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MarR家族转录因子HpaR和XC0449协同调控野油菜黄单胞菌致病性
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作者 李雅君 李爱宁 +4 位作者 孟繁凡 张宏宇 钱韦 贺伟 邓超颖 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1500-1510,共11页
MarR家族转录因子广泛存在于细菌及古生菌中,并灵活、精细地调控多种毒力、抗胁迫及抗生素相关的生理生化途径。在野油菜黄单胞菌中,MarR家族转录因子HpaR (XC2827)的失活会显著降低细菌对于寄主甘蓝的致病力,同时会导致胞外蛋白酶的过... MarR家族转录因子广泛存在于细菌及古生菌中,并灵活、精细地调控多种毒力、抗胁迫及抗生素相关的生理生化途径。在野油菜黄单胞菌中,MarR家族转录因子HpaR (XC2827)的失活会显著降低细菌对于寄主甘蓝的致病力,同时会导致胞外蛋白酶的过量表达。本研究进一步发现,Xcc 8004基因组一共编码9个MarR家族转录因子。表达并纯化其中的HpaR (XC2827)和XC0449,体外微量热泳动(MST)实验及 Pull-down 实验证明二者可以在体外特异性结合。同时,表型检测发现XC0449突变会导致细菌致病力显著下降。通过体外凝胶迁移阻滞试验(EMSA)、体内qRT-PCR和GUS检测证明,XC0449和HpaR均作为转录激活子协同调控下游致病相关基因XC0705的表达,最终调控细菌毒力及胞外酶合成。 展开更多
关键词 转录调控 MARR 家族转录因子 野油菜黄单胞菌 致病性
寄主植物中抑制十字花科黑腐病菌Ⅲ型分泌系统小分子化合物的鉴定
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作者 蓝逆寒 苏德山 +4 位作者 周乐 覃霞 黄佩芳 杨梅 姜伯乐 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期262-270,共9页
寻找抑制植物病原菌Ⅲ型分泌系统的植物源活性小分子化合物,是研发生物安全农药的重要途径之一。本研究采用水煮提取法从十字花科黑腐病菌寄主植物满身红萝卜中提取分离活性小分子化合物,利用高效液相-质谱联用解析出活性物质的单体结... 寻找抑制植物病原菌Ⅲ型分泌系统的植物源活性小分子化合物,是研发生物安全农药的重要途径之一。本研究采用水煮提取法从十字花科黑腐病菌寄主植物满身红萝卜中提取分离活性小分子化合物,利用高效液相-质谱联用解析出活性物质的单体结构。然后用荧光素酶基因luxAB构建融合报告系统以及定量PCR检测活性物质对十字花科黑腐病菌Ⅲ型分泌系统的抑制效果,最后采用剪叶接种和压渗接种的方法研究活性小分子物质对十字花科黑腐病菌的生防作用。研究表明,植物鞘氨醇和二氢鞘氨醇对十字花科黑腐病菌Ⅲ型分泌系统基因的转录表达有一定程度的抑制作用,但是对Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型分泌系统基因的表达没有明显的抑制作用。植物鞘氨醇在XCM1上影响菌的生长,而二氢鞘氨醇不影响菌的生长。同时,还发现这两种物质能显著降低Xcc在寄主植株满身红萝卜上的病害症状以及能够使Xcc在非寄主植物辣椒上引起过敏反应的能力丧失。该研究结果为深入研究小分子化合物对十字花科黑腐病菌Ⅲ型分泌系统的作用机制及后续开发植物源抑制剂提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 Ⅲ型分泌系统 植物鞘氨醇 二氢鞘氨醇
十字花科黑腐病菌中甲基趋化受体蛋白的研究
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作者 崔萍 丘献娟 +2 位作者 卢卓健 张达培 陆光涛 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2019年第9期4051-4058,共8页
趋化性是有运动能力的细菌对环境中的刺激物产生的趋向或离避行为。在细菌的趋化系统中,能够感应环境中化学物质浓度梯度的化学受体称为趋化受体。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestrispv. campestris, Xcc)是重要的植物病原菌,也... 趋化性是有运动能力的细菌对环境中的刺激物产生的趋向或离避行为。在细菌的趋化系统中,能够感应环境中化学物质浓度梯度的化学受体称为趋化受体。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestrispv. campestris, Xcc)是重要的植物病原菌,也是一种研究微生物与宿主互作机理的重要模式菌,然而关于Xcc 中趋化受体的研究还较少。本研究利用生物信息学技术对Xcc8004 中的21 个甲基受体趋化蛋白(methyl- accepting chemotaxis proteins, MCPs)进行功能域分析并构建了系统进化树。结果表明,Xcc 中MCP具有比较高的保守性。利用同源双交换法构建了MCP编码基因的缺失突变体,对这些突变体的生物学功能分析表明:21 个MCP编码基因突变后,皆影响Xcc 对糖类、氨基酸等趋化物的趋化性;大多数突变不影响细菌的运动性,但XC_2311、XC_2304、XC_1937、XC_2223 分别突变后,影响细菌的游动性和泳动性。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 甲基趋化受体 功能域 系统发育分析 趋化性
