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人肠道病毒71型及柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白的真核表达 预览
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作者 徐晓园 李文丽 +1 位作者 徐岚 李蕊 《癌变.畸变.突变》 CAS 2020年第1期43-46,51,共5页
目的:克隆人肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CA16)的VP1蛋白编码基因,构建相应真核表达质粒在体外进行重组表达,检测其细胞内定位,为EV71及CA16的疫苗研究提供基础。方法:通过PCR扩增分别获取EV71及CA16的VP1编码序列,插入pcFla... 目的:克隆人肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CA16)的VP1蛋白编码基因,构建相应真核表达质粒在体外进行重组表达,检测其细胞内定位,为EV71及CA16的疫苗研究提供基础。方法:通过PCR扩增分别获取EV71及CA16的VP1编码序列,插入pcFlag载体,分别构建EV71及CA16 VP1与FLAG标签融合的真核表达质粒;瞬时转染人胚肾293T细胞及横纹肌肉瘤RD细胞,Western blot法检测融合蛋白的表达,免疫荧光检测融合蛋白的细胞内定位情况。结果:测序表明两种来源VP1蛋白的重组表达质粒构建正确;分别转染两种不同的细胞后,均可通过Western blot检测到相应蛋白表达;免疫荧光检测显示两种毒株的VP1均表达在细胞质中。结论:外源融合表达EV71或CA16 VP1蛋白的真核表达质粒构建成功;所构建质粒分别转染细胞后,均可在细胞质内检测到VP1融合蛋白的表达。 展开更多
关键词 肠道病毒 EV71 柯萨奇病毒 VP1 真核表达
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柯萨奇病毒B组4型VP1蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立
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作者 张伟伟 周宏 +2 位作者 李娟 张振杰 史卫峰 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期303-308,共6页
目的 以柯萨奇病毒B组4型(Coxsackievirus B4,CV-B4)VP1基因的原核表达蛋白作为包被抗原,建立并优化间接ELISA方法,用于CV-B4的抗体检测.方法 采用RT-PCR技术扩增CV-B4病毒VP1基因,构建重组表达载体pET-32VP1,并转化至表达菌株大肠埃希... 目的 以柯萨奇病毒B组4型(Coxsackievirus B4,CV-B4)VP1基因的原核表达蛋白作为包被抗原,建立并优化间接ELISA方法,用于CV-B4的抗体检测.方法 采用RT-PCR技术扩增CV-B4病毒VP1基因,构建重组表达载体pET-32VP1,并转化至表达菌株大肠埃希菌Rosetta(DE3),进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和蛋白质谱鉴定目的蛋白成功表达.以纯化的重组蛋白为包被抗原,进行间接ELISA方法反应体系的建立和条件优化.结果 CV-B4的VP1基因可在大肠埃希菌中以包涵体形式稳定表达,确定抗体间接ELISA检测方法的抗原最佳包被浓度为7.5μg/孔,血清最佳稀释浓度为1:100,临界值为OD450值≥0.376,重组蛋白可与CV-B4阳性血清特异识别,与CV-B3阳性血清存在一定交叉反应,但与柯萨奇A组病毒以及CV-B1和CV-B5均无反应,表明蛋白具有良好的免疫原性.结论 大肠埃希菌表达的VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,可用于CV-B4血清抗体的检测. 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B组4型 VP1 原核表达 间接ELISA
2017—2018年山东省猪口蹄疫免疫效果评估 预览
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作者 曹龙龙 刘照虎 +3 位作者 孟凡亮 李焱 焦秋林 刘蒙达 《中国动物检疫》 CAS 2019年第12期12-16,共5页
