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PCV2、PRV、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用 预览
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作者 辛长勋 郑书轩 +7 位作者 时建立 彭喆 吴晓燕 高梅 刘玉伟 王硕 王金宝 李俊 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第2期65-68,共4页
根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)有关基因序列,通过序列比对及参考相关文献,设计了3对特异性引物。通过优化,建立了可同时检测PCV2、PRV及PPV3种病毒的多重PCR方法。结果表明,该方法能... 根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)有关基因序列,通过序列比对及参考相关文献,设计了3对特异性引物。通过优化,建立了可同时检测PCV2、PRV及PPV3种病毒的多重PCR方法。结果表明,该方法能同时检测到PCV2、PRV及PPV的最低核酸量分别为40pg、72pg、46pg。对猪圆环病毒3型(PCV3)、猪细环病毒(TTSuV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)无扩增。应用该方法对87份临床样品进行检测,PCV2阳性检出率为28.7%(25/87),PRV野毒检出率为11.5%(10/87),PPV检出率为12.6%(11/87)。其中2种以上病毒混合感染阳性率为13.8%(12/87),3种病毒同时感染的阳性率为2.3%(2/87),其结果也与单一PCR结果一致。研究结果提示,该方法可用于PCV2、PRV、PPV三种病原的单一感染或混合感染的鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病毒 猪细小病毒 多重PCR
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猪圆环病毒2型与猪细小病毒混合感染对仔猪致病性的研究 预览
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作者 刘国阳 唐波 +3 位作者 常晨 华涛 侯继波 张道华 《江西农业学报》 CAS 2019年第9期79-85,共7页
对35日龄健康仔猪进行人工单独或混合感染猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2),采用临床症状、组织病理学变化和血清学检测等手段,比较了不同实验组攻毒后仔猪的症状差异。实验结果显示:PPV和PCV2混合感染能够引起更加严重的断奶仔猪... 对35日龄健康仔猪进行人工单独或混合感染猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2),采用临床症状、组织病理学变化和血清学检测等手段,比较了不同实验组攻毒后仔猪的症状差异。实验结果显示:PPV和PCV2混合感染能够引起更加严重的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状,并加重PCV2引起的间质性肺炎和仔猪消瘦的严重程度;混合感染后,仔猪病毒血症出现更早,持续时间更长,且病毒含量明显高于单独感染组;混合感染组仔猪的PCV2 ELISA抗体水平和血清抗体水平均显著高于PCV2单独感染组的。说明PPV能够明显增强PCV2的临床症状,加重PMWS的发病程度。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 猪细小病毒 混合感染 致病性
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广西猪细小病毒6型VP1基因序列进化分析
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作者 尹柏双 赵翠青 +2 位作者 刘立明 沙万里 李国江 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第4期70-73,共4页