十字花科黑腐病菌的XC1193基因与致病相关
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作者 王凛 阳丽艳 +2 位作者 杨丽超 甘永亮 姜伯乐 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第2期789-795,共7页
十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是一种重要植物病原细菌,在全球范围内侵染十字花科植物引起黑腐病,其σ因子在基因表达中起到重要调节作用。XC1193基因在Xcc 8004菌株编码一个σ-70因子,为进一步研究该... 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是一种重要植物病原细菌,在全球范围内侵染十字花科植物引起黑腐病,其σ因子在基因表达中起到重要调节作用。XC1193基因在Xcc 8004菌株编码一个σ-70因子,为进一步研究该σ因子在Xcc中的调控作用,利用自杀质粒p K18mobsac B构建了XC1193基因的缺失突变体DM1193。与野生型菌株的比较发现,XC1193基因突变不影响菌体在丰富培养基和基本培养基上的生长;突变体的胞外蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶等生化表型也与野生型一致;植株实验表明XC1193突变不影响过敏反应。采用剪叶接种法进行致病性检测,突变体致病力与野生型一致。而采用喷雾接种法,突变体致病力显著降低,互补菌株致病力恢复至野生型水平。结果表明,该σ因子在十字花科黑腐病菌致病过程中发挥作用,并与Xcc侵染寄主的早期事件有关。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 Σ因子 致病性
Using Moringa oleifera Extracts to Control Blackrot (Xanthomonas campestris)in Field Grown Rape (Brassica napus) 预览
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作者 Maria Goss Paramu. L. Mafongoya +1 位作者 Augustine Gubba Obert Jiri 《药剂与药理学:英文版》 2018年第3期259-267,共9页
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十字花科黑腐病菌中9个纤维素酶基因的研究
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作者 林玲 梁雪莲 +1 位作者 刘晓 姜伯乐 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第8期3378-3386,共9页
十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)能够侵染几乎所有的十字花科植物引起黑腐病,而纤维素酶作为重要致病因子之一,在病原菌早期侵染中发挥重要作用。通过全基因组检索发现,已测序菌株Xcc 8004中有9个基因(X... 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)能够侵染几乎所有的十字花科植物引起黑腐病,而纤维素酶作为重要致病因子之一,在病原菌早期侵染中发挥重要作用。通过全基因组检索发现,已测序菌株Xcc 8004中有9个基因(XC_0026,XC_0027,XC_0028,XC_0625,XC_0639,XC_0783,XC_0784,XC_1727和XC_2483)注释为纤维素酶基因。本研究构建了9个纤维素酶基因的单基因缺失突变体和多基因缺失突变体。定性检测突变体纤维素酶活,发现D0639的CMC纤维素酶活力显著降低,其他8个单缺失突变体的CMC纤维素酶活力变化不明显,当9个基因同时缺失即D9,CMC纤维素酶活性完全丧失。在D9的背景进行单基因反式互补,通过定量和定性检测纤维素酶活力,XC_0639能基本上恢复野生型水平,XC_0026、XC_0783和XC_1727只能补回10%的酶活力,而其余几个基因完全不能补回酶活力。本研究首次发现了XC_0639是十字花科黑腐病菌的纤维素酶的主效基因。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 纤维素酶基因 纤维素酶活性
十字花科黑腐病菌中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的酶学分析
