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Alanine-substituted mutant on Gly^373 and Asn^375 of Cry1Ai-h-loop 2 causes reduction in both toxicity and binding against Helicoverpa armigera 预览
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作者 LIU Yu-xiao ZHOU Zi-shan +2 位作者 LIANG Ge-mei SONG Fu-ping ZHANG Jie 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第5期1064-1071,共8页
Cry1Ai-h-loop 2 is a mutant of Cry1Ai constructed by exchanging loop 2 from Cry1Ah protein and shows insecticidal activity against Helicoverpa armigera. The toxicity of Cry1 Ai-h-loop 2, in contrast to the very low to... Cry1Ai-h-loop 2 is a mutant of Cry1Ai constructed by exchanging loop 2 from Cry1Ah protein and shows insecticidal activity against Helicoverpa armigera. The toxicity of Cry1 Ai-h-loop 2, in contrast to the very low toxicity of Cry1Ai, is closely associated with the eleven residues in the loop 2 region. To characterize the key sites of loop 2 in Cry1Ai-h-loop 2, alaninesubstituted mutants were generated. The toxicity of these mutants against H. armigera indicated that dual-mutant on Gly^373 and Asn^375 caused a significant decrease in toxic activity. ELISA binding and competition binding assays demonstrated that the reduction of toxicity in the mutant of interest was correlated with decreased binding affinity. 展开更多
关键词 Bacillus THURINGIENSIS Cry1Ai Domain Ⅱ-loop2 HELICOVERPA ARMIGERA BINDING affinity
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Effects of AOS on Bt’s Adhesion Amount on Vegetable Leaves and Its Insecticidal Effect 预览
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作者 Airan CHEN Yinghao MA Dayong JIN 《农业生物技术:英文版》 CAS 2019年第2期235-237,共3页
[Objectives] This study was conducted to investigate the safety of surfactants AOS and Tween 80 on Bt and their effects on Bt’s adhesion amount on crop leaves and its field efficacy.[Methods] Certain concentrations o... [Objectives] This study was conducted to investigate the safety of surfactants AOS and Tween 80 on Bt and their effects on Bt’s adhesion amount on crop leaves and its field efficacy.[Methods] Certain concentrations of AOS and Tween 80 were added to Bt liquid to check the effects of the surfactants on Bt spore germination, the adhesion amount of Bt on vegetable leaves and the field efficacy on beet armyworm.