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金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白PBPX基因的克隆与表达 被引量:1
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作者 李文通 盛佩群 +4 位作者 羊晓敏 陈逸璐 何文迪 夏佳音 陈新江 《生物技术》 2018年第5期425-427,454共4页
[目的]对金黄色葡萄球菌一种新的青霉素结合蛋白(PBPX)进行原核表达,为新型抗菌药物设计提供参考数据。[方法]将ATCC25923基因组数据通过Blast进行比对,从中发现了一个含有PBP保守结构域的基因序列,命名为PBPX。PCR扩增PBPX基因,将扩... [目的]对金黄色葡萄球菌一种新的青霉素结合蛋白(PBPX)进行原核表达,为新型抗菌药物设计提供参考数据。[方法]将ATCC25923基因组数据通过Blast进行比对,从中发现了一个含有PBP保守结构域的基因序列,命名为PBPX。PCR扩增PBPX基因,将扩增产物酶切后与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建表达PBPX的重组质粒,将该重组质粒转化大肠杆菌TG1内,增菌培养后提取质粒,经PCR、双酶切鉴定后,再转化大肠杆菌BL21(DE3),对转化菌株诱导后进行10%SDS-PAGE分析。[结果]构建了表达载体pET-32a(+)-PBPX,在37℃经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得表达,重组青霉素结合蛋白分子量为52. 2 kDa。[结论]PBPX基因成功克隆到表达载体内并获得了表达。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 青霉素结合蛋白 药物靶点 克隆 表达
儿童感染肺炎链球菌的青霉素结合蛋白基因突变分析 被引量:1
2
作者 吴健宁 吴佳音 +2 位作者 沈晓丽 赖力 李丽榕 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2018年第9期1052-1056,共5页
目的分析儿童感染肺炎链球菌的青霉素结合蛋白基因突变与青霉素耐药水平之间的关系。方法自2012年1月至2014年12月期间分离的1 317株肺炎链球菌中随机抽取出青霉素MIC=2.0μg/mL、4.0μg/mL、≥8.0μg/mL各20株共60株作为实验菌株,采用... 目的分析儿童感染肺炎链球菌的青霉素结合蛋白基因突变与青霉素耐药水平之间的关系。方法自2012年1月至2014年12月期间分离的1 317株肺炎链球菌中随机抽取出青霉素MIC=2.0μg/mL、4.0μg/mL、≥8.0μg/mL各20株共60株作为实验菌株,采用PCR方法对实验菌株进行青霉素结合蛋白PBP1a、PBP1b、PBP2a、PBP2b、PBP2x、PBP3的基因扩增,扩增产物进一步纯化和测序,测序结果与青霉素敏感肺炎链球菌R6就国际上公认的PBPs保守序列进行比对分析。结果 60株肺炎链球菌的PBP2b、PBP1a、PBP2x、PBP2a基因的保守区或保守区附件均发现氨基酸突变,未发现PBP3与PBP1b突变。中介与耐药菌株基因突变位点存在重合,主要出现在单一的PBP1a序列的370STMK模体元件内Thr371Ser置换突变或伴有PBP2b序列的Thr451Ala/Ser和Ala624Gly置换突变,同时PBP2a序列的465SLN模体元件前置位发生Ser461Ala的置换突变。结论肺炎链球菌对青霉素中、高水平耐药菌株绝大部分合并有不同PBP序列中4~6个氨基酸的置换突变,但合并多个氨基酸置换突变并非就必然引起耐药水平的相应升高。中、高水平耐药与PBP1a、PBP2b、PBP2a的变异关系密切,其中PBP1a的STMK保守区域Thr371Ser置换是引起耐药的主要因素之一。 展开更多
关键词 儿童 肺炎链球菌 青霉素结合蛋白 基因突变
多靶点的抗菌先导化合物的虚拟筛选及活性研究 预览
3
作者 蔡珺珺 袁田青 +2 位作者 杨银萍 高双 宫兴文 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1500-1510,共11页
铜绿假单胞菌和大肠杆菌是医院和兽医临床上常见的病原菌,容易造成人类和动物感染,给疾病治疗和经济发展带来极大的挑战。为了开发出靶向铜绿假单胞菌和大肠杆菌黏肽合成酶(PBPs)的新型先导化合物,笔者以铜绿假单胞菌PBP3和大肠杆菌PB... 铜绿假单胞菌和大肠杆菌是医院和兽医临床上常见的病原菌,容易造成人类和动物感染,给疾病治疗和经济发展带来极大的挑战。为了开发出靶向铜绿假单胞菌和大肠杆菌黏肽合成酶(PBPs)的新型先导化合物,笔者以铜绿假单胞菌PBP3和大肠杆菌PBP1b、PBP4、PBP5作为靶点,针对ZINC数据库,使用分子对接软件DOCK6.5进行了虚拟筛选。之后,根据得分情况和结构分析,找出了具有全新结构的先导化合物,进行了有机合成,并检验了抑菌效果。经过以Grid score为评价标准的初次筛选后,所有得分数值低于-125.6kJ·mol^-1的化合物进入二次筛选,并进行Amber score打分,最终获得约200个得分数值低于-83.7kJ·mol^-1的化合物。对这些化合物的结构进行分析后,以ZINC00053282为先导化合物进行了合成和结构验证。抑菌试验结果表明,筛选出的先导化合物对革兰阳性和阴性菌均具备抑菌活性,且抑菌效果优于对照组的磺胺嘧啶。筛选出的先导化合物具有全新的化学结构,可以作为候选抗菌药物,经进一步结构改造,有望用于解决日益严重的细菌耐药性问题。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 大肠杆菌 黏肽合成酶 耐药性 虚拟筛选
