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崇明拟异小杆线虫gsa- 1基因的功能鉴定 预览
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作者 马丽君 黄金 +2 位作者 胡天翼 黄小娜 张克云 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期89-97,共9页
[目的]昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode,EPN)的嗅觉趋化性及适应性是影响其在实际应用中的重要因素。本文目的在于鉴定崇明拟异小杆线虫Heterorhabditidoides chongmingensis DZ0503CMFT(DZ)品系中gsa-1基因的生物学功能,探讨... [目的]昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode,EPN)的嗅觉趋化性及适应性是影响其在实际应用中的重要因素。本文目的在于鉴定崇明拟异小杆线虫Heterorhabditidoides chongmingensis DZ0503CMFT(DZ)品系中gsa-1基因的生物学功能,探讨该基因对DZ线虫的嗅觉趋化性及适应性的影响。[方法]根据前期构建的DZ线虫与其自身共生菌菌株Serratia nematodephila DZ0503SBS1 T(S1)及其非自身共生菌S.nematodiphila DR186(186)的数字基因表达谱(digital gene expression profile,DGE)文库中的差异基因,选取化感神经元中广泛表达的G蛋白Gα亚基的基因gsa-1作为研究对象。利用饲喂法将gsa-1的dsRNA导入线虫体内进行RNAi,从而降低线虫体内gsa-1基因的表达量。利用荧光定量PCR检测RNA干扰效果,并统计线虫的趋化性、嗅觉适应性、体长、寿命、发育历期及雌虫比例等变化。[结果]DZ/S1单菌侵染期线虫与DZ/186相比其趋化性及适应性均有显著差异。DZ/S1组的线虫对苯甲醛及活体大蜡螟幼虫的趋化性指数分别是DZ/186组的2.99倍和8.62倍。DZ/S1组的线虫对苯甲醛的嗅觉适应性较DZ/186组更强。gsa-1基因在DZ/S1单菌侵染期线虫中的表达量显著下调,相比DZ/186组下降了34.30%。gsa-1 RNAi后,其表达量相比对照组被抑制了54.19%。gsa-1 RNAi组线虫对苯甲醛的趋化性及对活体大蜡螟幼虫的趋化性明显升高,其趋化性指数分别是对照组的4.22倍和2.14倍。gsa-1 RNAi组与对照组之间嗅觉适应性、体长、寿命、发育历期及雌虫比例没有显著差异。[结论]通过RNAi方法初步验证了DZ线虫gsa-1基因的生物学功能,该基因负调控崇明拟异小杆线虫的嗅觉趋化性。 展开更多
关键词 昆虫病原线虫 崇明拟异小杆线虫 gsa-1 RNAi 嗅觉
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RNAi技术在中国昆虫学研究中的发展、应用与展望
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作者 田宏刚 刘同先 张文庆 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期605-616,共12页
RNAi现象从其原理揭示至今已有20余年的历史,我国昆虫学家利用RNAi技术在褐飞虱Nilaparvata lugens、飞蝗Locusta migratoria、豌豆蚜Acyrthosiphon pisum、烟粉虱Bemisia tabaci、甜菜夜蛾Spodopteraexigua、棉铃虫Helicoverpaarmiger... RNAi现象从其原理揭示至今已有20余年的历史,我国昆虫学家利用RNAi技术在褐飞虱Nilaparvata lugens、飞蝗Locusta migratoria、豌豆蚜Acyrthosiphon pisum、烟粉虱Bemisia tabaci、甜菜夜蛾Spodopteraexigua、棉铃虫Helicoverpaarmigera等多种昆虫中开展了广泛深入的研究工作,目前已发表的关于昆虫RNAi的论文数量位列世界第二位。我国科学家应用RNAi技术揭示了多个与昆虫重要生物学现象和行为相关的关键基因功能及其分子机制,发展了基于RNAi介导的转基因抗虫作物等多种害虫控制新方法,并探索了不同昆虫中RNAi作用的分子机制。这些研究表明RNAi技术对于中国昆虫学研究的发展起到了重要的推动作用。本文综述了RNAi技术在我国昆虫学研究领域近20年来的发展与应用,并对当前存在的问题及未来发展方向进行了展望,包括靶标基因筛选、RNAi效率评价标准、RNAi技术与传统害虫防治方法的联合应用模式以及昆虫RNAi作用机制等方面,以期更好地推动RNAi技术在我国昆虫学研究和害虫防治领域的发展。 展开更多
关键词 昆虫 RNAI 基因功能 害虫控制 RNAi机制
基于RNA干扰的台湾乳白蚁纤维素酶活抑制效果分析 预览
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作者 候亚会 毕可可 +2 位作者 孙龙华 谷岱霏 李志强 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期837-843,共7页
