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虾青素纳米载药颗粒靶向神经元细胞的可行性研究
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作者 尤宗琦 吴琪 +5 位作者 周晓明 张翔圣 袁斌 徐伟东 唐祥龙 张鑫 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1387-1390,共4页
目的为改善虾青素(ATX)水溶性差等问题,使用Fe3O4纳米颗粒(NPs)包封ATX,通过体外培养皮层神经元细胞评价其靶向聚集性.方法首先利用改良的高温热解法制备Fe3 O4纳米颗粒,并利用疏水相互作用制备出内包封ATX而表面分子末端修饰聚乙二醇(P... 目的为改善虾青素(ATX)水溶性差等问题,使用Fe3O4纳米颗粒(NPs)包封ATX,通过体外培养皮层神经元细胞评价其靶向聚集性.方法首先利用改良的高温热解法制备Fe3 O4纳米颗粒,并利用疏水相互作用制备出内包封ATX而表面分子末端修饰聚乙二醇(PEG)的虾青素纳米载药颗粒(ATX-NPs),同时为了增强神经元细胞的靶向作用,利用碳化二亚胺法进一步耦联转铁蛋白.通过透射电镜(TEM)观察纳米颗粒形态,动态光散射(DLS)测定其粒径及电势大小.体外实验中,采用16 ~ 18 d孕龄C57BL/6小鼠胚胎的大脑皮层培育原代神经元细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)法测定ATX-NPs对神经元细胞损伤的影响,其次分别采用TEM、共聚焦显微镜(LSCM)及流式细胞术分析ATX-NPs对神经元细胞的靶向聚集性,应用SPSS 25.0软件进行分析.结果 TEM观察可见,制备的ATX-NPs呈近似球形,DLS结果显示,粒径大小约为21 nm,zeta电位约为-28.8 mV.LSCM显示在24 h内ATX-NPs在神经元细胞胞质内有较多聚集.神经元培养基中加入ATX-NPs共同培养24h后,TEM观察到ATX-NPs通过转铁蛋白靶向神经元内吞形成的内涵体,同时流式细胞术也明确了ATX-NPs聚集于神经元细胞内,LDH法检测结果表明,不同浓度的ATX-NPs未使培养液中的LDH发生明显变化(F=0.610,P>0.05).结论耦联转铁蛋白的ATX-NPs有良好的稳定性及生物相容性,并能够靶向聚集于神经元细胞. 展开更多
关键词 虾青素 纳米颗粒 转铁蛋白 原代神经元细胞 靶向聚集
构建基于Keima蛋白的细胞自噬评价体系 预览
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作者 董华 李婷 +3 位作者 陈佳意 姚铖铖 潘欣 李爱玲 《生物技术通讯》 CAS 2019年第2期158-162,200共6页
目的:构建表达Cyto-Keima蛋白的宫颈癌细胞系HeLa及小鼠原代神经元,作为新的细胞自噬评价体系。方法:包装pCDH-Cyto-Keima慢病毒,感染HeLa细胞和小鼠原代神经元,采用激光共聚焦荧光显微镜观察Cyto-Kei.ma蛋白在HeLa细胞和小鼠原代神经... 目的:构建表达Cyto-Keima蛋白的宫颈癌细胞系HeLa及小鼠原代神经元,作为新的细胞自噬评价体系。方法:包装pCDH-Cyto-Keima慢病毒,感染HeLa细胞和小鼠原代神经元,采用激光共聚焦荧光显微镜观察Cyto-Kei.ma蛋白在HeLa细胞和小鼠原代神经元中的表达情况,用已知自噬诱导剂和抑制剂处理细胞,检测该体系对自噬的响应。结果:感染Cyto-Keima慢病毒48h后,通过激光共聚焦荧光显微镜观察,细胞表达Cyto-Keima蛋白;在Earle平衡盐溶液或自噬诱导剂雷帕霉素处理下,HeLa-Cyto-Keima细胞和Cyto-Keima原代神经元自噬水平明显增强;在自噬抑制剂巴弗洛霉素A1和氯喹处理下,细胞自噬水平明显降低。结论:构建了基于Cyto-Keima蛋白的细胞自噬评价体系。 展开更多
关键词 自噬 Cyto-Keima蛋白 评价体系 HELA细胞 原代神经元
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Real-time Microwave Exposure Induces Calcium Efflux in Primary Hippocampal Neurons and Primary Cardiomyocytes 预览
3
作者 WANG Hui ZHANG Jing +4 位作者 HU Shao Hua TAN Sheng Zhi ZHANG Bo ZHOU Hong Mei PENG Rui Yun 《生物医学与环境科学:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第8期561-571,共11页