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广州地区儿童分离株青霉素耐药肺炎链球菌青霉素结合蛋白基因分型 预览 被引量:2
4
作者 黄艳梅 林晓敏 +5 位作者 麦嘉良 梁秉绍 谢永强 钟华敏 邓秋莲 周珍文 《国际检验医学杂志》 CAS 2017年第7期873-875,879共4页
目的了解广州地区儿童分离株青霉素耐药肺炎链球菌(PNSP)的分子流行病学,为肺炎链球菌感染性疾病防控提供实验依据。方法设计特异性引物,PCR扩增PNSP青霉素结合蛋白基因PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP2B、PBP2X、PBP3,进行测序分析。并使用... 目的了解广州地区儿童分离株青霉素耐药肺炎链球菌(PNSP)的分子流行病学,为肺炎链球菌感染性疾病防控提供实验依据。方法设计特异性引物,PCR扩增PNSP青霉素结合蛋白基因PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP2B、PBP2X、PBP3,进行测序分析。并使用Hinf I对PCR产物进行酶切,分析其限制性片段性长度多态性(RFLP)。结果成功提取PNSP的DNA、PCR结果显示:50株耐青霉素肺炎链球菌中:含PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP2B、PBP2X及PBP3的菌株阳性率分别为48.9%、64.4%、71.1%、31.1%、40.0%、31.1%。测序显示,它们与GenBank已知序列的同源性分别为99%、98%、100%、97%、95%、100%。使用Hinf I的RFLP分析显示:PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP3仅有一种基因型;PBP2B、PBP2X有两种基因型的,阳性率分别为71.4%、28.6%、66.7%、33.3%。结论广州肺炎链球菌儿童分离株耐青霉素基因的分布以PBP2A、PBP1B、PBP1A为主。使用Hinf I酶切,PBP2B、PBP2X具有两种基因型,其中优势型均大于65%。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 青霉素 耐药 青霉素结合蛋白
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呼吸道感染婴幼儿肺炎链球菌的耐药性及青霉素结合蛋白基因突变分析 预览 被引量:4
5
作者 孔山 忽胜和 +1 位作者 杨新原 赵卫东 《广西医学》 CAS 2016年第5期632-634,共3页
目的分析呼吸道感染婴幼儿肺炎链球菌的耐药性及青霉素结合蛋白基因(PBPs)突变情况。方法收集呼吸道感染婴幼儿痰或咽拭子标本中分离出的24株肺炎链球菌,进行菌株鉴定和药敏试验。对筛选出的耐青霉素肺炎链球菌行耐药性分析,并提取菌... 目的分析呼吸道感染婴幼儿肺炎链球菌的耐药性及青霉素结合蛋白基因(PBPs)突变情况。方法收集呼吸道感染婴幼儿痰或咽拭子标本中分离出的24株肺炎链球菌,进行菌株鉴定和药敏试验。对筛选出的耐青霉素肺炎链球菌行耐药性分析,并提取菌株DNA后分析PBPs基因突变情况。结果 24株肺炎链球菌中,青霉素不敏感菌株有13株,占54.2%;13株青霉素不敏感菌株对对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸和头孢呋辛不敏感率较高,分别为100%、76.9%和76.9%;对头孢噻肟、头孢曲松和头孢吡肟的不敏感率较低,分别为46.2%、38.5%和30.8%;对美罗培南和万古霉素的不敏感率最低,分别为15.4%和0。13株青霉素不敏感菌株未发现pbp1a基因突变菌株,5株存在pbp2b基因突变,占38.5%。结论青霉素不敏感肺炎链球菌存在对多种抗生素耐药情况,而pbp2b基因突变可能是导致肺炎链球菌耐药的重要原因,应加强肺炎链球菌耐药性及PBP基因突变监测。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 青霉素 青霉素结合蛋白 耐药性
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鲍曼不动杆菌耐氨苄西林-舒巴坦与青霉素结合蛋白基因变异的相关性 预览 被引量:3
6
作者 肖淑珍 褚海青 +3 位作者 赵兰 张静波 李冰 郭庆兰 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期57-60,共4页
