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MiR-873对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及其机制 预览
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作者 周云洁 张会超 孙治霞 《中南大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期857-863,共7页
目的:探讨微小RNA(micro RNA,miR)-873在心肌细胞缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)损伤中的作用及其相关机制。方法:采用体外培养大鼠H9c2心肌细胞构建H/R模型,并转染miR-873模拟物(mimic),实验分为对照组、H/R组、阴性对照组及miR-... 目的:探讨微小RNA(micro RNA,miR)-873在心肌细胞缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)损伤中的作用及其相关机制。方法:采用体外培养大鼠H9c2心肌细胞构建H/R模型,并转染miR-873模拟物(mimic),实验分为对照组、H/R组、阴性对照组及miR-873 mimic组。Real-time PCR检测各组miR-873的表达水平;蛋白质印迹法检测egl-9家庭缺氧诱导因子3(egl-9 family hypoxia inducible factor 3,Egln3)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达水平;ELISA试剂盒以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing,aspartate-specific proteases-3,caspase-3)活性检测试剂盒分别用来检测细胞凋亡和caspase-3活性;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-873对Egln3的作用靶点,并将实验分为阴性对照组、携带野生型(wild type,WT)报告基因的Egln3 3'-非编码区(3'-untranslated regions,3'-UTR)组(WT组)和携带突变型(mutant type,MUT)报告基因的Egln3 3'-UTR组(MUT组)。为进一步检测Egln3对miR-873 mimic作用的影响,实验构建了Egln3过表达细胞,并将其分为H/R组、H/R+miR-873 mimic组、H/R+pcDNA3-Egln3(pcEgln3)组和H/R+miR-873 mimic+pcEgln3组。结果:与对照组相比,H/R组中miR-873表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,miR-873 mimic组中H9c2心肌细胞凋亡和caspase-3活性下降,Bax/Bcl-2比值下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);荧光素酶活性检测结果表明:与阴性对照组相比,WT组荧光素酶活性显著下调,差异有统计学意义(P<0.05),而MUT组荧光素酶活性无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。过表达实验结果表明:与H/R组相比,miR-873 mimic组细胞凋亡和Bax/Bcl-2比值均显著下降(均P<0.05);与miR-873 mimic组相比较,H/R+pcEgln3组和H/R+miR-873 mimic+pcEgln3组细胞凋亡和Bax/Bcl-2比值显著上调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:MiR-873通过靶向作用于Egln3而抑制H/R心肌细胞 展开更多
关键词 微小RNA-873 心肌细胞 缺氧/复氧 凋亡 egl-9家庭缺氧诱导因子3
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Shexiang Tongxin Dropping Pill(麝香通心滴丸)Protects against Na2S2O4-Induced Hypoxia-Reoxygenation Injury in H9c2 Cells
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作者 LIN Shan LIN Jiu-mao +7 位作者 ZHANG Ling CHEN Da-xin XIAO Fei CHEN Hong-wei CHEN You-qin ZHU Yu-ling CHU Jian-feng PENG Jun 《中国结合医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期439-445,共7页
Objectives: To investigate the protective effects of Shexiang Tongxin Dropping Pill(麝香通心滴丸,STP) on Na2S2O4-induced hypoxia-reoxygenation injury in cardiomyoblast H9c2 cells. Methods: The cell viability and level... Objectives: To investigate the protective effects of Shexiang Tongxin Dropping Pill(麝香通心滴丸,STP) on Na2S2O4-induced hypoxia-reoxygenation injury in cardiomyoblast H9c2 cells. Methods: The cell viability and levels of mRNA and protein expression in H9c2 cells were determined following Na2S2O4-induced hypoxia using Hoechst staining, annexin V/propidium iodide(PI) flow cytometry, real-time polymerase chain reaction and Western blot analysis. Results: STP pretreatment signi?cantly increased the viability and inhibited aberrant morphological changes in H9c2 cardiomyoblast cells induced by Na2S2O4 treatment(P<0.05). In addition, STP pretreatment attenuated Na2S2O4-induced hypoxic damage, down-regulated the expression of pro-apoptotic Bax,and up-regulated the expression of anti-apoptotic Bcl-2 in H9c2 cells(P<0.05). Conclusions: STP was strongly cardioprotective in hypoxia-reoxygenation injury by preventing hypoxic damage and inhibiting cellular apoptosis.These results further support the use of STP as an effective drug for the treatment of ischemic heart disease. 展开更多