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作者 李瑞芳 杨玉芹 +3 位作者 覃启剑 韦萍真 卢卓建 陆光涛 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第5期1979-1984,共6页
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是磷酸戊糖途径(HMP)的限速酶,在十字花科黑腐病菌8004的基因组中,有2个基因XC1977和XC4082被注释为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)。前期工作发现XC1977突变后,细胞的胞外多糖产量明显降低,而XC4082突变不影响胞外... 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是磷酸戊糖途径(HMP)的限速酶,在十字花科黑腐病菌8004的基因组中,有2个基因XC1977和XC4082被注释为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)。前期工作发现XC1977突变后,细胞的胞外多糖产量明显降低,而XC4082突变不影响胞外多糖产量。为明确这两个基因的编码产物在Xcc中的生化功能,本工作表达纯化了这两个蛋白,并对这两个蛋白的特征进行分析,发现这两个蛋白均具有6-葡萄糖脱氢酶的活性,但是它们的最适反应温度、最适反应p H、金属离子和烷化剂的敏感性完全不同。而且,XC1977以NAD+和NADP+为电子受体,而XC4082只能以NADP+为电子受体。在以NAD+和NADP+为受体时,XC1977的Km值分别为0.125 mmol/L和0.927 mmol/L,而XC4082以NADP+为受体时的Km值为0.364 mmol/L。这表明Xcc细胞合成胞外多糖时,需要NAD+参与能量代谢。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 酶活力
十字花科黑腐病菌中HpaM蛋白的突变分析
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作者 李瑞芳 朱艳宁 +3 位作者 韦萍真 覃启剑 李磊 陆光涛 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第6期2430-2439,共10页
我们的前期工作发现,黄单胞菌中的HpaM是一个位于外膜的Ⅲ型分泌系统的装置蛋白,对其编码基因缺失后,病原菌丧失在寄主上的致病力和在非寄主上引起过敏反应的能力。为了进一步了解该蛋白的功能,本研究将十字花科黑腐病菌中HpaM的功... 我们的前期工作发现,黄单胞菌中的HpaM是一个位于外膜的Ⅲ型分泌系统的装置蛋白,对其编码基因缺失后,病原菌丧失在寄主上的致病力和在非寄主上引起过敏反应的能力。为了进一步了解该蛋白的功能,本研究将十字花科黑腐病菌中HpaM的功能域分别进行缺失突变,并对一些保守氨基酸位点进行定点突变,发现HpaM的7个功能域分别缺失后,蛋白质的功能均丧失;另外8个位点的氨基酸分别突变后,使蛋白质的功能也丧失。这些结果表明,HpaM的每一个功能域,甚至是一些位点的单个氨基酸均是HpaM发挥正常功能所必需的。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 HpaM蛋白 功能域 氨基酸定点突变
十字花科黑腐病菌应急反应相关基因spokc对TXcc基因调控作用的分析
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作者 刘国芳 苏辉昭 +4 位作者 刘伟 牛祥娜 玉延华 姜伟 何勇强 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期27-36,共10页
通过反向遗传学方法和半定量RT-PCR方法,研究了十字花科黑腐病菌中被注释的应急反应相关基因spoTXcc与Ⅲ型分泌系统(T3SS)基因的调控关系。基于自杀质粒pKl8mob同源整合方法构建了十字花科黑腐病菌spoTXcc基因(XC_0956)的非极性整... 通过反向遗传学方法和半定量RT-PCR方法,研究了十字花科黑腐病菌中被注释的应急反应相关基因spoTXcc与Ⅲ型分泌系统(T3SS)基因的调控关系。基于自杀质粒pKl8mob同源整合方法构建了十字花科黑腐病菌spoTXcc基因(XC_0956)的非极性整合突变体,检测了突变体的多种表型,发现spozk突变体延迟了在非寄主植物辣椒ECW-10R上引发的过敏反应(HR)。利用GUS(β-葡糖苷酸酶)活性检测、原位组织染色和半定量RT-PCR的方法,发现T3SS相关基因在spoTXcc基因的非极性整合突变体中表达量降低,表明十字花科黑腐病菌中被注释的应急反应相关基因妒spoTXcc显著正调控T3SS相关基因的表达。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 spoTXcc基因 过敏反应(HR) T3SS 调控
利用双向电泳构建十字花科黑腐病菌HrcV控制的分泌蛋白质图谱 预览 被引量:1