目的测定鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的敏感性;分析青霉素结合蛋白(PBP)基因的变异,探索其与鲍曼不动杆菌对氨苄西林-舒巴坦耐药的相关性。方法收集上海市4所教学医院临床分离的鲍曼不动杆菌67株,采用琼脂稀释法测定其对常... 目的测定鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的敏感性;分析青霉素结合蛋白(PBP)基因的变异,探索其与鲍曼不动杆菌对氨苄西林-舒巴坦耐药的相关性。方法收集上海市4所教学医院临床分离的鲍曼不动杆菌67株,采用琼脂稀释法测定其对常用抗菌药物的最低抑菌浓度。扩增所有临床株的7种PBP基因并测序。比较该菌氨苄西林-舒巴坦敏感组与耐药组之间核苷酸序列差异。结果临床分离鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物耐药率高,对氨苄西林-舒巴坦耐药率为67.6%。测序结果显示敏感株及耐药株间未发现PBP的氨基酸变异。结论临床分离鲍曼不动杆菌对氨苄西林-舒巴坦耐药率较高。其耐药机制与PBP变异无相关性。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 青霉素结合蛋白 氨苄西林-舒巴坦
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pUC19-pbp2b重组质粒转化对肺炎链球菌感受态菌株耐药性的影响 预览
7
作者 赵卫东 忽胜和 +1 位作者 杨新原 孔山 《广西医学》 CAS 2016年第11期1485-1488,共4页
目的 探讨pUC19-pbp2b重组质粒转化对肺炎链球菌(SP)感受态菌株耐药性的影响。方法 收集13株对青霉素不敏感的SP菌株,其中8株青霉素结合蛋白(PBPs)编码基因pbp2b未突变,5株pbp2b基因突变,制备SP感受态。化学合成含SSN保守区的pbp2b... 目的 探讨pUC19-pbp2b重组质粒转化对肺炎链球菌(SP)感受态菌株耐药性的影响。方法 收集13株对青霉素不敏感的SP菌株,其中8株青霉素结合蛋白(PBPs)编码基因pbp2b未突变,5株pbp2b基因突变,制备SP感受态。化学合成含SSN保守区的pbp2b基因片段,构建pUC19-pbp2b重组质粒,将重组质粒转化感受态菌株。测定青霉素、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢曲松和头孢吡肟5种β-内酰胺酶类抗生素(BLA)对转化前后SP感受态菌株的最小抑菌浓度(MIC)。结果 pbp2b基因扩增产物可见约300 bp的特异条带,13株SP菌株均能形成感受态。与转化前菌株比较,5种抗生素对转化后菌株的MIC均降低(P〈0.05)。5种抗生素对5株转化后的pbp2b基因突变菌株的MIC均降低(P〈0.05)。结论 外源重组质粒转化SP感受态可以协助减缓SP耐药性的进展。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 青霉素结合蛋白 感受态 重组质粒 耐药性 β-内酰胺酶类抗生素
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β-内酰胺抗生素作用机制的研究进展 预览 被引量:9
8
作者 张韬 倪孟祥 +1 位作者 邵雷 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期785-790,共6页
以青霉素为代表的β-内酰胺类抗生素,在人类征服细菌感染的70多年历史中起着不可或缺的重要作用;β-内酰胺类抗生素作用机制的研究,为这类抗生素品种的开发以及在临床上的合理应用起到了重要的作用。本文简要阐述了这类抗生素作用机... 以青霉素为代表的β-内酰胺类抗生素,在人类征服细菌感染的70多年历史中起着不可或缺的重要作用;β-内酰胺类抗生素作用机制的研究,为这类抗生素品种的开发以及在临床上的合理应用起到了重要的作用。本文简要阐述了这类抗生素作用机制的有关研究脉络和成果,特别是近年来新技术新方法的应用在该领域所取得的进展,以及在真正解析抗菌机制研究方面对学术界提出的挑战。 展开更多
关键词 Β-内酰胺 青霉素结合蛋白 作用机制
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多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶、膜孔蛋白及β-内酰胺类靶位编码基因研究 预览 被引量:14
9
作者 许亚丰 耿先龙 +4 位作者 王春新 陈国千 赵琪 周丽珍 糜祖煌 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期58-64,共7页