白蚁纤维素酶在白蚁营养代谢中发挥着非常重要的作用,为了探索RNAi在白蚁防治中的应用技术,本文研究了RNAi技术与壳寡糖和曲酸联合对台湾乳白蚁纤维素酶活的抑制作用。在实验室条件下将dsCfEG与壳寡糖和曲酸分别联合浸湿滤纸饲喂白蚁,... 白蚁纤维素酶在白蚁营养代谢中发挥着非常重要的作用,为了探索RNAi在白蚁防治中的应用技术,本文研究了RNAi技术与壳寡糖和曲酸联合对台湾乳白蚁纤维素酶活的抑制作用。在实验室条件下将dsCfEG与壳寡糖和曲酸分别联合浸湿滤纸饲喂白蚁,采用还原糖法测定白蚁的滤纸酶活性(FPA)及内切β-1,4-葡聚糖酶(EG)的比活力,并观测记录供试白蚁的体重与死亡率变化。结果显示:联合处理组测定的FPA和EG比活力均显著低于空白对照组,dsCfEG+曲酸处理组在喂食7 d和5 d后分别对FPA和EG的抑制效果显著高于dsCfEG对照组;喂食7 d后处理组白蚁活力比对照组明显降低,处理组白蚁体重均有不同程度的减少;dsCfEG+壳寡糖联合处理后白蚁的校正死亡率提高,其与曲酸处理的效果之间无显著性差异。研究表明RNAi技术可增强一些酶活抑制物对白蚁纤维素酶活的抑制效果,可为白蚁的安全防控新技术研究提供参考。 展开更多
关键词 台湾乳白蚁 RNAI 壳寡糖 曲酸 纤维素酶 酶活抑制
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黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体制备及应用 预览
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作者 李歌 董旭 +2 位作者 危婉婷 叶彦杰 兰汉红 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1483-1488,共6页
【目的】制备效价高且特异性强的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白Argonaute 2(AGO2)多克隆抗体,为进一步研究AGO2蛋白在叶蝉RNAi免疫途径中的调控功能及作用机制提供技术支持。【方法】通过RT-PCR从黑尾叶蝉基因组扩增出AGO2基因的功能片段,... 【目的】制备效价高且特异性强的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白Argonaute 2(AGO2)多克隆抗体,为进一步研究AGO2蛋白在叶蝉RNAi免疫途径中的调控功能及作用机制提供技术支持。【方法】通过RT-PCR从黑尾叶蝉基因组扩增出AGO2基因的功能片段,与原核表达质粒pET-28a重组构建重组质粒,然后转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达;以纯化的AGO2融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体,并以多克隆抗体为一抗,采用Western blotting检测AGO2蛋白在健康和带毒黑尾叶蝉中的表达情况。【结果】RT-PCR扩增获得的黑尾叶蝉AGO2基因片段为1635 bp,构建的pET-AGO2重组质粒能在BL21感受态细胞中成功表达出AGO2融合蛋白,其最适表达条件:温度28℃,IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导时间5 h,摇床转速220 r/min。以纯化AGO2融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得的多克隆抗体效价为1∶106,抗体浓度约350μg/mL。Western blotting检测结果表明,AGO2蛋白在健康和水稻矮缩病毒(RDV)感染黑尾叶蝉中均有表达,但与健康黑尾叶蝉相比,AGO2蛋白在RDV感染黑尾叶蝉中的表达水平更高,即RDV侵染能提高AGO2蛋白的表达水平。【结论】制备获得的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体具有高纯度和高效价,且特异性强,可用于检测AGO2蛋白在病毒感染黑尾叶蝉中的表达水平,进而揭示AGO2蛋白在介体昆虫RNAi途径中的功能机制。 展开更多
关键词 水稻矮缩病毒(RDV) 黑尾叶蝉 RNAI AGO2蛋白 多克隆抗体 效价
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四种鳞翅目害虫精氨酸激酶基因的表达谱及基于RNAi的功能分析 预览
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作者 鲁艳辉 白琪 +2 位作者 郑许松 田俊策 吕仲贤 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期901-911,共11页
【目的】精氨酸激酶(arginine kinase,AK)(EC2.7.3.3)是昆虫体内重要的磷酸原激酶(能量代谢调节因子),也是唯一能够形成有效ATP的磷酰基供体,起着与脊椎动物中肌酸激酶相同的作用。本研究旨在了解鳞翅目害虫AK基因的表达和功能。【方法... 【目的】精氨酸激酶(arginine kinase,AK)(EC2.7.3.3)是昆虫体内重要的磷酸原激酶(能量代谢调节因子),也是唯一能够形成有效ATP的磷酰基供体,起着与脊椎动物中肌酸激酶相同的作用。本研究旨在了解鳞翅目害虫AK基因的表达和功能。【方法】利用qRT-PCR方法测定AK基因在大螟Sesamia inferens、二化螟Chilo suppressalis、甜菜夜蛾Spodoptera exigua和斜纹夜蛾Spodoptera litura这4种鳞翅目害虫不同发育阶段和3龄幼虫不同组织中的表达谱;通过终点法检测了这4种害虫不同发育阶段和幼虫不同组织中的AK酶活性;采用RNAi技术抑制该基因的表达并分析其功能。【结果】AK基因在大螟、二化螟、甜菜夜蛾和斜纹夜蛾这4种鳞翅目昆虫的不同发育阶段和3龄幼虫不同组织中均有表达,说明该基因的表达不具有发育时期和组织特异性。不同发育时期和3龄幼虫不同组织中AK酶活性与基因表达量变化趋势大体一致。注射以AK基因为靶标的dsRNA6d后,4种害虫体内AK基因的mRNA表达下降30%~50%,AK酶活性降低30%左右;14d后幼虫的死亡率达50%左右,显著高于对照组幼虫的死亡率。【结论】AK基因在上述4种鳞翅目害虫中为组成型表达,RNAi抑制AK基因的表达可导致4种害虫的幼虫死亡,研究结果为开发以AK基因为靶标的鳞翅目害虫防治新技术提供了理论依据。 展开更多