为研究广西地区是否存在猪细小病毒6型(PPV6)毒株流行,分析PPV6毒株遗传进化和分子特征,采用PCR技术对广西地区采集的猪组织样品进行PPV6基因片段检测。结果表明,广西地区猪群存在PPV6,感染率为36%(27/75),同时也存在着PPV6与猪圆环病毒... 为研究广西地区是否存在猪细小病毒6型(PPV6)毒株流行,分析PPV6毒株遗传进化和分子特征,采用PCR技术对广西地区采集的猪组织样品进行PPV6基因片段检测。结果表明,广西地区猪群存在PPV6,感染率为36%(27/75),同时也存在着PPV6与猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染现象,感染率为32%;5株PPV6 VP1基因与中国参考株TJ株、韩国参考株KSU1-AZ-2014株、美国参考株U18-4株、波兰参考株P15-1株核苷酸序列同源性分别为99.3%~99.8%,99.3%~99.8%,98.9%~99.8%,99.3%~99.8%;VP1基因遗传进化分析表明,PPV6包含两个基因亚群,5株PPV6与中国参考株BJ、SC、JS、TJ株及波兰参考株处在G2亚群,而美国U18-4株则单独处于一个G1亚群。本研究为中国PPV6毒株流行病学及其病毒致病性研究提供研究基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒6型 VP1基因 遗传进化 广西
利用E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白的研究 预览
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作者 王幸 张建楼 +2 位作者 霍珊珊 仲飞 张辉 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期90-95,共6页
为通过E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白,本试验利用DNAstar软件确定含有抗原表位的NS1蛋白片段,然后运用PCR方法从含有NS1基因的载体中扩增NS1抗原表位区基因片段,并将该基因片段插入到原核表达载体pGEX4T1中,构建成与GS... 为通过E.coli表达系统制备猪细小病毒NS1抗原表位区蛋白,本试验利用DNAstar软件确定含有抗原表位的NS1蛋白片段,然后运用PCR方法从含有NS1基因的载体中扩增NS1抗原表位区基因片段,并将该基因片段插入到原核表达载体pGEX4T1中,构建成与GST标签融合的NS1抗原表位基因的表达载体pGEXGSTNS1,将表达载体转化BL21大肠杆菌筛选出工程菌。经IPTG诱导表达NS1融合蛋白,经GST琼脂糖凝胶磁珠分离纯化,制备出与GST融合的NS1抗原表位蛋白。经SDSPAGE以及Westernblot鉴定,制备的NS1融合蛋白分子量和预期一致,并且可以和抗GST标签抗体进行特异反应,表明NS1抗原蛋白已成功制备,为下一步NS1抗体的研制提供了必要的条件。 展开更多
关键词 猪细小病毒 NS1蛋白 抗原表位 分离纯化
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ST悬浮细胞系的驯化与猪细小病毒的培养 预览
5
作者 赵刚 闫冰 刘鑫莹 《饲料博览》 2019年第10期28-30,共3页
将贴壁的ST细胞驯化为可单细胞悬浮生长的细胞,并进行猪细小病毒大规模培养。采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的ST-S细胞。结果表明,经悬浮驯化后的ST-S细胞呈现较好的单细胞悬浮生长状态,细胞呈圆球形,结团现象较少... 将贴壁的ST细胞驯化为可单细胞悬浮生长的细胞,并进行猪细小病毒大规模培养。采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的ST-S细胞。结果表明,经悬浮驯化后的ST-S细胞呈现较好的单细胞悬浮生长状态,细胞呈圆球形,结团现象较少,胞体大小基本一致,生长速度正常,最大细胞密度可以达到每毫升4.5×106个细胞。说明经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的ST细胞株,为大规模工业化生产ST细胞提供技术支持。 展开更多
关键词 ST悬浮细胞系 猪细小病毒 驯化 培养
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猪细小病毒生物学研究进展 预览
6
作者 陈玉梅 马丽萍 周景明 《河南农业科学》 北大核心 2019年第11期1-6,共6页
猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是猪繁殖障碍最常见和最重要的病原之一。一直以来,人们认为PPV的遗传变异性很低,通过接种疫苗可以很好地控制该病毒的传播。然而,该病毒的多样性比预期的要大得多,并且一些新出现的强毒株不能被经典... 猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是猪繁殖障碍最常见和最重要的病原之一。一直以来,人们认为PPV的遗传变异性很低,通过接种疫苗可以很好地控制该病毒的传播。然而,该病毒的多样性比预期的要大得多,并且一些新出现的强毒株不能被经典PPV疫苗株的抗血清有效中和,导致免疫失败。通过总结PPV研究的最新成果,全面更新对PPV生物学的理解,揭示在选择压力下,PPV新毒株出现的潜在风险及其对养猪业的危害,旨在为制定PPV的有效防控策略提供参考。 展开更多