目的研究一株多重耐药鲍曼不动杆菌(Multi.drug—resistantAcinetobacterbaumannii,MDR.ABA)J65可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制。方法MDR—ABAJ65株分离自2011年12,q某三甲医院住院患者痰标本,用gyrA和parC基NPCR扩增、测序和... 目的研究一株多重耐药鲍曼不动杆菌(Multi.drug—resistantAcinetobacterbaumannii,MDR.ABA)J65可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制。方法MDR—ABAJ65株分离自2011年12,q某三甲医院住院患者痰标本,用gyrA和parC基NPCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种。用PCR法分析该菌株的PBPIa、PBP2、CarO和33种A~D类B.内酰胺酶编码基因,并对检出的β-内酰胺酶编码基因作了插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测。结果MDR.ABAJ65检出13.内酰胺酶编码基因6肠TEM—l、6,口ADc_62、6Z。oxA_23、6肠oxA-66,插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测显示Isabal-ADC-62和llSabal—OXA-23为阳性。PBPla、PBP2和CarO编码基因序列与鲍曼不动杆菌敏感株(SDF)相比均存在有义突变,且三维结构同源建模显示,与SDF株PBPla、PBP2和CarO蛋白分子立体结构有明显差别。结论MDR.ABAJ65对β-内酰胺类耐药机制为PBPs和孔蛋CarO变异及可移动遗传元件介异的B.内酰胺酶编码基因。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 Β-内酰胺酶基因 膜孔蛋白 外排泵蛋白 青霉素结合蛋白 多重耐药
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携带新的突变的PBP2编码基因的泛耐药鲍曼不动杆菌的发现 预览 被引量:1
10
作者 李朋玲 蔡培泉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期137-140,共4页
目的探讨临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌(pandrug resistant Acinetobacter baumannii,PDR.ABA)的青霉素结合蛋白2(penicillin-binding protein2,PBP2)编码基因的突变状况,为临床抗生素的使用提供指导。方法我们收集了PDR-ABA并... 目的探讨临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌(pandrug resistant Acinetobacter baumannii,PDR.ABA)的青霉素结合蛋白2(penicillin-binding protein2,PBP2)编码基因的突变状况,为临床抗生素的使用提供指导。方法我们收集了PDR-ABA并对其中的3株PDR-ABA菌进行了PBP2编码基因的全长序列测定,使用工具软件对其进行读序并与GenBank已登录的其它鲍曼不动杆菌菌株PBP2编码基因序列进行对比。结果3株PDR-ABA之PBP2编码基因序列与鲍曼不动杆菌抗生素敏感株(SDF株)序列不同,且与GenBank已登录的其它鲍曼不动杆菌菌株PBP2编码基因序列也均不相同。结论3株PDR-ABA耐全部β-内酰胺类药物原因可能与其PBP2编码基因的突变亦相关。 展开更多
关键词 泛耐药鲍曼不动杆菌 青霉素结合蛋白 耐药机制
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社区呼吸道感染肺炎链球菌对头孢妥仑的耐药机制研究 预览 被引量:5
11
作者 杜娟 杨启文 +12 位作者 徐英春 孙宏莉 陈民钧 王辉 张嵘 卓超 胡云建 褚云卓 段穷 曹彬 刘勇 孙自镛 俞云松 《中国感染与化疗杂志》 CAS 北大核心 2012年第3期 199-205,共7页
目的研究头孢妥仑敏感性降低肺炎链球菌的耐药机制。方法收集2009年1月至2010年1月来自全国各地10所教学医院的37株头孢妥仑最低抑菌浓度(MIC)≥1 mg/L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为研究组,并取6株头孢妥仑MIC≤0.5 mg/L的社区呼吸... 目的研究头孢妥仑敏感性降低肺炎链球菌的耐药机制。方法收集2009年1月至2010年1月来自全国各地10所教学医院的37株头孢妥仑最低抑菌浓度(MIC)≥1 mg/L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为研究组,并取6株头孢妥仑MIC≤0.5 mg/L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为对照组。采用微量肉汤稀释法测定菌株对11种抗菌药物的MIC。采用多重PCR法对所有菌株进行血清分型。采用PCR法扩增43株菌的pbp2b、pbp1a、pbp2x和murM基因。用限制性内切酶进行pbp2b、pbp1a、pbp2x的指纹图谱分析。根据酶切试验分型结果,同一型的菌株挑选1~5个PCR产物送测序,测序结果与肺炎链球菌标准菌株R6比较以分析耐药菌株的青霉素结合蛋白(PBP)保守基序,特别是SXXK盒、SXN盒、KT(S)G盒的突变情况。结果根据药敏试验结果将菌株分为3组:3株对青霉素敏感、头孢妥仑MIC值≤0.5 mg/L作为C1组;3株对青霉素中介、头孢妥仑MIC值≤0.5 mg/L作为C2组;37株对青霉素中介,头孢妥仑MIC为1~4 mg/L的为R组。