关键词 鳞翅目 大螟 二化螟 甜菜夜蛾 斜纹夜蛾 AK基因 时空表达谱 酶活性 RNAI
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崇明拟异小杆线虫lin-41基因功能的鉴定
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作者 李朋娅 黄金 张克云 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2216-2226,共11页
昆虫病原线虫(entomopathogenic nematodes,EPNs)是一类高效安全的生物杀虫剂,其繁殖能力是影响其商品产量和质量的重要因素。利用前期构建的小杆科EPN崇明拟异小杆线虫(Heterorhabditidoides chongmingensis)的差异基因表达谱(differen... 昆虫病原线虫(entomopathogenic nematodes,EPNs)是一类高效安全的生物杀虫剂,其繁殖能力是影响其商品产量和质量的重要因素。利用前期构建的小杆科EPN崇明拟异小杆线虫(Heterorhabditidoides chongmingensis)的差异基因表达谱(differentially expressed genes,DEGs)文库,选取参与调控该线虫繁殖发育的RNA结合蛋白lin-41的编码基因(RNA-binding protein lin-41 coding gene,lin-41)作为研究对象,通过对其生物学功能进行鉴定,探究该基因在H.chongmingensis发育繁殖过程中的作用。通过同源性分析选取lin-41基因中保守区的非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkin’s lymphoma,NHL)超家族功能域构建RNA克隆载体,再利用L4440质粒构建干扰片段的双链核糖核酸(double-stranded RNA,dsRNA)表达载体,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)HT115(DE3)感受态细胞中。以饲喂法在H.chongmingensis线虫体内干扰目的基因的表达,利用qRT-PCR检测lin-41的被干扰效果及lin-41与繁殖相关基因G蛋白α亚基(G proteinαsubunit,goa-1)的潜在关系,并统计lin-41基因表达量下调后H.chongmingensis的生物学特征的变化。结果表明针对lin-41基因中保守区片段的NHL超家族功能域设计的dsRNA表达载体有效的降低了H.chongmingensis线虫体内lin-41的表达量,相对于对照组降低了72.08%(P<0.01)。lin-41 RNAi组线虫的产卵量与对照组相比明显下降,平均减少了45枚虫卵(P<0.05)。孵化率、体长和雌虫率没有显著变化。此外,lin-41被干扰之后可以显著降低goa-1的表达量(P<0.05)。本研究通过RNAi的方法初步探究了lin-41在H.chongmingensis中的生物学功能,该基因参与调控H.chongmingensis的产卵量并参与调控goa-1的表达,在H.chongmingensis线虫的繁殖过程中起重要调控作用。本研究为后续H.chongmingensis线虫的生产扩繁提供了重要的理论依据和技术支撑。 展开更多
关键词 昆虫病原线虫 崇明拟异小杆线虫 lin-41 RNAI 产卵
马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)PmHEX基因的功能研究
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作者 范闪闪 郑哲 +2 位作者 郝瑞娟 王庆恒 杜晓东 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期19-24,共6页
几丁质是软体动物贝壳有机框架的重要成分,其代谢在贝壳矿化中发挥重要作用。β-N-乙酰-己糖胺酶(HEX, EC3.2.1.52)是几丁质代谢的关键水解酶。为了探究马氏珠母贝β-N-乙酰-己糖胺酶(Pm HEX)(登录号:MF555152)在贝壳形成中的作用,本研... 几丁质是软体动物贝壳有机框架的重要成分,其代谢在贝壳矿化中发挥重要作用。β-N-乙酰-己糖胺酶(HEX, EC3.2.1.52)是几丁质代谢的关键水解酶。为了探究马氏珠母贝β-N-乙酰-己糖胺酶(Pm HEX)(登录号:MF555152)在贝壳形成中的作用,本研究利用原位杂交(ISH)技术检测Pm HEX基因在外套膜的定位,结果显示Pm HEX的mRNA主要分布于外侧褶的外上皮细胞、中褶的内侧上皮细胞和内褶上皮细胞。利用RNAi技术抑制Pm HEX表达后,Pm HEX在边缘区和套膜区的表达量均显著下调;SEM观察发现实验组的棱柱层和珍珠层的微观结构都出现不同程度的紊乱。综上所述,Pm HEX可能通过影响几丁质代谢,参与马氏珠母贝贝壳棱柱层和珍珠层的矿化过程。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 β-N-乙酰-己糖胺酶 贝壳矿化 RNAI 原位杂交