关键词 猪细小病毒 生物学特性 发病机制 遗传变异
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猪细小病毒NJ株ST细胞适应性研究 预览
7
作者 唐波 刘国阳 +2 位作者 常晨 华涛 张道华 《安徽农业科学》 CAS 2019年第18期93-94,110共3页
为评价ST细胞代次的增高对猪细小病毒NJ株免疫原性的影响,将第10、30、60代ST细胞分别接种猪细小病毒NJ株F8 、F18代毒种进行病毒培养,通过检测其病毒含量、血凝价以及制备疫苗免疫机体的抗体水平等指标来进行评价。结果表明,各代次病... 为评价ST细胞代次的增高对猪细小病毒NJ株免疫原性的影响,将第10、30、60代ST细胞分别接种猪细小病毒NJ株F8 、F18代毒种进行病毒培养,通过检测其病毒含量、血凝价以及制备疫苗免疫机体的抗体水平等指标来进行评价。结果表明,各代次病毒含量为10 7.2 ~10 7.5 TCID 50 /mL,血凝价为2 9~2 10;制苗后免疫阴性豚鼠与后备母猪,免疫28 d后均出现抗体反应,HI效价分别为2 7~2 9和2 8~2 9。不同代次毒种接种不同代次ST细胞培养的病毒含量、血凝价及疫苗免疫效力均符合要求。各代次细胞增殖性能稳定,培养的PPV NJ株均能满足兽用生物制品的生产要求。 展开更多
关键词 猪细小病毒 ST细胞 适应性
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猪细小病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 预览
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作者 粟元文 王怀禹 魏玲 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第1期65-68,共4页
为制备针对猪细小病毒(PPV)NS1蛋白的单克隆抗体,本研究以原核表达的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,获得了3株能稳定分泌抗PPVNS1蛋白的杂交瘤细胞株,间接ELISA检测3株单... 为制备针对猪细小病毒(PPV)NS1蛋白的单克隆抗体,本研究以原核表达的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,获得了3株能稳定分泌抗PPVNS1蛋白的杂交瘤细胞株,间接ELISA检测3株单克隆抗体腹水的抗体效价分别达到1∶2.048×10^6、1∶4.096×10^6和1∶2.048×10^6,染色体数分别为10^5、10^4和10^6,均能与PPVNS1重组蛋白及PRV毒株感染的PK-15细胞发生特异性反应,而与6种常见病毒不发生交叉反应。表明制备的3株NS1蛋白单克隆抗体效价高、特异性强,为NS1蛋白抗原表位分析、结构与功能研究,以及PPV免疫学诊断试剂的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒 NS1蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定
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猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒二重Luminex x-TAG方法的建立 被引量:1
9
作者 朱余军 徐宁 +7 位作者 肖丽 伍妙梨 饶丹 徐凤娇 练月晓 黄韧 郭鹏举 陈梅丽 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2258-2261,共4页
为了建立一种快速、特异、灵敏且能同时检测猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)二重Luminex x-TAG方法,参照GenBank中PPV的NS-1基因序列和PRV的ICP8基因序列,设计了2对特异性引物,其中上游引物5′端加一段TAG序列,下游引物5′端用生... 为了建立一种快速、特异、灵敏且能同时检测猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)二重Luminex x-TAG方法,参照GenBank中PPV的NS-1基因序列和PRV的ICP8基因序列,设计了2对特异性引物,其中上游引物5′端加一段TAG序列,下游引物5′端用生物素标记,进行二重PCR扩增。