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黄芪多糖抑制黄嘌呤氧化酶诱导的肺癌A549细胞自噬并调节自噬相关蛋白的表达
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作者 王雪林 李杨 +2 位作者 刘丹 王彦君 明海霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期619-624,共6页
目的探讨黄芪多糖(APS)对黄嘌呤氧化酶(XOD)诱导的肺癌A549细胞的自噬作用及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin1蛋白表达的影响。方法 A549细胞分为对照组、模型组、100μg/mL APS处理组、200μg/mL AP... 目的探讨黄芪多糖(APS)对黄嘌呤氧化酶(XOD)诱导的肺癌A549细胞的自噬作用及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin1蛋白表达的影响。方法 A549细胞分为对照组、模型组、100μg/mL APS处理组、200μg/mL APS处理组及400μg/mL APS处理组,除对照组,其余4组均需XOD诱导24 h建立自噬模型。采用透射电镜观察自噬体的形态、单丹磺酰尸胺(MDC)染色荧光显微镜观察自噬体数量的变化, Western blot法检测LC3B、mTOR、beclin1蛋白水平。结果与空白组比较,模型组细胞自噬体数量增多,且LC3B、beclin1蛋白水平升高, mTOR蛋白水平降低;与模型组比较,(200、400)μg/mL APS处理组细胞自噬体数量显著减少, LC3B、beclin1蛋白水平降低, mTOR蛋白水平升高。结论 APS可降低XOD诱导的A549肺癌细胞自噬水平,并降低LC3B、beclin1蛋白表达、增加mTOR蛋白表达。 展开更多
关键词 黄芪多糖 A549细胞 自噬 微管相关蛋白1轻链3B(LC3B) BECLINL 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)
川芎嗪通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导自噬改善糖尿病肾病大鼠肾损害 预览
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作者 钟娟 陈静 +2 位作者 青姚 吴曙粤 钟庆荣 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第4期395-400,共6页
目的探讨川芎嗪对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏PI3K/Akt/mTOR信号通路和自噬标志蛋白LC3B表达以及尿微量白蛋白与尿肌酐比值(U ACR)、肾脏病理的影响。方法采用链脲佐菌素建立DN大鼠模型,将模型大鼠随机分为模型组,川芎嗪低、中、高剂量组,... 目的探讨川芎嗪对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏PI3K/Akt/mTOR信号通路和自噬标志蛋白LC3B表达以及尿微量白蛋白与尿肌酐比值(U ACR)、肾脏病理的影响。方法采用链脲佐菌素建立DN大鼠模型,将模型大鼠随机分为模型组,川芎嗪低、中、高剂量组,厄贝沙坦组;另设正常组,每组12只。分别干预8周后,采用酶法测定尿肌酐,免疫比浊法测定尿微量白蛋白,计算UACR;取肾组织,经甲醛固定后,进行苏木精-伊红(H E)和过碘酸-雪夫(PAS)染色;通过蛋白免疫印迹法(W esternblot)和免疫组化检测大鼠肾组织PI3K/Akt/mTOR信号通路以及自噬标志蛋白LC3B表达的变化。结果川芎嗪能减缓DN大鼠UACR的升高,改善其肾脏病理变化,其中川芎嗪中、高剂量组UACR显著低于模型组(P<0.05),且川芎嗪中、高剂量组与厄贝沙坦组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。此外,川芎嗪能抑制DN大鼠肾组织p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达,进而提高自噬标志蛋白LC3B的表达水平和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值。结论川芎嗪能降低DN大鼠UACR的升高、改善其肾脏病理变化,发挥以上肾保护作用的机制可能与其抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而促进肾脏自噬有关。 展开更多
关键词 川芎嗪 糖尿病肾病 自噬 PI3K/Akt/mTOR通路 厄贝沙坦 LC3B
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LC3B和mTOR在口腔黏膜白斑和口腔鳞癌组织中的表达 预览
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作者 董小琳 柳志文 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期403-407,共5页
目的:探讨LC3B和mTOR在口腔黏膜白斑(OL)和口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中异常表达的情况。方法:采用免疫组化法检测LC3B和mTOR在20例口腔正常组织、120例OL及30例OSCC组织中的表达。结果:正常口腔黏膜、OL和OSCC组织的LC3B阳性率分别为85... 目的:探讨LC3B和mTOR在口腔黏膜白斑(OL)和口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中异常表达的情况。方法:采用免疫组化法检测LC3B和mTOR在20例口腔正常组织、120例OL及30例OSCC组织中的表达。结果:正常口腔黏膜、OL和OSCC组织的LC3B阳性率分别为85.0%、65.8%和33.3%(P<0.01),mTOR的阳性率分别为20.0%、48.3%和76.7%(P<0.01)。不同组织中LC3B和mTOR的表达呈显著负相关(r=-0.970)。随组织恶性度的增高, LC3B和mTOR协同失活率逐渐增高。结论:LC3B和mTOR在白斑癌变中可能起协同作用。 展开更多