飞蝗磷酸乙酰氨基葡萄糖变位酶基因表达及功能
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作者 张政 张学尧 +1 位作者 张建珍 刘晓健 《山西大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第4期929-934,共6页
几丁质是自然界广泛存在的第二大氨基多糖,在几丁质的合成途径中有许多酶的参与,其中磷酸乙酰氨基葡萄糖变位酶(Phosphoacetylglucosamine mutase,PAGM)是关键酶之一。以飞蝗为研究对象,对磷酸乙酰氨基葡萄糖变位酶基因PAGM的表达及功... 几丁质是自然界广泛存在的第二大氨基多糖,在几丁质的合成途径中有许多酶的参与,其中磷酸乙酰氨基葡萄糖变位酶(Phosphoacetylglucosamine mutase,PAGM)是关键酶之一。以飞蝗为研究对象,对磷酸乙酰氨基葡萄糖变位酶基因PAGM的表达及功能进行了研究。对飞蝗转录组数据库进行搜索,得到PAGM基因全长cDNA序列,将其命名为LmPAGM(GenBank登录号:MK568624),其中开放阅读框长度1 491 bp,编码497个氨基酸。通过Real-time PCR分析该基因在五龄若虫不同组织部位和不同天数的表达,结果表明LmPAGM在体壁、前肠、中肠、后肠、胃盲囊、马氏管、脂肪体和翅中均衡表达,并且在五龄若虫第8天表达显著上升。利用RNAi对LmPAGM的生物学功能进行探讨,注射LmPAGM的dsRNA至五龄若虫第2天的飞蝗,注射dsLmPAGM组中LmPAGM的表达较对照组显著下调,并且约30%的飞蝗无法成功羽化为成虫。 展开更多
关键词 飞蝗 磷酸乙酰氨基葡萄糖变位酶 基因表达 RNAI
中国对虾V-ATPasec亚基基因的克隆及其在高pH胁迫下的表达分析 预览
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作者 胡硕 何玉英 +2 位作者 李健 张海恩 韩旭 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1064-1074,共11页
采用RACE技术克隆了中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)V-ATPase c亚基基因,命名为FcVHA-c基因,检测该基因在高pH胁迫下的基因应答,并采用RNAi技术验证其功能。基因分析表明, FcVHA-c基因cDNA全长为2128 bp,开放阅读框483 bp,编码160... 采用RACE技术克隆了中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)V-ATPase c亚基基因,命名为FcVHA-c基因,检测该基因在高pH胁迫下的基因应答,并采用RNAi技术验证其功能。基因分析表明, FcVHA-c基因cDNA全长为2128 bp,开放阅读框483 bp,编码160个氨基酸,预测蛋白分子量为16 kD,理论等电点7.82,具有4个跨膜结构域。同源性和系统进化分析表明, FcVHA-c具有较高的保守性,其中与南美白对虾(Penaeus vannamei)同源性最高,为99%,与南美白对虾首先聚为一支。组织表达分析显示, FcVHA-c基因在中国对虾各个组织中均有表达,在鳃中表达量显著高于其他组织(P<0.05)。pH 8.8胁迫下,该基因的表达量在12 h达到峰值,为对照组的1.206倍,在48 h达到最低值,为对照组的0.166倍;pH 9.2胁迫下,该基因表达量在1 h达到峰值,为对照组的1.577倍,在12 h达到最低值,为对照组的0.104倍。结果表明,高pH对该基因具有一定的抑制作用。干扰结果显示,高pH胁迫下干扰组较对照组的死亡率显著增高(P<0.05),表明该基因表达量越高,越有利于中国对虾的存活。本研究结果表明, FcVHA-c基因参与了高pH胁迫下中国对虾的离子调控,高pH胁迫抑制FcVHA-c基因的调控能力。 展开更多
关键词 中国对虾 V-ATP酶 C亚基 PH胁迫 RNAI
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RNAi转基因作物安全评价研究进展 预览
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作者 栾颖 梁晋刚 +1 位作者 周晓莉 张正光 《生物安全学报》 CSCD 2019年第2期95-102,共8页
在秀丽隐杆线虫中首次发现双链RNA(dsRNA)能特异性地导致基因沉默(RNAi)现象后,人们开始大量地研究RNAi技术,并将其应用于功能基因的研究,来提高作物的抗性和改良遗传育种等。本文详细介绍了RNAi的技术原理,并且对RNAi技术与传统转基因... 在秀丽隐杆线虫中首次发现双链RNA(dsRNA)能特异性地导致基因沉默(RNAi)现象后,人们开始大量地研究RNAi技术,并将其应用于功能基因的研究,来提高作物的抗性和改良遗传育种等。本文详细介绍了RNAi的技术原理,并且对RNAi技术与传统转基因技术的区别进行分析,阐述了该技术具有重要的生物学意义,以及在农作物害虫防治领域的占据独特优势。基于RNAi技术存在的潜在脱靶效应,从改良植物、靶标生物和生态环境的3个方面具体分析该技术可能存在的风险,为RNAi技术的风险评估提供参考。由于RNAi技术仍存在风险,为了维护生态多样性和保障人们的人身安全,应尽快建立起符合实际需求的安全性评价方法,本文针对RNAi转基因作物的环境安全和食用安全2个方面的评估方案进行概述。RNAi技术对减少害虫数量、提高水稻产量、降低种植成本以及减少化学农药污染、促进农业可持续发展来说具有重要意义,但该技术仍存在风险,需要进一步监管和研究,建立完善的生态评价系统,让RNAi技术在农业生产上发挥作用。 展开更多
