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1株QX基因型鸡传染性支气管炎病毒的致病性
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作者 潘力 于可响 +7 位作者 李桂明 刘存霞 李玉峰 杨世发 万仁忠 李智勇 赵增成 林树乾 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1453-1459,1465共8页
通过对8日龄SPF鸡人工感染鸡传染性支气管炎病毒(IBV)QX株发病,分别在攻毒后3,7,30 d剖杀并采集气管、肺、肾、脾、胸腺、法氏囊制作病理组织切片。攻毒7 d后,采集上述器官相同部位进行免疫组织化学法分析。根据IBV-QX株NP基因的保守序... 通过对8日龄SPF鸡人工感染鸡传染性支气管炎病毒(IBV)QX株发病,分别在攻毒后3,7,30 d剖杀并采集气管、肺、肾、脾、胸腺、法氏囊制作病理组织切片。攻毒7 d后,采集上述器官相同部位进行免疫组织化学法分析。根据IBV-QX株NP基因的保守序列设计引物,构建质粒标准品,建立了IBV-QX Real-time PCR标准曲线,并跟踪检测试验鸡的口腔、泄殖腔排毒情况。此外,观察并记录了2组鸡的临床症状、体质量差异等信息。结果显示,发病初期(3 d),气管、肺几乎无明显病理变化,其他器官均出现不同程度的炎性反应;临床症状明显期(7 d),所涉及的器官均有不同程度的病理变化;发病后期(30 d),气管纤毛有所恢复,肺、脾炎性反应有所减轻,但肾脏和法氏囊的病变依然严重。免疫组织化学法检测到上述器官均有可见抗原聚集。30 d时被感染鸡的口腔、泄殖腔仍可检出病毒核酸。试验鸡临床症状明显,体质量差异显著。本试验旨在探究具有组织嗜性的IBV-QX毒株对宿主的免疫器官和该病毒的主要靶器官的病理损伤以及被损伤器官的自我修复情况,抗原分布差异,排毒规律等,为后续研究宿主免疫器官发挥天然免疫的相关机理打下基础,也为研发新的疫苗、相关药物的临床药效评价、制定合理的疫苗接种策略提供参考。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 QX基因型株 NP基因 病理变化 免疫组化 排毒
表达禽流感病毒NP和M2融合基因重组乳酸菌的构建及鉴定 预览
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作者 李琼燕 杨桂连 +4 位作者 张成赛 赵金辉 晋玉北 杨文涛 王春凤 《中国兽药杂志》 2018年第12期9-15,共7页
为了在乳酸菌中表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NP和M2基因并检测其反应原性,先以pMD19-T-M2质粒作为模板,采用PCR方法克隆M2全长基因,然后将M2基因亚克隆入pSIP409-pgsA′-NP质粒中,构建重组质粒pSIP409-pgsA′-NP-M2,再将重组质粒pSIP409... 为了在乳酸菌中表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NP和M2基因并检测其反应原性,先以pMD19-T-M2质粒作为模板,采用PCR方法克隆M2全长基因,然后将M2基因亚克隆入pSIP409-pgsA′-NP质粒中,构建重组质粒pSIP409-pgsA′-NP-M2,再将重组质粒pSIP409-pgsA′-NP-M2通过电转化的方法转入植物乳杆菌Lb.plantarumNC8中,制备重组菌NC8-pSIP409-pgsA′-NP-M2并诱导表达,最后通过流式细胞术、免疫荧光和免疫印迹技术验证。结果表明,重组菌NC8-pSIP409-pgsA′-NP-M2能够经诱导表达NP-M2融合蛋白,并且与兔源NP单克隆抗体和抗M2的小鼠血清具有反应原性。试验为后续研究禽流感广谱口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 NP基因 M2基因 原核表达 重组乳酸菌
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牛副流感3型NP融合蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立 预览
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作者 王苗苗 张玲玲 +2 位作者 张峣 冉旭华 闻晓波 《现代畜牧兽医》 2018年第3期1-7,共7页
为原核表达牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type3,BPIV3)NX49株截短NP融合蛋白并以此建立间接ELISA检测方法,本研究采用RT—PCR方法扩增了BPIV3截短NP蛋白基因序列并克隆至pET-28a中进行诱导表达,纯化后产物进行Weste... 为原核表达牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type3,BPIV3)NX49株截短NP融合蛋白并以此建立间接ELISA检测方法,本研究采用RT—PCR方法扩增了BPIV3截短NP蛋白基因序列并克隆至pET-28a中进行诱导表达,纯化后产物进行Western blot分析。