[Results] After treatment with surfactants AOS and Tween 80, Bt spores germinated normally. After adding AOS, the adhesion amounts of Bt spores on scallion, kohlrabi, radish and Chinese cabbage leaves were 209.75, 249.00, 274.00 and 281.75, respectively, which was 3.8, 2.2, 2.0 and 1.6 times higher than the CK. After adding Tween 80, the adhesion amounts of Bt spores on scallion, kohlrabi, radish and Chinese cabbage leaves were 198.25, 203.25, 233.00 and 236.75, respectively, which were 3.6, 1.8, 1.7 and 1.4 times higher than the CK, respectively. The average field insecticidal effect of the Bt liquid reached 81.3% and 79.5% after the addition of surfactants AOS and Tween 80, respectively, while the average insecticidal effect of the CK without the addition of a surfactant was only 53.3%, which was remarkably lower than above two values.[Conclusions] Surfactants AOS and Tween 80 are safe for Bt;and the addition of surfactants AOS and Tween 80 significantly increased the amount of Bt attached to vegetable leaves, and significantly improved the control efficacy of pests on plants rich in cuticle. 展开更多
关键词 Bacillus THURINGIENSIS Surfactant Alpha OLEFINE SULFONATE ADHESION AMOUNT Control efficacy
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Geographical Distribution of Bacillus thuringiensis Strains and vip3 Genes in Different Climatic Zones in China 预览
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作者 Luo Guo-xing Liu Zhi-yang +3 位作者 Li Shuai Zhang Jin-bo Gao Ji-guo Zhang Jie 《东北农业大学学报:英文版》 CAS 2017年第4期61-68,共8页
Vegetative Insecticidal Proteins (VIPs), a large family of insecticidal proteins, are produced from Bacillus thuringiensis (Bt) during the vegetative growth stage. VIPs represent the second generation of bio-insectici... Vegetative Insecticidal Proteins (VIPs), a large family of insecticidal proteins, are produced from Bacillus thuringiensis (Bt) during the vegetative growth stage. VIPs represent the second generation of bio-insecticides that confer a wider insecticidal spectrum and have stronger activity. This work compared the geographical distribution of Bt strains and their vip3 genes in different climatic zones in China, the tropical (Hainan Province), subtropical (Guangxi Province) and temperate zones (Heilongjiang Province). A total of 156 Bt strains were isolated from 841 soil samples in Hainan Province tropical region, 356 Bt strains from 1 420 soil samples in Guangxi Province and 167 Bt strains from 1 010 soil samples in different geographical regions in Heilongjiang Province. Twenty-two out of 156 strains from tropical Hainan Province and two out of 356 from subtropical Guangxi Province were found to express vip3 genes, while vip3 genes were not expressed from temperate zone in Heilongjiang Province. Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) was used to identify different types of vip3 genes that were within the same family and three fulllength vip3 genes were isolated. The genes cloned from Bacillus thuringiensis strain SL3 expressed in the transformed E. coli BL21 strain. Through SDS-PAGE, 88.6 ku insecticidal protein was expressed. The bioassays used two-instar larva of Lepidoptera insects (Spodoptera exigua and Agrotis ipsilon) were performed. The results of the bioassays showed that the protein strongly inhibited the body weight increasement on Spodoptera exigua and Agrotis ipsilon in a standard bioassay. Taken together, the results indicated thatthe distribution of Bt strains and vip3 genes had regional preference. Tropical and subtropical regions were the rich resources of Bt strains and vip3 genes compared with temperate region. These results would undoubtedly facilitate the studies of insecticidal proteins and expand the list of the pest-killing candidates to make fully use of the extremely rich microbia 展开更多
关键词 BACILLUS THURINGIENSIS vip3 gene identification climate INSECT BIOASSAY
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苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白研究综述
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作者 黎娅 《武汉生物工程学院学报》 2012年第1期11-17,共7页
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)伴孢晶体因具有杀虫作用而受到关注。但由于其生物制剂及相关转基因植物的广泛利用,导致害虫对其产生抗性。对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的结构功能、作用机理及产生抗性的机制进行综述,分析了目前... 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)伴孢晶体因具有杀虫作用而受到关注。但由于其生物制剂及相关转基因植物的广泛利用,导致害虫对其产生抗性。对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的结构功能、作用机理及产生抗性的机制进行综述,分析了目前尚存的问题和研究方向。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) 伴孢晶体 杀虫晶体蛋白 抗性
苏云金芽胞杆菌Cry7Ba1晶体蛋白溶解性的改良
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作者 李妮莎 《武汉生物工程学院学报》 2010年第4期239-243,共5页
研究了苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry7Bal的C-端半胱氨酸(Cys)在溶解性改良过程中的作用。本实验通过定点突变将Cry7Bal的C-端834和854位的Cys突变成丝氨酸(Ser),SDS-PAGE和镜检结果表明两个突变体在蛋白表达和晶体形... 研究了苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry7Bal的C-端半胱氨酸(Cys)在溶解性改良过程中的作用。本实验通过定点突变将Cry7Bal的C-端834和854位的Cys突变成丝氨酸(Ser),SDS-PAGE和镜检结果表明两个突变体在蛋白表达和晶体形成方面与Cry7Bal没有显著差别;溶解性实验结果表明C854S可以在pH 11.5时很好地溶解,C834S可以在pH9.5时很好地溶解。本研究通过对Cry7Bal的C-端单个半胱氨酸的突变,提高了Cry7Bal的溶解性。这为恢复Cry7Bal晶体蛋白的杀虫活性提供了可能性,也为这一类由于不能溶解而发挥不出活性的Cry蛋白的应用提供了新的思路。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis Bt) Cry7Bal 晶体蛋白 半胱
利用ubil内含子增强Btcry1Ah基因在转基因玉米中的表达 被引量:7
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作者 王悦冰 郎志宏 +3 位作者 张杰 何康来 宋福平 黄大防 《科学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第17期2041-2046,共6页