关键词 RNAI 抗虫作物 风险评估方案
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光滑鳖甲肽聚糖识别蛋白ApPGRP的表达与功能分析 预览
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作者 杨晓霞 徐鑫 +1 位作者 刘忠渊 毛新芳 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期653-662,共10页
【目的】旨在研究光滑鳖甲Anatolica polita肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins, PGRPs)基因ApPGRP表达模式及其对下游免疫相关基因的表达调控,以及重组蛋白ApPGRP与细菌的结合能力。【方法】构建原核表达载体pET-28a-A... 【目的】旨在研究光滑鳖甲Anatolica polita肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins, PGRPs)基因ApPGRP表达模式及其对下游免疫相关基因的表达调控,以及重组蛋白ApPGRP与细菌的结合能力。【方法】构建原核表达载体pET-28a-ApPGRP,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),诱导表达并纯化重组蛋白His-ApPGRP,分别测定其与金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和肽聚糖(peptidoglycan, PGN)的结合能力。金黄色葡萄球菌S.aureus刺激后,利用qRT-PCR检测光滑鳖甲6龄幼虫体内ApPGRP、抗菌肽基因ApAttacin2和ApAttacin1、防御素基因ApDefensin、丝氨酸蛋白酶基因ApSP和丝氨酸蛋白酶抑制剂基因ApSerpin等免疫相关基因的表达水平;采用RNAi技术沉默光滑鳖甲6龄幼虫体内ApPGRP基因的表达,并利用qRT-PCR分别检测RNAi处理以及RNAi后再用S.aureus刺激时幼虫体内上述基因的表达水平变化。【结果】通过原核表达获得了重组蛋白His-ApPGRP,其具有结合金黄色葡萄球菌和肽聚糖的能力。注射金黄色葡萄球菌后,检测的光滑鳖甲6龄幼虫免疫相关基因(ApSP除外)的表达都显著上调;RNAi沉默光滑鳖甲6龄幼虫ApPGRP后,其他免疫相关基因表达量均显著降低,其响应金黄色葡萄球菌刺激后的表达量也显著低于对照组。【结论】这些结果表明,ApPGRP在光滑鳖甲免疫防御中起着识别外源微生物,激活信号通路并调控抗菌肽表达的作用。 展开更多
关键词 光滑鳖甲 肽聚糖识别蛋白 原核表达 金黄色葡萄球菌 肽聚糖 RNAI
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鸡NLRX1表达的细胞定位及其siRNA干扰效果的研究 预览
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作者 朱祥 马珍 +6 位作者 叶红 丁泠 席德先 许志伟 寇家倩 李槿年 刘雪兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1047-1052,共6页
NLRX1 (NLR family member X1)是细胞内模式识别受体NLRs家族中重要成员之一,在炎症反应和抗病毒等天然免疫中主要发挥负调控作用。为了解鸡NLRX1 (chNLRX1)分子的特征及其生物学功能,本研究采用cDNA末端快速克隆(RACE)技术,从鸡肺脏组... NLRX1 (NLR family member X1)是细胞内模式识别受体NLRs家族中重要成员之一,在炎症反应和抗病毒等天然免疫中主要发挥负调控作用。为了解鸡NLRX1 (chNLRX1)分子的特征及其生物学功能,本研究采用cDNA末端快速克隆(RACE)技术,从鸡肺脏组织中克隆了chNLRX1基因的cDNA序列,其最长开放阅读框(ORF)为2 970 bp,编码989个氨基酸,含有较为保守的结构域,分子构象分析显示chNLRX1在空间结构上更接近于鱼类NLRX1;将chNLRX1真核表达质粒转染HEK293T细胞和鸡DF-1细胞,显示chNLRX1主要定位于细胞质内的线粒体区;以腺病毒介导RNAi干扰chNLRX1表达,采用荧光显微镜观察和western blot方法筛选出干扰效率相对较高的si RNA (sh-NLRX1-2)。上述结果为进一步研究chNLRX1的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 天然免疫受体 chNLRX1 RACE 细胞定位 RNAi干扰
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棉铃虫剂量补偿相关基因Hamsl1的鉴定与功能分析 预览
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作者 张亚坤 邓中原 +1 位作者 谷少华 李显春 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期799-813,共15页