以重组蛋白作为包被抗原,建立并优化检测BPIV3抗体的间接ELISA方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行验证。结果成功表达出截短的NP重组蛋白。该重组蛋白具有良好的反应原性。间接ELISA优化结果如下:抗原包被浓度为4μg/mL,37℃包被1h后4℃过夜,待检血清以1:80倍稀释37℃孵育1h,5%脱脂乳37℃封闭1h。二抗以1:5000倍稀释37℃孵育1h,TMB显色时间为15min。以该蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法其特异性为97.4%,敏感性为95.3%,批内、批间检测结果变异系数均小于10%。本试验成功建立检测BPIV3抗体的间接ELISA方法,该方法具有较强的特异性、良好的重复性及敏感性,为开展牛呼吸道疾病综合征的流行病学调查、实验室诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 NP基因 原核表达 间接ELSIA
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马流感病毒NP基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立
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作者 何栋 卢刚 +4 位作者 罗霭剑 孙凌霜 贾坤 沈丹 李守军 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2017年第10期1221-1226,共6页
采用RT-PCR方法从马流感病毒(EIV)分离株A/马/黑龙江/13(H3N8)扩增得到NP基因片段,将其克隆到pET-32a(+)构建表达质粒pET-NP,测序正确后转化表达菌株Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达、镍柱纯化获得目的蛋白,将获取的重组NP蛋白作... 采用RT-PCR方法从马流感病毒(EIV)分离株A/马/黑龙江/13(H3N8)扩增得到NP基因片段,将其克隆到pET-32a(+)构建表达质粒pET-NP,测序正确后转化表达菌株Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达、镍柱纯化获得目的蛋白,将获取的重组NP蛋白作为抗原包被,通过优化条件建立检测马血清中EIV抗体的ELISA方法。结果显示,在25℃、IPTG浓度为0.8 mmol/L的诱导条件下,目的蛋白在上清中可溶性表达且表达量最大。以重组NP为抗原建立的ELISA方法仅与马流感病毒阳性血清发生反应,而与马鼻肺炎病毒、马传染性贫血病毒及马红球菌的阳性血清均无交叉反应,具有较高的特异性;与HI试验相比,该ELISA方法有更高的敏感性;批间与批内的变异系数均在15%以下,具有良好的稳定性。该检测方法的建立可以为我国马流感血清学的检测提供有效手段。 展开更多
关键词 马流感病毒 NP基因 原核表达 间接ELISA
新城疫病毒Clone 30株辅助表达系统的构建及真核表达
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作者 王善辉 薛忠 +1 位作者 李云龙 成子强 《中国家禽》 北大核心 2016年第8期26-29,共4页
为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统,构建新城疫病毒Clone 30株NP、P和L基因的真核表达载体.根据GenBank中新城疫病毒Clone 30株的全长序列(Y18898.1),设计3对特异性引物,用RT-PCR法扩增出新城疫病毒C... 为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统,构建新城疫病毒Clone 30株NP、P和L基因的真核表达载体.根据GenBank中新城疫病毒Clone 30株的全长序列(Y18898.1),设计3对特异性引物,用RT-PCR法扩增出新城疫病毒Clone 30株的NP、P和L基因,将其克隆到真核载体pCI-neo上.通过酶切和测序验证克隆正确,得到重组质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L,瞬时转染到BHK-21细胞中.经RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光试验分别检测NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达.结果表明,重组质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L构建成功,为后期新城疫病毒反向遗传操作系统的构建奠定了基础. 展开更多
关键词 新城疫病毒 NP基因 P基因 L基因 辅助质粒
输入性甲型H1N1流感病毒M、NP、PB1基因进化特征 被引量:1
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作者 师永霞 刘丽珊 +7 位作者 黄吉城 洪烨 丁国允 李小波 郑夔 苏锦坤 幸芦琴 钟玉清 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期488-491,共4页