然后将PCR产物与链霉亲和素-藻红蛋白、磁珠混匀,42℃孵育25min,混合物在Luminex200仪器上进行读数分析。并用该方法进行特异性、灵敏度、重复性及临床样品的检测。结果显示,该方法与其他猪的病原无交叉反应,两者的检测下限都可达1×10^2 copies/μL,批内批间的变异系数都在4%以下;在30份临床样品中,PPV和PRV的检出率分别为13.3%和60.0%,比普通PCR的检出率高。结果表明,本研究建立的二重Luminex x-TAG方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好,可同时检测PPV和PRV两种病毒,可用于猪场中PPV和PRV的流行病学调查。 展开更多
关键词 猪细小病毒 猪伪狂犬病病毒 LUMINEX x-TAG
猪细小病毒检测基因芯片的构建及初步应用 预览
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作者 吴凤笋 吕玉金 +2 位作者 刘玲玲 赵迪 李文刚 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第1期37-39,共3页
本研究以猪细小病毒VP2基因为目的基因设计引物和探针,通过不对称PCR扩增Cy3标记的DNA片段与固定于芯片上的探针进行杂交,对杂交芯片进行扫描分析,根据荧光信号的强度来确定是否存在猪细小病毒。结果表明,采用浓度为5μmol/L的探针与PC... 本研究以猪细小病毒VP2基因为目的基因设计引物和探针,通过不对称PCR扩增Cy3标记的DNA片段与固定于芯片上的探针进行杂交,对杂交芯片进行扫描分析,根据荧光信号的强度来确定是否存在猪细小病毒。结果表明,采用浓度为5μmol/L的探针与PCR产物于47℃杂交1 h即可得到清晰的荧光信号,检测灵敏度可达34.5 ng/μL,同时用制备的基因芯片对临床20份疑似猪细小病毒病感染的病料进行检测,检测结果与PCR检测结果符合率达100%,表明基因芯片检侧技术是一种灵敏度高、特异好的检侧方法。该方法的建立可以快速有效地对猪细小病毒做出诊断,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 猪细小病毒 基因芯片 检侧方法
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猪细小病毒NS1基因的克隆、表达及密码子优化提高表达水平 被引量:2
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作者 张建楼 徐瑞涛 +3 位作者 霍珊珊 崔丹 左玉柱 仲飞 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1840-1845,共6页
通过PCR方法从猪细小病毒(PPV)基因组中扩增NS1基因,将其克隆到pcDNA3.1A质粒中,构建成与Myc/His标签融合的NS1真核表达载体。将表达载体转染PK-15细胞使其表达。利用猪偏爱的密码子对NS1全基因进行了密码子优化,通过构建表达载体和... 通过PCR方法从猪细小病毒(PPV)基因组中扩增NS1基因,将其克隆到pcDNA3.1A质粒中,构建成与Myc/His标签融合的NS1真核表达载体。将表达载体转染PK-15细胞使其表达。利用猪偏爱的密码子对NS1全基因进行了密码子优化,通过构建表达载体和转染细胞,检测并比较了密码子优化前后的表达水平。结果显示:扩增的NS1基因与GenBank序列一致,构建的表达载体结构正确;Western blot检测表明,NS1基因能够在PK-15细胞中进行表达,但表达水平很低,有时检测不到,从而严重影响对其的进一步研究;密码子优化后NS1基因的表达水平由优化前的7μg/T25培养瓶增加至32μg/T25培养瓶,是原来的4倍。可见密码子优化可明显提高NS1蛋白在PK-15细胞中的表达,这为下一步研究NS1蛋白的功能提供了有利条件。 展开更多
关键词 NS1基因 猪细小病毒 密码子优化
重组杆状病毒感染悬浮昆虫细胞及重组蛋白表达策略的优化 预览
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作者 李文丽 刘霞 +2 位作者 刘在新 卢曾军 范朋举 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第8期118-122,共5页
