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雷奈酸锶改善成骨不全症模型oim小鼠代谢失衡的双向机制
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作者 孙斌 徐增 +4 位作者 吴卉乔 郭蕾 张颖 石长贵 袁文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期945-953,共9页
目的探讨雷奈酸锶对成骨不全症(OI)模型oim小鼠成骨细胞和破骨细胞的双重作用。方法取1周龄OI模型纯合子oim/oim小鼠及野生型(wt/wt)小鼠的颅骨,采用Ⅰ型胶原酶通过连续消化法获取成骨细胞;取5~7周龄oim/oim小鼠和wt/wt小鼠的长骨,获取... 目的探讨雷奈酸锶对成骨不全症(OI)模型oim小鼠成骨细胞和破骨细胞的双重作用。方法取1周龄OI模型纯合子oim/oim小鼠及野生型(wt/wt)小鼠的颅骨,采用Ⅰ型胶原酶通过连续消化法获取成骨细胞;取5~7周龄oim/oim小鼠和wt/wt小鼠的长骨,获取骨髓单核细胞诱导分化成破骨细胞。给予不同浓度(1、10 mmol/L)的雷奈酸锶进行干预,采用实时定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质印迹法分别在mRNA及蛋白水平检测成骨细胞分化相关基因Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OCN),破骨细胞分化相关基因降钙素受体(Calcr)、抗酒石酸磷酸酶(Trap)、组织蛋白酶K(CTSK),以及破骨分化相关转录因子c-fos、活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达;采用ALP染色及茜素红S染色观察成骨分化及矿化情况;采用Trap染色及骨片陷窝实验评估破骨细胞形成数量及骨吸收活性;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测雷奈酸锶对成骨细胞和破骨细胞活性的影响。结果 qRT-PCR及蛋白质印迹法检测结果显示,雷奈酸锶在mRNA及蛋白水平均可促进oim/oim小鼠成骨细胞分化相关基因(Runx2、ALP、OCN)的表达增加,同时抑制破骨细胞分化相关基因及转录因子(Calcr、Trap、CTSK、c-fos、NFATc1)的表达(P均<0.05),且随浓度增加作用增强。ALP染色及茜素红S染色结果显示,雷奈酸锶可促进oim/oim小鼠成骨细胞分化及矿化(P均<0.05)。Trap染色及骨片陷窝实验结果显示,雷奈酸锶可降低oim/oim小鼠破骨细胞形成数量和破骨细胞骨吸收活性(P均<0.05)。MTT结果显示,1 mmol/L、10 mmol/L雷奈酸锶对oim/oim小鼠成骨细胞和破骨细胞无细胞毒性。结论雷奈酸锶可有效改善OI模型oim小鼠的骨代谢失衡,其机制可能是促进成骨细胞分化及矿化,同时抑制破骨细胞的形成及骨吸收活性。 展开更多
关键词 雷奈酸锶 成骨不全症 成骨细胞 破骨细胞 代谢
锶元素在骨组织工程研究中的应用与进展 预览
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作者 张骏 尤奇 +2 位作者 邹刚 葛振 刘毅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第18期2936-2940,共5页
背景:锶元素在骨组织工程中已得到广泛应用,能够促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞的吸收。目的:综述锶元素在骨组织工程中的应用与研究进展。方法:应用计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库中收录的相关文献,中文检索词为... 背景:锶元素在骨组织工程中已得到广泛应用,能够促进成骨细胞分化、抑制破骨细胞的吸收。目的:综述锶元素在骨组织工程中的应用与研究进展。方法:应用计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库及Elsevier数据库中收录的相关文献,中文检索词为'锶元素,锶,骨,骨缺损,骨修复,组织工程',英文检索词为'strontium,Sr,bone,bonedefects,bone repair,tissue engineering'。查阅1960年1月至2018年12月期间收录的锶元素在骨组织工程中应用的相关文章,包括综述、基础研究及临床研究,通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除与文章主题不相关的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入48篇文献进行结果分析。结果与结论:锶元素作为骨组织重要的组成成分,在骨的发育和形成过程中扮演着重要角色。掺锶的骨替代材料已成为目前骨组织工程研究的重点和热点,大量研究证实,锶的掺入能够有效改善骨替代材料的力学性能,提高对成骨细胞的招募能力及分化能力,同时促进体内成骨和成血管能力。但目前的研究还存在一定的不足:不同研究使用的掺锶方法不同,所以研究结果不具有可比性;不同掺锶量所得出的研究结论不同;目前尚无一个比较公认的掺锶浓度可用来诱导成骨分化。 展开更多
关键词 锶元素 骨组织工程 骨缺损 骨修复 成骨细胞 破骨细胞 成骨能力 成血管能力