为了解山东省猪群口蹄疫免疫状况,评估疫苗免疫效果,2017—2018年对全省135家规模化猪场,随机采集血液并分离血清,通过ELISA方法检测猪O型口蹄疫抗体和猪口蹄疫结构蛋白VP1抗体。结果显示:2017—2018年,无疫区内的合格率分别为96.03%、9... 为了解山东省猪群口蹄疫免疫状况,评估疫苗免疫效果,2017—2018年对全省135家规模化猪场,随机采集血液并分离血清,通过ELISA方法检测猪O型口蹄疫抗体和猪口蹄疫结构蛋白VP1抗体。结果显示:2017—2018年,无疫区内的合格率分别为96.03%、94.80%,其余地区的O型抗体合格率分别为78.24%、81.88%,均达到了农业农村部要求的70%以上的标准;聊城和济宁等地区的猪O型口蹄疫抗体水平最低,平均阳性率分别为64.68%和63.5%;各类型养殖场中,种猪场合格率最高,分别为90.73%和88.00%,散养户最低,合格率分别为68.80%和66.88%。2017—2018年,VP1抗体合格率分别为87.9%、84.9%,达到了70%以上的标准。结果表明,山东省猪口蹄疫免疫效果整体较好,说明强制免疫工作达到了预期效果,但散养户和部分地区猪群的免疫水平偏低,需要加强免疫宣传和培训,调整优化免疫程序,加大监测督查力度,实施疫苗的科学免疫,从而全面提高猪群免疫抗体水平。 展开更多
关键词 口蹄疫 免疫 抗体水平 VP1 山东
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猪A型塞内卡病毒分离鉴定及其VP1基因变异分析 预览
4
作者 李秀博 刘存 +3 位作者 崔玉东 梁琳 张建伟 崔尚金 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1747-1752,共6页
2017年7月,南方某猪场发生不明病原引起的猪水疱性疾病。为了确诊本次水疱性疾病的病因及了解病原的遗传演化关系,笔者通过RT-PCR方法对引起该场水疱性疾病的病原进行检测,利用BHK21细胞分离病毒,RT-PCR、电镜观察等方法对分离病毒进行... 2017年7月,南方某猪场发生不明病原引起的猪水疱性疾病。为了确诊本次水疱性疾病的病因及了解病原的遗传演化关系,笔者通过RT-PCR方法对引起该场水疱性疾病的病原进行检测,利用BHK21细胞分离病毒,RT-PCR、电镜观察等方法对分离病毒进行鉴定,同时对其主要的抗原基因VP1进行比对分析。RT-PCR检测结果表明导致该猪场发生水疱性疾病的病原为A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA),将利用BHK21细胞分离并经鉴定的病毒命名为CH/FuJ1/2017株。同源性分析结果显示,CH/FuJ1/2017株与报道的SVV-001株的相似性最低,与分离自美国的USA-GBI29-2015株的相似性最高。基于SVA VP1基因氨基酸序列的分析结果表明,SVA分离株形成一个独立的小分支,与SVV-001株相比,SVA分离株在VP1蛋白的59、62、63、93、97、172位氨基酸存在突变,且位于VP1蛋白的B-C环上和CD-Ⅱ环上,这可能与SVA的细胞嗜性改变有关。综上表明我国SVA分离株具有遗传多样性,部分国内分离株与国外SVA分离株间具有密切的相关性。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 分离 VP1 遗传演化
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猫杯状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 预览
5
作者 孟凯闻 朱文壮 +3 位作者 张迪 金艺鹏 林德贵 孟赓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期36-39,共4页
将构建的猫杯状病毒(Feline Calicivirus,FCV)衣壳蛋白VP1重组表达质粒转化感受态细胞,以表达的FCV-VP1蛋白作为包被抗原,以酶标记的兔抗猫IgG作为二抗,建立检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA检测方法。确定了最佳封闭液、最佳血清稀释液... 将构建的猫杯状病毒(Feline Calicivirus,FCV)衣壳蛋白VP1重组表达质粒转化感受态细胞,以表达的FCV-VP1蛋白作为包被抗原,以酶标记的兔抗猫IgG作为二抗,建立检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA检测方法。确定了最佳封闭液、最佳血清稀释液、最佳酶标二抗稀释液,当酶标记的兔抗猫IgG效价为1∶20 000时可以检出猫杯状病毒血清抗体。利用本实验室建立的检测方法对收集的96份临床血清进行检测,结果表明96份猫血清中检测出40份阳性。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 VP1 抗体 间接ELISA方法