目的 分析口岸输入性甲型H1N1流感病毒的M、NP和PB1基因进化特征,及时发现变异株。方法 对广东口岸2009-2011年检测的甲型H1N1流感阳性病例进行M、NP和PB1基因的RT-PCR扩增和核苷酸序列测定。以2009年甲型H1N1流感代表株A/California/04... 目的 分析口岸输入性甲型H1N1流感病毒的M、NP和PB1基因进化特征,及时发现变异株。方法 对广东口岸2009-2011年检测的甲型H1N1流感阳性病例进行M、NP和PB1基因的RT-PCR扩增和核苷酸序列测定。以2009年甲型H1N1流感代表株A/California/04/2009/H1N1的M、NP和PB1基因作为参考序列,分析输入性病例的系统进化树、核苷酸及氨基酸序列同源性和变异位点。结果 M基因系统进化树分为4个分支,2009年病毒与2010年病毒主要分布在第Ⅰ分支,2011年检出的多数病毒聚集于第Ⅳ分支。同源性结果显示M基因高度保守,仅有5个核苷酸位点发生显著变异,对应的蛋白序列仅在氨基酸V80I位点出现突变。所有病毒NP蛋白均出现V100I突变,同时零星出现K452R突变。PB1蛋白氨基酸序列在G154D、I397M和I435T等位点发生较明显突变。结论 2009-2011年输入性甲型H1N1流感病毒M、NP、PB1基因已发生一定程度的变异,对口岸和国内流感防控提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 流感病毒A型 H1N1亚型 M基因 NP基因
鸭源新城疫病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及抗原性检测 预览 被引量:1
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作者 王安平 朱善元 +3 位作者 王永娟 吴双 左伟勇 洪伟鸣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期1384-1388,共5页
为在昆虫细胞中表达鸭源新城疫病毒NP蛋白质,首先根据鸭源新城疫病毒NP基因序列设计引物,扩增出NP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体p Fast Bac1,获得重组转移载体p Fast Bac-NP,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得... 为在昆虫细胞中表达鸭源新城疫病毒NP蛋白质,首先根据鸭源新城疫病毒NP基因序列设计引物,扩增出NP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体p Fast Bac1,获得重组转移载体p Fast Bac-NP,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒r Bacmid-NP,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒NP蛋白质。Western blot、间接免疫荧光试验结果均显示表达的重组蛋白质能够与全病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。以上结果说明鸭源新城疫病毒NP蛋白质在昆虫细胞中获得了成功表达。 展开更多
关键词 鸭源新城疫病毒 NP基因 昆虫细胞 表达
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河南猪流感病毒H3N2分离株NP基因表达及抗原性分析
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作者 赵朴 苏红辽 +5 位作者 刘兴友 赵坤 胡建和 王三虎 姚四新 郑玉姝 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1173-1175,共3页
目的表达猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)H3N2分离株NP基因,获得具有良好抗原性的NP蛋白。方法PCR扩增猪流感病毒A/swine/Henan/2/2008(H3N2)NP基因,经EcoRI和XhoI双酶切后插入pET32a(+)载体,并转化大肠杆菌Rosset... 目的表达猪流感病毒(swineinfluenzavirus,SIV)H3N2分离株NP基因,获得具有良好抗原性的NP蛋白。方法PCR扩增猪流感病毒A/swine/Henan/2/2008(H3N2)NP基因,经EcoRI和XhoI双酶切后插入pET32a(+)载体,并转化大肠杆菌Rosset(DE3)菌株;PCR、EcoRI和XhoI双酶切及DNA测序鉴定重组质粒pET32a—NP;IPTG诱导,表达、纯化NP并免疫家兔制备免疫血清,SDS—PAGE、WB测其反应原性;同时构建pcDNA3.1-NP并转染293T细胞,免疫荧光检测其免疫源性。结果成功构建重组载体pET32a.NP和pcDNA3.1.NP,SDS-PAGE和WB显示融合蛋白约80kD,能与感染SIV的猪血清特异性反应,并且纯化蛋白制备的多克隆血清能识别293T细胞中表达的NP蛋白。结论正确表达SI~H3N2NP蛋白,并有良好的抗原性,为研究猪流感病毒NP诊断抗原和亚单位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒 NP基因 表达 抗原性