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女贞子提取物对破骨细胞分化及成骨细胞增殖的影响 预览
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作者 雷丽娟 杨晓琴 +3 位作者 周英 王慧娟 陈丽珍 俸婷婷 《中国药房》 CAS 北大核心 2019年第16期2247-2252,共6页
目的:探讨女贞子提取物对破骨细胞分化及成骨细胞增殖的影响。方法:以1α,25-二羟基维生素D3诱导兔原代骨髓细胞获取破骨细胞,经女贞子醇提物和水煎物低、中、高剂量(均为2、20、200 mg/L)处理后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性测... 目的:探讨女贞子提取物对破骨细胞分化及成骨细胞增殖的影响。方法:以1α,25-二羟基维生素D3诱导兔原代骨髓细胞获取破骨细胞,经女贞子醇提物和水煎物低、中、高剂量(均为2、20、200 mg/L)处理后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性测定法检测各组细胞裂解液中TRACP活性及细胞中TRACP阳性细胞数,采用甲苯胺蓝染色法检测各组细胞骨吸收陷窝数量及骨陷窝面积百分率。以L-抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、地塞米松诱导小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14细胞获取成骨细胞,采用MTT法检测各组细胞的相对增殖率,采用碱性磷酸酶(APK)活性测定法检测各组细胞中APK活性。结果:经不同剂量女贞子提取物处理后,TRACP阳性细胞数、骨吸收陷窝数量及其面积均有不同程度的改变,其中女贞子醇提物各剂量组和水煎物高剂量组TRACP活性及阳性细胞数、骨吸收陷窝数量及面积百分率,以及女贞子水煎物中剂量组TRACP活性及阳性细胞数、骨陷窝面积百分率均显著降低或减少,而水煎物低剂量组细胞的骨吸收陷窝数量显著增多(P<0.05或P<0.01);女贞子提取物低、中剂量组细胞的相对增殖率以及提取物各剂量组细胞的APK活性均显著升高,而女贞子提取物高剂量组细胞的相对增殖率均显著降低(P<0.01)。结论:女贞子提取物可抑制破骨细胞的TRACP活性,改变破骨细胞的骨吸收功能和成骨细胞的增殖行为,并增加成骨细胞的APK活性。 展开更多
关键词 女贞子 醇提物 水煎物 破骨细胞 成骨细胞 骨吸收 分化 增殖
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荷斯坦奶牛乳腺干细胞的成骨诱导及鉴定 预览
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作者 陈钰萌 韩哲先 +1 位作者 刘迎春 高峰 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第9期1359-1363,共5页
背景:课题组已经完成乳腺干细胞向神经细胞和脂肪细胞的诱导,该实验诱导乳腺干细胞分化为成骨细胞,进一步丰富其分化潜能多样性,对乳腺干细胞的研究具有重要意义。目的:探讨荷斯坦奶牛乳腺干细胞定向诱导分化为成骨细胞的潜能。方法:分... 背景:课题组已经完成乳腺干细胞向神经细胞和脂肪细胞的诱导,该实验诱导乳腺干细胞分化为成骨细胞,进一步丰富其分化潜能多样性,对乳腺干细胞的研究具有重要意义。目的:探讨荷斯坦奶牛乳腺干细胞定向诱导分化为成骨细胞的潜能。方法:分离纯化的荷斯坦奶牛乳腺干细胞系,由内蒙古生物制造重点实验室提供。取第4代乳腺干细胞加入成骨诱导液培养21 d,采用茜素红染色法和RT-PCR技术进行鉴定。结果与结论:荷斯坦奶牛乳腺干细胞经成骨诱导后,细胞边缘模糊,细胞中有颗粒状钙化结节出现,经茜素红染色呈阳性,诱导后成骨细胞标记性基因Alpl和Bglap呈阳性表达,表明了荷斯坦奶牛乳腺干细胞具有分化为成骨细胞的潜能。 展开更多
关键词 荷斯坦奶牛 乳腺干细胞 成骨诱导分化 成骨细胞 成骨标记基因 国家自然科学基金 乳腺 动物 干细胞 细胞分化 组织工程
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成骨细胞的功能与损伤和骨质疏松的防治 预览
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作者 刘扬捷 龚晓健 王永庆 《药学与临床研究》 2019年第3期201-205,共5页
骨质疏松是一种全身性骨骼疾病,导致骨折风险增加。成人的骨量通过破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨形成作用来维持动态平衡,治疗骨质疏松症的理想策略是抑制破骨细胞的骨吸收和/或增强成骨细胞的骨形成功能。目前针对保护成骨细胞及增... 骨质疏松是一种全身性骨骼疾病,导致骨折风险增加。成人的骨量通过破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨形成作用来维持动态平衡,治疗骨质疏松症的理想策略是抑制破骨细胞的骨吸收和/或增强成骨细胞的骨形成功能。目前针对保护成骨细胞及增强其功能的骨质疏松疗法相对较少。因此,本文针对成骨细胞相关功能蛋白、各种细胞损伤机制(内质网应激、氧化应激、机械过载、微小RNA和长链非编码RNA的影响等)及骨质疏松的治疗与预防作一综述,以期为针对增强成骨细胞功能的骨质疏松治疗策略提供新思路。 展开更多
关键词 骨质疏松 成骨细胞 内质网应激
