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小鼠抗人B7-2单克隆抗体的制备及对8266细胞表面Fas及FasL的诱导作用
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作者 王玉玉 颜天铭 +2 位作者 王志遥 沈立军 邱玉华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期50-56,共7页
目的制备鼠抗人B7-2单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),研究其对表达该分子的肿瘤细胞表面的死亡相关分子的诱导作用。方法以转基因细胞L929-B7-2为免疫原,免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、免疫荧光标记法多次筛选及连续亚克隆,获得能... 目的制备鼠抗人B7-2单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),研究其对表达该分子的肿瘤细胞表面的死亡相关分子的诱导作用。方法以转基因细胞L929-B7-2为免疫原,免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、免疫荧光标记法多次筛选及连续亚克隆,获得能分泌B7-2McAb的杂交瘤细胞株。采用Ig亚类鉴定试纸条、抗原位点竞争抑制试验、效价的测定及细胞膜型分子的识别作用对McAb进行生物学特性的分析。通过小鼠诱生腹水法制备McAb并经ProteinG亲和层析法进行纯化。以天然高表达B7-2分子的多发性骨髓瘤细胞8266为观察对象,加入McAb共同孵育,流式细胞仪(FCM)检测其对细胞表面死亡相关分子Fas及FasL的诱导作用。结果成功获得一株B7-2McAb,标记为12G4,其重链为IgG2b,轻链为κ。12G4McAb的效价为0.1μg/5×10^5个细胞,纯化后得到腹水型抗体的含量为1.61mg/ml。FCM结果显示,12G4McAb能很好地识别细胞膜型分子,其与8266细胞的阳性结合率为89.6%,当20μg/ml12G4McAb与细胞孵育12h,细胞表面Fas分子的平均值(mean)开始上调,48h达到最大值(62575.8),与IgG对照组(57135.4)比较差异有统计学意义(P<0.05)。20μg/ml12G4与细胞孵育12h,细胞表面FasL分子的表达也开始上调,48h达到最大值(7.98%),与IgG对照组(1.10%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功制备了B7-2McAb,其能诱导表达该分子的肿瘤细胞表面的部分死亡相关分子的表达。 展开更多
关键词 B7-2分子 杂交瘤细胞 单克隆抗体 FASL FAS
牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其应用
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作者 赵洪哲 范峻豪 +3 位作者 李新培 王昊 关平原 温永俊 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期287-293,共7页
为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间... 为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行2次亚克隆后注射入小鼠腹腔制备单抗腹水。利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,用间接免疫荧光试验测定其活性,用SDS-PAGE试验测定其纯度。经活性、纯度检测合格后,采用搅拌法与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联;用葡聚糖G-25 Medium介质进行分离纯化。结果,本研究共获得2株能够稳定分泌IgG1类型的阳性杂交瘤细胞株和一种直接荧光抗体,分别被命名为BMAb11、BMAb20、DB11。稳定性试验表明,杂交瘤细胞分泌的抗体稳定性好。ELISA、间接免疫荧光试验和直接免疫荧光试验表明,单克隆抗体和直标荧光抗体均与BVDV发生特异性反应,说明它们的特异性较好。经ELISA鉴定,腹水抗体效价达到1∶12 800。直接荧光抗体荧光素与蛋白的摩尔比(F/P)为3.34,标准值在2.0~4.0之间,符合标准。上述研究结果表明,本研究制备的单克隆抗体和直标荧光抗体可用于BVDV的检测,为BVDV的临床诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 杂交瘤细胞 单克隆抗体(MAb) 直标荧光抗体
苦马豆素单克隆抗体的制备与鉴定 预览
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作者 贾琦珍 陈根元 +2 位作者 王连群 亚森·麦麦提 王帅 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第7期2155-2159,共5页