关键词 myocardial ISCHEMIA apoptosis Shexiang Tongxin DROPPING PILL Chinese medicine Na2S2O4-induced HYPOXIA-REOXYGENATION injury
HO-1介导黄芪甲苷抗原代心肌细胞缺氧/复氧损伤作用研究 预览
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作者 杨萍 周玉平 +4 位作者 夏晴 姚立鹏 李高文 常秀春 王凤 《天津中医药》 CAS 2019年第1期79-82,共4页
[目的]研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及机制。[方法]培养乳鼠原代心肌细胞,以缺氧4h,复氧4h建立心肌H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力。检测细胞培养液中心肌肌钙蛋白(cTnT)、乳酸... [目的]研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及机制。[方法]培养乳鼠原代心肌细胞,以缺氧4h,复氧4h建立心肌H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力。检测细胞培养液中心肌肌钙蛋白(cTnT)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,炎症细胞因子超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。分别以聚合酶链式反应逆转录(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌细胞血红素氧化酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达水平。[结果]与H/R组比较,AS-Ⅳ、HO-1激动剂原卟啉氯化钴(CoPP)均可显著降低细胞上清中cTnT、LDH含量(P<0.01),降低炎症因子hs-CRP、TNF-α水平(P<0.01),而HO-1拮抗剂原卟啉Ⅸ锌(Ⅱ)络合物(ZnPP)作用趋势则相反。与H/R组比较,CoPP组及AS-Ⅳ组HO-1mRNA、蛋白表达水平显著升高(P<0.01),ZnPP组则显著下降(P<0.01)。[结论]AS-Ⅳ对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有显著的保护作用,其机制与诱导具有保护作用的HO-1表达有关。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 血红素氧化酶1 心肌细胞 缺氧/复氧 CoPP ZNPP
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人参皂甙对缺氧复氧致肾小管上皮细胞损伤保护作用的蛋白质组学分析 预览
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作者 张春燕 肖斌 +2 位作者 邵军 陶忠桦 甘淋 《西南医科大学学报》 2019年第3期207-210,共4页
目的:从蛋白质水平探讨人参皂甙(ginsenosides,GS)对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,HR)损伤的保护作用及其作用机制。方法:以人肾小管上皮细胞株HK-2为研究对象,建立细胞HR模型,分为对照组、HR组、HR+GS组。倒... 目的:从蛋白质水平探讨人参皂甙(ginsenosides,GS)对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,HR)损伤的保护作用及其作用机制。方法:以人肾小管上皮细胞株HK-2为研究对象,建立细胞HR模型,分为对照组、HR组、HR+GS组。倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳药物浓度,蛋白质组学技术鉴定差异表达蛋白。结果:HR组的细胞平均吸光度(A)值较对照组明显减少,细胞存活率明显下降(P<0.05)。浓度为2.0μg/mL的GS可显著提高HR损伤后的HK-2细胞存活率(P<0.01)。蛋白质组学技术鉴定出HR组与HR+GS组共3个差异表达蛋白点,包括凋亡相关蛋白、应激反应蛋白、细胞骨架蛋白等。结论:HR+GS组的蛋白质表达谱发生了改变,这些改变的蛋白质可能与GS对HR致HK-2损伤的保护作用有关。 展开更多
关键词 人参皂甙 人肾小管上皮细胞 缺氧复氧 抗氧化 凋亡
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NLRP3介导的细胞焦亡在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
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作者 岳荣川 卢圣忠 +7 位作者 罗瑜 曾静 梁豪 王小波 秦丹 杨小利 胡厚祥 曾春雨 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期471-478,共8页
目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)介导的细胞焦亡在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法为明确缺氧/复氧是否会引起细胞焦亡,采用抓阄法将H9c2心肌细胞随机分为2组:对照组(细胞不予缺氧/复氧处理)和缺氧/复氧组(细胞... 目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)介导的细胞焦亡在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法为明确缺氧/复氧是否会引起细胞焦亡,采用抓阄法将H9c2心肌细胞随机分为2组:对照组(细胞不予缺氧/复氧处理)和缺氧/复氧组(细胞进行缺氧/复氧处理);为了明确焦亡在缺氧/复氧损伤中的作用,采用抓阄法将细胞随机分为4组:对照组(细胞正常培养)、YVAD组[用含有20 μm Z-缬氨酸-丙氨酸-消旋天冬氨酸(甲酯)-氟甲基酮(Z-YVAD-FMK)的培养基预处理4 h后,换普通培养基正常培养]、缺氧/复氧组(细胞进行缺氧/复氧处理)和YVAD+缺氧/复氧组(用含有20 μm Z-YVAD-FMK的培养基处理4 h后,再进行缺氧/复氧处理);为明确缺氧/复氧诱导的细胞焦亡是否与NLRP3有关,采用抓阄法将细胞随机分为4组:对照组[培养基中加入非特异性小干扰RNA(si-RNA)]、si-NLRP3组(培养基中加入NLRP3的si-RNA)、缺氧/复氧组(对培养基中加入非特异性si-RNA的细胞进行缺氧/复氧处理)和si-NLRP3+缺氧/复氧组(对培养基中加入NLRP3 si-RNA的细胞进行缺氧/复氧处理)。