关键词 LC3B MTOR 口腔黏膜白斑(OL) 鳞状细胞癌(OSCC)
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姜黄素对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响
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作者 聂春迎 孙丽娜 +2 位作者 周忠启 张倩 李想 《中医药导报》 2019年第12期39-42,47共5页
目的:通过研究姜黄素(curcumin)对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响,探讨姜黄素对糖尿病肾病足细胞保护作用的可能机制。方法:将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmo... 目的:通过研究姜黄素(curcumin)对小鼠肾足细胞系(MPC5)自噬作用的影响,探讨姜黄素对糖尿病肾病足细胞保护作用的可能机制。方法:将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)、雷帕霉素组(10 nmol/L)。Western blot分别检测LC3B、Beclin-1、Synaptopodin及Nephrin蛋白表达。将足细胞分为6组:正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、姜黄素低、中、高浓度组(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)、LY294002组(10μmol/L)。Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路中p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平。结果:高糖组自噬相关蛋白LC3II/I比值及Beclin-1蛋白表达明显低于正常对照组(P<0.05);姜黄素组LC3B、Beclin-1等自噬标志性蛋白表达均高于高糖组(P<0.05);姜黄素组足细胞功能性标志蛋白表达水平明显高于高糖组(P<0.05);姜黄素组p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平均低于高糖组(P<0.05)。结论:姜黄素能明显改善高糖刺激对小鼠肾足细胞的自噬抑制作用,并且通过抑制P13K/Akt/mTOR信号途径减轻足细胞损伤。 展开更多
关键词 姜黄素 自噬 足细胞 LC3B 糖尿病肾病
肝细胞癌组织自噬相关蛋白Beclin1和LC3B及p62表达临床意义
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作者 吴玲红 李红 +4 位作者 国娇 曾洁 廖芝玲 邓伟 黄天壬 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期539-544,共6页
目的细胞自噬是普遍存在于真核生物中一种保守的细胞应激反应,其活性失调在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展中起着重要作用。本研究通过检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3B和p62在HCC组织和其远癌组织表达差异及临床意义... 目的细胞自噬是普遍存在于真核生物中一种保守的细胞应激反应,其活性失调在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展中起着重要作用。本研究通过检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3B和p62在HCC组织和其远癌组织表达差异及临床意义,进一步揭示自噬活性对HCC发生发展的影响。方法收集广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科2015-08-01-2016-12-30因HCC手术切除的患者56例为研究对象,对应远癌组织为非癌组织(距手术切缘>2cm的组织并经病理确诊),采用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3B和p62表达及其与临床病理特征的关系。结果癌组织中Beclin-1蛋白表达为0.049±0.026,低于远癌组织的0.069±0.034,t=3.400,P=0.001;癌组织LC3B蛋白表达为0.048±0.019,低于远癌组织的0.062±0.026,t=3.130,P=0.030;而癌组织p62蛋白表达量为0.073±0.033,高于远癌组织的0.062±0.026,t=2.370,P=0.021;Beclin-1蛋白表达与肿瘤大小有关联,F=3.747,P=0.030;LC3B蛋白表达与BCLC分期(A/B)有关联,t=5.960,P<0.001;p62蛋白表达与Edmondson分级(F=4.270,P=0.019)、癌栓存在情况有关联(t=2.459,P=0.017);与其他临床病理特征差异均无统计学意义,P>0.05;远癌组织中,Beclin-1和LC3B表达呈正相关,r=0.416,P=0.001;Beclin-1和p62表达呈正相关,r=0.361,P=0.006。结论 HCC组织Beclin1和LC3B蛋白表达下调与p62表达上调,提示细胞自噬活性降低,这可能与HCC发生发展有关。 展开更多
关键词 自噬 BECLIN1 LC3B P62 肝细胞癌
柴胡皂苷A诱导Huh7细胞凋亡并上调细胞自噬水平的研究 预览