鸭新城疫病毒NP基因的原核表达与多抗的制备 预览
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作者 王安平 朱善元 +3 位作者 吴双 王永娟 左伟勇 洪伟鸣 《福建农业学报》 北大核心 2015年第6期554-557,共4页
根据鸭新城疫病毒NP基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出NP基因,克隆入原核表达载体pET-30a,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),在IPTG的诱导下融合蛋白获得了成功表达,SDSPAGE结果显示表达的融合蛋白分子量约为59kD,Western b... 根据鸭新城疫病毒NP基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出NP基因,克隆入原核表达载体pET-30a,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),在IPTG的诱导下融合蛋白获得了成功表达,SDSPAGE结果显示表达的融合蛋白分子量约为59kD,Western blotting分析表明该重组融合蛋白能与His组氨酸单抗发生特异性反应。将目的蛋白切胶免疫ICR小鼠,制备了针对重组蛋白的多抗血清,Western-blotting分析显示制备的多抗血清能够与鸭新城疫病毒感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。以上结果表明,NP基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的多抗血清可以用于NP蛋白的检测。 展开更多
关键词 鸭新城疫病毒 NP基因 原核表达 多抗
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不同连翘制剂对甲型流感病毒NP基因转染后表达的影响 被引量:6
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作者 段林建 胡伶清 +3 位作者 张清 杨斌 何士勤 孙坚 《中医学报》 CAS 2015年第1期71-73,共3页
目的:观察连翘苷、连翘醇提液、连翘水煎剂等3种连翘制剂对甲型流感病毒甲1型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)基因转染后表达的影响。方法:将甲型流感病毒NP基因转染Hela细胞,用甲型流感病毒胶体金检测3种连翘制剂对转染后细胞内... 目的:观察连翘苷、连翘醇提液、连翘水煎剂等3种连翘制剂对甲型流感病毒甲1型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)基因转染后表达的影响。方法:将甲型流感病毒NP基因转染Hela细胞,用甲型流感病毒胶体金检测3种连翘制剂对转染后细胞内和上清核蛋白表达情况,用RT-PCR检测转染后Hela细胞内NP基因的拷贝数。结果:NP重组质粒组上清胶体金检测为阳性,连翘苷组上清为阴性、细胞内为弱阳性;连翘水煎剂及连翘醇提物组上清均为弱阳性。连翘苷组NP基因表达量较NP重组质粒组减少(P〈0.05)。结论:连翘苷抑制甲型流感病毒NP基因转染后表达作用最强。 展开更多
关键词 连翘苷 连翘醇提液 连翘水煎剂 甲型流感病毒 NP基因 转染 核蛋白 RT-PCR
新城疫病毒NP和P基因辅助质粒的构建及鉴定 被引量:6
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作者 陈兴 阎富龙 +7 位作者 徐一鸣 赵权 肖朋朋 郭海宁 靖杰 辛舒 鲁会军 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第6期500-503,508共5页
目的构建新城疫病毒JL02/2000株P和NP基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。方法根据新城疫病毒(JL02/2000毒株)的全基因组中的NP、P基因分别设计引物,应用RT—PCR方法扩增NP基因... 目的构建新城疫病毒JL02/2000株P和NP基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。方法根据新城疫病毒(JL02/2000毒株)的全基因组中的NP、P基因分别设计引物,应用RT—PCR方法扩增NP基因和P基因,将扩增的NP基因和P基因片段连接到pMDl8T载体上,限制性内切酶EcoRI和XbaI酶切鉴定确认后回收目的条带,分别插入到真核表达载体pCI上,经测序确认pCI—NP、pCI-P辅助质粒的构建。将pCINP、pCI—P转染BHK-21细胞,两次换液,72h后回收细胞,经RT—PCR检测NP和P基因片段。结果构建的辅助质粒pCI—NP和pCI—P经双酶切和测序鉴定到目的片段。pCI-NP、pCI—P转染后,RT—PCR检测到NP和P基因片段。结论新城疫病毒pCI—NP、pCI-P辅助质粒构建成功,pCI-NP、pCI-P可在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 NP基因 P基因 辅助质粒 鉴定