Objective To detect the effects of microwave on calcium levels in primary hippocampal neurons and primary cardiomyocytes by the real-time microwave exposure combined with laser scanning confocal microscopy. Methods Th... Objective To detect the effects of microwave on calcium levels in primary hippocampal neurons and primary cardiomyocytes by the real-time microwave exposure combined with laser scanning confocal microscopy. Methods The primary hippocampal neurons and primary cardiomyocytes were cultured and labeled with probes, including Fluo-4 AM, Mag-Fluo-AM, and Rhod-2, to reflect the levels of whole calcium [Ca2+], endoplasmic reticulum calcium [Ca2+]ER, and mitochondrial calcium [Ca2+]MIT, respectively. Then, the cells were exposed to a pulsed microwave of 2.856 GHz with specific absorption rate (SAR) values of 0, 4, and 40 W/kg for 6 min to observe the changes in calcium levels. Results The results showed that the 4 and 40 W/kg microwave radiation caused a significant decrease in the levels of [Ca2+], [Ca2+]ER, and [Ca2+]MIT in primary hippocampal neurons. In the primary cardiomyocytes, only the 40 W/kg microwave radiation caused the decrease in the levels of [Ca2+], [Ca2+]ER, and [Ca2+]MIT. Primary hippocampal neurons were more sensitive to microwave exposure than primary cardiomyocytes. The mitochondria were more sensitive to microwave exposure than the endoplasmic reticulum. Conclusion The calcium efflux was occurred during microwave exposure in primary hippocampal neurons and primary cardiomyocytes. Additionally, neurons and mitochondria were sensitive cells and organelle respectively. 展开更多
关键词 Real time Microwave CALCIUM PRIMARY HIPPOCAMPAL neurons PRIMARY CARDIOMYOCYTES
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脊髓康对共培养体系中小胶质细胞吞噬及损伤神经元再生的影响 预览 被引量:2
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作者 潘娅岚 郭杨 +3 位作者 周龙云 苑文超 马勇 黄桂成 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1652-1657,共6页
目的:观察中药复方脊髓康对共培养体系中小胶质细胞吞噬及损伤神经元修复再生的影响。方法:制备脊髓康含药血清,分离、鉴定原代海马神经元、原代小胶质细胞,谷氨酸诱导神经元损伤,含药血清预处理小胶质细胞,建立小胶质细胞/损伤神经... 目的:观察中药复方脊髓康对共培养体系中小胶质细胞吞噬及损伤神经元修复再生的影响。方法:制备脊髓康含药血清,分离、鉴定原代海马神经元、原代小胶质细胞,谷氨酸诱导神经元损伤,含药血清预处理小胶质细胞,建立小胶质细胞/损伤神经元共培养体系,采用免疫荧光双重标记法观察混培养24 h后小胶质细胞对神经元碎片的吞噬作用及96 h后损伤神经元突起生长情况。结果:混合培养24 h后,脊髓康含药血清中、高剂量组在吞噬指数及吞噬百分率方面均高于空白组(P〈0.05),中剂量组低于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)组(P〈0.05),高剂量组与LPS组间的差异则无统计学意义(P〉0.05)。混合培养96 h后,脊髓康含药血清中、高剂量组一级突起数量多于空白组(P〈0.05),与LPS组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。脊髓康中、高剂量组平均突起较空白组长(P〈0.05),与LPS对比,脊髓康中剂量组平均神经突起较短(P〈0.05),而高剂量组则平均突起较长(P〈0.05)。结论:中药复方脊髓康可能通过促进小胶质细胞吞噬神经元碎片,改善局部微环境,从而促进损伤神经元的修复再生。 展开更多