【目的】棉铃虫Helicoverpa armigera的剂量补偿(dosage compensation,DC)分子机制尚不清楚。本研究旨在通过克隆棉铃虫雄性特异性致死(male-specific lethal,msl)基因Hamsl 1,利用RNA干扰技术明确其是否参与调控棉铃虫剂量补偿。【方... 【目的】棉铃虫Helicoverpa armigera的剂量补偿(dosage compensation,DC)分子机制尚不清楚。本研究旨在通过克隆棉铃虫雄性特异性致死(male-specific lethal,msl)基因Hamsl 1,利用RNA干扰技术明确其是否参与调控棉铃虫剂量补偿。【方法】利用RT-PCR同源克隆棉铃虫Hamsl 1基因全长cDNA;利用qPCR技术研究Hamsl 1基因在棉铃虫不同发育时期的表达谱;通过显微注射Hamsl 1 siRNA到棉铃虫3龄幼虫中对Hamsl 1基因进行RNA干扰后,利用qPCR技术检测15个Z染色体基因的表达情况,分析Hamsl 1是否调控Z染色体基因剂量。【结果】成功克隆了棉铃虫Hamsl 1基因的cDNA序列,鉴定出Hamsl 1基因mRNA存在2种剪接体,分别命名为Hamsl1a(GenBank登录号:MK564008)和Hamsl1b(GenBank登录号:MK564009)。功能域分析发现HaMSL1含有典型的PEHE和coiled-coil功能域,具有MSL1蛋白的特征。qPCR分析表明,Hamsl 1基因位于棉铃虫Z染色体上;棉铃虫Hamsl1a与Hamsl1b基因表达均具有发育时期特异性,在成虫期表达量最高,且雌雄化蛹后基因表达量差异显著,具有性别特异性。通过同源比对和qPCR分析,在DNA水平鉴定了15个Z染色体候选基因。显微注射Hamsl 1 siRNA于3龄幼虫体内72 h,干扰效率为36.01%~64.27%,并未发生雄性致死现象;与对照组相比,Hamsl 1 RNAi处理组中棉铃虫15个Z染色体基因在雄性个体中整体呈现表达量上调趋势,而在雌性个体中平均表达水平差异不显著。【结论】本研究初步探明Hamsl 1基因位于棉铃虫Z染色体上,且该基因可能通过抑制雄性棉铃虫Z染色体基因表达,调控棉铃虫Z染色体剂量补偿。本研究为深入研究棉铃虫剂量补偿分子机制和绿色防控棉铃虫提供了理论基础。 展开更多
关键词 棉铃虫 Hamsl1 性染色体 剂量补偿 RNAI
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生物策略在控制伊蚊传播疾病的应用
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作者 张阳 邓晓东 费小雯 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1599-1607,共9页
RNAi技术作为高效、特异性的阻断技术,已经在低等原核生物、植物、动物、真菌等的研究和农作物病虫害防治、人类蚊媒传染病的控制等方面得到了广泛的应用。近年来全球每年有约一半的人受到蚊媒传播疾病的威胁,蚊媒传病严重危害全世界人... RNAi技术作为高效、特异性的阻断技术,已经在低等原核生物、植物、动物、真菌等的研究和农作物病虫害防治、人类蚊媒传染病的控制等方面得到了广泛的应用。近年来全球每年有约一半的人受到蚊媒传播疾病的威胁,蚊媒传病严重危害全世界人类的生命健康,成为巨大的公共卫生问题。其中,伊蚊在传播疾病方面扮演着十分重要的角色,包括目前最重要的流行性病,如登革热、寨卡病毒病、黄热病、流行性乙型脑炎、基孔肯雅病等都是由伊蚊传播的疾病。因此,非常急需一种有效的防控蚊虫的手段来控制疾病的传播。生物防控策略具有环境和生态友好的特征,为近年研究的主流。本研究从近十年来伊蚊生物防控的研究成果,着重综述了生物防控策略的有效性、可行性和经济性,对本领域研究进展和未来的发展方向进行了总结和阐述。 展开更多
关键词 生物策略 RNAI 控制 伊蚊
慢病毒介导B7-2基因RNA干扰对小鼠树突状细胞诱导T细胞增殖的影响 预览
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作者 孔永 颜天铭 +3 位作者 王玉玉 沈立军 王婧 邱玉华(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期140-145,共6页
目的:制备沉默小鼠B7-2基因的RNAi慢病毒,研究其对体外诱导培养的小鼠树突状细胞B7-2基因表达的干扰效应及对其刺激T细胞增殖的影响。方法:从GenBank获取小鼠B7-2基因序列,在其编码区选择3段RNAi靶序列,构建介导B7-2基因RNAi的双发夹RN... 目的:制备沉默小鼠B7-2基因的RNAi慢病毒,研究其对体外诱导培养的小鼠树突状细胞B7-2基因表达的干扰效应及对其刺激T细胞增殖的影响。方法:从GenBank获取小鼠B7-2基因序列,在其编码区选择3段RNAi靶序列,构建介导B7-2基因RNAi的双发夹RNA慢病毒表达载体,采用DNA测序进行重组载体鉴定。重组慢病毒表达质粒及包装辅助质粒,在脂质体介导下共转染293T细胞制备重组慢病毒并经超高速离心进行浓缩;浓缩慢病毒颗粒感染293T细胞,根据其介导GFP表达的情况测定病毒滴度。分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,采用GM-CSF及IL-4诱导DC的分化,LPS刺激48h促进其成熟,并进行形态以及表型鉴定。采用制备的小鼠B7-2基因RNAi重组慢病毒感染小鼠骨髓源DC,流式分析其感染效率及对DC表面B7-2分子表达的干扰效率;通过慢病毒感染的DC与小鼠脾脏T细胞混合培养测定慢病毒介导B7-2沉默对DC刺激T细胞增殖能力的影响。结果:小鼠B7-2基因RNAi慢病毒表达载体构建正确;获得了针对3靶点序列RNAi和阴性对照的浓缩小鼠B7-2基因RNAi重组慢病毒,滴度达(2~4)×10^8TU/ml,重组慢病毒能够有效感染DC及抑制其表面的B7-2分子表达,经小鼠B7-2基因RNAi慢病毒感染及介导B7-2沉默后,DC刺激T细胞增殖的能力显著下降(P<0.05)。结论:慢病毒介导小鼠B7-2基因RNA干扰可沉默DC表面B7-2分子的表达及抑制DC诱导的T细胞增殖效应。 展开更多