Btcry1Ah基因是从国内苏云金芽胞杆菌分离株BT8中鉴定克隆的新型杀虫蛋白基因.本研究构建了两个含有Bt cry1Ah基因的植物表达载体,在其中一个植物表达载体(pUUOAH)的玉米Ubiquitin启动子与cry1Ah基因之间插入了玉米泛素蛋白基因ubiq... Btcry1Ah基因是从国内苏云金芽胞杆菌分离株BT8中鉴定克隆的新型杀虫蛋白基因.本研究构建了两个含有Bt cry1Ah基因的植物表达载体,在其中一个植物表达载体(pUUOAH)的玉米Ubiquitin启动子与cry1Ah基因之间插入了玉米泛素蛋白基因ubiqutinl的第一个内含子(ubil).利用基因枪法将其导入玉米(Zea世隔绝mays L.)胚性愈伤组织中,得到了可育的再生植株.PCR及Southern blot检测结果表明,cry1Ah基因已整合入玉米基因组中,并稳定遗传至下一代.对T1及T2代转基因植株进行ELISA检测,发现pUUOAH载体转基因植株Cry1Ah蛋白的平均表达量提高了20%.对T2代转基因植株进行了田间抗虫性鉴定,发现转cry1Ah基因玉米对玉米螟有很高的抗性,并且pUUOAH载体转基因植株的抗虫性好于pUOAH(无内含子)载体的转基因植株.以上结果表明,玉米ubil内含子可以有效增强cry1Ah在转基因玉米中的表达. 展开更多
关键词 BACILLUS THURINGIENSIS cry1Ah基因 ubil内含子 内含子增强效应 抗虫转基因玉米
转Bt基因作物种植对土壤养分含量的影响 预览 被引量:26
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作者 孙彩霞 张玉兰 +2 位作者 缪璐 陈利军 武志杰 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期 943-946,共4页
转Bt基因棉花和水稻的盆栽种植试验结果表明,与非转Bt基因原始对照相比,转Bt基因水稻短期种植30d和转Bt基因棉花种植一个生长季后土壤中全碳和全氮以及碱解氮、速效磷、有效硫含量与对照均无显著差异,表明转Bt基因作物的种植短期内... 转Bt基因棉花和水稻的盆栽种植试验结果表明,与非转Bt基因原始对照相比,转Bt基因水稻短期种植30d和转Bt基因棉花种植一个生长季后土壤中全碳和全氮以及碱解氮、速效磷、有效硫含量与对照均无显著差异,表明转Bt基因作物的种植短期内对土壤主要营养元素循环和平衡的扰动是微小的. 展开更多
关键词 Bt(Bacillus thuringiensis) 转基因作物 土壤养分
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苏云金杆菌和昆虫杆状病毒增效因子的研究进展 预览 被引量:2
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作者 张慧 匡石滋 王晓容 《仲恺农业技术学院学报》 2006年第2期 61-65,70,共6页
苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)、昆虫杆状病毒作为杀虫剂是害虫生物防治中不可缺少的重要组成部分.文章就如何提高该两种杀虫剂的杀虫效果,从两种生物农药间的混合应用、与化学农药的混合应用、在生物农药中添加其它增效因子3... 苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)、昆虫杆状病毒作为杀虫剂是害虫生物防治中不可缺少的重要组成部分.文章就如何提高该两种杀虫剂的杀虫效果,从两种生物农药间的混合应用、与化学农药的混合应用、在生物农药中添加其它增效因子3个方面,对近年来的研究进展进行了综述,并对研究和应用中存在的问题提出了解决对策. 展开更多
关键词 苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis) 昆虫杆状病毒 增效作用 生物农药
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采取4x-2x杂交从二倍体中把Bacillus thuringiensis cry 3Aa转基因导入四倍体马铃薯:倍数增加对转基因表达的影响和TPS杂种生产的意义 预览
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作者 A.A.T.Johnson 谢国禄 《国外作物育种》 2004年第2期 27,共1页
试验有3个目的:一是表明在第一次分裂恢复就产生非还原配子的二倍体马铃薯基因型中具有重经济意义的转基因;二是采用4x-2x杂交把转基因导入四倍体后代;三是分析倍数增加对四倍体后代中转基因表达的影响。通过非还原配子检测了倍数增... 试验有3个目的:一是表明在第一次分裂恢复就产生非还原配子的二倍体马铃薯基因型中具有重经济意义的转基因;二是采用4x-2x杂交把转基因导入四倍体后代;三是分析倍数增加对四倍体后代中转基因表达的影响。通过非还原配子检测了倍数增加对马 展开更多
关键词 四倍体马铃薯 BACILLUS THURINGIENSIS CRY 3Aa基因 4x-2x杂交 二倍体 转基因 TPS杂种
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一株苏云金亚种的发酵产物对柳蚜3种保护酶活性的影响 预览
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作者 唐箫濛 毛洪波 《中国林副特产》 SCIE 2019年第1期1-4,8共5页
为探究苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis Bt)对蚜虫的生物活性影响及作用方式,以苏云金亚种(Bacillus thuringiensis subsp.thuringiensis)为目的菌株,以发酵产物为材料。利用5种不同浓度的菌液分别喷雾处理柳蚜,72h校正死亡率为29.74... 为探究苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis Bt)对蚜虫的生物活性影响及作用方式,以苏云金亚种(Bacillus thuringiensis subsp.thuringiensis)为目的菌株,以发酵产物为材料。利用5种不同浓度的菌液分别喷雾处理柳蚜,72h校正死亡率为29.74%~78.88%,其浓度与及死亡率呈正相关关系。苏云金杆菌亚种发酵液和发酵液滤液处理柳蚜后,12~24h柳蚜超氧化物歧化酶(SOD)比活力均被抑制,其抑制率分别为21.06%~38.11%和4.69%~36.79%,其中18h、24h对SOD比活力的抑制达显著水平(p<0.05)。发酵液和滤液处理组18h前对柳蚜过氧化氢酶(CAT)比活力的影响总体呈激活趋势,其中发酵液和滤液处理组分别在18h、12h对柳蚜CAT的激活率最高,其CAT比活力分别为对照的1.8890倍和2.9463倍。滤液处理组对柳蚜POD比活力总体呈激活作用,其激活率为14.78%~57.39%;发酵液处理组6h和18hPOD比活力显著高于对照,其他时间点POD比活力与对照无显著差异。 展开更多