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作者 岑卫健 刘娇 +3 位作者 付秋霞 杨丽超 朱平川 姜伯乐 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期120-126,共7页
以十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)8004菌株为研究材料,采用双向电泳-质谱技术鉴定Hrc V控制的分泌蛋白质组。结果表明,野生型和突变体菌株均获得分辨率高且具有可重复性的双向电泳银染图谱,经过图像软... 以十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)8004菌株为研究材料,采用双向电泳-质谱技术鉴定Hrc V控制的分泌蛋白质组。结果表明,野生型和突变体菌株均获得分辨率高且具有可重复性的双向电泳银染图谱,经过图像软件分析找出差异点61个,以野生型菌株为对照,22个蛋白点上调,39个蛋白点下调。挖取下调蛋白质点39个做质谱分析,质谱成功鉴定出25蛋白质,主要包括各种酶类、转运蛋白、延伸因子、Dna K蛋白、分子伴侣及假定蛋白。推测这些蛋白质可能在Xcc 8004的致病性中起到重要作用,为进一步研究Xcc的致病机理奠定基础。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 Hrc V 双向电泳 质谱
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十字花科黑腐病菌中一个与趋化性相关基因的突变分析 被引量:3
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作者 丘献娟 吴柳 +1 位作者 陈正培 陆光涛 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1225-1231,共7页
十字花科作物黑腐病,又称为野油菜黄单胞菌野油菜变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,简称Xcc),该细菌是引起十字花科作物等植物发生黑腐病的病原菌,同时该细菌也是人们研究寄主与病原微生物相互作用的具体分子机理的模式菌... 十字花科作物黑腐病,又称为野油菜黄单胞菌野油菜变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,简称Xcc),该细菌是引起十字花科作物等植物发生黑腐病的病原菌,同时该细菌也是人们研究寄主与病原微生物相互作用的具体分子机理的模式菌之一。在Xcc 8004菌株基因组中,XC2304编码的产物为一个趋化性蛋白。由于细菌的趋化性在病原学方面的意义是非常重要的,为评估XC2304的功能,本研究利用p K18mob Sac B对XC2304进行缺失突变,获得缺失突变体DM2304。植株试验发现,突变体DM2304对寄主植物的致病力下降约30%,其互补菌株CDM2304的致病力基本恢复至野生型水平,这表明XC2304与Xcc致病力有关。利用毛细管法检测DM2304对18种物质的趋化性,结果表明突变体对木糖、苯丙氨酸、精氨酸、蔗糖以及核糖的趋化性比野生型弱。运动性分析发现,DM2304在含有0.3%、0.6%琼脂的NYGA板的游动性稍微降低,表明XC2304与游动性有关。而DM2304的胞外纤维素酶、胞外蛋白酶、胞外淀粉酶、EPS产量、HR与野生型菌株相比均没有明显差异。本研究为十字花科黑腐病菌中其它与趋化性相关基因提供实验思路,对病原菌如何趋利避害的机制的研究具有一定的意义。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 趋化性 致病性 XC2304
野油菜黄单胞菌效应蛋白XopXccN抑制鞭毛蛋白诱导的MAPK激酶活性
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作者 刘洋 戎伟 +1 位作者 林道哲 何朝族 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期468-475,共8页
野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)通过Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白到植物体内.帮助其在植物体内侵染和繁殖。XopXccN是野油菜黄单胞菌Xcc8004菌株的一个效应蛋白,利用同源重组双交换法将基因xopXccN在Xcc8... 野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)通过Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白到植物体内.帮助其在植物体内侵染和繁殖。XopXccN是野油菜黄单胞菌Xcc8004菌株的一个效应蛋白,利用同源重组双交换法将基因xopXccN在Xcc8004的基因组上做了删除突变,并对突变菌株进行了遗传互补。通过在拟南芥叶片上接种野生型Xcc8004、突变体菌株△xopXccN以及互补菌株△xopXccNC,发现效应蛋白XopXccN对于Xcc8004在拟南芥叶肉组织内的完整毒性是必须的。进一步研究发现,XopXccN可以抑制鞭毛蛋白诱导的MAPK激酶活性,其抑制发生在MKK下游。另外.XopXccN还可以抑制鞭毛蛋白诱导的下游标志基因FRK1(fig22-induced receptor—like kinase)的表达。将XopXccN蛋白分段表达后发现,对于FRK1基因表达的抑制依赖于XopXccN的全长蛋白序列。本研究结果表明,XopXccN通过抑制MAPK激酶活性,从而抑制寄主的先天免疫反应。 展开更多