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2018年Cox-A6感染性手足口病住院患儿82例临床特征和病原学分析 预览
6
作者 麦庆锋 吴梓坤 +3 位作者 柴慧颖 程欢 杨笑涵 刘攀 《广东医学》 CAS 2019年第13期1884-1888,共5页
目的了解2018年柯萨奇A6(Cox-A6)感染性手足口病(HFMD)住院患儿的临床和病原学特征。方法分析2018年82例Cox-A6感染性HFMD住院患儿的临床和实验室资料,并构建Cox-A6分子进化树。结果82例患儿年龄(18.6±9.8)个月,男性占64.6%(53/82... 目的了解2018年柯萨奇A6(Cox-A6)感染性手足口病(HFMD)住院患儿的临床和病原学特征。方法分析2018年82例Cox-A6感染性HFMD住院患儿的临床和实验室资料,并构建Cox-A6分子进化树。结果82例患儿年龄(18.6±9.8)个月,男性占64.6%(53/82)。主要临床症状包括皮疹(100%)、高热(75.6%)、咳嗽(54.9%)、扁桃体肿大(45.1%)、纳差(23.2%)、呕吐(29.3%)等。重症HFMD患儿11例(13.4%),7例(8.5%)确诊为病毒性脑炎,3例(3.7%)存在肺水肿。实验室指标主要以白细胞(WBC)、血小板(PLT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)升高为主。分子进化树显示12株Cox-A6均属于E2亚群,与2017年云南、广东和广西地区分离的毒株具有高度同源性。结论2018年Cox-A6感染性HFMD住院患儿的主要临床特征为年龄小、高热、皮疹,伴随扁桃体肿大、咳嗽、呕吐、惊厥等;部分Cox-A6感染患儿出现肺水肿等重症HFMD表现;E2亚群是Cox-A6的流行优势株。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A6 手足口病 临床特征 实验室特征 衣壳蛋白VP1
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玉米穗发芽突变体vp-like8的遗传分析及突变基因鉴定 预览
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作者 王瑞 陈阳松 +3 位作者 孙明昊 张秀艳 杜依聪 郑军 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期656-661,共6页
玉米突变体vp-like8具有明显的穗发芽性状且能稳定遗传,遗传分析表明该突变性状受隐性单基因控制。用vp-like8与自交系郑58杂交构建F2遗传定位群体,利用BSR-Seq方法,将基因初定在玉米第3染色体160.4 Mb~165.6Mb区间内。参考玉米基因组信... 玉米突变体vp-like8具有明显的穗发芽性状且能稳定遗传,遗传分析表明该突变性状受隐性单基因控制。用vp-like8与自交系郑58杂交构建F2遗传定位群体,利用BSR-Seq方法,将基因初定在玉米第3染色体160.4 Mb~165.6Mb区间内。参考玉米基因组信息,发现已报道的穗发芽基因Vp1位于此定位区间内。分别利用vp1、vp-like8的杂合突变体进行等位测验,发现杂交后代中正常与穗发芽籽粒符合3∶1遗传分离比。经序列分析,发现vp-like8突变体中Vp1基因在第2内含子有343 bp碱基的缺失,且第3内含子有222 bp重复序列的插入,而已报道的vp1突变体只在第2个内含子有343 bp碱基的缺失。通过实时定量PCR检测发现,与正常籽粒相比,vp-like8与Vp1突变籽粒中Vp1基因的转录水平均明显降低。以上证据表明,vp-like8是一个新的Vp1基因等位突变体。 展开更多
关键词 玉米 穗发芽 突变体 VP1 基因定位
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青岛市埃可病毒6型相关重症手足口病及疱疹性咽峡炎临床表现及病毒VP1区遗传进化分析
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作者 李国平 王伟栋 +4 位作者 柴青 宫金伶 苏志磊 赵丹 史晓燕 《中国病毒病杂志》 CAS 2019年第3期209-213,共5页