关键词 苏云金亚种(Bacillus THURINGIENSIS subsp.thuringiensis) 生物测定 保护酶 酶活
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苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bti)发酵液的浓缩工艺研究 预览
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作者 陈伟 廖先清 +2 位作者 刘芳 饶犇 周荣华 《湖北农业科学》 2019年第22期111-113,共3页
通过对苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis,Bti)发酵液浓缩工艺的研究,探索了不同温度对浓缩液有效成分的影响程度,比较了不同浓缩方式、不同干燥方式处理下有效成分的回收率。结果表明,采用真空薄膜... 通过对苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis,Bti)发酵液浓缩工艺的研究,探索了不同温度对浓缩液有效成分的影响程度,比较了不同浓缩方式、不同干燥方式处理下有效成分的回收率。结果表明,采用真空薄膜浓缩方式最终得到的产物质量是离心浓缩方式得到产物质量的176%,效价回收率提高了36%。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp. israelensis) 真空薄膜浓缩 离心浓缩
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一株拮抗魔芋软腐病的苏云金芽胞杆菌研究 预览
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作者 李辉 李雷林 +4 位作者 高媛 杨宇纯 刘欢 薛艳红 刘士平 《三峡大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期108-112,共5页
魔芋软腐病严重影响着魔芋的生长,本实验室从魔芋软腐病出发,分离筛选出一株对其具有强拮抗作用的菌株16-4,并测定了其抑菌活性.经过形态观察、显微鉴定和分子鉴定确定该菌株是一株苏云金芽孢杆菌.拮抗实验结果表明16-4对魔芋软腐病具... 魔芋软腐病严重影响着魔芋的生长,本实验室从魔芋软腐病出发,分离筛选出一株对其具有强拮抗作用的菌株16-4,并测定了其抑菌活性.经过形态观察、显微鉴定和分子鉴定确定该菌株是一株苏云金芽孢杆菌.拮抗实验结果表明16-4对魔芋软腐病具有很强的拮抗能力,平板对峙法显示该菌株对魔芋软腐病的抑菌圈达到75.4mm,魔芋块的实验说明16-4菌悬液与病原液3∶1的比例加入能很好地控制魔芋软腐病的发作,模拟田间管理的植株实验,当16-4菌悬液是病原液的3倍时就可达到较理想的防治效果.所有实验结果为魔芋软腐病的生物防治奠定了良好的基础. 展开更多
关键词 魔芋软腐病 苏云金芽孢杆菌 内生细菌 生物防治
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苏云金芽孢杆菌毒性研究 预览
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作者 李依韦 尹萌萌 +1 位作者 《安徽农业科学》 CAS 2019年第20期159-161,共3页
以菜青虫为试验材料,用苏云金芽孢杆菌浸泡过的小白菜饲喂菜青虫,提取菜青虫体内的伴孢晶体,通过生物测定法对苏云金芽孢杆菌的毒性进行研究,并对出发菌株进行紫外诱变筛选高毒性菌株。结果表明,苏云金芽孢杆菌毒性与伴孢晶体含量有关,... 以菜青虫为试验材料,用苏云金芽孢杆菌浸泡过的小白菜饲喂菜青虫,提取菜青虫体内的伴孢晶体,通过生物测定法对苏云金芽孢杆菌的毒性进行研究,并对出发菌株进行紫外诱变筛选高毒性菌株。结果表明,苏云金芽孢杆菌毒性与伴孢晶体含量有关,伴孢晶体含量越多,毒力越高;紫外诱变16min时得到菌株B16,伴孢晶体含量比出发菌株提高8.2%,杀虫效率比出发菌株提高77%。该研究为苏云金芽孢杆菌生产高效率生物农药提供菌种。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 伴孢晶体 毒力测定 紫外诱变
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Cry1Ia和Cry2Ab融合蛋白的表达 预览
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作者 郭小琴 钱红梅 +3 位作者 郭俊佩 史宗勇 高建华 王兴春 《山西农业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期101-105,共5页