本试验采用苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1∶25 600,... 本试验采用苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1∶25 600,诱生腹水效价为1∶80 000。单克隆抗体的亚型为IgG1,亲和力解离常数为1.14×1010,腹水抗体纯化后纯度可达98%,回收率80%,SDS-PAGE凝胶电泳可见单克隆抗体的轻链、重链分子质量分别为25和50ku,Western blotting检测抗体能特异性的识别SW。其线性检测范围为4~128μg/mL(R2=0.9969),与BSA、明胶、多聚赖氨酸、α-甘露糖苷等无交叉反应。本试验制备的SW单克隆抗体为免疫学检测SW和免疫学防制家畜疯草中毒奠定基础。 展开更多
关键词 苦马豆素 单克隆抗体 杂交瘤细胞 间接ELISA
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分泌抗山羊γ干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与鉴定 预览
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作者 张洪杰 桑锋锋 +3 位作者 刘阿华 李言言 王毅 陈德坤 《动物医学进展》 北大核心 2017年第12期14-17,共4页
为筛选分泌山羊γ干扰素(IFN-γ)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以原核表达的山羊rIFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,以间接ELISA方法筛选分泌山羊IFN-γ单克隆抗体杂交瘤细胞,采用山羊外周血淋巴细胞产生的... 为筛选分泌山羊γ干扰素(IFN-γ)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以原核表达的山羊rIFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,以间接ELISA方法筛选分泌山羊IFN-γ单克隆抗体杂交瘤细胞,采用山羊外周血淋巴细胞产生的IFN-γ包被酶标板对IFN-γ的特异性进行鉴定,用试纸条对IFN-γ单克隆抗体类别和亚型进行鉴定。结果获得了1株能特异性识别山羊IFN-γ的杂交瘤细胞3C,3C分泌的单克隆抗体能够特异性识别天然结构的山羊IFN-γ,单克隆抗体类别为IgG,轻链为κ型。 展开更多
关键词 山羊 Γ干扰素 杂交瘤细胞
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抗Gly m Bd 28K单克隆抗体的制备及其免疫学特性 预览 被引量:1
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作者 闫慧丽 席俊 +3 位作者 高学梅 贺梦雪 陈哲 陆启玉 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期748-752,共5页
利用Gly m Bd 28K天然蛋白免疫BALB/c雌性小鼠,取小鼠脾脏细胞与杂交瘤细胞融合,筛选出2株能稳定分泌抗Gly m Bd 28K单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E3和2F4。体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体,经纯化后,得到2株均为Ig G1型的单克隆抗体m Ab... 利用Gly m Bd 28K天然蛋白免疫BALB/c雌性小鼠,取小鼠脾脏细胞与杂交瘤细胞融合,筛选出2株能稳定分泌抗Gly m Bd 28K单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E3和2F4。体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体,经纯化后,得到2株均为Ig G1型的单克隆抗体m Ab1E3和m Ab2F4。间接ELISA方法测得m Ab1E3的效价达到1∶4.10×10~5,对Gly m Bd 28K蛋白的半数抑制率(IC_(50))为23.99μg·L^-1,与花生蛋白、核桃蛋白等的交叉反应率均低于0.1%。该单克隆抗体的制备为Gly m Bd 28K致敏蛋白的检测以及抗原表位的鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 GLY M BD 28K 杂交瘤细胞 单克隆抗体 间接ELISA
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沙拉沙星单克隆抗体制备及鉴定 预览 被引量:2
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作者 刘儒彪 胡骁飞 +6 位作者 张改平 王慧 王方雨 刘璐 刘玺 邓瑞广 宋照军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期87-91,共5页
为制备敏感性好、亲和力高、特异性强的抗沙拉沙星(Sarafloxacin,SARA)单克隆抗体,采用碳二亚胺法合成SARA人工抗原,通过免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌抗SARA单克隆抗体(M... 为制备敏感性好、亲和力高、特异性强的抗沙拉沙星(Sarafloxacin,SARA)单克隆抗体,采用碳二亚胺法合成SARA人工抗原,通过免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌抗SARA单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备SARA mAb,通过间接ELISA和间接竞争ELISA对SARA mAb的免疫学特性进行鉴定。结果表明:小鼠经免疫原免疫后,小鼠多抗血清效价均达到1∶128 000。选择敏感性较好的2号小鼠进行细胞融合,经多次亚克隆后,筛选出1G3、3H3两株杂交瘤细胞株,其中1G3所产SARA mAb效价较高,为1∶512 000,IC_(50)为6.34 ng/mL,亲和常数为8.55×10~8L/mol,与诺氟沙星的交叉反应率为1.06%,与其他药物交叉反应率均低于0.50%。 展开更多