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红芪中5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞和成骨细胞成骨分化的影响
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作者 方瑶瑶 薛志远 +3 位作者 杨秀艳 杨亚飞 赵良功 封士兰 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期632-638,共7页
目的研究红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)和颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)成骨性分化的影响。方法贴壁分离... 目的研究红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)和颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)成骨性分化的影响。方法贴壁分离法培养rBMSCs;酶消解法分离培养ROBs;MTT法检测rBMSCs和ROBs细胞的增殖情况;试剂盒检测rBMSCs和ROBs的碱性磷酸酶(ALP)活性和Ca2+含量;茜素红染色法检测矿化结节形成。结果 5种成分均能不同程度促进rBMSCs和ROBs的增殖,提高ALP活性,增加Ca2+含量,增加钙化结节面积和数量(P<0.05)。其中毛蕊异黄酮促进rBMSCs的成骨分化作用最佳,美迪紫檀素促进ROBs的成骨分化作用最佳,毛蕊异黄酮次之。结论这5种黄酮类成分对rBMSCs和ROBs的成骨功能均有一定程度地改善作用,而毛蕊异黄酮对2种细胞表现的成骨活性均较佳,可发展作为良好的骨诱导活性因子。 展开更多
关键词 红芪 美迪紫檀素 芒柄花素 芒柄花苷 毛蕊异黄酮 异甘草素 成骨分化 骨髓间充质干细胞 成骨细胞
在Prrx1^+骨髓间充质干细胞中过表达肝素结合表皮生长因子样生长因子抑制小鼠骨发育 预览
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作者 刘佳佳 李平 +1 位作者 邓琦 刘慧娟 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第29期4623-4628,共6页
背景:肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨骼的发育十分重要,但目前尚未报道过体内骨髓间充质干细胞来源的肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨发育的影响。目的:探究在骨髓间充质干细胞中过表达肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨发... 背景:肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨骼的发育十分重要,但目前尚未报道过体内骨髓间充质干细胞来源的肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨发育的影响。目的:探究在骨髓间充质干细胞中过表达肝素结合表皮生长因子样生长因子对骨发育的影响并初步分析相关机制。方法:利用Cre-LoxP系统构建在Prrx1^+骨髓间充质干细胞中过表达肝素结合表皮生长因子样生长因子(ROSA26^tm1(HB-EGF);Prrx1-Cre)的小鼠模型,取骨组织切片染色进行组织学分析。取小鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养,进行分化能力检测和分子机制研究。实验于2015年经上海交通大学实验动物管理、学术、伦理与使用委员会批准,批准号为A2015027。结果和结论:①Prrx1在成年小鼠股骨关节头、生长板、骨小梁表面和骨膜上均有表达;②ROSA26^tm1(HB-EGF);Prrx1-Cre小鼠股骨变短,骨量明显减少,软骨形态和结构异常,出现骨关节炎样表型;③ROSA26^tm1(HB-EGF);Prrx1-Cre小鼠骨髓间充质干细胞体外成骨、软骨分化减弱。结果提示在骨髓间充质干细胞中过表达HB-EGF可能通过削弱骨髓间充质干细胞成骨、软骨分化抑制小鼠骨发育。 展开更多
关键词 Prrx1 肝素结合表皮生长因子样生长因子 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 软骨细胞 骨关节炎 转基因模型
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莱菔硫烷对常氧条件下成骨细胞活性的影响 预览
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作者 陈巧凤 闻博 +1 位作者 谢俊杰 曾冰 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期472-476,共5页