关键词 中药复方 脊髓康 原代小胶质细胞 原代神经元 共培养 吞噬作用 神经元修复再生
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中药复方脊髓康对小胶质细胞吞噬神经元碎片作用的影响 预览 被引量:1
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作者 苑文超 王磊 +3 位作者 马勇 黄桂成 周龙云 郭杨 《实用医学杂志》 北大核心 2017年第20期3359-3363,共5页
目的观察中药复方脊髓康(JSK)对小胶质细胞吞噬神经元碎片的影响。方法制备JSK含药血清,分为低、中、高剂量组,另设空白血清组、脂多糖(LPS)+空白血清组;慢病毒转染绿色荧光蛋白基因(GFP)标记小胶质细胞;分离、鉴定原代神经元,... 目的观察中药复方脊髓康(JSK)对小胶质细胞吞噬神经元碎片的影响。方法制备JSK含药血清,分为低、中、高剂量组,另设空白血清组、脂多糖(LPS)+空白血清组;慢病毒转染绿色荧光蛋白基因(GFP)标记小胶质细胞;分离、鉴定原代神经元,建立损伤神经元模型,并将损伤神经元与转染后小胶质细胞混合培养。荧光显微镜下观察含药血清干预后小胶质细胞吞噬神经元碎片的情况。结果 JSK中、高剂量组小胶质细胞吞噬百分率及吞噬指数与空白组对比差异具有统计学意义(P〈0.001);与和脂多糖+空白血清组比较,JSK高剂量组在吞噬百分率方面无差异,而在吞噬指数方面具有明显优势(P〈0.05)。结论中药复方JSK能促进小胶质细胞吞噬神经元碎片,为神经元生长提供良好的生存环境。 展开更多
关键词 中药复方 小胶质细胞 原代神经元 吞噬作用 转染
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海马神经元初级纤毛染色技术探索 预览
6
作者 周晓春 王珊珊 安云鹤 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第3期107-109,129共4页
为了建立体外原代培养的大鼠海马神经元初级纤毛的染色标记方法,以体外原代培养的18 d胎鼠的海马神经元为研究材料,应用荧光免疫细胞化学实验技术,分别在不同的时间点,应用不同的初级纤毛蛋白标记物的抗体[抗ADP核糖基化因子相似蛋白-13... 为了建立体外原代培养的大鼠海马神经元初级纤毛的染色标记方法,以体外原代培养的18 d胎鼠的海马神经元为研究材料,应用荧光免疫细胞化学实验技术,分别在不同的时间点,应用不同的初级纤毛蛋白标记物的抗体[抗ADP核糖基化因子相似蛋白-13B(ARL13B)抗体,抗III型腺苷酸环化酶(ACIII)抗体]对海马神经元初级纤毛进行染色,然后应用倒置荧光显微镜观察记录染色结果。从免疫荧光图像中看出,anti-ARL13B抗体和anti-ACIII抗体都能较好地标记海马神经元初级纤毛,但anti-ARL13B抗体的染色效果更佳。随着体外原代培养天数的增加,初级纤毛长度逐步增加(anti-ACIII抗体标记组:纤毛生长从第1天的3.3μm到第14天的8.5μm逐渐增加;antiARL13B抗体标记组:纤毛生长从第1天的4.4μm到第14天的9.1μm逐渐增加)。对星型胶质细胞的ACIII和ARL13B进行免疫荧光染色,也能较好地标记其初级纤毛。ARL13B和ACIII都能作为大鼠海马神经元初级纤毛的标记物,但ARL13B体现出更好的特异性。初级纤毛会伴随着海马神经元的发育成熟而生长,提示初级纤毛在海马神经元的发育过程中可能发挥着重要作用。ARL13B和ACIII也可以作为星型胶质细胞初级纤毛的染色标志。 展开更多
关键词 初级纤毛 海马神经元 免疫荧光 ADP核糖基化因子相似蛋白-13B III型腺苷酸环化酶
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全反式视黄酸通过RARα抑制缺氧缺糖引起的原代神经元凋亡
7
作者 郭敏 江伟 +4 位作者 侯娜丽 谷燕 黄鸿眉 陈洁 李廷玉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期8-13,共6页