为确定嵌合口蹄疫病毒(FMDV)中和表位的猪细小病毒(PPV)衣壳蛋白在昆虫细胞(Sf-9)中的最佳表达条件。通过对比悬浮培养和贴壁培养2种培养条件,探究Sf-9细胞的最佳培养方式;利用血球计数板每隔24 h进行细胞计数,绘制Sf-9细胞生长曲线;将P... 为确定嵌合口蹄疫病毒(FMDV)中和表位的猪细小病毒(PPV)衣壳蛋白在昆虫细胞(Sf-9)中的最佳表达条件。通过对比悬浮培养和贴壁培养2种培养条件,探究Sf-9细胞的最佳培养方式;利用血球计数板每隔24 h进行细胞计数,绘制Sf-9细胞生长曲线;将P1代重组病毒传代至P3代,提取重组病毒基因组DNA,进行PCR鉴定,检测插入目的基因的完整性;通过研究感染复数(MOI)和感染时间的关系来摸索重组病毒最佳感染条件,以获得高滴度的重组病毒;利用Western blot检测目的蛋白的表达量并探究重组蛋白的最佳表达条件。结果表明,悬浮培养的Sf-9细胞大小均一、边缘整齐,生长状态良好;PCR鉴定结果表明,插入的FMDV中和表位基因完整,可以进行重组蛋白的表达;Western blot结果显示,重组蛋白同时与FMDV阳性血清和PPV阳性血清产生特异性反应,进一步证明了插入的FMDV中和表位的存在;重组蛋白最佳表达条件是以10个MOI病毒液感染悬浮Sf-9细胞,在72 h时重组蛋白表达量最大。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 猪细小病毒 中和表位 杆状病毒载体表达系统 昆虫细胞
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疫苗生产中猪源材料的外源性病毒检测 预览
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作者 杜岩 郝鹏博 +6 位作者 谢秋红 周长清 董思宏 杨蕾蕾 郭卉 任玉卓 刘志强 《中国卫生产业》 2018年第7期140-141,共2页
目的加强水痘减毒活疫苗生产中猪源材料的外源性病毒的质量控制,防止外源病毒污染。方法采用酶联免疫法对人二倍体细胞2BS株及胰蛋白酶进行猪细小病毒检测,并对检验方法进行方法学验证。结果人二倍体细胞2BS株及胰蛋白酶猪细小病毒检测... 目的加强水痘减毒活疫苗生产中猪源材料的外源性病毒的质量控制,防止外源病毒污染。方法采用酶联免疫法对人二倍体细胞2BS株及胰蛋白酶进行猪细小病毒检测,并对检验方法进行方法学验证。结果人二倍体细胞2BS株及胰蛋白酶猪细小病毒检测结果均为阴性,且方法学验证中的精密度符合2010版《药品GMP指南》的要求。结论酶联免疫法准确、快速,可用于水痘减毒活疫苗生产中人二倍体细胞2BS株及胰蛋白酶的外源性病毒检测。 展开更多
关键词 水痘减毒活疫苗 猪细小病毒 酶联免疫法 猪源材料
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表达猪细小病毒VP2蛋白的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株的生物学特性 被引量:3
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作者 付朋飞 乔涵 +3 位作者 张宇 杨兴武 徐朋丽 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期11-17,共7页
探索重组PPVVP2基因的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株作为弱毒疫苗候选株的潜在价值,对其在多种细胞上的增殖特性、病毒滴度、最适培养细胞中的遗传稳定性、一步生长曲线、转录和翻译水平等生物学特性进行研究。并初步探索对小鼠安全性。结... 探索重组PPVVP2基因的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株作为弱毒疫苗候选株的潜在价值,对其在多种细胞上的增殖特性、病毒滴度、最适培养细胞中的遗传稳定性、一步生长曲线、转录和翻译水平等生物学特性进行研究。并初步探索对小鼠安全性。结果显示:重组病毒rPRV-VP2株在VERO、ST、PK-15和IPEC细胞上的TCID5。分别为10^4.375/0.1mL、10^6.5/0.1mL、10^3.75/0.1mL、10^5.625/0.1mL。重组毒与亲本毒PRVHB-98株在ST细胞中的毒力(10^6.125TCID50/0.1mL)和细胞病变相当,重组病毒保持了PRV病毒的通性。连续传毒20代后的绿色荧光观察、RT-PCR、Westernblot试验结果均表明重组病毒中的VP2基因得到了有效表达,且遗传稳定性良好。安全性试验结果显示:重组毒对小鼠安全。本试验为后期对PPVVP2基因重组猪伪狂犬病毒rPRV—VP2株的开发利用奠定了基础。 展开更多
关键词 重组 猪细小病毒 VP2基因 PRV 生物学特性
纳米蜂胶黄酮对猪细小病毒的体内外抗病毒作用 被引量:2
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作者 马霞 郭振环 +2 位作者 刘永录 雷连成 沈志强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期18-22,46共6页