采用碘化丙啶(PI)染色检测细胞膜上的孔隙形成,采用CCK8法检测细胞活力,采用Western blot检测NLRP3、焦亡相关蛋白Caspase-1和白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达水平。结果(1)缺氧/复氧组PI染色阳性率[(26.46±5.15)%比(1.69±0.73)%]、NLRP3(0.57±0.16比0.23±0.06)、Caspase-1(1.07±0.13比0.37±0.08)和IL-1β(0.38±0.08比0.16±0.05)蛋白表达水平均高于对照组(P均<0.01)。(2)YVAD+缺氧/复氧组细胞活力高于缺氧/复氧组[(87.31±9.05)%比(73.30±7.19)%,P<0.05],PI染色阳性细胞率低于缺氧/复氧组[(18.12±4.36)%比(26.45±4.60)%,P<0.05],Caspase-1(0.72±0.12比1.07±0.15,P<0.05)和IL-1β(0.29±0.07比0.39±0.06,P<0.05)蛋白表达水平均低于缺氧/复氧组。(3)si-NLRP3+缺氧/复氧组细胞活力高于缺氧/复氧组[(85.46±7.71)%比(72.41±5.53)%,P<0.05],PI染色� 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 缺氧/复氧 焦亡
Salvianolic Acid A Protects Neonatal Cardiomyocytes against Hypoxia/Reoxygenation-Induced Injury by Preserving Mitochondrial Function and Activating Akt/GSK-3β Signals
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作者 LI Xue-li FAN Ji-ping +1 位作者 LIU Jian-xun LIANG Li-na 《中国结合医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期23-30,共8页
Objective: To investigate the effects of salvianolic acid A(SAA) on cardiomyocyte apoptosis and mitochondrial dysfunction in response to hypoxia/reoxygenation(H/R) injury and to determine whether the Akt signaling pat... Objective: To investigate the effects of salvianolic acid A(SAA) on cardiomyocyte apoptosis and mitochondrial dysfunction in response to hypoxia/reoxygenation(H/R) injury and to determine whether the Akt signaling pathway might play a role. Methods: An in vitro model of H/R injury was used to study outcomes on primary cultured neonatal rat cardiomyocytes. The cardiomyocytes were treated with 12.5, 25, 50 μg/m L SAA at the beginning of hypoxia and reoxygenation, respectively. Adenosine triphospate(ATP) and reactive oxygen species(ROS) levels were assayed. Cell apoptosis was evaluated by flow cytometry and the expression of cleavedcaspase 3, Bax and Bcl-2 were detected by Western blotting. The effects of SAA on mitochondrial dysfunction were examined by determining the mitochondrial membrane potential(△Ψm) and mitochondrial permeability transition pore(m PTP), followed by the phosphorylation of Akt(p-Akt) and GSK-3β(p-GSK-3β), which were measured by Western blotting. Results: SAA significantly preserved ATP levels and reduced ROS production. Importantly, SAA markedly reduced the number of apoptotic cel s and decreased cleaved-caspase 3 expression levels, while also reducing the ratio of Bax/Bcl-2. Furthermore, SAA prevented the loss of △Ψm and inhibited the activation of m PTP. Western blotting experiments further revealed that SAA significantly increased the expression of p-Akt and p-GSK-3β, and the increase in p-GSK-3β expression was attenuated after inhibition of the Akt signaling pathway with LY294002. Conclusion: SAA has a protective effect on cardiomyocyte H/R injury; the underlying mechanism may be related to the preservation of mitochondrial function and the activation of the Akt/GSK-3β signaling pathway. 展开更多