关键词 B7-2 RNAi 慢病毒 树突状细胞 共刺激信号
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中蜂囊状幼虫病毒RdRp基因dsRNA干扰的研究
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作者 史红霞 党晓群 +5 位作者 朱祥龙 马振刚 刘永梅 黄钰彬 周泽扬 许金山 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期103-111,共9页
中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)可以引起中蜂幼虫死亡,给中蜂的养殖造成严重的威胁。其RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)是病毒复制中必不可少的中心酶,控制着病毒的复制和翻译过程。本研究以CSB... 中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)可以引起中蜂幼虫死亡,给中蜂的养殖造成严重的威胁。其RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)是病毒复制中必不可少的中心酶,控制着病毒的复制和翻译过程。本研究以CSBV RdRp基因为靶标,选取两个干扰区域RdRp-1和RdRp-2,并构建相应的dsRNA表达载体,获取dsRNA后进行RNAi实验,通过qRT-PCR检测CSBV RdRp基因的表达情况。实验结果显示:干扰片段RdRp-1不能显著下调RdRp基因的转录,而干扰片段RdRp-2可显著性下调RdRp表达并具有剂量依赖性,当添食2μg dsRdRp-2时,在72 h RdRp基因表达下调了85%,CSBV的衣壳蛋白VP1基因下调表达78%,幼虫死亡率降低60%,表明RdRp基因可以作为RNA干扰的靶标用于CSBV防治,本研究为后期在养蜂场进行蜜蜂病毒病的防治奠定了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 中蜂囊状幼虫病毒(CSBV) RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp) dsRNA的体外表达 RNAI
宫颈癌中SIX1和Ezrin的表达及临床意义
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作者 肖芳 赵敏 +4 位作者 李桃 王慧芳 张辉 孙红 黄江梅 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期157-159,共3页
目的检测宫颈癌中SIX1和Ezrin的表达,探讨其在宫颈癌浸润转移中的作用及临床意义。方法采用免疫组化检测2015年10月至2017年10月秦皇岛市第一医院确诊的80例宫颈癌组织和配对癌旁组织中SIX1和Ezrin的表达。应用RNA干扰(RNAi)技术,将SIX1... 目的检测宫颈癌中SIX1和Ezrin的表达,探讨其在宫颈癌浸润转移中的作用及临床意义。方法采用免疫组化检测2015年10月至2017年10月秦皇岛市第一医院确诊的80例宫颈癌组织和配对癌旁组织中SIX1和Ezrin的表达。应用RNA干扰(RNAi)技术,将SIX1-si RNA表达质粒转染宫颈癌Hela细胞,采用RT-PCR和Western blot检测沉默SIX1基因后宫颈癌Hela细胞中SIX1和Ezrin的m RNA和蛋白表达水平。结果宫颈癌组织SIX1的阳性表达率高于癌旁组织,Ezrin的中-强度阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05);二者的表达与宫颈癌FIGO分期和淋巴结转移有关。转染SIX1-si RNA后宫颈癌Hela细胞SIX1和Ezrin的蛋白水平有显著下调。结论 SIX1可能通过调节其下游Ezrin的表达在宫颈癌的发生、发展过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 宫颈癌 RNAI SIX1 EZRIN
基于RNAi和蛋白质组学研究胶孢炭疽菌CgCDC2基因的功能 预览
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作者 夏杨 苏初连 +3 位作者 叶子 刘晓妹 蒲金基 张贺 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1483-1493,共11页