目的了解莱菔硫烷对常氧条件下成骨细胞活性的影响,探讨常氧条件下使用抗氧化剂的合理性。方法将成骨细胞hfob1.19置于常氧条件(培养箱内含20%O2),根据实验分组分别加入0、5、10、20μmol/L的莱菔硫烷,分别培养24 h和48 h,通过MTT检测... 目的了解莱菔硫烷对常氧条件下成骨细胞活性的影响,探讨常氧条件下使用抗氧化剂的合理性。方法将成骨细胞hfob1.19置于常氧条件(培养箱内含20%O2),根据实验分组分别加入0、5、10、20μmol/L的莱菔硫烷,分别培养24 h和48 h,通过MTT检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,同时检测细胞内ROS。结果 24 h组的OD值分别为0.63±0.02,0.77±0.04,0.91±0.04,0.85±0.01;48 h组的OD值分别为0.53±0.04,0.65±0.04,0.82±0.02,0.76±0.04。5μmol/L、10μmol/L的莱菔硫烷可促进细胞增殖,当浓度增加到20μmol/L后增殖速度减缓;24 h组的细胞凋亡率分别为3.76%、3.71%、3.38%、3.33%,48 h组的细胞凋亡率分别为4.02%、3.49%,3.33%,3.09%,可见莱菔硫烷可减少细胞的凋亡,浓度越高,作用越明显;24 h组的ROS值分别为3 152.67±118.73,2 762.33±75.25,2 384.67±100.52, 2 165.67±196.02;48 h组细胞ROS值分别为3 762.33±74.65,3 291±90.02,2 956.67±78.27,2 746.33±82.08。可见莱菔硫烷会减少细胞活性氧,浓度越高,细胞内ROS降低越明显。结论在常氧培养条件下,低浓度的莱菔硫烷可促进成骨细胞的增殖,浓度升高会抑制细胞增殖;莱菔硫烷的应用可以减少细胞凋亡,起到抗氧化作用。 展开更多
关键词 成骨细胞 常氧 莱菔硫烷 线粒体
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干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨分化能力 预览 被引量:1
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作者 陈钦桂 曾勉 +2 位作者 何婉媚 张莉珊 郑海崇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第5期673-679,共7页
背景:foxM1基因被认为参与了干细胞分化命运的调控,但其对间充质干细胞成骨分化的影响尚未见报道,关于foxM1基因的研究也主要集中于肿瘤领域。目的:探索干扰foxM1基因表达水平对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法:全骨髓贴壁法... 背景:foxM1基因被认为参与了干细胞分化命运的调控,但其对间充质干细胞成骨分化的影响尚未见报道,关于foxM1基因的研究也主要集中于肿瘤领域。目的:探索干扰foxM1基因表达水平对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法:全骨髓贴壁法培养SD大鼠(中山大学实验动物中心提供)骨髓间充质干细胞,构建含嘌呤霉素抗性基因的foxM1shRNA重组慢病毒载体并转染大鼠骨髓间充质干细胞,经嘌呤霉素筛选建立foxM1稳定敲低细胞株,另设置空病毒载体组以及未转染组。使用骨髓间充质干细胞成骨诱导分化培养基诱导培养并行茜素红染色检测其成骨分化能力,使用定量RT-PCR检测成骨相关基因的表达水平,同时提取胞核蛋白,Westernblot检测β-catenin蛋白表达水平。结果与结论:①与空病毒载体组以及未转染组比较,foxM1敲低的大鼠骨髓间充质干细胞经成骨诱导分化后形成的骨结节数量明显增多,成骨相关基因col1a1和runx2表达水平均显著升高,但胞核β-catenin蛋白水平无明显改变;②干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨能力。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 成骨 诱导分化 慢病毒载体 foxM1基因 基因干扰 β-catenin 国家自然科学基金 叉头转录因子类 RNA干扰 骨髓 间质干细胞 细胞分化 成骨细胞 组织工程
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淫羊藿苷对UMR-106成骨细胞和RAW264.7细胞诱导的破骨细胞蛋白质组学的影响
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作者 沈燚 祝峥 +3 位作者 张奇 何玉琼 吴岩斌 张巧艳 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期268-273,共6页
目的研究淫羊藿苷基于成骨细胞和破骨细胞蛋白质组学的抗骨质疏松作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖,ELISA法测定碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性,茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成,以骨片上... 目的研究淫羊藿苷基于成骨细胞和破骨细胞蛋白质组学的抗骨质疏松作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞的增殖,ELISA法测定碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性,茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成,以骨片上形成的骨吸收陷窝的数目和面积表征破骨细胞的骨吸收活性,以二维凝胶电泳观察成骨及破骨细胞蛋白质组的变化,应用TOF/MS/MS对差异表达的蛋白进行鉴定。结果淫羊藿苷显著增加成骨细胞的骨形成,抑制破骨细胞的骨吸收,上调或下调成骨和破骨细胞各9个蛋白的表达。结论淫羊藿苷通过参与能量代谢、氧化应激、嘌呤合成和细胞生长分化的等生物学过程调控骨代谢。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 成骨细胞 破骨细胞 蛋白质组学 差异蛋白