关键词 沙拉沙星 单克隆抗体 杂交瘤细胞 免疫学特性
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抗埃博拉病毒核蛋白NP人-鼠嵌合抗体的研究
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作者 周荣苹 孙丽娜 +4 位作者 刘洋 芜为 李川 梁米芳 仇佩虹 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期14-18,共5页
埃博拉病毒感染致死率最高可达90%,属烈性传染病,检测诊断对于疫情控制就显得异常重要。目前我国实验室通过实时定量荧光PCR检测埃博拉病毒核酸进行确诊,但耗时相对较长,对检测的人员和仪器要求较高。ELISA法检测血清是病原学诊断的主... 埃博拉病毒感染致死率最高可达90%,属烈性传染病,检测诊断对于疫情控制就显得异常重要。目前我国实验室通过实时定量荧光PCR检测埃博拉病毒核酸进行确诊,但耗时相对较长,对检测的人员和仪器要求较高。ELISA法检测血清是病原学诊断的主要指标,该种检测方法简单易操作,能够有效判断患者是否感染埃博拉以及感染程度,可用于流行病学调查,血清学指标的检测可以作为核酸检测的有力补充。由于埃博拉出血热在我国境内尚无病例出现,尤其需要储备血清学检测阳性质控物。通过基因工程抗体技术构建并表达抗埃博拉病毒核蛋白NP人-鼠嵌合抗体,为埃博拉出血热血清学检测做人源阳性对照储备。采用RT-PCR技术,从分泌抗埃博拉核蛋白单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞株中分离克隆抗体轻重链可变区基因,对其进行序列分析。根据序列分析的结果,设计特异性引物将鼠源抗体可变区基因VH、VL分别克隆至携带有人抗体轻重链恒定区基因的真核表达载体HL51-14,瞬时转染293T细胞,表达并纯化获得人鼠嵌合IgG抗体,随后对其进行了免疫学检测和功能鉴定。结果表明正确构建抗埃博拉病毒核蛋白人鼠嵌合抗体真核表达载体,成功表达并纯化获得两株人鼠嵌合单抗。 展开更多
关键词 埃博拉核蛋白 杂交瘤细胞 人鼠嵌合抗体
A群脑膜炎奈瑟球菌多糖单克隆抗体的制备及其应用 被引量:1
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作者 舒曼 鲁卫东 +4 位作者 钱雯 马波 叶红艳 黄微 兰萍 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1339-1343,共5页
目的 :筛选能分泌A群脑膜炎奈瑟球菌多糖抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,运用该单抗建立检测ACYW135群脑膜炎奈瑟球菌多糖疫苗中A群多糖的竞争ELISA方法。方法 :运用经典的杂交瘤技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠腹腔注射收获腹水... 目的 :筛选能分泌A群脑膜炎奈瑟球菌多糖抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,运用该单抗建立检测ACYW135群脑膜炎奈瑟球菌多糖疫苗中A群多糖的竞争ELISA方法。方法 :运用经典的杂交瘤技术筛选杂交瘤细胞株,采用小鼠腹腔注射收获腹水型单克隆抗体,优化条件建立间接竞争ELISA,分别测定5支同一批和3个不同批次的ACYW135群脑膜炎奈瑟球菌多糖疫苗成品中的A群多糖含量,检测结果应用SPSS软件做单样本t检验分析。结果:标准曲线经Log-logit处理,得到回归方程:y=-1.664 8-2.254 2x,R^2=0.989 5,线性范围0.022 8~1.200 7μg/m L,IC50为0.165 8μg/m L,最低检测限为0.022 8μg/m L,检测疫苗中A群多糖含量,检测值与疫苗标示量无统计学差异(P〉0.05)。结论 :成功筛选杂交瘤细胞株,制备A群多糖特异性单克隆抗体,建立的间接竞争ELISA方法 ,灵敏度高、稳定性好、可重复性强,可用于脑膜炎奈瑟球菌多糖疫苗研发过程中的定量检测,能克服磷含量法和火箭免疫电泳法检测A群多糖含量的缺点。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 流脑疫苗
重组人β干扰素1a(rhIFN-β1a)单克隆抗体的制备
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作者 张登央 喇文军 +1 位作者 李柳萍 王妍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1549-1553,共5页