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作者 张庆伟 包军 +2 位作者 贾志龙 盛杰霞 代二庆 《海南医学院学报》 CAS 2019年第2期81-84,90共5页
目的:探讨柴胡皂苷A(SSA)对人肝癌Huh7细胞凋亡和自噬水平的影响。方法:通过MTT和流式细胞术检测不同浓度SSA对Huh7细胞增殖和凋亡的影响;构建重组质粒pEGFP-N1-LC3B并转染Huh7细胞,SSA培养基干预后共聚焦显微镜下观察细胞自噬水平。Wes... 目的:探讨柴胡皂苷A(SSA)对人肝癌Huh7细胞凋亡和自噬水平的影响。方法:通过MTT和流式细胞术检测不同浓度SSA对Huh7细胞增殖和凋亡的影响;构建重组质粒pEGFP-N1-LC3B并转染Huh7细胞,SSA培养基干预后共聚焦显微镜下观察细胞自噬水平。Western Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、PCNA及自噬相关蛋白LC3B、Beclin1、Apg12-Apg5的表达变化。结果:SSA可明显抑制Huh7细胞增殖,促进细胞凋亡,增加胞质内自噬小体形成数量,上调Bax、LC3B-Ⅱ、Beclin1、Apg12-Apg5的表达,下调Bcl-2、PCNA的表达。结论:SSA体外诱导Huh7细胞凋亡的同时上调了细胞自噬水平。 展开更多
关键词 柴胡皂苷A(SSA) 人肝癌Huh7细胞 自噬 凋亡 Bax PCNA LC3B BECLIN1
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黄颡鱼自噬相关基因LC3B和Beclin1的原核表达及多克隆抗体制备 预览
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作者 魏晓雷 叶汉梅 罗智 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1197-1202,共6页
为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco自噬的发生过程和机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得372和1344 bp的黄颡鱼LC3B(PfLC3B)和Beclin1(PfBeclin1)基因编码序列,并成功构建了pET32a(+)-PfLC3B和pET32a(+)-PfBeclin1重组表达载体,分别采... 为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco自噬的发生过程和机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得372和1344 bp的黄颡鱼LC3B(PfLC3B)和Beclin1(PfBeclin1)基因编码序列,并成功构建了pET32a(+)-PfLC3B和pET32a(+)-PfBeclin1重组表达载体,分别采用亲和层析和包涵体纯化的方法得到了纯度较高的重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白;以重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白免疫Balb/C小鼠,制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfLC3B和PfBeclin1抗血清可以分别特异性识别重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白;PfLC3B抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白,PfBeclin1抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性Beclin1蛋白。蛋白水平的组织分布显示,黄颡鱼LC3和Beclin1蛋白在肝脏中表达水平均较高,在肾脏和脾脏中的表达水平较低。综上所述,研究成功制备了黄颡鱼LC3B和Beclin1的多克隆抗体,为深入研究黄颡鱼自噬机制提供了有力工具。 展开更多
关键词 黄颡鱼 LC3B BECLIN1 原核表达 多克隆抗体制备
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人牙髓炎及根尖周炎病损组织中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B的表达 预览 被引量:1
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作者 马金宝 王倩 +1 位作者 董明 白桦 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第15期2364-2368,共5页
背景:自噬在牙髓炎、根尖周炎及其引起的牙槽骨破坏中的作用和明确机制尚未完全阐明。目的:研究自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)B在人牙髓炎及根尖周炎中的表达,以初步探讨自噬发挥的作用。方法:经患者知情同意后选取临床因正畸新... 背景:自噬在牙髓炎、根尖周炎及其引起的牙槽骨破坏中的作用和明确机制尚未完全阐明。目的:研究自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)B在人牙髓炎及根尖周炎中的表达,以初步探讨自噬发挥的作用。方法:经患者知情同意后选取临床因正畸新鲜拔除的健康第1前磨牙或外科完整拔除无龋坏的健康第3磨牙。使用1mg/L脂多糖刺激牙髓细胞,作用时间分别为0,6,12,24,48h,使其引起致炎反应。Westernblot法检测正常及脂多糖刺激的人牙髓细胞中微管相关蛋白1轻链3B的表达水平;细胞免疫荧光染色观察微管相关蛋白1轻链3B点状聚集情况;Real-timeRT-PCR法检测人慢性根尖周炎病损组织中微管相关蛋白1轻链3B的表达水平。结果与结论:①脂多糖刺激6,12,24,48h后的牙髓细胞中微管相关蛋白1轻链3B的表达高于正常牙髓细胞,且Ⅱ型微管相关蛋白1轻链3B的表达随刺激时间的延长而增高,其中24h达到高峰;②微管相关蛋白1轻链3B点状聚集随脂多糖刺激时间延长而增多;③微管相关蛋白1轻链3B在人慢性根尖周炎病损组织中的表达高于正常根尖周组织;④结果说明,自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B在人牙髓炎及根尖周炎中的表达增高,形态学亦显示自噬活动增强,提示自噬作用可能与牙髓炎及根尖周炎的发生发展相关。 展开更多