目的 :探讨全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是否能够抑制缺氧缺糖损伤(oxygen and glucose-deprivation,OGD)诱导的原代神经元凋亡。方法 :采用原代神经元作为研究对象,分为对照组、OGD组、OGD+ATRA组;体外分离培养... 目的 :探讨全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是否能够抑制缺氧缺糖损伤(oxygen and glucose-deprivation,OGD)诱导的原代神经元凋亡。方法 :采用原代神经元作为研究对象,分为对照组、OGD组、OGD+ATRA组;体外分离培养原代神经元,用神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)鉴定神经元;倒置显微镜观察OGD损伤前后细胞形态变化;流式细胞技术研究OGD损伤后各组原代神经元凋亡水平;Real-time PCR检测视黄酸核受体α(retinoic acid receptor alpha,RARα)、转录生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、转录生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3)mRNA表达水平;Western blot印迹检测RARα、TGF-β、Caspase-3蛋白表达水平。结果 :成功培养原代神经元;原代神经元OGD损伤后,倒置显微镜观察发现OGD组死亡的原代神经元较OGD+ATRA组明显增多,细胞更加杂乱;流式细胞计数发现OGD+ATRA组(26.11±2.96)%细胞凋亡率较OGD组(52.14±5.23)%明显降低(P=0.025);OGD+ATRA组RARαmRNA表达水平(1.52±0.43)和蛋白表达水平(0.22±0.02)较OGD组的m RNA表达水平(0.49±013)和蛋白表达水平(0.10±0.02)均明显增高(P=0.006,P=0.005),而OGD+ATRA组TGF-β1、TGF-β2 m RNA表达水平(0.45±0.10,0.41±0.08)分别较OGD组(0.81±0.15,0.98±0.15)明显降低(P=0.034,P=0.018),而且OGD+ATRA组TGF-β、Caspase-3蛋白表达水平(0.22±0.04,0.18±0.03)分别较OGD组(0.39±0.05,0.47±0.06)也明显降低(P=0.016,P=0.002),OGD+ATRA组(1.08±0.49)与OGD组(1.00±0.15)Caspase-3 m RNA表达水平无明显差异(P=0.148)。结论 :ATRA可以激活其受体RARα进而下调TGF-β,抑制凋亡因子Caspase-3的表达,最终抑制OGD损伤引起的原代神经元凋亡。 展开更多
关键词 全反式视黄酸 缺氧缺糖损伤 原代神经元 转录生长因子β 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3
丙烯酰胺对原代培养大鼠大脑皮质神经元毒性作用的研究
8
作者 张亚琼 李细霞 +4 位作者 赵萌萌 梁自豪 马宇昕 李国营 刘靖 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期208-214,共7页
目的:研究丙烯酰胺(acrylamide,ACR)对体外原代培养的大鼠大脑皮质神经元的毒性作用。方法:原代培养新生SD大鼠大脑皮质神经元,将培养至第7天的神经元分为空白对照组,丙烯酰胺不同浓度组。染毒后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测... 目的:研究丙烯酰胺(acrylamide,ACR)对体外原代培养的大鼠大脑皮质神经元的毒性作用。方法:原代培养新生SD大鼠大脑皮质神经元,将培养至第7天的神经元分为空白对照组,丙烯酰胺不同浓度组。染毒后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组皮质神经元的存活率,倒置显微镜观察各组皮质神经元的形态学变化,Hoechst33258染色法观察皮质神经元核形态的变化。结果:MTT结果显示各剂量ACR组的神经元存活率与对照组相比都显著降低,并且呈时间和剂量依赖性。ACR可造成皮质神经元突起萎缩,胞体肿胀,并可以诱导皮质神经元发生核固缩、碎裂,出现典型的凋亡特征,且随着浓度的升高,毒性作用加重。结论:ACR可对原代培养的大鼠大脑皮质神经元产生毒性损伤作用。它能抑制皮质神经元的存活,诱导神经元形态结构的改变、凋亡的发生。 展开更多
关键词 原代培养 丙烯酰胺 皮质神经元 神经毒性
邻苯二甲酸-单-乙基己基酯对原代培养新生大鼠下丘脑神经元活性的影响及其氧化损伤作用 被引量:1
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作者 黄玉敬 高娜 孙增荣 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期1058-1060,共3页