关键词 salvianolic acid A CARDIOMYOCYTE HYPOXIA/REOXYGENATION INJURY mitochondria Akt/GSK-3β
当归多糖对缺氧-复氧损害导致的H9c2心肌细胞能量代谢障碍的保护作用 预览
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作者 霍礼超 李梦丽 乔成栋 《河北医学》 CAS 2019年第3期568-572,共5页
目的:探索当归多糖(ASP)对缺氧-复氧损害导致的H9c2心肌细胞能量代谢障碍的保护作用。方法:MTT检测ASP对H9c2细胞增殖的影响;在体外建造ASP干预和非干预下的缺氧-复氧模型;观察细胞形态;流式检测细胞凋亡;线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒... 目的:探索当归多糖(ASP)对缺氧-复氧损害导致的H9c2心肌细胞能量代谢障碍的保护作用。方法:MTT检测ASP对H9c2细胞增殖的影响;在体外建造ASP干预和非干预下的缺氧-复氧模型;观察细胞形态;流式检测细胞凋亡;线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位变化;试剂盒检测心肌细胞培养上清液中LDH和心肌细胞中Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶以及线粒体呼吸酶链复合物Ⅰ、Ⅳ活性。结果:ASP浓度-时间依赖地抑制H9c2细胞增殖;缺氧-复氧诱导H9c2细胞凋亡、MMP减小,同时造成H9c2细胞上清中LDH上升,细胞中Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶以及线粒体呼吸酶链复合物Ⅰ、Ⅳ活性降低;ASP可浓度依赖的抑制细胞凋亡,提高MMP,降低上清中LDH,增加Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶以及线粒体呼吸酶链复合物Ⅰ、Ⅳ活性。结论:ASP可通过改善缺氧-复氧造成的心肌细胞能量代谢障碍,保护心肌细胞免受缺氧-复氧的损伤。 展开更多
关键词 当归多糖 缺血再灌注损伤 能量代谢障碍 缺氧-复氧
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mTOR/p70S6K通路在缺氧/复氧诱导的分化后PC12神经细胞凋亡中的作用
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作者 周高雅 柴志勇 胡治平 《中南药学》 CAS 2019年第7期1024-1029,共6页
目的探讨缺氧/复氧(H/R)诱导的分化后肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)通路的关系。方法实验分为正常对照(Con)组、H/R组、H/R+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、H/R+雷帕霉素(Rapa)组、... 目的探讨缺氧/复氧(H/R)诱导的分化后肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)通路的关系。方法实验分为正常对照(Con)组、H/R组、H/R+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、H/R+雷帕霉素(Rapa)组、NAC组及Rapa组。应用MTT法检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,用活性氧试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)生成,Western blot检测Bax、Bcl-2、p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)的表达。结果H/R诱导分化后PC12神经细胞凋亡,Bax表达增加,Bcl-2表达降低,NAC或Rapa显著抑制H/R所致的细胞凋亡,逆转Bax及Bcl-2表达的变化;H/R增加分化后PC12神经细胞内ROS水平,NAC显著抑制H/R所致细胞内ROS水平的增加,而Rapa对细胞内ROS水平无明显影响;H/R增加分化后PC12神经细胞p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)的表达,NAC或Rapa显著抑制H/R所致细胞p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)表达的增加。结论H/R可能通过升高细胞内ROS水平,进而激活mTOR/p70S6K信号通路,诱导分化后PC12神经细胞凋亡。 展开更多
关键词 缺氧/复氧 PC12细胞 mTOR/p70S6K通路 N-乙酰半胱氨酸 雷帕霉素
心肌细胞缺氧/复氧模型的构建及研究进展 预览
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作者 熊伟 钱金桥 《医学综述》 2019年第18期3578-3583,共6页
心肌细胞缺氧/复氧模型是模拟心肌缺血再灌注损伤及相关疾病的经典细胞模型,具有操作便捷、直观形象、稳定性好等优势,可准确反映疾病细胞水平的病理改变,广泛应用于药物与疾病的分子机制研究。缺氧/复氧是导致多种心血管疾病的主要机... 心肌细胞缺氧/复氧模型是模拟心肌缺血再灌注损伤及相关疾病的经典细胞模型,具有操作便捷、直观形象、稳定性好等优势,可准确反映疾病细胞水平的病理改变,广泛应用于药物与疾病的分子机制研究。缺氧/复氧是导致多种心血管疾病的主要机制之一,构建理想的心肌细胞缺氧/复氧模型是深入研究心血管疾病机制的基础,目前该模型的构建方法较多,主要包括物理法(混合气体培养法、厌氧袋/罐法、液体石蜡封闭法)、化学法(氧耗法、超氧法、酶抑法和缺氧液法)和联合法等,其中混合气体培养法和氧耗法最常用。 展开更多
关键词 心肌细胞 缺氧/复氧 细胞模型
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胡椒碱对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及机制研究 预览
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作者 宋思维 唐艳红 《岭南心血管病杂志》 2019年第1期106-111,共6页