[目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼... [目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测。[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼接起来,获得cry1Ia-cry2Ab融合基因和cry2Ab-cry1Ia融合基因。另外,将Cry1Ia蛋白N端第一个α-螺旋(73个氨基酸)的编码序列删除后,接入cry2Ab基因5'端,获得第三个融合基因cry1IaD73-cry2Ab。将3个基因分别插入pHT304载体,并由cry1Ac基因的启动子和终止子调控其在Bt细胞中表达。[结果]SDS-PAGE结果显示,Cry1Ia-Cry2Ab、Cry2Ab-Cry1Ia和Cry1IaD73-Cry2Ab三个融合蛋白均能够在Bt细胞中表达,其测定分子量与预期大小一致,分别约152kDa、152kDa和144kDa。蛋白印迹法分析发现,在表达过程中,三种融合蛋白均有一定比例的降解。另外,不同温度对融合蛋白的表达也有不同程度的影响。[结论]本研究构建了3种融合杀虫基因并在Bt细胞中成功表达,为进一步解析这类融合蛋白的杀虫活性和机理奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1Ia CRY2AB 融合蛋白 蛋白表达
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苏云金杆菌G033A对萝卜黄曲条跳甲的室内活性及田间药效 预览
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作者 方国斌 王攀 +3 位作者 望勇 孙光忠 匡辉 司升云 《长江蔬菜》 2019年第20期73-75,共3页
针对萝卜黄曲条跳甲,采用浸叶法进行了32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂的生物活性测定,并在湖北和云南两地开展了田间药效试验。试验结果表明,32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂对黄曲条跳甲的LC50值为26.1451mg/L,LC90值为207.... 针对萝卜黄曲条跳甲,采用浸叶法进行了32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂的生物活性测定,并在湖北和云南两地开展了田间药效试验。试验结果表明,32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂对黄曲条跳甲的LC50值为26.1451mg/L,LC90值为207.2838mg/L,表现较好的田间防治效果;试验处理条件下,湖北与云南两地的最高防效分别为85.6%和89.2%,且对萝卜均表现安全。该农药田间推荐制剂用量为2250~3000g/hm^2,施药间隔期为7~10d。 展开更多
关键词 黄曲条跳甲 苏云金杆菌 生物活性 田间药效
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Bt蛋白对杨扇舟蛾连续世代存活与发育的影响 预览
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作者 王留成 刘洁 +4 位作者 高佳敏 孟丹阳 姚彤 孙天骅 高宝嘉 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1021-1029,共9页
旨在探讨杨扇舟蛾(Clostera anachoreta)在BtCry1Ac杀虫蛋白处理后耐药性的产生及形成规律。以转基因‘741’杨高抗品系‘Pb29’叶片及浸泡不同梯度Cry1Ac杀虫蛋白原毒素的‘741’杨树叶片对杨扇舟蛾存活和生长发育进行室内生测,分析3... 旨在探讨杨扇舟蛾(Clostera anachoreta)在BtCry1Ac杀虫蛋白处理后耐药性的产生及形成规律。以转基因‘741’杨高抗品系‘Pb29’叶片及浸泡不同梯度Cry1Ac杀虫蛋白原毒素的‘741’杨树叶片对杨扇舟蛾存活和生长发育进行室内生测,分析3代幼虫存活与发育趋势。结果表明:(1)高质量浓度Bt对低龄幼虫有着较强的毒杀作用,且致死效果随着代数延长没有明显减弱;幼虫对低质量浓度Bt及转基因Pb29杨耐受性提高,死亡速度减慢,校正死亡率降低。(2)幼虫取食Bt叶片后发育受到抑制,第1代和第2代历期较对照组明显延长,停止胁迫后对老龄幼虫龄期影响不明显。(3)Bt能显著降低蛹质量,但随着代数延长而逐渐回升,且亚致死剂量增幅最高。随着杨扇舟蛾的世代延续,Cry1Ac蛋白对其致死效果和抑制发育能力逐渐降低,存在杨扇舟蛾世代种群对转Bt植物耐受性累积发展的风险。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 杨扇舟蛾 存活率 发育历期 连续世代
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Cry1Ah蛋白标准物质候选物的制备与纯化
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作者 郭林 耿丽丽 +3 位作者 孙晓晓 王美玲 束长龙 张杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1511-1519,共9页
随着转基因技术的迅猛发展,转基因产品的安全性受到了广泛关注。转基因检测用有证标准物质在确保转基因产品定性、定量检测结果的可比性和可追溯性方面发挥着重要作用。但转基因蛋白质标准物质的开发相对缓慢,其中一个难点是制备高纯度... 随着转基因技术的迅猛发展,转基因产品的安全性受到了广泛关注。转基因检测用有证标准物质在确保转基因产品定性、定量检测结果的可比性和可追溯性方面发挥着重要作用。但转基因蛋白质标准物质的开发相对缓慢,其中一个难点是制备高纯度的转基因蛋白质候选物。苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis cry1Ah1基因因其对亚洲玉米螟等鳞翅目害虫有很好的杀虫活性,已用于转基因抗虫作物的研制,并获得具有较好抗虫性状的转基因株系。为了研发Cry1Ah蛋白有证标准物质,亟需建立其制备及纯化体系。文中优化了利用Bt表达系统制备Cry1Ah蛋白的体系,利用离子交换色谱法和排阻色谱法逐级纯化的方法,获得了高纯度的Cry1Ah蛋白(排阻色谱纯度:99.6%)。生物活性测定结果表明,纯化的Cry1Ah蛋白与原毒素对小菜蛾Plutella xylostella的杀虫活性没有显著差异。最后使用Edman降解法和质谱法确定了Cry1Ah蛋白活化后的氨基酸序列。综上所述,获得的Cry1Ah纯蛋白可用于蛋白质标准物质的研制。 展开更多