关键词 自噬 LC3B 牙髓炎 根尖周炎 自噬相关蛋白 Ⅱ型微管相关蛋白 自噬活动 慢性根尖周炎 牙髓 组织工程
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Saikosaponin A induces apoptosis and upregulates autophagy in Huh7 cells
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作者 Qing-Wei Zhang Jun Bao +2 位作者 Zhi-Long Jia Jie-Xia Sheng Er-Qing Dai 《海南医科大学学报(英文版)》 2019年第2期1-5,共5页
Objective: It is discussed whether saikosaponin A induces apoptosis of human hepatoma Huh7 cells is related to the change of autophagy level.Methods: The effects of different concentrations of SSA on proliferation and... Objective: It is discussed whether saikosaponin A induces apoptosis of human hepatoma Huh7 cells is related to the change of autophagy level.Methods: The effects of different concentrations of SSA on proliferation and apoptosis of Huh7 cells were detected by MTT and flow cytometry, and then constructed recombinant plasmid pEGFP-N1-LC3B and transfected into Huh7 cells. After intervened by SSA culture medium, the autophagy level was observed under confocal microscope. The expression of apoptosis proteins Bax, Bcl-2, PCNA and autophagy-related proteins LC3B, Beclin1, and Apg12-Apg5 were detected by Western Blot. Results: SSA can significantly inhibit the proliferation of Huh7 cells, promote apoptosis, increase the number of autophagy bodies in the cytoplasm, up-regulate the expression of Bax, LC3B-II, Beclin1, Apg12-Apg5 and down-regulate the expression of Bcl-2, PCNA. Conclusion:SSA induced apoptosis of Huh7 cells in vitro and upregulated the autophagy level. 展开更多
关键词 SAIKOSAPONIN A(SSA) HUH7 cells AUTOPHAGY APOPTOSIS Bax PCNA LC3B BECLIN1
疏风活血方通过自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用 预览
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作者 耿忆薇 王亚兰 +2 位作者 邓蓉 傅楷历 邓燕 《南方医科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期630-634,共5页
目的观察自噬在疏风活血方对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成中的作用。方法体外培养鼠B16细胞,设立空白对照组(C组),0.12、0.25、0.49、0.98、1.96 mg/m L疏风活血方组(S组),自噬诱导剂雷帕霉素组(R组),自噬诱导+疏风... 目的观察自噬在疏风活血方对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成中的作用。方法体外培养鼠B16细胞,设立空白对照组(C组),0.12、0.25、0.49、0.98、1.96 mg/m L疏风活血方组(S组),自噬诱导剂雷帕霉素组(R组),自噬诱导+疏风活血方组(RS组),采用MTT法测定各组对B16细胞增殖的影响,酶标仪检测法测定各组酪氨酸酶活性及黑素含量,Western blot法测定自噬相关蛋白P62、p-m TOR、LC3B、Beclin1含量,比较分析结果。结果与C组相比,S组及RS组对B16细胞增殖均起浓度依赖的抑制作用(P〈0.05);对酪氨酸酶活性及黑素合成有促进作用(P〈0.05);0.98 mg/m L疏风活血方组(R0.98)、自噬诱导+0.98 mg/m L疏风活血方组(RS0.98)、50 nmol/L自噬诱导剂雷帕霉素组(Rap50)均能上调自噬相关蛋白LC3B-II、Beclin1,下调P62、p-m TOR含量。结论疏风活血方能通过激活自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用,对其细胞增殖有抑制作用;对酪氨酸酶活性及黑素合成起促进作用。 展开更多