GPMV F、HN 及 NP 蛋白核酸疫苗的构建及体外表达的研究 被引量:1
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作者 杨玉菊 徐丹丹 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期150-152,232共4页
为了更好地预防和控制严重威胁养禽业的鹅副黏病毒病,试验采用基因重组的方法,以F、HN和NP基因作为候选基因,真核表达载体pcDNA3.1(+)作为载体,构建含以上3种基因的DNA疫苗,并用构建的3种DNA疫苗转染293T细胞进行瞬时表达。结... 为了更好地预防和控制严重威胁养禽业的鹅副黏病毒病,试验采用基因重组的方法,以F、HN和NP基因作为候选基因,真核表达载体pcDNA3.1(+)作为载体,构建含以上3种基因的DNA疫苗,并用构建的3种DNA疫苗转染293T细胞进行瞬时表达。结果表明:3种DNA疫苗质粒均能在体外获得表达,表达的蛋白可与抗GPMV抗体发生特异性结合,于荧光显微镜下可见黄绿色荧光,而真核表达载体pcDNA3.1(+)及未转染质粒的293T细胞均未见荧光出现,呈阴性反应。 展开更多
关键词 鹅副黏病毒(GPMV) F基因 HN基因 NP基因 DNA疫苗 瞬时表达
牛副流感病毒3型NP基因原核表达及纯化 预览 被引量:2
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作者 曹丽 高维凡 温永俊 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期20-28,共9页
旨在对牛副流感病毒3型(BPIV3) NP基因进行分段克隆及原核表达,获得纯化蛋白.根据GenBank中公布的牛副流感病毒3型NP蛋白基因序列(JQ063064)设计合成2对特异性引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,以牛胚肾细胞(MDBK)... 旨在对牛副流感病毒3型(BPIV3) NP基因进行分段克隆及原核表达,获得纯化蛋白.根据GenBank中公布的牛副流感病毒3型NP蛋白基因序列(JQ063064)设计合成2对特异性引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,以牛胚肾细胞(MDBK)培养的BPIV3 NM09株病毒液提取的RNA为模板,扩增获得2段NP基因序列(NP1、NP2),将2个片段克隆到PGEX-6P-1表达载体,构建具GST标签的重组质粒PGEX-NP1、PGEX-NP2,将2种阳性重组质粒分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3),优化诱导表达条件进行可溶性分析,并用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定,同时利用亲和层析法将重组蛋白纯化.最终获得大小分别为42.3 ku、38.5 ku的重组蛋白,其中PGEX-NP1为包涵体表达,PGEX-NP2为可溶性和包涵体2种表达形式,因PGEX-NP2蛋白疏水性强、等电点较高,其蛋白大小比理论值偏大;Western blot结果显示2种重组蛋白都具有良好的反应原性. 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 NP基因 原核表达 蛋白纯化
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新城疫病毒NP基因的克隆与原核表达研究 预览 被引量:1
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作者 刘苏君 高永安 +4 位作者 张陈量 金俊杰 涂宜强 荀飞琼 白宇 《浙江畜牧兽医》 2014年第4期4-7,共4页
参照GenBank新城疫病毒(NDV)LaSota株NP基因序列,设计并合成1对特异性引物。提取NDVLaSota株基因组RNA,利用RT-PCR方法扩增出NP基因片段,将其克隆至pBluscript11KS(+/-)多克隆位点,经PCR检测、酶切及测序检测,结果表明成功... 参照GenBank新城疫病毒(NDV)LaSota株NP基因序列,设计并合成1对特异性引物。提取NDVLaSota株基因组RNA,利用RT-PCR方法扩增出NP基因片段,将其克隆至pBluscript11KS(+/-)多克隆位点,经PCR检测、酶切及测序检测,结果表明成功克隆获得NP基因。再将NP基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a—NDV-NP。经酶切、PCR鉴定后的阳性重组质粒转化感受态BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过SDS—PAGE分析结果表明,获得该蛋白的高效表达,主要以可溶性形式存在。Western—blot分析表明重组蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 NP基因 原核表达 新城疫病毒
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我国部分地区禽流感病毒流行株的分子流行病学调查 预览