目的了解青岛市埃可病毒6型(ECHO6)所致重症手足口病及疱疹性咽峡炎的临床特点及病毒基因特征。方法对2014年青岛市手足口病哨点1 727例手足口病及48例疱疹性咽峡炎患者的咽拭子标本进行肠道病毒检测,非EV-A71、非CV-A16咽拭子标本在RD... 目的了解青岛市埃可病毒6型(ECHO6)所致重症手足口病及疱疹性咽峡炎的临床特点及病毒基因特征。方法对2014年青岛市手足口病哨点1 727例手足口病及48例疱疹性咽峡炎患者的咽拭子标本进行肠道病毒检测,非EV-A71、非CV-A16咽拭子标本在RD及Hep-2细胞中进行毒株分离,半巢式反转录PCR扩增肠道病毒部分VP1序列,结合序列分析鉴定ECHO6毒株,对分离到的ECHO6毒株进行VP1编码区全长核苷酸序列测定,以Mega 7.0软件进行遗传进化及分子特征分析并分析相关病例的临床特征。结果共获得2株重症手足口病相关ECHO6毒株及1株疱疹性咽峡炎相关的ECHO6毒株VP1序列,2例手足口病重症病例均表现出高热、手、足、口腔部位皮疹和中枢神经系统受累症状。ECHO6青岛株VP1区核苷酸同源性为96.4%~97.6%,同属于D基因型D9亚型D9c分支,与2014年山东省无菌性脑膜炎病原中ECHO6毒株遗传关系密切。结论 ECHO6能引起中枢神经系统受累型重症手足口病,导致青岛市重症手足口病及疱疹性咽峡炎的ECHO6基因型属于D基因型D9亚型的D9c分支。 展开更多
关键词 埃可病毒6型 手足口病重症 疱疹性咽峡炎 VP1 遗传进化分析
Nebovirus的分子检测及VP1基因遗传演化分析 预览
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作者 颜超跃 艾梦燕 汤承 《兽医导刊》 2019年第12期221-223,共3页
Nebovirus(NeV)是国内新发的致犊牛腹泻病毒,本实验的目的是对某奶牛场犊牛腹泻样本进行NeV的检测.采用RT-PCR方法对辽宁某牛场的20份奶牛腹泻粪便进行检测,并对阳性样本进行完整VP1基因的克隆.结果显示,从20份样本中检出13份NeV阳性,... Nebovirus(NeV)是国内新发的致犊牛腹泻病毒,本实验的目的是对某奶牛场犊牛腹泻样本进行NeV的检测.采用RT-PCR方法对辽宁某牛场的20份奶牛腹泻粪便进行检测,并对阳性样本进行完整VP1基因的克隆.结果显示,从20份样本中检出13份NeV阳性,检出率为65.0%;获得的3个完整VP1基因序列,其长度均为1,650 bp,与GenBank中登陆的国内NeV VP1基因核苷酸相似性和氨基酸相似性分别为82.3%~95.6%和92.3~98.9%;完整VP1蛋白的遗传进化分析显示这3株NeV毒株均属于基因1型谱系1,与国内基因1型谱系1毒株显示一定的遗传距离.本结果丰富了国内牛NeV VP1基因信息,也为该牛场犊牛腹泻的防控提供了参考. 展开更多
关键词 Nebovirus RT-PCR VP1 遗传进化
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基于O型口蹄疫病毒VP21-33肽段增强VP1141-160肽段免疫原性的新型纳米颗粒疫苗研究 预览 被引量:1
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作者 付丽新 唐冬梅 +3 位作者 周彪 刘香易 罗又才 严亨秀 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期689-696,共8页
的 研究O型口蹄疫病毒中VP21-33肽段能否增强VP1141-160肽段的免疫原性及其可能的免疫机制。方法 分别构建两种新的含有VP1和VP2的重组质粒 (PcDNA3.1-VP1、PcDNA3.1-VP2),并将重组质粒制备成纳米颗粒,检测其体外转染效率。然后将上... 的 研究O型口蹄疫病毒中VP21-33肽段能否增强VP1141-160肽段的免疫原性及其可能的免疫机制。方法 分别构建两种新的含有VP1和VP2的重组质粒 (PcDNA3.1-VP1、PcDNA3.1-VP2),并将重组质粒制备成纳米颗粒,检测其体外转染效率。然后将上述纳米颗粒作为基因疫苗免疫Balb/c小鼠,PBS及空载质粒作为对照。液相阻断ELISA方法检测不同时间小鼠血清中抗体情况;流式细胞术和免疫组化染色的方法分析免疫小鼠外周血、脾脏和腹股沟淋巴结中CD4+、CD8+ T淋巴细胞的差异;淋巴细胞增殖实验检测免疫28 d后小鼠外周血中淋巴细胞的增殖能力。结果 对重组质粒进行鉴定,结果显示重组质粒(PcDNA3.1-VP1、PcDNA3.1-VP2)构建成功;体外转染实验结果显示该纳米颗粒体外转染效率约为28%,具有较高的转染效率。ELISA检测显示VP1与VP2共同免疫小鼠血清中的抗体滴度均在初次免疫后的第21和28 d达到最高,并显著高于对照组(F=4.625,P〈0.05);流式和免疫组化染色结果分析发现VP1与VP2共同免疫小鼠血液、淋巴结和脾脏中CD4+、CD8+ T淋巴细胞数均显著高于对照组;淋巴细胞增殖实验结果显示VP1与VP2共同免疫小鼠淋巴细胞增殖能力均显著高于对照组(F=12.73, P〈0.05)。结论 O型FMDV VP2的1-33肽段能增强VP1的141-160肽段的免疫原性,其可能通过激活细胞免疫和体液免疫实现。 展开更多
关键词 口蹄疫 钠米颗粒 VP1 VP2 基因疫苗