关键词 自噬 B16 黑素合成 酪氨酸酶活性 LC3B Beclin1 P62 P-MTOR
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术芩总多糖对免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖与自噬的影响 预览 被引量:3
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作者 庞敏 朱兆荣 +2 位作者 乔芊芊 詹珠玉 刘娟 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2762-2770,共9页
探讨术芩总多糖对免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖与自噬的影响。采用CCK-8法筛选术芩总多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的最佳作用浓度及时间;试验分为空白组、3-MA(自噬抑制剂)组、3-MA+术芩总多糖组,Westernblot测定术芩总多糖对小鼠脾淋巴细... 探讨术芩总多糖对免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖与自噬的影响。采用CCK-8法筛选术芩总多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的最佳作用浓度及时间;试验分为空白组、3-MA(自噬抑制剂)组、3-MA+术芩总多糖组,Westernblot测定术芩总多糖对小鼠脾淋巴细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3B表达的影响;试验分为空白组、环磷酰胺致免疫低下模型组、模型+术芩总多糖组,Westernblot测定术芩总多糖对免疫低下小鼠脾淋巴细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3B表达的影响;试验结果:1)质量浓度为10-1μg·mL-1的术芩总多糖作用小鼠脾淋巴细胞12h,细胞的增殖能力最强;2)环磷酰胺免疫低下模型小鼠脾淋巴细胞增殖能力降低,术芩总多糖使淋巴细胞的增殖能力增强;3)3-MA抑制小鼠脾淋巴细胞自噬时,自噬起始相关蛋白Beclin1的表达降低,术芩总多糖能使Beclin1的表达增加;当自噬相关蛋白LC3BⅡ/LC3BⅠ的表达升高时,术芩总多糖能降低LC3BⅡ/LC3BⅠ的表达;4)免疫低下小鼠脾淋巴细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3BⅡ/LC3BⅠ的表达升高,术芩总多糖能降低Beclin1、LC3BⅡ/LC3BⅠ蛋白的表达。环磷酰胺降低小鼠免疫功能可能与其损伤脾淋巴细胞增殖发育,激活过度的自噬导致Ⅱ型程序性细胞死亡有关,术芩总多糖能抑制过高的自噬,增强淋巴细胞增殖能力,通过调控Beclin1、LC3BⅡ/LC3BⅠ蛋白的表达而调节机体的免疫功能。 展开更多
关键词 术芩总多糖 脾淋巴细胞 自噬 LC3B BECLIN1
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登革2型病毒对人血管内皮细胞自噬的影响 预览
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作者 杨杨 左丽 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第10期1183-1191,共9页
目的:研究登革2型病毒NGC株(DEN2)感染人血管内皮细胞(HUVEC)后对HUVEC自噬的影响。方法:采用免疫组织化学法检测Ⅷ因子表达,鉴定HUVEC,50%组织细胞感染量(TCID50)测定DEN2NGC株对白纹伊蚊C6/36细胞的毒力,实时荧光定量PCR检测... 目的:研究登革2型病毒NGC株(DEN2)感染人血管内皮细胞(HUVEC)后对HUVEC自噬的影响。方法:采用免疫组织化学法检测Ⅷ因子表达,鉴定HUVEC,50%组织细胞感染量(TCID50)测定DEN2NGC株对白纹伊蚊C6/36细胞的毒力,实时荧光定量PCR检测感染DEN2的HUVEC中病毒mRNA表达水平的变化,Western-blot检测DEN2感染对HUVEC自噬标记性蛋白LC3B表达的影响,激光共聚焦显微镜观察DEN2感染HUVEC自噬现象。结果:免疫组织化学法结果显示,细胞表达Ⅷ因子,符合HUVEC特点;接种DEN2后5~7dC6/36细胞出现肿胀、融合、产生空泡等典型的细胞病变,TCID50为10^-5.6;随着感染DEN2量增加,HUVEC中DEN2mRNA相对表达量呈上升趋势,在加入1×10^4TCID50病毒量时DEN2mRNA相对表达量最高(P〈0.05);用巴伐洛霉素A1(Baf)抑制后,与未用Baf相比,相同TCID50DEN2感染HUVEV后DEN2mRNA表达减少(P〈0.05)。Western-blot结果显示,与空白对照组比较,1×10^2、1×10^3、1×10^4TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值升高,LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度值增加(P〈0.05);用Baf抑制后,与未用Baf相比,1×10^2、1×10^3、1×10^4TCID50DEN2感染组LC3BⅡ/Ⅰ比值上高,LC3BⅡ、Ⅰ条带灰度增加(P〈0.05)。激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示,在正常HUVEC胞浆内有LC3B(绿色荧光)及LAMP1(红色荧光),荧光融合后绿色、红色荧光重叠;用Baf抑制后,HUVEC胞浆内绿色红色荧光强度增加,荧光融合后绿色、红色荧光重叠部分减少;与正常HUVEC相比,1×10^4TCID50DEN2感染组HUVEC胞浆内可观察到绿色、红色及橘黄色荧光(DEN2NS1),绿色、红色荧光强度增加,在荧光融合后绿色、红色与橘黄色荧光重叠。结论:HUVEC在DEN2感染后24h,随着感染量增加,病毒载量增加,加Baf抑制后DEN2增殖被抑制;DEN2感染HUVEC后,在胞浆内DEN2NS1与LC3B、溶酶体标记蛋白LAMP1共定位;DEN2可诱导HUVEC自噬增强,Baf可抑制DEN2感染HUVEC自噬的发生。 展开更多