采用体内外试验研究纳米蜂胶黄酮抗猪细小病毒(PPV)作用。体外试验是以普通蜂胶黄酮为对照,分3种加药方式(先加蜂胶、后加蜂胶、蜂胶和病毒同时加入)加至PK-15细胞中,用MTT法检测细胞活性,实时荧光PCR检测PK-15中PPV含量,观察... 采用体内外试验研究纳米蜂胶黄酮抗猪细小病毒(PPV)作用。体外试验是以普通蜂胶黄酮为对照,分3种加药方式(先加蜂胶、后加蜂胶、蜂胶和病毒同时加入)加至PK-15细胞中,用MTT法检测细胞活性,实时荧光PCR检测PK-15中PPV含量,观察蜂胶黄酮对PK-15抗PPV及清除PPV能力的影响。体内试验是给豚鼠注射PPV后灌胃纳米蜂胶黄酮和普通蜂胶黄酮,检测肺脏、肾脏、肝脏、性腺及血液中PPV含量、血清中HI含量。结果显示:(1)与普通蜂胶黄酮相比,纳米蜂胶黄酮可显著抑制PPV在PK-15上生长,高浓度效果优于低浓度,3种加药方式中先加药物的效果最好;(2)高中剂量的纳米蜂胶黄酮可以显著抑制PPV在血液中复制、减轻PPV对豚鼠体重的影响、提高血清HI效价。结果表明:蜂胶黄酮经纳米化处理后,可以显著提高其抗PPV活性。 展开更多
关键词 纳米蜂胶黄酮 猪细小病毒 体内 体外 抗病毒活性
云南省曲靖地区猪细小病毒血清流行病学调查 预览 被引量:2
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作者 顾绍锋 《养猪》 2017年第1期103-104,共2页
为了解曲靖地区猪细小病毒(PPV)的感染情况,试验采用间接ELISA方法,从曲靖地区的10个规模化养猪场和5个散养户中随机采取560份猪血样,进行猪细小病毒IgG的抗体检测,检测结果显示:这15个猪场总的猪细小病毒抗体阳性率是61.96%... 为了解曲靖地区猪细小病毒(PPV)的感染情况,试验采用间接ELISA方法,从曲靖地区的10个规模化养猪场和5个散养户中随机采取560份猪血样,进行猪细小病毒IgG的抗体检测,检测结果显示:这15个猪场总的猪细小病毒抗体阳性率是61.96%。从猪场方面来看,2号猪场抗体阳性率最高达到80%,从猪的类别来看,经产母猪的抗体阳性率最高为70.99%,从不同的饲养模式来看,规模化饲养的猪细小病毒抗体阳性率比散养户要高。从检测结果来看,曲靖地区总的猪细小病毒抗体阳性率低,说明猪场的免疫效果不好,对该病的防制要提高警惕,加强饲养管理、环境卫生和防护方面工作。 展开更多
关键词 猪细小病毒 抗体检测 调查
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猪细小病毒感染PK-15细胞后TLRs转录时相的变化 预览 被引量:1
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作者 周雍 靳晓慧 +4 位作者 李炳晓 景亚星 韩丽 张利卫 魏战勇 《河南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期201-206,共6页
研究猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)感染猪肾传代细胞(PK-15 cells)后Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达水平变化情况,为探明PPV感染机制提供理论基础。试验利用荧光定量PCR方法检测PPV感染PK-15细胞后TLR1-10的转... 研究猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)感染猪肾传代细胞(PK-15 cells)后Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达水平变化情况,为探明PPV感染机制提供理论基础。试验利用荧光定量PCR方法检测PPV感染PK-15细胞后TLR1-10的转录时相变化。结果显示,PPV感染PK-15细胞后,TLR1在PPV感染后3h表达上调,约为对照组细胞的3.1倍,其他时段均低于正常水平;TLR3和TLR7 mRNA表达水平在病毒感染早期均低于正常水平;TLR4和TLR8的mRNA含量均在感染后3、12、36 h表达上调,TLR10分别在在3h和36 h表达上调,其他时段均不同程度的降低;而TLR2和TLR9 mRNA表达水平在感染后24 h开始升高,并于48 h达到峰值,分别为对照水平的10.1倍和26.7倍。研究表明,PPV感染PK-15细胞后能够诱导细胞上TLR2和TLR9在mRNA水平显著上调,PPV感染可能通过TLR2和TLR9受体介导感染。 展开更多
关键词 猪细小病毒 TOLL样受体 PK-15细胞 转录时相
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猪细小病毒病毒样颗粒的体外组装