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柯萨奇病毒A6型VP1和VP2基因的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 陈静 李鹏飞 +3 位作者 吴杰 孟胜利 申硕 王泽鋆 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期640-645,共6页
目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virusA6,CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备抗CVA6VP1和VP2兔抗血清。方法逆转录PCR扩增CVA6VP1和VP2基因片段,整合入表达载体pGEX-6p-1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半... 目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virusA6,CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备抗CVA6VP1和VP2兔抗血清。方法逆转录PCR扩增CVA6VP1和VP2基因片段,整合入表达载体pGEX-6p-1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,经过大型SDS-PAGE制备电泳并进行切胶回收纯化,纯化后的融合蛋白GST-VP1和GST-VP2分别免疫家兔,获得兔抗血清。Westernblot(WB)和间接免疫荧光试验(indirectimmunofluorescence assay,IFA)鉴定抗体。结果CVA6VP1和VP2原核表达载体经PCR、双酶切和测序鉴定正确,获得了高纯度的CVA6VP1和VP2融合蛋白,WB和IFA鉴定多克隆抗体制备成功。结论成功构建了CVA6VP1和VP2原核表达载体,获得了重组的CVA6VP1和VP2蛋白及其多克隆抗体。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A6型 VP1 VP2 原核表达 多克隆抗体
2013~2014年山东省4株柯萨奇B4型分离株遗传分析 被引量:1
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作者 王敏 韦庆娟 +6 位作者 李娟 江新泉 张振杰 童贻刚 丁淑军 王显军 史卫峰 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期22-29,共8页
尽管柯萨奇病毒B4(Coxsackievirus B4,CVB4)分离率不高,但是在我国引起儿童脑炎的病例屡屡报道。目前人们对CVB4基因组的遗传变异了解并不多,GenBank公共数据库仅仅存储有20几个CVB4全基因组序列,分离自我国的CVB4基因组序列不足10条... 尽管柯萨奇病毒B4(Coxsackievirus B4,CVB4)分离率不高,但是在我国引起儿童脑炎的病例屡屡报道。目前人们对CVB4基因组的遗传变异了解并不多,GenBank公共数据库仅仅存储有20几个CVB4全基因组序列,分离自我国的CVB4基因组序列不足10条。本研究对2013~2014年山东省分离的4株CVB4阳性样本进行高通量测序,测得其全基因组序列,利用Mega 5.1对CVB4型毒株全基因组及VP1片段进行系统发生及同源性分析,用RDP3和SimPlot 3.5.1软件进行基因重组分析。结果显示这4株病毒为柯萨奇病毒B4(Coxsackievirus B4,CVB4)型,全基因组序列长度分别为7 372bp、7 389bp、7 389bp和7 391bp,核苷酸同源性为97.1%~99.9%,氨基酸同源性为98.5%~99.9%。与2013年温州CVB4分离株CVB4/P11/2013/China(GenBank登录号:KP289433)分离株同源性最高,核苷酸及氨基酸同源性分别为97.1%~98.3%和98.6%~99.4%。对VP1基因进行系统发育树分析表明,VP1基因可划分成5个基因型,基因型内部序列距离小于15%,而基因型间距离均大于15%。另外,4株CVB4分离株VP1的进化关系较近,同近年来国内其他分离株单成一簇,属于基因型V分支。经RDP3和SimPlot 3.5.1软件分析发现,这四个CVB4分离株均发生了基因重组,分离株SDJN/CHN/2013可能发生了两次基因重组。综上,这4个CVB4分离株基因组高度相似,均位于基因型V分支,且基因组发生了基因重组。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B4型(CVB4) 系统发育分析 VP1 基因重组