关键词 登革2型病毒 感染 人血管内皮细胞 自噬 LC3B 溶酶体标记性蛋白 巴伐洛霉素A1
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自噬及Rab9在阿尔茨海默病神经元变性过程中的作用 预览
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作者 陈妍林 李志军 +1 位作者 巴黎 张旻 《国际神经病学神经外科学杂志》 2018年第1期37-41,共5页
目的以12月龄的APPswe/PSldE9双转基因小鼠为对象,研究自噬及Rab9在阿尔茨海默病神经元变性过程中的作用。方法以同窝同龄同性别野生型小鼠脑组织为对照,采用免疫荧光检测12月龄APPswe/PSldE9转基因小鼠脑组织中Aβ1-16、LC3B和Rab... 目的以12月龄的APPswe/PSldE9双转基因小鼠为对象,研究自噬及Rab9在阿尔茨海默病神经元变性过程中的作用。方法以同窝同龄同性别野生型小鼠脑组织为对照,采用免疫荧光检测12月龄APPswe/PSldE9转基因小鼠脑组织中Aβ1-16、LC3B和Rab9的表达;采用WesternBlot对脑组织中LC3B—I、LC3B.Ⅱ和Rab9蛋白表达进行定量分析。结果12月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的皮质及海马区域有大量典型“有致密核心”的老年斑分布。12月龄的APPswe/PSldE9双转基因小鼠脑内LC3B和LC3B-Ⅱ的表达较对照组明显增多,差异具有统计学意义(LC3B:0.819±0.034VS.0.390±0.047,P=0.0005:LC3B.II:0.162±0.004VS.0.067±0.001,P〈0.0001)。12月龄的APPswe/PsldE9双转基因小鼠脑内Rab9呈粗颗粒状,聚集为“半月形”,分布于核周区,与在对照组小鼠脑内分布的形态不同;但两组在Rab9表达水平上差异无统计学意义(0.481±0.071vs.0.508±0.064,P〉0.05)。结论阿尔茨海默病神经元变性过程中存在自噬诱导的增加和Rab9的功能和/或分布异常。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 APPswe/PSl dE9双转基因小鼠 自噬 LC3B Rab9
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自噬相关因子在糖尿病小鼠晶状体上皮细胞中的表达变化 预览
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作者 程荣 张璐 黄钰森 《中华实验眼科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期424-428,共5页
目的 通过检测自噬相关因子BECN1、LC3B和P62在糖尿病小鼠晶状体上皮细胞中的表达情况,以探讨自噬在糖尿病性白内障发生和发展中的作用.方法 取同批次的6~8周龄雄性C57BL/6小鼠80只,应用随机数字表法随机选取50只小鼠采用连续小剂量腹... 目的 通过检测自噬相关因子BECN1、LC3B和P62在糖尿病小鼠晶状体上皮细胞中的表达情况,以探讨自噬在糖尿病性白内障发生和发展中的作用.方法 取同批次的6~8周龄雄性C57BL/6小鼠80只,应用随机数字表法随机选取50只小鼠采用连续小剂量腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)50 mg/(kg·d)诱导1型糖尿病小鼠模型作为模型组,其余30只小鼠腹腔内注射适当剂量的柠檬酸盐缓冲液作为对照组.3个月后检测模型组小鼠空腹血糖.使用透射电子显微镜观察模型组和对照组小鼠晶状体上皮细胞自噬小体的形态变化;免疫组织化学法检测2个组小鼠晶状体前囊膜组织中LC3B和P62蛋白的表达和定位;荧光定量PCR法检测各组小鼠晶状体前囊膜中BECN1、LC3B和P62 mRNA的表达量;Western blot法检测2个组小鼠晶状体前囊膜中自噬相关蛋白的相对表达量.结果 透射电子显微镜下观察发现,与对照组小鼠相比,模型组小鼠晶状体上皮细胞中的自噬体体积更大,且其内包含多个线粒体;免疫组织化学法检测结果显示,与对照组小鼠相比,模型组小鼠晶状体前囊膜中LC3B和P62蛋白表达均增强;荧光定量PCR结果显示,模型组小鼠晶状体前囊膜中BECN1 、LC3B和P62 mRNA的相对表达量分别为1.48±0.10、2.62±0.15和1.89±0.20,均高于对照组的1.10±0.02、1.10±0.05和1.01 ±0.01,差异均有统计学意义(t=6.64、14.25、6.14,均P<0.05);Western blot检测结果显示,模型组小鼠晶状体前囊膜中BECN1、LC3B和P62蛋白的相对表达量分别为1.50±0.10、1.24±0.09和3.19±1.04,均高于对照组的1.00±0.00、1.00±0.00和1.00±0.00,差异均有统计学意义(t=8.75、6.10、3.65,均P<0.05).结论 糖尿病小鼠晶状体上皮细胞中自噬现象出现异常,自噬功能失调可能在糖尿病性白内障的形成过程中起重要作用. 展开更多
关键词 糖尿病性白内障 自噬 晶状体上皮细胞 BECN1 LC3B P62
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依达拉奉拮抗阿霉素诱导H9C2心肌细胞自噬的研究