目的探讨邻苯二甲酸-单-乙基己基酯[mono-(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]对原代培养新生大鼠下丘脑神经元活性的影响及其氧化损伤作用。方法选取24 h内新生清洁级SD大鼠,取下丘脑神经元进行原代培养,分别加入含终浓度0(溶剂对照)、1... 目的探讨邻苯二甲酸-单-乙基己基酯[mono-(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]对原代培养新生大鼠下丘脑神经元活性的影响及其氧化损伤作用。方法选取24 h内新生清洁级SD大鼠,取下丘脑神经元进行原代培养,分别加入含终浓度0(溶剂对照)、10-12、10-9、10-6、10-3、1.0 mmol/L MEHP的培养液暴露24 h。采用MTT法测定下丘脑神经元的活性,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力和丙二醛(MDA)的含量。结果与溶剂对照组比较,仅1.0 mmol/L MEHP暴露组新生大鼠下丘脑神经元的存活率较低,差异有统计学意义(P〈0.05);且随着MEHP暴露剂量的升高,新生大鼠下丘脑神经元的存活率呈下降趋势。与溶剂对照组比较,仅1.0 mmol/L MEHP暴露组新生大鼠下丘脑神经元上清液中的MDA含量升高,差异有统计学意义(P〈0.05);而各MEHP暴露组新生大鼠下丘脑神经元上清液中的SOD活力均无明显改变。结论MEHP可抑制原代培养新生大鼠下丘脑神经元活性,并具有氧化损伤作用,提示其可能是MEHP神经毒性机制之一。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸-单-乙基己基酯 原代培养 下丘脑神经元 神经元活力 氧化损伤
α-突触核蛋白促进原代神经元及转基因小鼠神经细胞表面NMDA受体的内在化 预览
10
作者 陈予东 杨巍巍 +3 位作者 李昕 王鹏 李旭冉 于顺 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第5期596-600,共5页
目的在原代培养神经元及转基因动物水平上,研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)对神经细胞表面N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的影响及其机制。方法免疫荧光标记法和Western blotting测定NMDA受体(NMDA r... 目的在原代培养神经元及转基因动物水平上,研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)对神经细胞表面N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的影响及其机制。方法免疫荧光标记法和Western blotting测定NMDA受体(NMDA receptor,NMDAR)和Rab5B质量分数。Rab5B反义寡核苷酸抑制Rab5B基因表达。以原代培养神经细胞及转基因小鼠为模型,观察α-Syn蛋白增多对细胞膜NMDAR质量分数的影响以及Rab5B的作用。结果在细胞及动物水平,α-Syn明显上调Rab5B表达,促进NMDAR的内在化。而抑制Rab5B表达可消除α-Syn致NMDAR的内在化。结论α-Syn通过上调Rab5B的表达促进NMDAR的内在化。 展开更多
关键词 Α-突触核蛋白 转基因小鼠 原代神经元 N-甲基-D-天门冬氨酸 内在化
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原代神经元转染方法 被引量:3
11
作者 刘俊燕 赵凤艳 +1 位作者 屈艺 母得志 《生命的化学》 CAS CSCD 2013年第4期455-460,共6页
体外培养的原代神经元形态和功能与在体神经元相似,在神经系统疾病研究中能提供准确的生物学信息,是研究神经系统疾病的重要工具。转染技术的发展,为研究原代培养神经元基因和蛋白质功能提供了技术支持。本文总结了近年来原代神经元... 体外培养的原代神经元形态和功能与在体神经元相似,在神经系统疾病研究中能提供准确的生物学信息,是研究神经系统疾病的重要工具。转染技术的发展,为研究原代培养神经元基因和蛋白质功能提供了技术支持。本文总结了近年来原代神经元转染方法的研究进展,比较了不同转染方法如磷酸钙沉淀法、脂质体介导转染、电穿孔法、病毒介导转染等的优缺点,为选择最佳的神经元基因转染技术提供有价值的参考。 展开更多
关键词 原代神经元 转染方法 磷酸钙沉淀法 脂质体法 电穿孔法 病毒转染
皮质神经元B27原代培养及MAP2鉴定 被引量:13
12
作者 曹珂 刘检 +1 位作者 苗露阳 张予阳 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期40-43,共4页
目的对原代新生鼠皮质神经元原代培养方法进行改进,以获得纯度更高、体外更易存活的神经元进行相关实验研究。方法采用胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮质神经元悬液,进行培养,用倒置相差显微镜观察细胞形态,利用神经元特异性... 目的对原代新生鼠皮质神经元原代培养方法进行改进,以获得纯度更高、体外更易存活的神经元进行相关实验研究。方法采用胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮质神经元悬液,进行培养,用倒置相差显微镜观察细胞形态,利用神经元特异性标志物微管相关蛋白2(MAP2)鉴定培养神经元的纯度。结果神经元细胞存活率高,在体外培养条件下细胞状态良好,生长旺盛。培养第4天,可见多数细胞长出1、2个突起并交织成网。培养第8天细胞胞体较大,能形成典型的神经细胞网络。培养第10天,鉴定神经元纯度质量分数达90%以上。结论该方法简便可行,是体外培养神经元较理想的方法。 展开更多