下颌升支截骨术加速正畸牙移动的实验研究 预览
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作者 谭俭琴 唐正龙 +4 位作者 李永頔 王冬香 陈友利 高琼 董强 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第6期647-652,657共7页
目的:探讨下颌升支截骨术对正畸牙移动速度的影响及机制。方法:48只建立下颌第一磨牙近中移动正畸模型新西兰大耳家兔均分为实验组和对照组,实验组家兔正畸牙同侧实施下颌骨升支截骨术,对照组不实施截骨手术,术后第1天以80g正畸力近中... 目的:探讨下颌升支截骨术对正畸牙移动速度的影响及机制。方法:48只建立下颌第一磨牙近中移动正畸模型新西兰大耳家兔均分为实验组和对照组,实验组家兔正畸牙同侧实施下颌骨升支截骨术,对照组不实施截骨手术,术后第1天以80g正畸力近中移动正畸牙;在加载正畸力第5、7、14及21天时测量两组家兔正畸牙移动距离和速度,观察正畸牙的牙周组织形态学改变、成骨细胞和破骨细胞数量变化,ELISA法检测两组家兔血清中的碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原羧基末端肽水平。结果:从正畸牵引第5天开始,实验组家兔下颌第一磨牙近中移动速度大于对照组;第5、14及21天时,实验组家兔正畸牙张力侧成骨细胞数量多于对照组、实验组家兔正畸牙压力侧破骨细胞数量多于对照组;正畸后实验组家兔血清中的碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原羧基末端肽水平在各个时间点上均高于对照组。结论:下颌升支截骨术术后可加速正畸牙移动,并通过早期激活牙周组织中的破骨和成骨活性,加速骨的分解和合成代谢,从而加速正畸牙移动。 展开更多
关键词 成骨细胞 破骨细胞 正畸 下颌升支截骨术 手术优先方法 碱性磷酸酶 Ⅰ型胶原羧基末端肽
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分子信号通路及细胞层面的骨折愈合机制 预览
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作者 杨楠 陈跃平 章晓云 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第20期3188-3194,共7页
背景:骨不连和骨折延迟愈合不仅对个人和家庭造成了极大的困扰,对整个社会也会带来巨大的经济损失。而最佳的骨折治疗需要了解骨折愈合的复杂生理过程。目的:综述国内外相关文献,通过研究和对比骨折愈合机制,为临床诊断、治疗提供新的... 背景:骨不连和骨折延迟愈合不仅对个人和家庭造成了极大的困扰,对整个社会也会带来巨大的经济损失。而最佳的骨折治疗需要了解骨折愈合的复杂生理过程。目的:综述国内外相关文献,通过研究和对比骨折愈合机制,为临床诊断、治疗提供新的思路。方法:中文以'骨折愈合,骨折不愈合,炎症,信号通路,破骨细胞,成骨细胞,骨形态发生蛋白,Wnt,甲状旁腺激素,Hedgehog'检索CNKI、万方、维普数据库;英文以'Fracturehealing,Nonunion,Inflammation, Signaling pathways, Osteoclast,Osteoblast,BMP,Wnt,Hedgehog,PTH'检索PubMed数据库,收录与骨折愈合机制有关的分子信号通路和基因细胞研究相关的文献报道,并排除重复性研究,按照纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入46篇文章进行综述分析。结果与结论:(1)通过从炎症阶段、信号通路、细胞3个方面对骨折愈合机制进行综述讨论,发现临床和早期科研之间的矛盾(如副反应)能在更深层次的研究中得到统一;(2)但由于骨折愈合机制过于复杂,现在的研究结果并不足以解开所有临床问题;(3)不同分子之间相互影响,难以找到具有临床意义可以用于早期骨不连临床诊断的标志物;(4)需要研发更加精细的实验设备和设计更严密的科研方案,服务临床;(5)但是针对目前的科研结果,可以考虑配合仿生骨信号递送系统,使原本孤立、平面、静止的研究结果具有三维动态性更符合临床实际的治疗需求,这是下一步考虑的事情。 展开更多
关键词 骨折愈合 炎症阶段 信号通路 破骨细胞 成骨细胞 骨形态发生蛋白 WNT HEDGEHOG 甲状旁腺激素 国家自然科学基金
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地塞米松通过线粒体途径诱导成骨细胞凋亡的研究 预览
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作者 伍龙果 蔡劲薇 +1 位作者 潘吉铭 梁敏 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期380-384,403共6页