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作者 张升 杨林 +4 位作者 由振强 李丽丽 谢峰 徐潘生 辛艳飞 《毒理学杂志》 CSCD 2018年第3期220-223,共4页
目的探讨新型抗氧化剂依达拉奉(edaravone,EDA)拮抗阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的H9C2心肌细胞损伤中的自噬机制。方法 H9C2心肌细胞加EDA和不同浓度DOX共同孵育后,MTT法检测细胞存活率并用试剂盒测定过氧化物岐化酶(SOD)活性和... 目的探讨新型抗氧化剂依达拉奉(edaravone,EDA)拮抗阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的H9C2心肌细胞损伤中的自噬机制。方法 H9C2心肌细胞加EDA和不同浓度DOX共同孵育后,MTT法检测细胞存活率并用试剂盒测定过氧化物岐化酶(SOD)活性和氧化代谢产物丙二醛(MDA)水平,DAPI染色法观察细胞凋亡情况,Western blot测定自噬相关蛋白LC3B表达水平。结果在实验设置细胞评价体系下,浓度为1μg/ml的EDA可以显著提高DOX作用下H9C2心肌的存活率,同时能显著降低DOX(浓度为1μmol/L)引起细胞中MDA水平(P〈0.05,P〈0.01)的升高,且使DOX诱导的SOD活性的降低得到显著提升(P〈0.05),上述差异有统计学意义。DAPI染色结果显示EDA能够减少DOX导致的心肌细胞凋亡,并显著抑制DOX诱导的自噬相关蛋白LC3B的增加,差异有统计学意义(P〈0.05,P〈0.01)。结论 DOX能引起H9C2细胞产生氧化应激,并诱导细胞自噬进而使细胞凋亡。而EDA对DOX诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,这种作用可能是通过调节自噬并降低细胞内氧化应激损伤而保护的心肌细胞。 展开更多
关键词 依达拉奉 阿霉素 细胞自噬 LC3B 氧化应激
自噬相关蛋白LC3Av1和LC3B在大鼠牙髓炎中的表达研究 被引量:2
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作者 丁印浩 王倩 +2 位作者 牛卫东 解傲 白桦 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期130-132,138共4页
目的研究自噬相关蛋白LC3Av1和LC3B在大鼠实验性牙髓炎组织中的表达。方法 30只8周龄SD大鼠左侧下颌第一磨牙开髓,封入大肠埃希菌LPS(5μg/μL)棉球,玻璃离子封闭髓腔。分别于开髓后0、6、12、24和48h处死大鼠,分离下颌骨。组织学处理... 目的研究自噬相关蛋白LC3Av1和LC3B在大鼠实验性牙髓炎组织中的表达。方法 30只8周龄SD大鼠左侧下颌第一磨牙开髓,封入大肠埃希菌LPS(5μg/μL)棉球,玻璃离子封闭髓腔。分别于开髓后0、6、12、24和48h处死大鼠,分离下颌骨。组织学处理后,HE染色观察牙髓组织炎症状况,免疫组织化学染色SP法检测LC3Av1和LC3B的表达及分布。结果正常牙髓组织中LC3Av1和LC3B少量表达。实验组中,LC3Av1在12、24和48h时表达量较0、6h时显著增高,差异具有统计学意义(P〈0.01);LC3B在6、12h时表达量较0、24和48h时增高,差异具有统计学意义(P〈0.05);两种蛋白表达分布均集中于成牙本质细胞及多细胞层中的成纤维细胞。结论自噬相关蛋白LC3Av1和LC3B在牙髓组织中的表达随炎症发展增加,提示自噬作用可能与牙髓炎的发生发展相关。 展开更多
关键词 自噬 LC3Av1 LC3B 牙髓炎
两性霉素B脂质体抗烟曲霉的研究 被引量:2
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作者 赵素玲 陈恒 +3 位作者 仝岩 冯倩 李文博 任伟宏 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2017年第5期510-513,520共5页
目的通过对两性霉素B脂质体(L-AmB)的烟曲霉抵抗实验的研究,初步探讨其抗真菌的机制,为临床的合理使用两性霉素B脂质体提供实验指导。方法将烟曲霉菌株复苏后,接种于沙保弱平板,恢复正常毒力。用洗液洗脱烟曲霉的孢子,进行两性霉素B... 目的通过对两性霉素B脂质体(L-AmB)的烟曲霉抵抗实验的研究,初步探讨其抗真菌的机制,为临床的合理使用两性霉素B脂质体提供实验指导。方法将烟曲霉菌株复苏后,接种于沙保弱平板,恢复正常毒力。用洗液洗脱烟曲霉的孢子,进行两性霉素B脂质体及两性霉素B体外抗真菌的研究;用注射器吸取一定量的含烟曲霉孢子的溶液,注入小鼠的肺部,当确证其肺部感染了烟曲霉后,用L-AmB进行治疗,后期通过观察小鼠肺部的病理结果判断疗效并检测鼠肺部细胞在药物治疗后的细胞自噬相关基因LC3B,Beclin-1的水平。结果 L-AmB组的体内外抑菌作用强于AmB组且L-AmB可显著增加鼠肺部细胞的自噬水平。结论两性霉素B脂质体可通过显著的增加细胞的自噬水平,来有效的抵抗烟曲霉的感染。 展开更多
关键词 两性霉素B 两性霉素B脂质体 烟曲霉 自噬 LC3B BECLIN-1
3-甲基腺嘌呤对骨折诱发肺损伤大鼠肺脏损伤程度的影响 预览
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作者 郝刚 杜志伟 +2 位作者 刘耀波 高利杰 杨林 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2017年第1期61-66,共6页