关键词 野油菜黄单胞菌 XopXccN MAPK 先天免疫
十字花科黑腐病菌IV型分泌系统的诱导表达与抗逆功能分析
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作者 蒋国凤 韦蕾蕾 +4 位作者 张正淳 徐勇 张君成 何勇强 姜伯乐 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期486-493,共8页
细菌通过IV型分泌系统(Type IV Secretion System, T4SS)的接合系统、效应物转运系统和释放/吸收系统3个子家族进行DNA、蛋白质及毒素的分泌和转运。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv. campestris, Xcc)是一种重要的植... 细菌通过IV型分泌系统(Type IV Secretion System, T4SS)的接合系统、效应物转运系统和释放/吸收系统3个子家族进行DNA、蛋白质及毒素的分泌和转运。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv. campestris, Xcc)是一种重要的植物病原菌,也是研究植物病原细菌与植物相互作用机理的模式细菌之一。本研究通过检测Xcc 8004野生型菌株和T4SS突变体在不同条件下的生长、诱导情况及对过敏反应的影响发现:T4SS不影响在培养基中的生长,与野生型菌株相比,T4SS突变体在非寄主辣椒ECW-10R上的过敏反应减弱;T4SS相关基因受基本培养基MMX诱导表达,且与Ni^2+、H2O2、Phenol等抗逆相关。推测T4SS相关基因在该病原菌的接触、识别阶段起作用。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 IV型分泌系统 过敏反应 抗逆
金属离子对十字花科黑腐病菌不同致病系统表达的影响
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作者 唐江涛 王成 +5 位作者 周乐 韦载娲 付秋霞 杨丽超 梁晓夏 姜伯乐 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期332-338,共7页
十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是引起十字花科植物黑腐病的病原细菌,其通过不同的分泌系统将效应物蛋白或细胞毒素转运进真核宿主细胞产生病害,对农业生产造成巨大的经济损失。本研究利用GUS融合报告系... 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是引起十字花科植物黑腐病的病原细菌,其通过不同的分泌系统将效应物蛋白或细胞毒素转运进真核宿主细胞产生病害,对农业生产造成巨大的经济损失。本研究利用GUS融合报告系统,考察了常见的几种不同金属离子(Zn^2+,Mn^2+,Ca^2+,Fe^2+)对Xcc 8004不同致病系统装置基因表达的影响。结果表明,在1μmol/L-1 mmol/L浓度区间,Zn^2+和Mn^2+同时对XccⅡ型分泌系统(T2SS)和Ⅲ型分泌系统(T3SS)有抑制作用;在大于0.01 mmol/L浓度时,Ca^2+特异性抑制T3SS;Fe^2+同时抑制T2SS、T3SS和Ⅳ型分泌系统(T4SS)装置基因的表达。金属离子Zn^2+、Mn^2+、Ca^2+和Fe^2+在不同浓度下对Xcc的致病系统均有抑制作用。本研究为分析病原细菌不同分泌系统响应金属离子的模式奠定了基础。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 致病系统 金属离子
野油菜黄单胞菌Xcc 8004双组分信号转导系统基因及其蛋白架构分析 被引量:1
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作者 潘俊霞 付珊 +3 位作者 姚任之 唐学慧 何勇强 姜伟 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期139-150,共12页