目的探讨胡椒碱(piperine,PIP)对缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞的保护作用及对磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路影响。方法分离培养原代心肌细胞,随机分为3组(n=... 目的探讨胡椒碱(piperine,PIP)对缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞的保护作用及对磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路影响。方法分离培养原代心肌细胞,随机分为3组(n=3):对照组、H/R组、H/R+PIP处理组。4 h缺氧联合6 h复氧构建H/R损伤模型,在机制探讨中给予PI3K/AKT抑制剂(LY294002)干预。以心肌细胞存活率与心肌损伤酶浓度评估细胞损伤程度;促炎症标志物(IL-6/TNF-α)检测评估炎症反应;超氧化物歧化酶(SOD)/丙二醛(MDA)浓度检测氧化应激反应;流式细胞术评估细胞凋亡;Western blotting检测相关蛋白表达。结果(1)与H/R组相比,H/R+PIP处理组心肌细胞活性增加而乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶浓度降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。(2)与H/R组相比,H/R+PIP处理组能够显著抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡、炎症与活性氧反应,表现为凋亡率、促炎症介质、丙二醛浓度降低而超氧化物歧化酶酶活性升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。(3)在机制探讨中我们观察到,PIP能够上调PI3K/AKT磷酸化水平,而抑制PI3K/AKT通路后PIP的心肌细胞保护功能被逆转(均P<0.05)。结论PIP主要通过PI3K/AKT依赖性途径改善心肌细胞H/R损伤。 展开更多
关键词 胡椒碱 缺氧复氧 炎症 凋亡 活性氧 磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶B
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p38MAPK信号通路介导右美托咪定对缺氧/复氧心肌细胞损伤的保护作用 预览
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作者 赵彦芬 赵峰 刘鹏森 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第14期3528-3532,共5页
目的探讨右美托咪定(Dex)是否通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路发挥对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的保护作用。方法培养大鼠心肌细胞H9c2,随机分为空白对照组、H/R组、Dex预处理(Dex+H/R)组、抑制剂SB203580(H/R+SB)组和Dex预处... 目的探讨右美托咪定(Dex)是否通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路发挥对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的保护作用。方法培养大鼠心肌细胞H9c2,随机分为空白对照组、H/R组、Dex预处理(Dex+H/R)组、抑制剂SB203580(H/R+SB)组和Dex预处理+SB203580(Dex+H/R+SB)组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)含量,分光光度计检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western印迹检测细胞中磷酸化(p)-p38MAPK、细胞色素(Cyt)C和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3蛋白水平。结果与H/R组比,Dex预处理可提高H9c2细胞活力,降低细胞凋亡率,下调LDH和CK的漏出量,减少MDA含量,上调SOD和GSH-Px活性,抑制p-p38MAPK、CytC和酶切Caspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。p38MAPK信号通路抑制剂SB203580可明显增强Dex对H/R心肌细胞损伤的保护作用。结论Dex可能通过p38MAPK信号通路抑制细胞中的氧化应激,下调CytC和酶切Caspase-3蛋白的表达,抑制H9c2细胞凋亡对H/R心肌细胞损伤的保护作用。 展开更多
关键词 右美托咪定 p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路 缺氧/复氧 心肌细胞 氧化应激
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七氟醚预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧后转录沉默信息调节器3的表达及乙酰化水平的影响
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作者 熊超 刘力 +1 位作者 冯建国 魏继承 《山东大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2019年第3期25-30,共6页
目的探究七氟醚预处理对大鼠H9C2心肌细胞缺氧/复氧后,对转录沉默信息调节器3(SIRT3)的表达及细胞蛋白乙酰化的影响。方法将大鼠H9C2心肌细胞随机分为对照组、缺氧/复氧组和七氟醚预处理组。低氧培养箱构建缺氧/复氧模型:对照组心肌细... 目的探究七氟醚预处理对大鼠H9C2心肌细胞缺氧/复氧后,对转录沉默信息调节器3(SIRT3)的表达及细胞蛋白乙酰化的影响。方法将大鼠H9C2心肌细胞随机分为对照组、缺氧/复氧组和七氟醚预处理组。低氧培养箱构建缺氧/复氧模型:对照组心肌细胞无任何处理;缺氧/复氧组心肌细胞缺氧2 h/复氧2 h;七氟醚预处理组心肌细胞在缺氧/复氧前予以2.5%七氟醚预处理1 h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组细胞存活率;采用JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;采用Western blotting法检测细胞整体蛋白及线粒体蛋白乙酰化水平、SIRT3表达及线粒体自噬水平的变化。结果缺氧/复氧组较对照组心肌细胞SIRT3(0.78±0.04 vs 1.04±0.06)表达减少,细胞整体蛋白(1.72±0.06 vs 0.98±0.03)及线粒体蛋白(0.96±0.03 vs 0.45±0.03)乙酰化水平升高(P<0.05);同时心肌细胞存活率[(48.2±0.4)%vs 100%]、线粒体膜电位(1.72±0.14 vs 2.83±0.11)下降,线粒体自噬水平升高(P<0.05);与缺氧/复氧组相比,七氟醚预处理组心肌细胞SIRT3表达增加(0.93±0.03 vs 0.78±0.04),细胞整体蛋白(1.34±0.05 vs 1.72±0.06)及线粒体蛋白(0.65±0.04 vs 0.96±0.03)乙酰化水平降低(P<0.05);同时心肌细胞存活率[(65.80±1.53)%vs(48.20±0.40)%]及线粒体膜电位(2.33±0.12 vs 1.72±0.14)升高,线粒体自噬激活水平降低(P<0.05)。结论七氟醚预处理可以增加SIRT3表达,降低心肌细胞缺氧/复氧损伤后蛋白的乙酰化水平,可能是七氟醚预处理对心肌细胞保护作用的潜在分子机制。 展开更多