目的观察地塞米松对离体成骨细胞凋亡的影响,探讨地塞米松对成骨细胞凋亡的分子作用机制。方法采用不同浓度地塞米松(10-8、10-6、10-4mol/L)干预SD大鼠离体成骨细胞,DAPI染色观察细胞核形态,透射电镜观察细胞核及线粒体形态,流式细胞... 目的观察地塞米松对离体成骨细胞凋亡的影响,探讨地塞米松对成骨细胞凋亡的分子作用机制。方法采用不同浓度地塞米松(10-8、10-6、10-4mol/L)干预SD大鼠离体成骨细胞,DAPI染色观察细胞核形态,透射电镜观察细胞核及线粒体形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1荧光探针检测线粒体跨膜电位。结果 10-8、10-6、10-4mol/L地塞米松干预24 h后,DAPI染色发现,10-8mol/L地塞米松组的成骨细胞很少发生凋亡,10-6mol/L和10-4mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡明显,地塞米松的浓度越高,核固缩、核裂解等凋亡现象越明显;透射电镜观察发现,随着地塞米松浓度增加,细胞核固缩明显,线粒体肿胀、空泡样变化现象增多;成骨细胞的凋亡率随着地塞米松浓度的增加而逐渐增高,与空白对照组相比,10-8mol/L地塞米松组细胞凋亡率无明显升高(P>0.05),10-6 mol/L和10-4mol/L地塞米松组的成骨细胞凋亡率分别较空白对照组增加7.240%和31.173%(P<0.05);随着地塞米松浓度的增加,线粒体膜电位逐渐减低,与空白对照组相比较,10-8mol/L地塞米松组细胞膜电位下降不明显(P>0.05),10-6 mol/L和10-4mol/L地塞米松组膜电位下降分别较空白对照组降低6.814%和17.846%(P<0.05)。结论地塞米松通过激活线粒体途径诱导成骨细胞凋亡,存在浓度依赖性。 展开更多
关键词 地塞米松 成骨细胞 凋亡 超微结构
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17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Ca^2+通道的作用 预览
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作者 冷冰 王大麟 +4 位作者 郑淑云 韩梅 吴震宇 裴颖 薛昊罡 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1041-1045,I0003共6页
目的:观察17β-雌二醇(17β-E2)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化过程中钙离子(Ca^2+)通道的影响,阐明17β-E2对MSCs促成骨分化的作用机制。方法:采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离出MSCs,连续传代3次,进行成骨细胞的诱导分化。... 目的:观察17β-雌二醇(17β-E2)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化过程中钙离子(Ca^2+)通道的影响,阐明17β-E2对MSCs促成骨分化的作用机制。方法:采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离出MSCs,连续传代3次,进行成骨细胞的诱导分化。将MSCs分为对照组[单纯成骨细胞培养基(OBM)培养]和不同剂量17β-E2组(在OBM中分别添加0.1、1.0、10.0和100.0 pmol·L^-1 17β-E2)。成骨诱导14 d ,各组细胞经Fluo-3/AM染色后,利用激光扫描共聚焦显微镜测定平均荧光强度(MFI),以MFI代表Ca^2+水平。应用全细胞膜片钳技术记录不同条件下的全细胞Ca^2+电流。结果:采用密度梯度离心法和贴壁筛选法成功分离MSCs。MSCs细胞呈成纤维细胞样,核呈椭圆形,细胞核内可见核仁。传代培养的MSCs生长旺盛,保持原代细胞的形态特征。随着17β-E2浓度的增加,各组细胞的Ca^2+水平也逐渐增强,以100.0 pmol·L^-1 17β-E2组最为明显。与对照组比较,10.0和100.0 pmol·L^-1 17β-E2组的MSCs成骨分化过程中Ca^2+水平和Ca^2+电流峰值明显升高( P <0.05或 P <0.01),0.1和1.0pmol·L^-1 17β-E2组Ca^2+水平和Ca^2+电流峰值差异无统计学意义( P >0.05)。结论:密度梯度离心法和贴壁筛选法分离所得细胞为大鼠MSCs。17β-E2通过增强MSCs Ca^2+通道的开放,增强Ca^2+内向电流发挥促进成骨形成作用,并呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 17Β-雌二醇 钙离子通道 成骨细胞
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肺癌细胞来源的Sema4D通过抑制成骨细胞分化介导肺癌溶骨性骨破坏
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作者 陈武桂 孙靖 +7 位作者 杨思振 张莹 胡旭 李松涛 沈伟伟 廖通权 周跃 初同伟 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期701-711,共11页