关键词 大鼠 原代培养 皮质神经元 鉴定
Oxygen-glucose deprivation of neurons transfected with toll-like receptor 3-siRNA Determination of an optimal transfection sequence 预览 被引量:1
13
作者 Guiyun Cui Xiaopeng Wang +3 位作者 Xinchun Ye Jie Zu Kun Zan Fang Hua 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2013年第34期3233-3240,共8页
Toll-like receptor 3 protein expression has been shown to be upregulated during cerebra ischemia/reperfusion injury in rats.In this study,rat primary cortical neurons were subjected to oxygen-glucose deprivation to si... Toll-like receptor 3 protein expression has been shown to be upregulated during cerebra ischemia/reperfusion injury in rats.In this study,rat primary cortical neurons were subjected to oxygen-glucose deprivation to simulate cerebral ischemia/reperfusion injury.Chemically synthesized small interfering RNA(siRNA)-1280,-1724 and-418 specific to toll-like receptor 3 were transfected into oxygen-glucose deprived cortical neurons to suppress the upregulation of toll-like receptor 3 protein expression.Western blotting demonstrated that after transfection with siRNA toll-like receptor 3 protein expression reduced,especially in the toll-like receptor 3-1724 group These results suggested that siRNA-1724 is an optimal sequence for inhibiting toll-like receptor 3expression in cortical neurons following oxygen-glucose deprivation. 展开更多
关键词 TOLL样受体 皮层神经元 核糖核酸 转染 缺氧 缺血 再灌注损伤 WESTERN印迹 TOLL样受体
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NMDA受体的活化调节原代皮层神经元的Wnt/β-catenin信号通路 被引量:1
14
作者 彭彦茜 万仙子 +4 位作者 李屹晨 李莎莎 张薇 Tang Shaojun 钟翎 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 250-256,共7页
经典的Wnt/β-catenin信号通路在中枢神经系统突触形成和功能中发挥重要的调节作用。作为兴奋性神经递质的谷氨酸,与其受体结合,参与许多信号调节活动。为了探讨NMDA受体活化对Wnt/β-catenin信号通路的作用,该文利用18 d的C57小鼠胚胎... 经典的Wnt/β-catenin信号通路在中枢神经系统突触形成和功能中发挥重要的调节作用。作为兴奋性神经递质的谷氨酸,与其受体结合,参与许多信号调节活动。为了探讨NMDA受体活化对Wnt/β-catenin信号通路的作用,该文利用18 d的C57小鼠胚胎培养皮层神经元(离体10 d),用10μmol/L谷氨酸钠(monosodium glutamate,MSG)和50μmol/L N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)处理细胞,通过蛋白免疫印迹技术或者细胞免疫荧光染色分析Wnt/β-catenin信号通路关键成员。结果发现,NMDA受体的活化能使GSK-3β的Ser9位磷酸化水平增加,活性被抑制,胞浆内β-catenin蛋白降解减少,入核增加,激活下游基因表达。这些结果提示,NMDA受体激活能够上调Wnt/β-catenin信号通路。 展开更多
关键词 NMDA受体 WNT/Β-CATENIN信号通路 原代培养 皮层神经元