R组的肺炎链球菌对左氧氟沙星、莫西沙星和万古霉素均敏感,对头孢呋辛、头孢克洛、阿奇霉素和克拉霉素均耐药,仅有8.2%和5.4%的菌株分别对阿莫西林-克拉维酸和头孢曲松敏感。37株R组菌株血清学分型结果35株为19F型,1株为14型,1株为19A型。C1组菌的PBP氨基酸保守基序与野生株R6相比无突变。C2组菌PBP氨基酸保守基序与R6株相比在PBP2B、PBP2X和PBP1A中均发生3点突变。R组菌株PBP氨基酸保守基序与R6株相比则在C2组突变的基础上增加了2~3个活性位点的突变。结论 PBP2B、PBP1A和PBP2X的突变与肺炎链球菌的头孢妥仑耐药性密切相关,特别是PBP2B的Ala618→Gly,PBP2X的Met339→Phe和Tyr595→Phe可能与头孢妥仑MIC升高相关。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 头孢妥仑 青霉素结合蛋白
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泛耐药鲍曼不动杆菌PBP1A、CarO及β-内酰胺酶的编码基因分析 被引量:19
12
作者 翁幸鐾 糜祖煌 《中华临床感染病杂志》 CAS 2012年第4期215-220,共6页
目的了解一株泛耐药鲍曼不动杆菌(js01株)可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制。方法对自2011年12月宁波市第一医院住院患者的痰样本js01株分离,用gyrA和parC基因PCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种。用PCR法分析33种β-内酰胺酶基因... 目的了解一株泛耐药鲍曼不动杆菌(js01株)可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制。方法对自2011年12月宁波市第一医院住院患者的痰样本js01株分离,用gyrA和parC基因PCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种。用PCR法分析33种β-内酰胺酶基因(13种A类酶基因、10种B类酶基因、2种C类酶基因、8种D类酶基因)和插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测以及CarO膜孔蛋白编码基因。再用分段PCR法扩增PBP1A编码基因,双向测序后拼接成全长序列。结果js01株检出β-内酰胺酶TEM-1、ADC-30、OXA-23和OXA-66编码基因。插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测显示ISabal-ADC-30和ISabal—OXA-23为阳性。js01株carO基因序列与鲍曼不动杆菌敏感株(SDF)相比存在有义突变,氨基酸序列一致率为76.0%(189/249),存在3个氨基酸缺失。is01株PBP1A编码基因序列与SDF株相比存在有义突变,氨基酸序列的一致率为99.6%(848/851),存在3个氨基酸变异,但js01株PBP1A蛋白分子立体结构比SDF株丢失2个螺旋结构。结论本株鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与该菌株管家基因(PBP1A、CarO编码基因)突变与可移动遗传元件介异的β-内酰胺酶编码基因有关。 展开更多
关键词 鲍氏不动杆菌 Β-内酰胺类 基因 膜孔蛋白 CarO 青霉素结合蛋白 PBP1A 抗药性
革兰阳性菌青霉素结合蛋白研究进展 预览 被引量:3
13
作者 朱竟赫 郭文洁 +3 位作者 刘耀川 赵敬翠 庞杰 刘明春 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第1期 77-80,共4页
革兰阳性菌的青霉素结合蛋白(PBPs)是一类在肽聚糖合成中起着重要作用酶类。聚合过程中存在3种关键的酶类,即糖基转移酶、肽基转移酶和D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶(D,D-羧肽酶)。A型高分子质量PBPs是一类双重功能的PBPs,它具有糖基... 革兰阳性菌的青霉素结合蛋白(PBPs)是一类在肽聚糖合成中起着重要作用酶类。聚合过程中存在3种关键的酶类,即糖基转移酶、肽基转移酶和D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶(D,D-羧肽酶)。A型高分子质量PBPs是一类双重功能的PBPs,它具有糖基转移酶和肽基转移酶的作用。B型高分子质量PBPs只有肽基转移酶的活性,低分子质量PBPs普遍具有D,D-羧肽酶的活性。PBPs数量和结构的变化均会导致细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性。不同革兰阳性菌PBPs的数量、种类和功能不尽相同,但在发生β-内酰胺类抗生素耐药时,往往是PBPs相应的基因发生变异,构成了细菌耐药机制中的重要部分。 展开更多
关键词 革兰阳性菌 青霉素结合蛋白 耐药性 Β-内酰胺类抗生素
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肺炎链球菌β-内酰胺类抗生素最小抑菌质量浓度与青霉素结合蛋白1A和2B变异的关系 预览 被引量:1