关键词 七氟醚预处理 乙酰化 转录沉默信息调节器3 线粒体自噬 缺氧/复氧
缺氧-复氧对H9c2心肌细胞自噬和线粒体缝隙连接蛋白43的影响及其相互作用
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作者 李兆康 卢青 丁世芳 《上海医学》 CAS 北大核心 2019年第7期391-396,共6页
目的探究心肌细胞系H9c2在缺氧-复氧(H/R)后自噬与线粒体缝隙连接蛋白43(Cx43)的变化,以及两者间的相互关系。方法通过缺氧处理12 h、复氧处理12 h建立H9c2细胞H/R模型。将H9c2细胞随机分为5组:对照组、H/R组、格尔德霉素(GA)组、3-甲... 目的探究心肌细胞系H9c2在缺氧-复氧(H/R)后自噬与线粒体缝隙连接蛋白43(Cx43)的变化,以及两者间的相互关系。方法通过缺氧处理12 h、复氧处理12 h建立H9c2细胞H/R模型。将H9c2细胞随机分为5组:对照组、H/R组、格尔德霉素(GA)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、GA+3-MA组。应用线粒体膜电位检测试剂盒检测各组线粒体膜电位,细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测各组细胞活力,采用Western印迹法检测各组Beclin-1、LC3B、线粒体Cx43和磷酸化Cx43(p-Cx43)的蛋白质水平;应用电子显微镜观察各组自噬体情况。结果 H/R组的细胞活力显著低于对照组(P<0.01),乳酸脱氢酶(LDH)水平显著高于对照组(P<0.01),H-R模型建立成功。H/R组的线粒体膜电位、细胞活力均显著低于对照组(P值均<0.05);GA组、3-MA组和GA+3-MA组的线粒体膜电位、细胞活力为均显著低于H/R组(P值均<0.05);GA+3-MA组线粒体膜电位、细胞活力均分别显著低于GA组和3-MA组(P值均<0.05)。H/R组自噬相关蛋白质Beclin-1水平和LC3BⅡ/LC3BⅠ分别为0.89±0.05和4.37±0.50,均显著高于对照组的0.26±0.03和0.77±0.09(P值均<0.05);与H/R组相比,GA组、3-MA组和GA+3-MA组的Beclin-1水平(0.75±0.06、0.47±0.03、0.31±0.02)、LC3BⅡ/LC3BⅠ(3.29±0.18、1.37±0.09、0.85±0.14)均显著降低(P值均<0.05);GA+3-MA组的Beclin-1水平、LC3BⅡ/LC3BⅠ又显著低于GA组和3-MA组(P值均<0.05)。H/R组线粒体Cx43和p-Cx43蛋白质水平分别为0.75±0.03和0.41±0.03,均显著低于对照组的0.86±0.02和0.58±0.01(P值均<0.05);GA组、3-MA组和GA+3-MA组的线粒体p-Cx43蛋白质水平分别为0.27±0.06、0.33±0.05、0.18±0.04,均显著低于H/R组(P值均<0.05);GA组和GA+3-MA组的线粒体Cx43蛋白质水平(0.62±0.09、0.59±0.07)均显著低于H/R组(P值均<0.05);GA+3-MA组的线粒体p-Cx43蛋白质水平显著低于GA组和3-MA组(P值均<0.05)。结论 H/R引起的线粒体Cx43含量下降和脱磷酸化增加可能是缺血-再灌注损� 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 自噬 缺氧-复氧 线粒体Cx43
心肌线粒体复合体在高脂模型小鼠心脏缺氧-复氧中的作用
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作者 朱师超 邵永丰 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期880-883,共4页
目的:研究高脂模型小鼠心肌线粒体复合体功能变化,并探讨其在心肌缺氧/复氧(模拟缺血再灌注)中的作用。方法:将12只雄性2周龄C57B6小鼠随机分为高脂饮食组和对照组,进行20周高脂饮食和正常饮食喂养,并记录体重。实验结束后,提取心脏线粒... 目的:研究高脂模型小鼠心肌线粒体复合体功能变化,并探讨其在心肌缺氧/复氧(模拟缺血再灌注)中的作用。方法:将12只雄性2周龄C57B6小鼠随机分为高脂饮食组和对照组,进行20周高脂饮食和正常饮食喂养,并记录体重。实验结束后,提取心脏线粒体,将其在密闭空间内耗尽氧气后,维持缺氧状态30 min再通入氧气以模拟心脏缺血再灌注过程。通过氧气浓度检测探针测量并记录线粒体的耗氧率(oxygen consumption rate,OCR),荧光比色法检测线粒体复合体活性,荧光分光光度计测量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生速率。结果:高脂饮食组心肌线粒体的OCR明显高于对照组(P <0.05),同时线粒体复合体Ⅱ的活性在高脂饮食组中明显升高(P <0.05)。OCR在两组中均升高,尤其是在高脂饮食组,且这种升高可以被复合体Ⅱ抑制剂Malonate抑制。比较线粒体ROS的产生速率也发现相同倾向。结论:线粒体复合体Ⅱ的活性在高脂模型小鼠中有较大变化,且这种变化可能是心肌缺氧/复氧(模拟缺血再灌注)损伤加剧的机制。 展开更多
关键词 缺氧/复氧 线粒体 复合体Ⅱ 缺血再灌注 活性氧
Wnt5a对缺氧复氧导致的心肌细胞氧化损伤的影响 预览
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作者 赵丽华 尹宏磊 +3 位作者 吕风华 张素荣 郭长磊 张培勇 《中国循证心血管医学杂志》 2019年第4期465-468,473共5页
目的探讨Wnt5a对缺氧复氧导致的心肌细胞氧化损伤的影响。方法以心肌细胞HCM为研究对象,分为:正常组、模型组、siRNA control组、Wnt5a siRNA组。其中正常组细胞正常培养,模型组、siRNA control组、Wnt5a siRNA组细胞按照缺氧复氧处理,s... 目的探讨Wnt5a对缺氧复氧导致的心肌细胞氧化损伤的影响。方法以心肌细胞HCM为研究对象,分为:正常组、模型组、siRNA control组、Wnt5a siRNA组。其中正常组细胞正常培养,模型组、siRNA control组、Wnt5a siRNA组细胞按照缺氧复氧处理,siRNA control组、Wnt5a siRNA组细胞分别用转染Wnt5a siRNA和siRNA control后的HCM细胞。Western blot和RT-PCR检测Wnt5a mRNA和蛋白水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果模型组心肌细胞中Wnt5a mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、MDA水平、LDH水平均明显高于正常组(P<0.05),而细胞存活率、SOD水平均明显低于正常组(P<0.05)。siRNA control组细胞中Wnt5a mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、MDA水平、LDH水平、SOD水平及细胞存活率与模型组相比没有明显差异。Wnt5a siRNA组Wnt5amRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、MDA水平、LDH水平均明显低于模型组(P<0.05),而细胞存活率、SOD水平均明显高于模型组(P<0.05)。结论Wnt5a在缺氧复氧心肌细胞中表达升高,干扰Wnt5a表达能够降低缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤,减少细胞凋亡。 展开更多