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作者 张传美 杨海燕 单虎 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第8期9-12,共4页
为了解近年来禽流感病毒在我国部分地区家禽中的流行情况,深入阐明我国禽流感病毒流行株的HA和NP基因的进化关系及遗传进化过程,本研究采用RT-PCR方法,对我国广西、河北、湖南、河南、山东等地采集的病料进行检测,并对其中19株H5N1... 为了解近年来禽流感病毒在我国部分地区家禽中的流行情况,深入阐明我国禽流感病毒流行株的HA和NP基因的进化关系及遗传进化过程,本研究采用RT-PCR方法,对我国广西、河北、湖南、河南、山东等地采集的病料进行检测,并对其中19株H5N1阳性分离株进行HA和NP基因测序,将测定的序列与参照序列对比,运用DNAStar软件对核苷酸序列进行同源性和遗传进化分析。结果表明,分离的禽流感流行株因地域的不同、时间的差异、宿主的不同,禽流感病毒HA基因核苷酸序列的同源性在96.0%~99.7%之间,推导的氨基酸序列的同源性在95.8%~99.6%之间;禽流感病毒NP基因核苷酸序列的同源性在68.2%~99.7%之间,推导的氨基酸序列的同源性在65.5%~99.8%之间。各分离株在遗传进化树上并不集中处于一个分枝中,而是处于遗传进化树的不同位置,说明我国禽流感病毒可能已经发生部分变异,这些禽流感病毒起源于不同的种系,但可能具有共同的祖先。 展开更多
关键词 禽流感 分子流行病学 HA基因 NP基因 序列分析 遗传进化
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携带DEV—NP28/gB双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建 被引量:2
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作者 王相金 文明 +3 位作者 周碧君 王开功 程振涛 汪德生 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期36-40,共5页
目的:构建携带pcDNA3.1-DEV—NP28/gB双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌。方法:大量培养含pcDNA3.1-DEV—NP28/gB大肠杆菌DH50t,提取重组质粒,转化至感受态减毒沙门氏菌SL7207中,培养后再提取重组质粒,通过双酶切、PCR和序列测序进... 目的:构建携带pcDNA3.1-DEV—NP28/gB双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌。方法:大量培养含pcDNA3.1-DEV—NP28/gB大肠杆菌DH50t,提取重组质粒,转化至感受态减毒沙门氏菌SL7207中,培养后再提取重组质粒,通过双酶切、PCR和序列测序进行鉴定。结果:经对重组质粒双酶切和PCR后,均可得到与预期大小相一致的DNA片段(1062bp);测序发现重组质粒目的基因序列与预期设计一致。结论:成功构建了携带pcDNA3.1-DEV—NP28/gB的减毒沙门氏菌SL7207。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 NP基因 GB基因 DNA疫苗 减毒沙门氏菌 构建
一株H3N2犬源猫流感病毒NP基因的遗传变异性分析 预览
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作者 涂黎晴 袁子国 +5 位作者 李陆涛 贾坤 李华涛 赵明喜 邹雨妃 李守军 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期146-148,F0002共4页
从被感染猫体内分离出流感病毒,利用RT—PCR扩增NP基因,分析其遗传变异性。与NCBI上的14株流感病毒的NP全基因序列进行比对分析,发现其与参考毒株的NP基因序列的相似性为79.3%-99.7%,其中与感染株A/canine/Guangdong/1/2007... 从被感染猫体内分离出流感病毒,利用RT—PCR扩增NP基因,分析其遗传变异性。与NCBI上的14株流感病毒的NP全基因序列进行比对分析,发现其与参考毒株的NP基因序列的相似性为79.3%-99.7%,其中与感染株A/canine/Guangdong/1/2007(H3N2)的NP基因序列的相似性最高,为99.7%。基因序列比对发现,编码区存在5处突变:A33G、A81G、C235T、G345A、A567G:氨基酸仅存在1处变异:1189M。研究结果表明,犬流感病毒在犬和猫之间存在跨中间传播,虽然变异系数不高,但是567位碱基突变所造成的氨基酸突变为NP基因的遗传性和种间特异性的研究提供了参考。 展开更多
关键词 H3N2亚型 猫流感 NP基因 遗传变异
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The structure of prion: is it enough for interpreting the diverse phenotypes of prion diseases?
