的变化,记录术后恢复时间和疼痛缓解时间以及术后疼痛缓解的相关危险因素分析。结果所有患者均穿刺成功,且术后未出现神经损伤、椎间盘感染,无脊髓、血管脏器损伤等并发症。术后行6个月定期随访,术后2周VAS评分平均3分;术后1个月VAS评分平均2.6分,与术后2周比较差异有统计学意义(P〈0.05);术后3个月达到稳定状态,VAS评分平均1.3分,与术后2周比较差异有统计学意义(P〈0.05);术后6个月VAS评分平均1.2分,与术后3个月比较无明显改善,差异无统计学意义(P〉0.05)。MacNab评估结果为优的患者共30例(51.7%),评价结果为良的患者共15例(25.8%),评价结果为可的患者共8例(15.5%),评价结果为差的患者共5例(7%),优良率达到89.7%。结论多种微创技术联合治疗腰椎间盘突出症安全有效,值得临床推广应用。 展开更多
关键词 低温等离子消融术 胶原酶 腰椎间盘突出症 计算机断层扫描术
Modified insulin-like growth factor 1 containing collagen-binding domain for nerve regeneration 认领
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作者 Jian-an Li Chang-fu Zhao +5 位作者 Shao-jun Li lun Zhang Zhen-hua Li Qiao Zhang Xiao-yu Yang Chun-fang Zan 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第2期298-303,共6页
关键词 神经生长 生长因素 骨胶原 胰岛素 绑定 新生 IGF-1 修改
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