关键词 转基因生物 有证标准物质 苏云金芽胞杆菌 Cry1Ah 蛋白
Cry1Ia蛋白的表达与纯化 预览
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作者 郭小琴 钱红梅 +4 位作者 郭星 高佳丽 张义茹 高建华 王兴春 《山西农业科学》 2019年第5期748-750,769共4页
苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌... 苏云金芽孢杆菌表达的Cry1Ia蛋白对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性。为便于后期评价不同的Cry1Ia蛋白,建立了Cry1Ia蛋白的表达与纯化体系。将一个cry1Ia基因的编码基因接入pET28aDel表达载体,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)star菌株。在大肠杆菌中诱导Cry1Ia蛋白的表达,并与Bt中的表达产物进行比较。最后,利用Cry1Ia蛋白C端包含的组氨酸标签,对大肠杆菌表达的Cry1Ia蛋白进行纯化。结果显示,大肠杆菌中Cry1Ia蛋白随着表达时间的延长,产物积累显著,并且其表达量高于Bt菌株,因此,其更适宜生产完整的Cry1Ia蛋白。对大肠杆菌表达的Cry1Ia进行纯化,获得了理想的结果。研究构建了Cry1Ia蛋白的大肠杆菌表达体系,并成功对其进行纯化,可为进一步研究此类蛋白的杀虫活性和机制奠定基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 大肠杆菌 cry1Ia 蛋白表达 蛋白纯化
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Bacillus thuringiensis P34与海泡石联合阻控蔬菜积累铅和改良土壤的作用 预览
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作者 贺卓 殷涂童 +2 位作者 葛占标 盛下放 何琳燕 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1240-1247,共8页
本研究为建立微生物-吸附剂联合钝化修复技术,以期为重金属污染农田的修复和蔬菜安全生产提供试验依据。在南京市栖霞区某矿区周边农田开展田间试验,探究了Bacillus thuringiensis P34及海泡石(S)对辣椒(苏椒五号)和茄子(苏琦一号)的生... 本研究为建立微生物-吸附剂联合钝化修复技术,以期为重金属污染农田的修复和蔬菜安全生产提供试验依据。在南京市栖霞区某矿区周边农田开展田间试验,探究了Bacillus thuringiensis P34及海泡石(S)对辣椒(苏椒五号)和茄子(苏琦一号)的生长、Pb积累和营养品质的影响,评估复配处理(P34+S)改良蔬菜根际土壤理化性质的作用。结果表明,与对照相比,海泡石可显著降低蔬菜果实Pb含量,菌株P34和海泡石复配可进一步显著降低辣椒和茄子果实Pb含量(58%和26%)。与对照相比,复配处理可显著使辣椒果实生物量增加1.5倍,改善蔬菜的营养品质,还能提高根际土壤pH、芽孢细菌数量、蔗糖酶和脲酶活性,显著降低根际土壤DTPA提取态Pb含量,并显著增加>1 mm团聚体的比例、显著减少<0.25 mm团聚体的比例。将B. thuringiensis P34与海泡石联合施用于Pb污染土壤,可显著阻控茄果类蔬菜积累Pb并提高其营养品质,显著改善根际土壤的理化性质,具有修复Pb污染土壤、保障蔬菜安全生产的潜力。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 海泡石 复配菌剂 蔬菜 田间试验
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苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11定点突变对棉铃虫杀虫活性的影响 预览
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作者 刘明 孙海燕 郑树生 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第1期21-27,共7页
为了寻找苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11中对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,通过序列比对,利用PCR方法对Vip3Aa11中7个氨基酸位点进行定点突变,对各突变蛋白杀棉铃虫的生物活性进行测定。结果表明,获得... 为了寻找苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11中对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,通过序列比对,利用PCR方法对Vip3Aa11中7个氨基酸位点进行定点突变,对各突变蛋白杀棉铃虫的生物活性进行测定。结果表明,获得的Vip3Aa11突变体I358V、I362M、K553I、I663T对棉铃虫的杀虫活性明显降低,而突变体I706N对棉铃虫的杀虫活性有所提高,各突变体对胰蛋白酶敏感性基本一致。说明第358位、362位、663位异亮氨酸及553位赖氨酸对Vip3Aa11杀棉铃虫活性有重要影响。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 Vip3Aa 定点突变 棉铃虫
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