目的 :探讨肺癌来源的信号素4D(semaphorin 4D,Sema4D)在肺癌骨转移溶骨性骨破坏中的作用及机制。方法 :采用免疫组织化学法检测肺癌骨转移灶及正常骨组织中Sema4D的表达情况。分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测4种肺癌细胞... 目的 :探讨肺癌来源的信号素4D(semaphorin 4D,Sema4D)在肺癌骨转移溶骨性骨破坏中的作用及机制。方法 :采用免疫组织化学法检测肺癌骨转移灶及正常骨组织中Sema4D的表达情况。分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测4种肺癌细胞株中Sema4D蛋白及mRNA表达水平。收集4种肺癌细胞条件培养液,采用ELISA法检测其中Sema4D的分泌水平。收集Sema4D高表达(PC9细胞)及低表达(A549细胞)肺癌细胞的条件培养液,与成骨前体细胞MC3T3-E1共培养后,采用碱性磷酸酶染色法检测成骨细胞分化水平,采用茜素红染色法检测成骨细胞矿化能力,采用实时荧光定量PCR法检测成骨细胞分化基因如肝/肾/骨型碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, liver/bone/kidney,ALPL)、Oxterix和Ⅰ型胶原α1(collagen typeⅠalpha 1,Col1α1)的表达水平。将Sema4D shRNA转染肺癌PC9细胞后,采用蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR及ELISA法分别检测肺癌细胞中Sema4D表达与分泌水平的变化;收集肺癌条件培养液与成骨前体细胞共培养,再次采用碱性磷酸酶染色法、茜素红染色法和实时荧光定量PCR法检测干扰Sema4D表达后肺癌条件培养液对成骨细胞分化的影响。结果:与正常骨组织相比,Sema4D在肺癌溶骨性骨转移灶中高表达。Sema4D在不同肺癌细胞株中呈不同程度的表达与分泌,其中肺癌PC9细胞中表达与分泌水平最高,而肺癌A549细胞中表达与分泌水平最低(P <0.05)。肺癌条件培养液可明显抑制成骨前体细胞在成骨诱导剂诱导下的成骨分化,表现为碱性磷酸酶染色及茜素红染色的相对染色面积减小(P值均<0.05),成骨分化基因ALPL、Oxterix和Col1α1的mRNA表达水平均明显降低(P值均<0.05);并且Sema4D高表达细胞株PC9的条件培养液抑制成骨细胞分化的能力明显强于Sema4D低表达细胞株A549(P <0.05)。shRNA转染可显著降低肺癌细胞中Sema4D的表达与分泌水平(P值均<0.05),并� 展开更多
关键词 肺肿瘤 肿瘤转移 信号素4D 成骨细胞 细胞分化
过表达脾酪氨酸激酶降低氧化应激诱导的小鼠成骨细胞凋亡 预览
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作者 晋瑞 金迎迎 +1 位作者 李嫚 雷喆 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第7期1013-1018,共6页
目的探究脾酪氨酸激酶(SYK)对氧化应激(OS)诱导的小鼠成骨细胞MC3T3-1凋亡的影响及其机制。方法过氧化氢(H2O2)孵育MC3T3-1细胞,建立OS模型;实时荧光定量PCR检测SYK的mRNA表达量;Western blot检测SYK、AKT、p-AKT和UCP2蛋白表达量;构建... 目的探究脾酪氨酸激酶(SYK)对氧化应激(OS)诱导的小鼠成骨细胞MC3T3-1凋亡的影响及其机制。方法过氧化氢(H2O2)孵育MC3T3-1细胞,建立OS模型;实时荧光定量PCR检测SYK的mRNA表达量;Western blot检测SYK、AKT、p-AKT和UCP2蛋白表达量;构建重组质粒pcDNA.3.1-SYK或pcDNA.3.1-UCP2,分别转染MC3T3-1;AKT抑制剂HIMO抑制AKT磷酸化;annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡;caspase-3荧光检测等试剂盒检测caspase-3活性和ROS水平。结果OS降低MC3T3-1中SYK的表达(P<0.01);过表达SYK降低OS诱导的细胞凋亡(P<0.05)、caspase-3活性(P<0.01)和ROS水平(P<0.01);过表达SYK提高AKT的磷酸化水平(P<0.05)和UCP2的表达量(P<0.01);抑制AKT磷酸化后可消除过表达SYK对细胞凋亡和UCP2的表达的影响(P<0.01)。在过表达SYK、抑制AKT的MC3T3-1细胞中,过表达UCP2,细胞凋亡(P<0.05)和ROS水平(P<0.01)均显著降低。结论过表达SYK可通过调控AKT/UCP2降低OS对小鼠成骨细胞的伤害。 展开更多
关键词 SYK P-AKT UCP2 成骨细胞 细胞凋亡
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应力刺激下TGFβ/Smad信号通路介导成骨细胞功能变化的研究
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作者 程烨 吕春晓 +3 位作者 李贵凤 陶贵渝 陈建伟 李煌 《现代口腔医学杂志》 CAS 2019年第3期142-146,共5页