关键词 心肌细胞 缺氧复氧 氧化损伤 WNT5A
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氯喹预处理在高糖环境下对HK-2细胞缺氧复氧损伤中的保护作用及机制
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作者 何宇红 黄亚医 +3 位作者 肖业达 赵博 汪华新 詹丽英 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期213-217,共5页
目的探讨氯喹预处理在高糖环境下对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧损伤中的保护作用及机制。方法随机将HK-2细胞分为3组(n=6):高糖组(HG组);高糖缺氧复氧组(HH/R组);高糖缺氧复氧+氯喹预处理组(HH/R-CQ组)。采用高糖刺激72 h建立高糖模... 目的探讨氯喹预处理在高糖环境下对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧损伤中的保护作用及机制。方法随机将HK-2细胞分为3组(n=6):高糖组(HG组);高糖缺氧复氧组(HH/R组);高糖缺氧复氧+氯喹预处理组(HH/R-CQ组)。采用高糖刺激72 h建立高糖模型,预处理组给予50 μmol氯喹与高糖同时作用72 h预处理,缺氧4 h复氧2 h建立缺氧复氧模型。采用细胞增殖与毒性(CCK-8)和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞活性,酶联免疫吸附试验法检测细胞内白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光和Western blot法检测肾脏细胞TLR7、MyD88和NF-κB蛋白的表达。采用t检验进行统计学分析。结果与HG组相比,HH/R组CCK-8活性下降,LDH、IL-6、TNF-α、细胞凋亡率、TLR7(0.635±0.034比0.857±0.052,t=4.77,P<0.05)、MyD88(0.607±0.029比0.828±0.040,t=5.36,P<0.05)及NF-κB(0.618±0.035比0.854±0.024,t=5.62,P<0.05)表达增多;与HH/R组相比,HH/R-CQ组CCK-8活性上升,LDH、IL-6、TNF-α、细胞凋亡率、TLR7(0.857±0.052比0.642±0.024,t=4.61,P<0.05)、MyD88(0.828±0.040比0.638±0.050,t=4.60,P<0.05)及NF-κB(0.854±0.024比0.605±0.035,t=5.94,P<0.05)表达减少。结论氯喹通过抑制TLR7/MyD88信号通路,降低炎症反应,减少细胞凋亡从而减轻缺氧复氧损伤。 展开更多
关键词 氯喹 HK-2细胞 高糖 缺氧复氧
缺氧复氧致心肌AC16细胞损伤途径的研究 预览
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作者 戴文芝 叶文峰 +4 位作者 何原 陈灿 黄石安 雷桅 郭军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1232-1235,共4页
目的:探讨缺氧复氧条件下不同复氧时间致心肌细胞损伤的途径。方法:培养人心肌AC16细胞,先置入1%O2、无糖无血清条件下培养24 h,再更换含10%胎牛血清的低糖DMEM联合21%O2进行不同时间的复氧培养,采用CCK-8法检测细胞活力,并通过Western ... 目的:探讨缺氧复氧条件下不同复氧时间致心肌细胞损伤的途径。方法:培养人心肌AC16细胞,先置入1%O2、无糖无血清条件下培养24 h,再更换含10%胎牛血清的低糖DMEM联合21%O2进行不同时间的复氧培养,采用CCK-8法检测细胞活力,并通过Western blot法检测不同细胞损伤途径标记分子的蛋白水平,如细胞自噬相关蛋白LC3-II/-I、细胞焦亡相关蛋白caspase-1和gasdermin D及凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl2。结果:与空白对照组相比,各缺氧复氧组细胞活力降低,且随复氧时间延长,细胞活力相应持续降低(P<0.05),同时缺氧组LC3-II/-I上调(P<0.05),而复氧后LC3-II/-I较缺氧组下降,但仍高于对照组;此外,cleaved caspase-1和cleaved gasdermin D蛋白在复氧6 h组和复氧12 h组表达水平上调(P<0.05);cleaved caspase-3水平和Bax/Bcl2在复氧12 h组上调(P<0.05)。结论:缺氧致心肌AC16细胞的自噬上调,并随复氧时间增加自噬水平减弱,且在复氧过程中细胞焦亡的激活早于细胞凋亡。 展开更多
关键词 缺氧复氧 心肌细胞 细胞自噬 细胞焦亡 细胞凋亡
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五味子乙素通过抑制内质网应激调控乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤作用观察
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作者 李玉慈 王玲 +1 位作者 罗丹 周龙友 《北京中医药》 2019年第6期550-554,共5页
目的研究五味子乙素对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其对内质网应激的抑制作用。方法体外培养乳鼠心肌细胞,于缺氧3 h复氧3 h构建缺氧/复氧(H/R)损伤模型,于缺氧前1 h加入低(10 mg/L)、中(100 mg/L)、高(200 mg/L)浓度五... 目的研究五味子乙素对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其对内质网应激的抑制作用。方法体外培养乳鼠心肌细胞,于缺氧3 h复氧3 h构建缺氧/复氧(H/R)损伤模型,于缺氧前1 h加入低(10 mg/L)、中(100 mg/L)、高(200 mg/L)浓度五味子乙素及1μM SIRT1抑制剂(Ex-527)对细胞进行干预,然后对心肌细胞的相对存活率进行检测,对细胞匀浆中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量进行测定,并采用Western Blot方法对GRP78、CHOP、Cleaved caspase12、SIRT1及PGC-1α蛋白表达进行检测。结果与正常对照组相比,H/R组细胞相对存活率显著降低(P<0.05),细胞匀浆中LDH及MDA含量升高(P<0.05),而SOD活力则降低(P<0.05),并且GRP78、CHOP、Cleaved caspase12水平显著升高(P<0.05),SIRT1及PGC-1α蛋白表达水平降低(P<0.05);与H/R组比较,细胞经过不同浓度五味子乙素干预后,细胞相对存活率升高(P<0.05),细胞上清中LDH及MDA含量显著降低(P<0.05),SOD活力则显著升高(P<0.05),并且GRP78、CHOP、Cleaved caspase12水平降低(P<0.05),SIRT1及PGC-1α蛋白表达水平明显升高(P<0.05);然而,SIRT1抑制剂组细胞相关指标的变化则与五味子乙素干预组相反。结论五味子乙素对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制内质网应激有关。 展开更多