14
作者 徐敏 张建华 +2 位作者 丁云芳 陶云珍 吴良霞 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第16期 1242-1245,共4页
目的探讨肺炎链球菌(Sp)β-内酰胺类抗生素最小抑菌质量浓度(MIC)与青霉素结合蛋白(PBP)1A和2B变异的关系。方法对55株Sp用E-test法进行7种β-内酰胺类抗生素进行药敏试验,并提取每株Sp的DNA,分别对其青霉素结合蛋白基因(pbp)1a... 目的探讨肺炎链球菌(Sp)β-内酰胺类抗生素最小抑菌质量浓度(MIC)与青霉素结合蛋白(PBP)1A和2B变异的关系。方法对55株Sp用E-test法进行7种β-内酰胺类抗生素进行药敏试验,并提取每株Sp的DNA,分别对其青霉素结合蛋白基因(pbp)1a和pbp2b中编码青霉素结合区域(PBD)进行套式PCR扩增和直接测序,并用Clustalx软件进行序列比对,分析PBP1A和PBP2BPBD保守序列的氨基酸置换。结果青霉素敏感株4株中发现PBP2B保守序列SSN后苏氨酸(Thr)445→丙氨酸(Ala),Thr451→Ala和谷氨酸(Glu)481→甘氨酸(Gly)置换,其余6株PSSP未发现PBP1A和PBP2B保守序列氨基酸置换。4株青霉素中介株(PISP)(MIC0.19~0.38mg/L)PBP2BThr445→Ala,Thr451→Ala和Glu481→Gly置换,其中1株发现PBP2B保守序列SVVK后第431-432位点处脯氨酸(Pro)的插入,余3株存在谷氨酰胺(Gln)432→亮氨酸(Leu)置换。另16株PISP(MIC0.5~1.0mg/L)在此基础上出现PBP1ASRN后Pro432→Thr,STMK中Thr371→丝氨酸(Ser)/Ala和KTG附近的短镶嵌序列Thr574→天冬氨酸(ASn)Ser575→Thr,Gln576→Gly,苯丙氨酸(Phe)577→酪氨酸(Tyr)置换,且后二种变异存在于所有青霉素和头孢类中介和耐药株中。20/25株青霉素耐药株存在PBP2B保守序列KTG附近Ala624→Gly,包含Ala624→GlySp组青霉素、头孢呋新、阿莫西林等抗生素平均MIC值明显高于不包含这一置换的Sp组。在青霉素MIC≥0.5mg/L的菌株中均同时存在PBP1A和PBP2B的变异。结论β-内酰胺类抗生素对肺炎链球菌临床分离株MIC值与PBP1A和PBP2B编码青霉素结合活性区域的保守序列中或附近的氨基酸置换有关。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 青霉素结合蛋白 最小抑菌质量浓度
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淋球菌青霉素结合蛋白PPNG基因与耐青霉素类药物的关系 预览 被引量:2
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作者 谢平 糜祖煌 +2 位作者 李琴 张稷 肖琛月 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期 35-36,共2页
目的探讨淋球菌青霉素结合蛋白2基因(Pen A)突变及产青霉素酶淋球菌(PPNG)与耐青霉素类药物的关系.方法采用巢式聚合酶链技术对97株淋球菌临床分离株进行PPNG基因检测,并对4例PPNG基因检测阴性、而抗生素药敏试验表明对青霉素类药物耐... 目的探讨淋球菌青霉素结合蛋白2基因(Pen A)突变及产青霉素酶淋球菌(PPNG)与耐青霉素类药物的关系.方法采用巢式聚合酶链技术对97株淋球菌临床分离株进行PPNG基因检测,并对4例PPNG基因检测阴性、而抗生素药敏试验表明对青霉素类药物耐药的淋球菌菌株的PenA基因进行测序.结果 97株淋球菌菌株中有67株为PPNG基因检测阳性;而4株PPNG阴性的耐药菌株的Pen A基因序列均存在点突变.结论 PPNG所导致的耐药是淋球菌耐青霉素类药物的主要来源;PenA基因突变是产生耐药菌株的主要原因. 展开更多
关键词 淋球菌 青霉素结合蛋白 PPNG基因 青霉素类药物 基因突变 耐药性
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靶向铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)粘肽合成酶PBP3的抗菌先导化合物的虚拟筛选及活性研究
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作者 喻召武 宋立华 +3 位作者 童丽艳 王远 郑雯 宫兴文 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期219-231,共13页