目的在双侧股骨干骨折诱发间接性肺损伤大鼠模型中,观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对肺脏损伤程度的影响。方法构建双侧股骨干骨折诱发间接性肺损伤大鼠模型,通过HE染色法观察各组肺脏组织学变化,双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)... 目的在双侧股骨干骨折诱发间接性肺损伤大鼠模型中,观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对肺脏损伤程度的影响。方法构建双侧股骨干骨折诱发间接性肺损伤大鼠模型,通过HE染色法观察各组肺脏组织学变化,双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肺组织TNF-α、IL-6炎症介质,RT-PCR检测自噬相关基因Beclin1、LC3B的m RNA表达情况,并观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对大鼠肺脏损伤程度的影响。所有检测结果均以均数±标准差(sx?)表示,采用SPSS13.0统计软件进行方差分析和两样本均数比较的t检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果双侧股骨干骨折诱发大鼠肺损伤模型中,3-甲基腺嘌呤干预组较单纯创伤组Beclin1、LC3B的m RNA表达均明显降低(6 h,Beclin1 0.130±0.01 vs.0.221±0.02;LC3B 0.167±0.01 vs.0.274±0.03),差异有统计学意义(P<0.05)。3-甲基腺嘌呤干预组大鼠肺脏局部炎症介质TNF-α、IL-6的表达较单纯创伤组均明显降低[6 h,TNF-α(42.89±1.09)pg/ml vs.(55.60±3.53)pg/ml;IL-6(20.26±0.69)pg/ml vs.(30.64±2.56)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞自噬可能在双侧股骨干骨折诱发大鼠肺损伤的发生发展过程中发挥了重要的促进作用。 展开更多
关键词 急性肺损伤 自噬 3-甲基腺嘌呤 BECLIN1 LC3B
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自噬相关基因BECN1、LC3B、mTOR在宫颈鳞状上皮病变进展中的表达及意义 被引量:2
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作者 张晶 舒丽莎 张林西 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2017年第7期497-501,共5页
目的:检测BECN1、膜型微管相关蛋白1轻链3(LC3B)和雷帕霉素靶蛋白(m TOR)在宫颈鳞状上皮病变中的表达,并探讨其临床意义。方法:免疫组化法及荧光原位杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变和正常宫颈组织中自噬相关基因BECN1、LC3B和m TO... 目的:检测BECN1、膜型微管相关蛋白1轻链3(LC3B)和雷帕霉素靶蛋白(m TOR)在宫颈鳞状上皮病变中的表达,并探讨其临床意义。方法:免疫组化法及荧光原位杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变和正常宫颈组织中自噬相关基因BECN1、LC3B和m TOR的蛋白及m RNA表达情况。结果:宫颈鳞状细胞癌(SCC)组和高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组中BECN1和LC3B的蛋白及m RNA表达均明显低于正常宫颈组,m TOR的蛋白及m RNA表达明显高于正常宫颈组,差异均有统计学意义(P〈0.01)。低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组中,BECN1及LC3B的蛋白表达明显低于正常宫颈组,LC3B m RNA表达明显低于正常宫颈组,m TOR m RNA表达高于正常宫颈组,差异均有统计学意义(P〈0.01)。SCC组中,BECN1蛋白表达与临床分期及淋巴结转移有关,LC3B蛋白表达与肿瘤细胞分化程度相关,m TOR蛋白表达则与淋巴结转移相关。SCC组中,LC3B表达与BECN1呈正相关,与m TOR呈负相关。结论:自噬相关基因与宫颈鳞状上皮病变的严重程度有关,推测BECN1、LC3B和m TOR异常表达可能导致病变恶化。 展开更多
关键词 自噬 BECN1 LC3B MTOR 宫颈鳞状病变
紫贻贝LC3B蛋白的原核表达及抗血清制备 预览
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作者 余振兴 朱倩 姚翠鸾 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期498-505,共8页
LC3B是检测自噬程度的标志性分子,但是在低等动物体内缺少特异性强的LC3B抗体。为研究贝类的自噬性细胞死亡,本研究通过将紫贻贝的LC3B编码序列克隆到pET-32a原核表达载体中构建重组表达载体,进而对IPTG诱导浓度、诱导表达时间进行摸索... LC3B是检测自噬程度的标志性分子,但是在低等动物体内缺少特异性强的LC3B抗体。为研究贝类的自噬性细胞死亡,本研究通过将紫贻贝的LC3B编码序列克隆到pET-32a原核表达载体中构建重组表达载体,进而对IPTG诱导浓度、诱导表达时间进行摸索;采用亲和层析对重组蛋白进行纯化,并采用SDS-PAGE检测及Western blot进行验证;利用获得的重组蛋白免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体。结果显示,在20℃,转速为150 r/min条件下,当IPTG浓度为0.6 mmol/L,诱导表达10 h后,可以得到高表达量、可溶性的重组MgLC3B-His融合蛋白,亲和层析纯化后,获得单一条带的MgLC3B-His可溶性重组蛋白;采用纯化后的MgLC3B-His融合蛋白对新西兰兔进行多次免疫,采集分离兔抗血清并利用protein A纯化,获得紫贻贝的LC3B多克隆抗体,效价为25 600。紫贻贝LC3B多克隆抗体的成功制备,为今后深入开展紫贻贝及相近物种的细胞自噬研究奠定了基础。 展开更多
关键词 紫贻贝 LC3B 重组表达 细胞自噬 多克隆抗体
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