目的探究机械张应力通过TGFβ/Smad信号通路介导成骨细胞增殖分化相关因子的表达变化规律。方法采用成骨细胞体外张应力加载模型,使用流式细胞术检测成骨细胞的增殖活性;并提取成骨细胞的mRNA,利用实时聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测TGF... 目的探究机械张应力通过TGFβ/Smad信号通路介导成骨细胞增殖分化相关因子的表达变化规律。方法采用成骨细胞体外张应力加载模型,使用流式细胞术检测成骨细胞的增殖活性;并提取成骨细胞的mRNA,利用实时聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测TGFβ/Smad及成骨分化相关因子ALP、OCN、Runx2、COL-I的mRNA表达水平。结果机械张应力促进了成骨细胞的增殖活性,并同时改变了TGFβ/Smad、ALP、OCN、Runx2及COL-I mRNA的表达水平。结论 TGFβ/Smad信号通路可能参与机械应力对成骨细胞增殖分化活性的调控。 展开更多
关键词 TGFβ/Smad 张应力 成骨细胞
衰老原代小鼠成骨细胞模型的建立与评价 预览
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作者 鲁晴 谭海涛 +3 位作者 贺锦桥 杨心妮 张鑫 黎静 《系统医学》 2019年第16期14-16,20共4页
目的提取小鼠颅骨原代成骨细胞,并建立成骨细胞衰老模型。方法取5只新出生5~7 d的昆明乳鼠颅骨,采取酶消化法与组织块培育法获取原代成骨细胞,经鉴定后,采用D-半乳糖诱导成骨细胞衰老,行β-半乳糖苷酶衰老染色、RT-PCR法分析ALP,BMP-2... 目的提取小鼠颅骨原代成骨细胞,并建立成骨细胞衰老模型。方法取5只新出生5~7 d的昆明乳鼠颅骨,采取酶消化法与组织块培育法获取原代成骨细胞,经鉴定后,采用D-半乳糖诱导成骨细胞衰老,行β-半乳糖苷酶衰老染色、RT-PCR法分析ALP,BMP-2的表达。结果光学显微镜下观察细胞呈三角形,长梭形,不规则多边形,碱性磷酸酶染色呈阳性且阳性率为90%。经D-半乳糖处理后,成骨细胞β-半乳糖苷酶衰老染色阳性细胞数较对照组阳性细胞数显著增多(P<0.01),RT-PCR结果表明衰老成骨细胞中mRNAALP,BMP-2的表达较对照组均显著降低(P<0.05)。结论该研究采取D-半乳糖诱导法成功建立了小鼠原代成骨细胞衰老模型。 展开更多
关键词 原代细胞 成骨细胞 衰老 D-半乳糖
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大鼠不同胚层来源成骨细胞生物学行为比较研究 预览
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作者 陈玉玲 许雄程 +4 位作者 江俊 阳雪 吴玉铭 何梦娇 骆凯 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期196-200,共5页
目的:探讨大鼠不同胚层来源成骨细胞生物学行为的差异。方法:体外培养大鼠颌骨与股骨成骨细胞(MOBs与FOBs),通过MTT比色法检测细胞的增殖能力,采用碱性磷酸酶染色与活性测定、茜素红染色与定量比较细胞的成骨能力。应用荧光定量PCR及EL... 目的:探讨大鼠不同胚层来源成骨细胞生物学行为的差异。方法:体外培养大鼠颌骨与股骨成骨细胞(MOBs与FOBs),通过MTT比色法检测细胞的增殖能力,采用碱性磷酸酶染色与活性测定、茜素红染色与定量比较细胞的成骨能力。应用荧光定量PCR及ELISA检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况。结果:与FOBs相比,MOBs的增殖能力、成血管相关细胞因子Angpt-1和FGF-2的表达更强,但碱性磷酸酶的表达、体外矿化结节形成能力以及成骨相关基因ALP、RUNX2、Col-Iα1和OC的表达均较低。结论:MOBs与FOBs相比较,增殖力较强,分化能力较弱。 展开更多
关键词 颌骨 股骨 成骨细胞 成骨 成血管
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中药巴戟天对动物骨骼生长影响的研究进展 预览
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作者 孔安安 曹芹芹 +1 位作者 黄淑成 仝宗喜 《畜牧与饲料科学》 2019年第5期73-77,共5页
骨骼的生长发育对动物非常重要,其正常的生长主要通过成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收来共同维持骨的动态平衡。巴戟天作为一种中药,不仅在抗衰老、增强免疫方面作用显著,而且在补肾壮阳、强筋健骨方面尤为突出。就巴戟天通过细胞... 骨骼的生长发育对动物非常重要,其正常的生长主要通过成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收来共同维持骨的动态平衡。巴戟天作为一种中药,不仅在抗衰老、增强免疫方面作用显著,而且在补肾壮阳、强筋健骨方面尤为突出。就巴戟天通过细胞水平和动物水平如何影响骨骼的生长发育进行综述,旨在为中药巴戟天作为一种口服添加制剂在改善动物骨骼生长上的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 巴戟天 成骨细胞 破骨细胞 骨密度 骨小梁
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