乳鼠皮层神经元原代培养改良方法及基本电生理特性研究 被引量:5
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作者 赵丽 陈瑶 +1 位作者 龚丽景 吕媛媛 《北京体育大学学报》 CSSCI 北大核心 2012年第10期42-45,75共5页
目的:对原有乳鼠大鼠皮层神经元的原代培养方法进行改进,获得高质量且体外存活时间更长的神经元,以期应用于对细胞功能状态要求高的相关研究。方法:多聚赖氨酸预处理培养皿,分离出生24 h之内的SD大鼠大脑皮层神经元,采用机械吹打与胰... 目的:对原有乳鼠大鼠皮层神经元的原代培养方法进行改进,获得高质量且体外存活时间更长的神经元,以期应用于对细胞功能状态要求高的相关研究。方法:多聚赖氨酸预处理培养皿,分离出生24 h之内的SD大鼠大脑皮层神经元,采用机械吹打与胰蛋白酶化学消化相结合的方法制备单细胞悬液,经计数后以1×105/mL的细胞密度接种。24 h后加阿糖胞苷(3μg/mL)以抑制非神经细胞过度增殖。培养3d后将培养液全量换为添加B27的培养液。用倒置相差显微镜观察细胞形态,并用膜片钳单通道记录法记录BKCa通道电流。结果:对原有培养方法改进后获得可长期存活的形态典型神经元。在培养36 d时,用膜片钳单通道记录法仍能记录到正常的BKCa通道电流。结论:该培养方法简单,经济,结果稳定,可作为体外原代培养乳鼠神经元的良好实验模型。 展开更多
关键词 原代培养 皮层神经元 乳鼠 膜片钳 BKCa通道电流
15-脱氧前列腺素J2在大鼠缺氧性神经细胞损伤中的作用 预览 被引量:1
16
作者 裴丽春 张一娜 +3 位作者 张震环 刘美玲 韩晶 张艳桥 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第14期 1829-1831,共3页
目的观察环氧合酶-2的代谢产物15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)在原代培养的大鼠皮质神经细胞损伤中的作用。方法原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为未处理组、缺氧再复氧组、不同浓度15d-PGJ2处理的缺氧再复氧组。用噻唑蓝(MTT)比色... 目的观察环氧合酶-2的代谢产物15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)在原代培养的大鼠皮质神经细胞损伤中的作用。方法原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为未处理组、缺氧再复氧组、不同浓度15d-PGJ2处理的缺氧再复氧组。用噻唑蓝(MTT)比色法测定神经细胞生存率,用DNA凝胶电泳法检测神经细胞凋亡情况。结果 15d-PGJ2具有剂量依赖性保护神经细胞免于缺氧导致的死亡的作用,15d-PGJ2在10μmmol/L以上保护神经细胞,与未处理组比较差异有统计学意义(P〈0.01);15d-PGJ2预处理组皮质神经细胞凋亡的DNA所出现的梯形裂解条带比单纯缺氧再复氧组明显减轻。结论环氧合酶-2代谢产物15d-PGJ2参与了神经细胞死亡、凋亡的病理过程,减轻缺氧再复氧后神经细胞的损伤。 展开更多
关键词 大鼠 缺氧损伤 原代神经元细胞 15脱氧前列腺素J2
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原代皮质神经元的转染及RNA干扰 预览
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作者 曹邓晗 《中国中医药咨讯》 2010年第34期 31-32,共2页
目的:探讨成功转染原代神经元的方法,为有效利用RNA干扰技术(RNAi)技术研究、治疗中枢神经系统疾病奠定基础。方法:取新生sD鼠皮质神经元,采用Amaxa Nucleofector?技术将外源GFP表达质粒PEGFP—C1vector转染进原代皮质神经元,... 目的:探讨成功转染原代神经元的方法,为有效利用RNA干扰技术(RNAi)技术研究、治疗中枢神经系统疾病奠定基础。方法:取新生sD鼠皮质神经元,采用Amaxa Nucleofector?技术将外源GFP表达质粒PEGFP—C1vector转染进原代皮质神经元,在荧光显微镜下观察转染效率;同时还将干扰GFP的siRNA转染进原代皮质神经元,通过观察GFP荧光的变化,来探讨原代神经元内的RNAi现象。结果:在Amaxa Nucleofector?转染技术和转染体系下,PEGFP—C1 vector可有效进入原代皮质神经元并进行表达,当共转染特异性siRNA时可呈现出明显的基因干扰现象。在此过程中神经元没有明显的神经毒性反应。结论:Amaxa Nucleofector技术是一种有效转染原代皮质神经元的方法。该方法解决了以往传统转染方法不能有效转染原代神经元的难题,从而为进一步利用原代神经元研究中枢神经系统疾病提供了良好的技术支持。 展开更多
关键词 原代神经元 RNA干扰
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咖啡酸对大鼠海马神经元铝盐损伤的保护作用 预览 被引量:10