Xanthomonas campestris pv.campestris(Xcc 8004)是一个拥有复杂代谢循环的革兰氏阴性植物病原菌,它能侵染几乎所有的十字花科植物引起黑腐病.基因注释表明,该基因组存在大量编码双组分信号转导系统的基因,本研究利用生物信息学方法... Xanthomonas campestris pv.campestris(Xcc 8004)是一个拥有复杂代谢循环的革兰氏阴性植物病原菌,它能侵染几乎所有的十字花科植物引起黑腐病.基因注释表明,该基因组存在大量编码双组分信号转导系统的基因,本研究利用生物信息学方法鉴定编码双组分信号转导系统感受蛋白和响应调控蛋白基因,结果表明,Xcc 8004共有111个双组分信号转导系统基因,55个感受基因中的30个与响应调控基因成对存在,很有可能组成一个双组分信号转导系统,25个感受基因和26个响应调控基因独立存在于基因组中.另外,还发现3个HKs和2个RRs未被注释.本文拟通过分析双组分信号转导系统基因及其编码蛋白的功能域架构,为Xcc 8004双组分调控系统的功能研究和防治病害提供参考. 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 生物信息学 双组分信号转导系统 功能域架构
十字花科黑腐病菌分泌蛋白质双向电泳条件的构建及优化 被引量:3
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作者 岑卫健 成春燕 +2 位作者 杨丽超 王凛 姜伯乐 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期403-407,共5页
本研究旨在建立一套适合于十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris 8004,Xcc8004)分泌蛋白质的双向电泳技术(two-dimensional electrophoresis,2-DE),以便更好的利用蛋白质组学技术鉴定Xcc 8004的分泌蛋白质。我们... 本研究旨在建立一套适合于十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris 8004,Xcc8004)分泌蛋白质的双向电泳技术(two-dimensional electrophoresis,2-DE),以便更好的利用蛋白质组学技术鉴定Xcc 8004的分泌蛋白质。我们就MME和XCM2两种培养基对分泌蛋白质的诱导能力、蛋白质提取方法以及样品上样量等方面对2-DE的影响进行了比较,结果表明,XCM2培养基对Xcc 8004分泌蛋白质的诱导能力比MME强。用TCA/丙酮法沉淀蛋白质得到的双向电泳图谱背景清晰,分辨率高。分别采用400μg、300μg、250μg和150μg四个不同的上样量进行双向电泳,结果显示在上样量为250-300μg时(IPG pH 3-10,24 cm),电泳图谱分辨率最好。综上可知,XCM2培养基比较适合用于Xcc 8004分泌蛋白质的诱导,TCA/丙酮法提取分泌蛋白质为较优方法,250-300μg是较为合适的上样量。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 双向电泳 分泌蛋白质 蛋白提取方法
假定蛋白基因XC2038与十字花科黑腐病菌致病相关
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作者 蒋国凤 吴秋菊 +1 位作者 韩路芬 姜伯乐 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期530-534,共5页
十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是研究植物病原细菌和寄主互作的模式细菌,鉴定其致病相关基因对于控制作物病害有重要的意义。XC2038在Xcc 8004中注释为功能未知的假定蛋白基因。本研究利用实验室前期构... 十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是研究植物病原细菌和寄主互作的模式细菌,鉴定其致病相关基因对于控制作物病害有重要的意义。XC2038在Xcc 8004中注释为功能未知的假定蛋白基因。本研究利用实验室前期构建的XC2038基因的Tn5gus A5插入突变体164H09,并构建了该突变体的互补菌株C164H09,随后对各菌株的致病性及相关表型进行了检测。结果表明,164H09影响Xcc 8004胞外多糖、泳动性及生物被膜的形成,影响在寄主满身红萝卜上的致病性,而突变体的互补菌株能将以上表型恢复至野生型水平。综上可知,假定蛋白基因XC2038与十字花科黑腐病菌致病相关。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 假定蛋白 XC2038 致病性
十字花科黑腐病菌一个新的Ⅲ型效应物XC3176的鉴定
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作者 杨丽超 苏华 +4 位作者 杨凤 蹇华哗 周敏 姜伟 姜伯乐 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1264-1272,共9页