【目的】开发出与铜绿假单胞菌粘肽合成酶PBP3有高亲和力,具有全新结构的先导化合物。【方法】以铜绿假单胞菌粘肽合成酶PBP3为靶点,通过分子对接软件DOCK6.5,对含有104万个小分子化合物的数据库进行了大规模虚拟筛选,选取结构相对简单... 【目的】开发出与铜绿假单胞菌粘肽合成酶PBP3有高亲和力,具有全新结构的先导化合物。【方法】以铜绿假单胞菌粘肽合成酶PBP3为靶点,通过分子对接软件DOCK6.5,对含有104万个小分子化合物的数据库进行了大规模虚拟筛选,选取结构相对简单的中选化合物进行合成,得到先导化合物,并验证其抑菌活性。【结果】通过grid score进行第一轮初筛,筛选出grid score分值小于–30 kcal/mol的6万个化合物,接着以amber score进行第二轮筛选,筛出amber score分值小于–20 kcal/mol的化合物约200个。最终,经过观察分析,从中挑选出4种打分高并且结构新颖的小分子化合物作为先导化合物。合成出的先导化合物及其衍生物对铜绿假单胞菌等常见微生物的最小抑菌浓度(MIC)在175–275μg/m L之间,对革兰氏阴性菌和阳性菌均有效,MIC值比作为阳性对照的磺胺嘧啶更低,说明先导化合物具有较好的抗菌活性。【结论】这些先导化合物可以进一步开发为新型抗菌药物,用于解决铜绿假单胞菌的耐药性问题。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 粘肽合成酶PBP3 耐药性 虚拟筛选 抑菌活性
靶向大肠杆菌(E.coli)黏肽合成酶PBP1b的抗菌先导化合物的虚拟筛选
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作者 童丽艳 喻召武 +3 位作者 繆士涛 郑雯 王远 宫兴文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期469-474,共6页
大肠杆菌(E.coli)是一种常见的致病菌,大肠杆菌的黏肽合成酶PBP1B对于它的细胞壁合成和存活具有至关重要的作用,是β-内酰胺类抗生素的作用靶点。但是,由于抗生素滥用等原因,目前已造成了大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素较强的耐药性。... 大肠杆菌(E.coli)是一种常见的致病菌,大肠杆菌的黏肽合成酶PBP1B对于它的细胞壁合成和存活具有至关重要的作用,是β-内酰胺类抗生素的作用靶点。但是,由于抗生素滥用等原因,目前已造成了大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素较强的耐药性。本研究针对大肠杆菌的黏肽合成酶PBP1B,通过分子对接软件DOCK6.5进行虚拟筛选,以期得到具有全新结构的高亲和力的先导化合物,用作新型抗菌药物。我们对含104万个化合物的ZINC数据库进行了虚拟筛选,以grid score进行了第1轮打分,得到分值在-30kcal/mol以下的化合物约6万个,从中挑选出打分高的600个化合物进入第2轮筛选,采用amber score进行第2轮打分,筛出分值在-20kcal/mol以下的化合物约200个。对这些化合物进行分析,最终挑选2种打分高并且结构新颖的先导化合物,并进行了有机合成。采用MH肉汤稀释法检验了先导化合物的抗菌活性,发现先导化合物对常见革兰阳性菌和革兰阴性菌均有抗菌活性,并且抗菌活性比具有相似结构的磺胺嘧啶更强。因此,这2种先导化合物有望进一步开发为新型抗菌药物。 展开更多
关键词 细菌耐药性 虚拟筛选 大肠杆菌 黏肽合成酶 PBP1B DOCK6.5
青霉素结合蛋白2a单克隆抗体的研制和初步应用 预览
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作者 郑佐娅 金姝 +1 位作者 谈景婴 朱晴晖 《微生物学免疫学进展》 2015年第3期5-8,共4页
目的 研制青霉素结合蛋白2a(PBP2a)单克隆抗体(McAb),为建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)免疫层析检测方法提供检测用抗体.方法 以基因工程抗原rPBP2a免疫BALb/c小鼠,通过常规小鼠B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用免疫... 目的 研制青霉素结合蛋白2a(PBP2a)单克隆抗体(McAb),为建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)免疫层析检测方法提供检测用抗体.方法 以基因工程抗原rPBP2a免疫BALb/c小鼠,通过常规小鼠B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用免疫印迹技术(Western blotting)分析单克隆抗体特异性.选取敏感、特异的单克隆抗体进行金标记和硝酸纤维膜包被,建立胶体金免疫层析检测方法.结果 共获得11株分泌抗rPBP2a的杂交瘤细胞,其中6株分泌的单克隆抗体能够与天然PBP2a呈阳性反应.用其中2株单克隆抗体建立的PBP2a胶体金免疫层析方法,可在5~ 20 min内完成检测.结论 获得了特异性针对PBP2a蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测PBP2a蛋白的胶体金免疫层析检测方法,为临床快速、简便检测产生PBP2a的细菌提供了检测方法. 展开更多
关键词 青霉素结合蛋白2A 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌异质性耐药株检测方法探讨 预览 被引量:3
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作者 于农 张伟 +3 位作者 陈建魁 宋世平 金欣 左向华 《解放军医药杂志》 CAS 2013年第5期74-76,共3页