2014年-2015年淮南市手足口病EV71型病毒分离株VP1基因特征分析 被引量:1
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作者 曾凡荣 史永林 +2 位作者 刘江 余寿杰 魏志军 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第7期816-818,共3页
目的了解淮南市手足口病EV71型病毒分离株VP1基因遗传特征及进化关系。方法使用RD细胞对EV71型荧光PCR阳性标本进行病毒分离,盲传2代接种出现CPE后,收集培养物上清,提取病毒RNA,RT-PCR扩增VP1基因,对扩增产物进行基因序列测定,采用DNASt... 目的了解淮南市手足口病EV71型病毒分离株VP1基因遗传特征及进化关系。方法使用RD细胞对EV71型荧光PCR阳性标本进行病毒分离,盲传2代接种出现CPE后,收集培养物上清,提取病毒RNA,RT-PCR扩增VP1基因,对扩增产物进行基因序列测定,采用DNAStar 7.1和Mega 5.0软件对测序结果与国内外参考毒株进行基因亲缘性进化分析。结果 7株毒株基因测序显示VP1区核苷酸长度均为891 nt,其核苷酸同源性为93.5%-100%,氨基酸同源性为98.3%-100%;基因进化分析显示,与安徽阜阳、山东、河南EV71型毒株亲缘性较近,处于同一进化C4a分支。结论淮南市分离到的7株EV71型病毒VP1区基因核苷酸和氨基酸序列变异较小,与阜阳、山东、河南流行的C4a亚型存在共循环流行。 展开更多
关键词 手足口病 EV71 VP1 PCR
肝片吸虫Fh8标签融合表达口蹄疫O型病毒结构蛋白
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作者 孙小涵 张雪寒 +2 位作者 张碧成 张强 何孔旺 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期727-730,共4页
口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的结构蛋白VP1难以实现体外的高效表达。本研究为获得良好免疫原性的VP1蛋白,选用肝片吸虫Fh8小肽段作为新型融合表达标签,构建重组Fh8-VP1免疫原,以期获得大肠杆菌中的高效表达。... 口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的结构蛋白VP1难以实现体外的高效表达。本研究为获得良好免疫原性的VP1蛋白,选用肝片吸虫Fh8小肽段作为新型融合表达标签,构建重组Fh8-VP1免疫原,以期获得大肠杆菌中的高效表达。分别合成VP1的20440aa和129~169aa之间的核苷酸片段,并用2个甘氨酸(GG)连接2个片段,合成的核苷酸片段(△VP1)克隆入Fh8标签之后,构建重组菌BL21(DE3)/pCold I—Fh8-△VP1,SDS-PAGE分析蛋白表达形式,Westernblot方法检测重组His—Fh8-△VP1的抗原性。结果显示,成功构建重组质粒BL21(DE3)/pCold I—Fh8-△VP1,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,且以包涵体形式存在于菌体蛋白,可与猪源FMDV阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1 肝片吸虫Fh8 可溶性表达
非致病大肠杆菌鞭毛与O型FMDV结构蛋白VP1嵌合体的免疫效力评估
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作者 葛东红 孙小涵 +3 位作者 郭芸芸 张碧成 王警 张雪寒 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第12期96-99,共4页
为探讨以非致病性大肠杆菌鞭毛蛋白为载体展示口蹄疫病毒(FMDV) VP1蛋白嵌合体(Fn-VP1-Fc)的免疫效力为目的,筛选2月龄FMDV阴性仔猪,颈部肌肉注射,分别于免疫前、免疫后第14、28和60天采集血清,用液相阻断ELISA (LPB-ELISA)测定IgG滴度... 为探讨以非致病性大肠杆菌鞭毛蛋白为载体展示口蹄疫病毒(FMDV) VP1蛋白嵌合体(Fn-VP1-Fc)的免疫效力为目的,筛选2月龄FMDV阴性仔猪,颈部肌肉注射,分别于免疫前、免疫后第14、28和60天采集血清,用液相阻断ELISA (LPB-ELISA)测定IgG滴度。分别于免疫前和免疫后第28天,采集鼻腔拭子和肛拭子,间接ELISA测定IgA滴度。结果显示,疫苗接种第14天,免疫Fn-VP1-Fc疫苗产生了可以检测到的FMDV特异性抗体;第28和60天,FMDV特异性抗体持续升高;第60天,产生了可以检测到的特异性IgA,部分猪只滴度可达1∶160,而对照疫苗未检测到IgA。结果表明,Fn-VP1-Fc嵌合免疫原不仅能促进FMDV全身特异性抗体产生,也在一定程度上促进局部IgA分泌。 展开更多