【目的】在十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)的致病因子中,III型分泌系统(Type III Secretion System,T3SS)是至关重要的致病系统,III型效应物通过III型分泌系统直接转运到寄主植物细胞内。本研究通过... 【目的】在十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)的致病因子中,III型分泌系统(Type III Secretion System,T3SS)是至关重要的致病系统,III型效应物通过III型分泌系统直接转运到寄主植物细胞内。本研究通过效应物水平转移的特征获得候选基因,旨在鉴定一个新的依赖于III型分泌的效应物。【方法】以缺失了N-端58个氨基酸的Avr Bs1作为报告系统构建效应物鉴定报告质粒p LJB3176,导入Δavr Bs1和Δhrc V,通过检测报告菌株在辣椒ECW-10R上的过敏反应来鉴定XC3176是否为III型效应物。构建XC3176融合GUS报告质粒p LGUS3176,导入野生菌株Xcc 8004、Δhrp G和Δhrp X,通过测定菌株GUS活性检测hrp G、hrp X对XC3176的调控作用。构建XC3176缺失突变体和互补菌株,通过剪叶法接种检测XC3176对Xcc 8004致病性的影响。【结果】XC3176融合Avr Bs1报告菌株在非寄主辣椒ECW-10R上能引发过敏反应,GUS活性检测显示Δhrp G/p LGUS3176、Δhrp X/p LGUS3176比8004/p LGUS3176的GUS酶活显著降低,致病性检测显示突变体Δ3176与野生型Xcc 8004相比在寄主满身红萝卜上的病斑长度有显著减少,互补菌株C3176的病斑长度能补回到野生型水平。【结论】XC3176是依赖于hrc V分泌的III型效应物,hrp G、hrp X正调控XC3176,XC3176与Xcc致病相关。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 XC3176 Ⅲ型效应物 hrpG hrpX
一个用于鉴定十字花科黑腐病菌Ⅲ型效应物分泌与转运的报告质粒的构建
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作者 成春燕 杨威 +4 位作者 甘永亮 蒋国凤 杨丽超 阳丽艳 姜伯乐 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期232-238,共7页
通过免疫检测的方法鉴定十字花科黑腐病菌(Xcc)Ⅲ型效应物的分泌和转运,将cyaA基因克隆至带有3×FLAG的pJXG载体上,构建带有3×FLAG和cyaA基因的报告质粒pJAA,并用已鉴定为Ⅲ型效应物的XC_1553启动子区信号区验证该报告质... 通过免疫检测的方法鉴定十字花科黑腐病菌(Xcc)Ⅲ型效应物的分泌和转运,将cyaA基因克隆至带有3×FLAG的pJXG载体上,构建带有3×FLAG和cyaA基因的报告质粒pJAA,并用已鉴定为Ⅲ型效应物的XC_1553启动子区信号区验证该报告质粒。将pJAA1553三亲导入Xcc 8004^*和8004^*ΔhrcV,然后通过Western blotting免疫检测XC_1553的分泌,结果在8004^*/pJAA1553的胞外蛋白中检测到了XC_1553的分泌,而在8004^*ΔhrcV/pJAA1553的胞外蛋白中没有检测到XC_1553的分泌。通过免疫反应定量检测8004^*/pJAA1553和8004^*ΔhrcV/pJAA1553侵染后植物体内的cAMP含量,结果发现8004^*/pJAA1553侵染后植物体内的cAMP含量比8004^*ΔhrcV/pJAA1553侵染后植物体内的cAMP含量高15倍。结果表明,报告质粒pJAA能够应用于鉴定十字花科黑腐病菌的Ⅲ型效应物。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 Ⅲ型效应物 cyaA 3xFLAG pJAA
黄单胞菌葡萄糖转运系统相关基因的敲除及功能分析 预览
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作者 马辰 梁如冰 刘建华 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期100-104,共5页
分别敲除了植物病原体野油菜黄单胞菌( Xanthomonas campestris pv.campestris 8004)的3个葡萄糖转运蛋白和2个葡萄糖脱氢酶,获得了5株相应基因敲除的突变体。在营养丰富的培养基中,这5株突变体的生长曲线、胞外纤维素酶活性和胞... 分别敲除了植物病原体野油菜黄单胞菌( Xanthomonas campestris pv.campestris 8004)的3个葡萄糖转运蛋白和2个葡萄糖脱氢酶,获得了5株相应基因敲除的突变体。在营养丰富的培养基中,这5株突变体的生长曲线、胞外纤维素酶活性和胞外多糖量与野生型相比并无显著差异。在以葡萄糖为唯一碳源的M63培养基中,XC_2460基因的敲除显著影响了黄单胞菌的生长;在以CMC作为唯一碳源的M63培养基中, XC_2460基因的敲除使突变体的胞外葡萄糖累积量达到野生菌株的1.67倍。这些结果首次显示阻遏葡萄糖的跨膜转运是改进纤维素分解菌株积累葡萄糖量的有益途径。 展开更多
关键词 野油菜黄单胞菌 葡萄糖转运蛋白 基因敲除 分析功能
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