【目的】CDC2是调控细胞周期的主要因子之一,对植物病原菌的生长发育有着重要作用,但目前还未有胶孢炭疽菌CDC2蛋白生物学功能方面的研究。本试验的目的是获得胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgCDC2的RNAi突变体菌株,并分析... 【目的】CDC2是调控细胞周期的主要因子之一,对植物病原菌的生长发育有着重要作用,但目前还未有胶孢炭疽菌CDC2蛋白生物学功能方面的研究。本试验的目的是获得胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgCDC2的RNAi突变体菌株,并分析CgCDC2基因的功能。【方法】利用RNAi技术和PEG介导法获得CgCDC2的RNAi突变体菌株,通过表型分析、TMT蛋白质组学分析和酶活性测定来确定该基因的生物学功能。【结果】通过PCR扩增获得CgCDC2基因,编码一个326个氨基酸的蛋白,其RNAi突变体菌株与野生型相比,生长速率减缓、分生孢子产量显著下降、对H2O2敏感性增强,PG、PL蛋白质含量、基因相对表达量和酶活性均显著降低,致病力减弱。【结论】CgCDC2参与调控胶孢炭疽菌的生长,分生孢子产量,氧化应激反应以及PG、PL的酶活性,从而降低病原菌的致病力。 展开更多
关键词 杧果 胶孢炭疽菌 CDC2 RNAI TMT蛋白质组学 致病力
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siRNA干扰DNALI1基因对HEK-293细胞增殖与迁移的影响 预览
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作者 崔勇 刘功振 《教育教学论坛》 2019年第50期61-62,共2页
文章探讨了siRNA干扰DNALI1基因对HEK-293细胞增殖、迁移的影响。通过培养HEK-293细胞株,分别转染siRNA DNALI1组(DNALI1-homo-66组、DNALI1-homo-426组与DNALI1-homo-777组)和对照组。siRNA DNALI1组细胞中DNALI1 mRNA表达量均低于对照... 文章探讨了siRNA干扰DNALI1基因对HEK-293细胞增殖、迁移的影响。通过培养HEK-293细胞株,分别转染siRNA DNALI1组(DNALI1-homo-66组、DNALI1-homo-426组与DNALI1-homo-777组)和对照组。siRNA DNALI1组细胞中DNALI1 mRNA表达量均低于对照组,三个干扰组中DNALI1-homo-66组干扰效率最高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组和阴性对照组相比,siRNA DNALI1组细胞转染24-48h细胞增殖能力明显减弱,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在细胞水平可通过RNA干扰特异性抑制DNALI1基因来抑制细胞的增殖和迁移能力,为研究DNALI1基因在细胞中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 DNALI1 RNAI Real-Time PCR 增殖 侵袭
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沉默HMGA2表达对人结肠癌HCT116细胞增殖及侵袭能力的影响 预览
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作者 徐广甍 张海娜 +2 位作者 姜丹 张丽梅 丁相福 《癌症进展》 2019年第19期2255-2258,2325共5页
目的研究高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对人结肠癌细胞系HCT116增殖及侵袭能力的影响。方法构建HMGA2短发夹RNA(shRNA)表达载体,转染HCT116细胞,建立稳定沉默HMGA2的HCT116细胞株。将未转染细胞、转染阴性对照质粒细胞及转染HMGA2shRNA质粒... 目的研究高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对人结肠癌细胞系HCT116增殖及侵袭能力的影响。方法构建HMGA2短发夹RNA(shRNA)表达载体,转染HCT116细胞,建立稳定沉默HMGA2的HCT116细胞株。将未转染细胞、转染阴性对照质粒细胞及转染HMGA2shRNA质粒细胞分别命名为CON组、NC组、KD组。通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blot)法对各组细胞HMGA2mRNA及蛋白相对表达情况进行检测,确认沉默及转染效果,并分别应用CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell小室实验,检测HMGA2沉默对细胞增殖及侵袭能力的影响。结果KD组细胞HMGA2mRNA及蛋白相对表达量均低于CON组及NC组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同时间点KD组细胞吸光度值均低于CON组及NC组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。CON组及NC组细胞克隆数、穿膜细胞数均多于KD组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论shRNA可有效沉默结肠癌HCT116细胞中HMGA2的表达。HMGA2对结肠癌细胞的增殖及侵袭等生物学行为具有调控作用,可能成为结肠癌诊断的有效标志物及治疗靶点。 展开更多
关键词 HMGA2 干扰RNA 增殖 侵袭 结肠癌
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