关键词 大肠杆菌鞭毛 口蹄疫病毒 VP1 免疫原性
柯萨奇病毒A组16型病毒株VP1基因序列测定及进化分析研究 预览
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作者 李小平 吴亦栋 +3 位作者 周俊 周林福 樊凯 钱苗苗 《中国全科医学》 北大核心 2018年第5期546-550,共5页
目的 通过检测分析2015年杭州市柯萨奇病毒A组16型(CA16)病毒株VP1区核苷酸序列,掌握杭州市CA16的流行情况及种系进化关系,为手足口病的预防和治疗提供支持,同时为CA16疫苗株的选择提供依据。方法 收集2015年杭州市儿童医院256例临床资... 目的 通过检测分析2015年杭州市柯萨奇病毒A组16型(CA16)病毒株VP1区核苷酸序列,掌握杭州市CA16的流行情况及种系进化关系,为手足口病的预防和治疗提供支持,同时为CA16疫苗株的选择提供依据。方法 收集2015年杭州市儿童医院256例临床资料齐全且临床诊断为手足口病患儿的粪便或咽拭子,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增CA16病毒株VP1区核苷酸序列(约1 020 bp),测序后利用DNASTAR和Primer Premier 5.0进行序列比对分析,并用Mega 3.1软件建立检测样本VP1区序列与GenBank上CA16参考毒株VP1核苷酸序列的系统发育树。结果 共分离到80株CA16阳性病毒。序列比对分析结果显示,CA16分离株的核苷酸同源性为90.8%~100.0%,氨基酸同源性为99.5%~100.0%。系统发育树分析结果显示,17株CA16全部属于B1基因亚型,并且同时存在B1a和B1b两个进化分支,其中4株属于B1a亚型,13株属于B1b亚型。结论 2015年杭州市CA16病毒株属于B1基因亚型,与国内外某些地区手足口病病原学及分子进化研究结果一致,有望成为疫苗候选株作进一步研究。 展开更多
关键词 手足口病 柯萨奇病毒感染 柯萨奇病毒A组16型 VP1 系统进化分析
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Insertion site of FLAG on foot-and-mouth disease virus VP1 G-H loop affects immunogenicity of FLAG 预览
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作者 ZHU Yuan-yuan ZOU Xing-qi +5 位作者 BAO Hui-fang SUN PU MA Xue-qing LIU Zai-xin FAN Hong-jie ZHAO Qi-zu 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第7期1655-1666,共12页
关键词 病毒 旗帜 地点 疾病 VP1 FMDV 循环 BALB/C
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口蹄疫病毒O型抗体直接竞争ELISA检测方法研究 预览
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作者 张杰 苗银萍 +2 位作者 娄亚坤 曾小宇 赵林萍 《畜禽业》 2018年第8期4-5,共2页
目的建立一种敏感、特异、快速的O型口蹄疫病毒抗体检测方法。方法以O型口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1和HRP标记VP1兔抗血清为原料,通过方阵滴定试验确定ELISA的反应条件以及阈值,建立直接竞争ELISA检测方法 ,并运用该方法检测已知临床阴阳性... 目的建立一种敏感、特异、快速的O型口蹄疫病毒抗体检测方法。方法以O型口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1和HRP标记VP1兔抗血清为原料,通过方阵滴定试验确定ELISA的反应条件以及阈值,建立直接竞争ELISA检测方法 ,并运用该方法检测已知临床阴阳性样品。结果 VP1抗原包被浓度为50ng/μL;HRP标记抗血清工作浓度为1:2000;抑制率大于30%为阳性,抑制率小于30%为阴性;检测120阳性临床血清,阳性检出率为90.8%;检测120份阴性临床血清,阴性检出率为93.3%。结论研究建立的直接竞争ELISA方法操作简单,能够用于检测口蹄疫病毒O型抗体VP1抗体。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1 直接竞争 ELISA