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作者 宋品 孙世琪 +4 位作者 董虎 滕志东 曹随忠 郭慧琛 余树民 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第6期707-712,共6页
为了研制猪细小病毒(PPV)病毒样颗粒(VLPs)疫苗,将合成的PPV VP2全长基因克隆到带有His标签和小分子泛素相关修饰物(SUMO)标签的p SMK表达载体中,在大肠杆菌中表达可溶性PPV VP2蛋白。对表达的重组融合蛋白,用特异性蛋白酶切除其S... 为了研制猪细小病毒(PPV)病毒样颗粒(VLPs)疫苗,将合成的PPV VP2全长基因克隆到带有His标签和小分子泛素相关修饰物(SUMO)标签的p SMK表达载体中,在大肠杆菌中表达可溶性PPV VP2蛋白。对表达的重组融合蛋白,用特异性蛋白酶切除其SUMO标签,结果显示PPV VP2蛋白可自我组装成VLPs。进一步研究发现,VLPs的组装效率与pH值、离子强度关系密切。本研究通过大肠杆菌表达系统获得的具有良好反应原性的PPV VLPs,为研制PPV VLPs疫苗奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒 病毒样颗粒 原核表达 VP2基因
猪细小病毒致PK-15细胞病变的荧光显微镜和电镜观察 预览
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作者 方振华 沈振国 孙倩 《现代畜牧科技》 2017年第7期1-2,4共3页
利用荧光显微镜、扫描和透射电镜对猪细小病毒病(PPV)感染的PK-15细胞进行形态结构观察。结果显示,PPV能诱导猪肾(PK-15)细胞发生典型病变,病变程度随感染时间而加剧。被感染的细胞皱缩、变圆,细胞核浓染、碎裂;超微结构表现为细胞... 利用荧光显微镜、扫描和透射电镜对猪细小病毒病(PPV)感染的PK-15细胞进行形态结构观察。结果显示,PPV能诱导猪肾(PK-15)细胞发生典型病变,病变程度随感染时间而加剧。被感染的细胞皱缩、变圆,细胞核浓染、碎裂;超微结构表现为细胞微绒毛消失,有较多的球状突起;粗面内质网严重扩张,线粒体嵴肿胀、模糊不清,核染色质固缩并边集于核膜,在胞核和胞浆内有较多子代病毒聚集;感染的后期出现了细胞膜凹陷包裹胞质成分的凋亡小体,胞浆中细胞器空泡化严重,细胞核碎裂。本研究从细胞水平上了解PPV的致病过程,为其致病机理的研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒 PK-15细胞 细胞病变 超微结构
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蜂胶黄酮对PK-15细胞感染PPV与TGEV产生抗感染因子的比较 被引量:1
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作者 马霞 郭振环 +2 位作者 刘永录 雷连成 沈志强 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期989-993,共5页
为了研究蜂胶黄酮对宿主细胞感染不同结构病毒后产生抗感染因子的影响,将蜂胶黄酮从最大安全质量浓度250rag/L倍比稀释5个浓度,与猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis of pigs virus,TGEV)、细小病毒(porcine parv... 为了研究蜂胶黄酮对宿主细胞感染不同结构病毒后产生抗感染因子的影响,将蜂胶黄酮从最大安全质量浓度250rag/L倍比稀释5个浓度,与猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis of pigs virus,TGEV)、细小病毒(porcine parvovirus,PPV)分别一起加至长成单层PK-15细胞培养体系中,ELISA法测定蜂胶黄酮对TGEV或PPV感染PK-15细胞后产生IFN-β、IFN-γ和iNOS抗感染因子的含量。结果显示,与病毒对照组比较,在感染TGEV后2,12h的前期,蜂胶黄酮可以显著提高PK-15细胞产生IFN-β、IFN-γ和iNOS含量的能力;在感染PPV后2,12h的前期,只有较高质量浓度的蜂胶黄酮可以提高PK-15细胞产生IFN-β、IFN-7和iNOS含量的能力。PK-15细胞在感染病毒后24,48和72h,蜂胶黄酮对提高TGEV感染PK-15细胞后产生抗感染因子能力高于PPV。蜂胶黄酮提高有囊膜的TGEV感染宿主PK-15细胞产生抗感染因子能力高于无囊膜的PPV。 展开更多
关键词 蜂胶黄酮 猪传染性胃肠炎病毒 猪细小病毒 抗感染因子
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