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作者 Chan Tian Xiaoping Dong 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2013年第6期429-434,共6页
Prion 疾病,或能递送的海绵状的 encephalopathies,是 neurodegenerative 疾病,它与 100% 命运影响人和动物的许多种率。为 prion 疾病的最接受的病原学是 prion,它从细胞的 PrPC 从变换产生到病理学的 PrPSc。这评论讨论了 PrP 的... Prion 疾病,或能递送的海绵状的 encephalopathies,是 neurodegenerative 疾病,它与 100% 命运影响人和动物的许多种率。为 prion 疾病的最接受的病原学是 prion,它从细胞的 PrPC 从变换产生到病理学的 PrPSc。这评论讨论了 PrP 的典型结构,包括 PRNP 基因, PrPC, PrPSc, PrP 淀粉,并且 prion 种类。 展开更多
关键词 朊病毒疾病 结构特征 朊蛋白 神经退行性疾病 表型 淀粉样蛋白 动物物种 NP基因
连翘苷对甲型流感病毒核蛋白基因表达的影响研究 预览 被引量:35
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作者 段林建 张清 +3 位作者 王农荣 杨斌 何士勤 孙坚 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期 2082-2084,共3页
目的 探讨连翘苷对甲型流感病毒核蛋白(NP)基因转染后表达的影响.方法 将甲型流感病毒NP基因转染Hela细胞,用甲型流感病毒胶体金法检测连翘苷对转染后细胞内和上清核蛋白表达情况,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hela细胞... 目的 探讨连翘苷对甲型流感病毒核蛋白(NP)基因转染后表达的影响.方法 将甲型流感病毒NP基因转染Hela细胞,用甲型流感病毒胶体金法检测连翘苷对转染后细胞内和上清核蛋白表达情况,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hela细胞内NP基因的拷贝数.结果 NP重组质粒组甲型流感病毒核蛋白含量高.空质粒组、脂质体组、Hela细胞组基本不含甲型流感病毒核蛋白.连翘苷组上清无或可能含有微量核蛋白.连翘苷组胞内甲型流感病毒含量不高.RT-PCR校正曲线相关性为0.998,效率为97.4%.重复4次转染后48 h连翘苷组NP基因表达量为(2.1±0.3)×105拷贝数/μl,NP重组质粒组NP基因表达量为(61.5±15.0)×105拷贝数/μl,连翘苷组NP基因表达量低于NP重组质粒组,差异有统计学意义(t=7.672,P<0.05).结论 连翘苷可以抑制甲型流感病毒NP基因转染后表达. 展开更多
关键词 连翘苷 甲型流感病毒 NP基因
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Phylogenetic relationships and estimation of divergence times among Sisoridae catfishes 被引量:1
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作者 YU MeiLing HE ShunPing 《中国科学:生命科学英文版》 SCIE CAS 2012年第4期312-320,共9页
Nineteen taxa representing 10 genera of Sisoridae were subjected to phylogenetic analyses of sequence data for the nuclear genes Plagl2 and ADNP and the mitochondrial gene cytochrome b. The three data sets were analyz... Nineteen taxa representing 10 genera of Sisoridae were subjected to phylogenetic analyses of sequence data for the nuclear genes Plagl2 and ADNP and the mitochondrial gene cytochrome b. The three data sets were analyzed separately and combined into a single data set to reconstruct phylogenetic relationships among Chinese sisorids. Both Chinese Sisoridae as a whole and the glyptosternoid taxa formed monophyletic groups. The genus Pseudecheneis is likely to be the earliest diverging extant genus among the Chinese Sisoridae. The four Pareuchiloglanis species included in the study formed a monophyletic group. Glaridoglanis was indicated to be earliest diverging glyptosternoid, followed by Glyptosternon maculatum and Exostoma labiatum. Our data supported the conclusion that Oreoglanis and Pseudexostoma both formed a monophyletic group. On the basis of the fossil record and the results of a molecular dating analysis, we estimated that the Sisoridae diverged in the late Miocene about 12.2 Mya. The glyptosternoid clade was indicated to have diverged, also in the late Miocene, about 10.7 Mya, and the more specialized glyptosternoid genera, such as Pareuchiloglanis, originated in the Pleistocene (within 1.9 Mya). The speciation of glyptosternoid fishes is hypothesized to be closely related with the uplift of the Qinghai-Tibet Plateau. 展开更多
关键词 时间估计 系统发育关系 分歧 鲶鱼 线粒体细胞色素B 系统发育分析 序列数据 NP基因
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