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作者 黄砚 杨俊卿 谢灵瑶 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期 1605-1609,共5页
目的建立氯化铝致原代培养大鼠海马神经元损伤模型,观察咖啡酸对神经元铝盐损伤的保护作用。方法新生24h内SD大鼠海马神经元原代培养,7d后用免疫组化鉴定纯度;并分成空白对照组(NaCl200μmol.L^-1)、铝负荷模型组(AlCl3200μmol.L^-... 目的建立氯化铝致原代培养大鼠海马神经元损伤模型,观察咖啡酸对神经元铝盐损伤的保护作用。方法新生24h内SD大鼠海马神经元原代培养,7d后用免疫组化鉴定纯度;并分成空白对照组(NaCl200μmol.L^-1)、铝负荷模型组(AlCl3200μmol.L^-1)、铝和不同浓度的5-LO抑制剂咖啡酸(10^-6、10^-7、10^-8mol.L^-1)混合处理组。以HE染色,MTT测定,LDH漏出率,SOD活性和MDA含量为观测指标。结果神经元纯度超过95%。铝负荷致神经细胞数目明显减少,神经元突起减少变短,原代培养海马神经元活力降低,LDH漏出明显增多,SOD活性降低,MDA含量升高。咖啡酸能剂量依赖性地减轻铝盐所致的原代培养的海马神经元损伤,提高神经细胞的活力,减少LDH漏出,明显阻遏铝负荷所致的神经元SOD活性的降低和MDA含量的升高。结论咖啡酸对铝负荷所致的原代培养大鼠海马神经元损伤有一定的保护作用,其机制可能与其抑制5-LO活性,进而抑制炎症反应和氧化应激有关。 展开更多
关键词 5-LO 咖啡酸 原代培养 海马神经元 铝负荷 保护 氧化应激
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知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用 预览 被引量:15
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作者 邓云 马百平 +3 位作者 从玉文 沈玉先 张晶晶 沈玉君 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期 244-247,共4页
目的研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD... 目的研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD(超氧化物歧化酶)活力、MDA(丙二醛)含量以及ACHE(乙酰胆碱酯酶)活力。结果知母皂苷BⅡ10^-4、10^-5mol·L^-1能明显增强Aβ25-35(20μmol·L^-1)诱导的神经细胞增殖活性,降低LDH漏出率,并能明显提高其SOD活力、降低MDA含量,同时对AChE活力具有一定的降低作用。结论知母皂苷BⅡ能明显改善Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤,可能与其提高模型细胞的抗氧化能力,改善胆碱能系统相关。 展开更多
关键词 知母皂苷BⅡ AΒ25-35 原代大鼠神经细胞
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新生大鼠海马神经元原代培养及钾离子通道特性研究 预览 被引量:5
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作者 张红 程洁 +3 位作者 汪溪洁 程宏 高蓉 肖杭 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期 335-338,共4页
目的建立大鼠海马神经元原代培养方法,记录钾电流并观察其特性。方法无血清培养法进行海马神经元原代培养,从形态学和电生理学方面鉴定细胞活性;全细胞膜片钳技术记录钾电流,从药理学和动力学观察钾通道特性。结果经5—7d培养,获... 目的建立大鼠海马神经元原代培养方法,记录钾电流并观察其特性。方法无血清培养法进行海马神经元原代培养,从形态学和电生理学方面鉴定细胞活性;全细胞膜片钳技术记录钾电流,从药理学和动力学观察钾通道特性。结果经5—7d培养,获得胞膜完整、胞质均匀的海马神经元,并记录到典型的全细胞电压依赖性钾电流(IK)、延迟整流钾电流(IKDR),IK和IKDR均为外向电流,激活电压分别为-50mV和-40mv,随着去极化程度增加而增加,能被已知的钾通道的阻断剂4-AP和TEA—C1阻断,IK和IKDR的半教最大激活膜电位(V1/2)分别为(22.1676±2.1778)mV(n=6)和(17.8457±1.7767)mV(n=6),斜率因子(K)分别为(-6.1541±3.0541)mV(n=6)和(-6.5193±2.1894)mV(n=6)。结论在该实验条件下培养的海马神经元形态和生理特性起好,较好的表达了电压依赖性钾离子通道特性,适合电生理研究。 展开更多
关键词 细胞培养 海马神经元 大鼠 膜片钳 电压依赖性钾通道
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