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siRNA干扰EV71病毒VP1基因抑制细胞凋亡的实验研究
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作者 胡小云 李敏燕 +1 位作者 何桂蓉 方红辉 《中华医院感染学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第22期3369-3373,共5页
目的探讨VP1基因小干扰RNA(siRNA)对肠道病毒71型(EV71)诱导细胞凋亡的影响。方法设计、合成靶向EV71病毒VP1基因的siRNA,验证干扰效果;易感非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)干扰后接种EV71病毒,通过细胞存活率测定、病毒滴度检测验证沉... 目的探讨VP1基因小干扰RNA(siRNA)对肠道病毒71型(EV71)诱导细胞凋亡的影响。方法设计、合成靶向EV71病毒VP1基因的siRNA,验证干扰效果;易感非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)干扰后接种EV71病毒,通过细胞存活率测定、病毒滴度检测验证沉默VP1基因对病毒感染的抑制作用;Vero细胞干扰后接种EV71病毒,通过流式细胞术检测细胞周期改变及细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,验证细胞凋亡的改变;通过蛋白印迹检测凋亡蛋白,探讨引起凋亡改变的相关通路。结果合成的siRNA干扰效率为73.3%,干扰并接种EV71病毒后,细胞存活率从38.6%增高至76.1%、上清病毒滴度从6.1降低至3.2;VP1干扰组细胞Sub-G1期阻滞从(31.8±4.0)%减轻为(16.9±2.2)%,早期凋亡细胞数从43.01%降低为16.00%,AKT、p38蛋白上调减弱。结论运用siRNA干扰EV71病毒VP1基因表达可通过AKT及p38信号通路抑制细胞凋亡进而抑制病毒感染。 展开更多
关键词 EV71病毒 VP1 siRNA 凋亡 AKT P38
2017年北京市东城区EV-A71和CV-A16分离株VP1基因序列特征分析
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作者 王联君 李艳宇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期505-509,共5页
目的通过分析北京市东城区2017年手足口疑似病例样本中肠道病毒A组71(enterovirus71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievrius A16,CV—A16)毒株VP1基因序列特征,为手足口病的防治提供基础资料。方法利用RT-PCR法对分离得到... 目的通过分析北京市东城区2017年手足口疑似病例样本中肠道病毒A组71(enterovirus71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievrius A16,CV—A16)毒株VP1基因序列特征,为手足口病的防治提供基础资料。方法利用RT-PCR法对分离得到的EV—A71和CV—A16VP1序列进行扩增和测序,利用DNAstar5.0和MEGA6.0软件对EV-A71和CV—A16的VP1序列进行比对分析并构建系统发育树。结果2017年东城区共检测手足口疑似病例咽拭子95份,肠道病毒阳性46份(占48.42%);其中EV—A71阳性4份(占4.21%),CV—A16阳性4份(占4.21%),非EV-A71非CV-A16的其他肠道病毒阳性38份(占40.00%)。4株EV-A71分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.89%-99.15%和97.32%~98.66%;3株CV—A16分离株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.90%~98.76%和98.32%~100.00%。系统进化树显示4株EV—A71属于C4a基因亚型,3株CV—A16属于B1b基因亚型。结论北京市东城区2017年引起手足口病的病原主要以非EV—A71非CV—A16的其他肠道病毒为主,但是EV—A71和CV—A16仍占一定比例。EV—A71毒株属于C4a基因亚型;CV-A16毒株属于B1b基因亚型;与近年来中国大部分地区毒株的基因分型一致;没有检测到新亚型。 展开更多
关键词 ENTEROVIRUS 71 Coxsackievrius A16 VPl基因 进化分析
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