关键词 五味子乙素 内质网应激 缺氧/复氧 心肌细胞
NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用 预览
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作者 肖业达 黄亚医 +3 位作者 黄婷 汪华新 赵博 王雅枫 《医学研究杂志》 2019年第3期49-53,共5页
目的探讨Nod样受体蛋3炎性体(nod-like receptor protein-3,NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)/白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)信号通路介导的高糖缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular cells,HK-2)的损伤。... 目的探讨Nod样受体蛋3炎性体(nod-like receptor protein-3,NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)/白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)信号通路介导的高糖缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular cells,HK-2)的损伤。方法采用数字表法将人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为5组(n=5),即低糖组(NG组)、低糖缺氧复氧组(NHR组)、高糖组(HG组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)和高糖缺氧复氧+NLRP3抑制剂BAY11-7082(5μmol/L)组(HHR-BAY组)。采用高糖(30mmol/L)刺激72h建立高糖模型,缺氧4h复氧2h建立缺氧复氧模型。CCK-8检测细胞存活率;酶标仪测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)含量;ELISA法检测IL-1β含量和caspase-1活性;免疫印迹法和免疫荧光法检测细胞NLRP3蛋白的表达。结果与NG组比较,NHR组与HG组ROS和IL-1β含量,caspase-1活性,NLRP3表达升高,细胞存活率,SOD活性降低(P均<0.05);分别与HG组和NHR组比较,HHR组ROS和IL-1β含量,caspase-1活性,NLRP3表达升高,细胞存活率,SOD活性降低(P均<0.05);而NLRP3抑制剂BAY11-7082预处理可显著抑制细胞损伤和氧化应激水平,下调NLRP3蛋白水平,caspase-1活性和IL-1β含量(P均<0.05)。结论NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路参与了高糖缺氧复氧诱导的HK-2细胞损伤过程。 展开更多
关键词 NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路 高糖 缺氧复氧 人肾小管上皮细胞
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柚皮苷预处理通过抑制内质网应激凋亡途径减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤 预览
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作者 刘丹 潘连红 +3 位作者 金良友 雷登徐 易均 张永慧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期214-218,共5页
目的研究柚皮苷(naringin,Nar)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中内质网应激凋亡途径的影响及其分子作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,并随机分为5组:正常对照组(C)、缺氧/复氧组(H/R)、Nar低剂量组(L)、中... 目的研究柚皮苷(naringin,Nar)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中内质网应激凋亡途径的影响及其分子作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,并随机分为5组:正常对照组(C)、缺氧/复氧组(H/R)、Nar低剂量组(L)、中剂量组(M)和高剂量组(H)。C组心肌细胞正常培养至实验结束,H/R组行缺氧4h后复氧24h,H/R+Nar低、中、高剂量组分别于缺氧前6h给予10、20、40mg·L^-1的Nar培养,再行缺氧4h后复氧24h。实验后,MTT法测定细胞存活率;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;Westernblot检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化转录因子4(ATF4)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)及其磷酸化水平(p-eIF2α)、双链RNA样内质网激酶(PERK)及其磷酸化水平(p-PERK)。结果与C组相比,H/R组明显降低H9c2心肌细胞存活率,诱导细胞凋亡,增加CHOP、ATF4、p-eIF2α/eIF2α和p-PERK/PERK表达(P<0.05);与H/R组比较,Nar3个剂量组均能提高H9c2心肌细胞存活率,降低细胞凋亡,CHOP、ATF4、p-eIF2α/eIF2α和p-PERK/PERK表达下调,以Nar中、高剂量组效果最明显(P<0.05)。结论Nar预处理可以减轻心肌细胞H/R损伤所致的心肌细胞凋亡,提示PERK-eIF2α-ATF4-CHOP途径参与Nar减轻内质网应激相关凋亡的作用。 展开更多
关键词 柚皮苷 心肌细胞 缺氧/复氧 凋亡 内质网应激 葡萄糖调节蛋白78
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