目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的异质性耐药株的检测方法。方法收集102株金黄色葡萄球菌,采用微量肉汤稀释法分别检测其对头孢西丁、苯唑西林的耐药性,乳胶凝集法检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a),同时采用菌群谱分析法对... 目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的异质性耐药株的检测方法。方法收集102株金黄色葡萄球菌,采用微量肉汤稀释法分别检测其对头孢西丁、苯唑西林的耐药性,乳胶凝集法检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a),同时采用菌群谱分析法对异质性耐药株进行筛选。结果头孢西丁耐药71例(69.6%),其中PBP2a阳性70例(98.6%);苯唑西林耐药80例(78.4%),其中PBP2a阳性70例(87.5%)。头孢西丁耐药菌株PBP2a检出率明显高于苯唑西林(P〈0.05)。苯唑西林耐药而头孢西丁敏感的9株菌中筛选出2株(22.2%)异质性耐药株。结论头孢西丁检出MRSA的敏感性优于苯唑西林,但苯唑西林对MRSA异质性耐药菌株检测的敏感性优于头孢西丁。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 甲氧西林抗药性 异质性耐药 青霉素结合蛋白2A 头孢西丁 苯唑西林
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Development of a Rapid Multi-residue Assay for Detecting β-Iactams Using Penicillin Binding Protein 预览 被引量:1
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作者 ZENG Kum ZHANG Jing +4 位作者 WANG Yang WANG ZhanHui ZHANG Su Xia WU Chong Ming SHEN Jian Zhong 《生物医学与环境科学:英文版》 SCIE CAS CSCD 2013年第2期100-109,共10页
Objective To develop a rapid multi-residue assay for detecting 16 demanded by the European Union (EU). Methods A recombinant penicillin-binding protein(PBP)2x* from Streptococcus pneumoniae R6 was expressed in vitro a... Objective To develop a rapid multi-residue assay for detecting 16 demanded by the European Union (EU). Methods A recombinant penicillin-binding protein(PBP)2x* from Streptococcus pneumoniae R6 was expressed in vitro and six β-lactams were conjugated to HRP by four methods.A rapid multi-residue assay for β-lactams was established with PBP2x* and HRP-conjugate. Results PBP2x* was expressed and purified successfully and the ideal HRP-conjugate was identified. The multi-residue assay was developed.After optimization,penicillin G,ampicillin,amoxicillin, cloxacillin,dicloxacillin,oxacillin,nafcillin,cephalexin,ceftiofur,cefaIonium,cefquinome,cefazolin, cefoperazone,cephacetrile,and cephapirin can be detected at levels below MRL in milk with simple pretreatment. Conclusion This assay developed can detect all 16 β-lactams demanded by the European Union(EU). The whole procedure takes only 45 min and can detect 42 samples and the standards with duplicate analysis. 展开更多
关键词 快速检测方法 青霉素G 多残留分析 结合蛋白 多残留检测 欧洲联盟 头孢氨苄 肺炎链球菌
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