目的制备抗重组人B干扰素1a(rhIFN-β1a)单克隆抗体(mAb)。方法用纯化的rhIFN-1βa免疫BALB/c小鼠。取血清抗rhIFN-β1a滴度最高的小鼠的脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞进行融合。经HAT筛选、有限稀释及阳性选择步骤获得稳定的... 目的制备抗重组人B干扰素1a(rhIFN-β1a)单克隆抗体(mAb)。方法用纯化的rhIFN-1βa免疫BALB/c小鼠。取血清抗rhIFN-β1a滴度最高的小鼠的脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞进行融合。经HAT筛选、有限稀释及阳性选择步骤获得稳定的杂交瘤细胞株。通过ELISA结果计算抗体的平衡解离常数(KD)并比较,选取KD最好的1株细胞通过生物反应器进行罐培养,含有抗体的培养液经超滤和蛋白G凝胶亲和层析进行纯化。结果通过融合筛选过程获得了13株稳定分泌抗rhIFN-β1a mAb的杂交瘤细胞株。KD为4.6×10^-9mol/L的1E8细胞株经培养后其上清抗体滴度可达1:5000,经过2步纯化获得了纯度可达90%的抗体。结论成功制备了纯度较高的rhIFN-β1a mAb。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 重组人β干扰素1a 单克隆抗体 生物反应器 纯化
小分子单克隆抗体的制备与敲除技术研究进展 被引量:5
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作者 刘菁 毛新民 +3 位作者 李琳琳 李新霞 王烨 兰怡 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第19期3737-3741,共5页
随着单克隆抗体技术应用的愈加广泛,其生产技术也日臻完善。小分子单克隆抗体技术也日益成为人们研究的热点课题。中药小分子单克隆抗体技术的应用也日益广泛,这门技术给中药有效成分的敲除提供有力的技术支持。该文就小分子单克隆抗体... 随着单克隆抗体技术应用的愈加广泛,其生产技术也日臻完善。小分子单克隆抗体技术也日益成为人们研究的热点课题。中药小分子单克隆抗体技术的应用也日益广泛,这门技术给中药有效成分的敲除提供有力的技术支持。该文就小分子单克隆抗体制备与敲除技术进行了综述。就其制备过程中的几个步骤,如:半抗原的制备,半抗原与载体偶联,人工抗原的鉴定及偶联比率的测定,动物免疫与单克隆杂交瘤细胞株的建立,单克隆抗体的大规模制备;小分子单克隆抗体的敲除技术的免疫亲和色谱柱的方法进行了详尽的阐述。笔者相信这门技术会使得中药的研究上更高一个层次,并且提高中药研究的国际化水平。 展开更多
关键词 半抗原 人工抗原 偶联比率 单克隆抗体 动物免疫 杂交瘤细胞 免疫亲和色谱柱
抗山羊痘病毒P32蛋白杂交瘤细胞的构建及其单克隆抗体的制备 预览 被引量:2
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作者 陈伯祥 杨明 +1 位作者 贺泂杰 李杰 《中国动物检疫》 CAS 2015年第12期66-68,共3页
本研究旨在以纯化的山羊痘病毒P32蛋白为免疫原,构建杂交瘤细胞株,制备P32蛋白单克隆抗体。用纯化的P32蛋白免疫BALB/C小鼠后,按常规方法进行细胞融合,构建抗山羊痘病毒P32蛋白的杂交瘤细胞,制备P32蛋白单克隆抗体,获得4株能识别重组蛋... 本研究旨在以纯化的山羊痘病毒P32蛋白为免疫原,构建杂交瘤细胞株,制备P32蛋白单克隆抗体。用纯化的P32蛋白免疫BALB/C小鼠后,按常规方法进行细胞融合,构建抗山羊痘病毒P32蛋白的杂交瘤细胞,制备P32蛋白单克隆抗体,获得4株能识别重组蛋白且特异性强无交叉反应的杂交瘤细胞株,腹水抗体效价均在10^5以上。山羊痘病毒P32蛋白杂交瘤细胞株的构建及单克隆抗体的制备为进一步开展检测方法研究提供了材料。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 P32蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究 预览 被引量:1
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作者 邱果 许凤 +5 位作者 邱义兰 廖旻晶 李烨 刘胜姿 李桑 刘如石 《激光生物学报》 CAS CSCD 2014年第4期338-345,共8页
人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV ... 人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 PP65蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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抗人和肽素单克隆抗体的研制 预览
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作者 夏文龙 卞智萍 +4 位作者 徐晋妉 顾春荣 吴恒芳 陈相健 杨笛 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期726-728,共3页
目的 制备抗人和肽素单克隆抗体并完成鉴定。方法 合成人和肽素C端及N端氨基酸片段并耦联钥孔戚血蓝蛋白(KLH)作为抗原,分别免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤技术筛选出分泌抗人和肽素抗体的单克隆细胞株,动物体内诱生法收集腹水,葡萄... 目的 制备抗人和肽素单克隆抗体并完成鉴定。方法 合成人和肽素C端及N端氨基酸片段并耦联钥孔戚血蓝蛋白(KLH)作为抗原,分别免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤技术筛选出分泌抗人和肽素抗体的单克隆细胞株,动物体内诱生法收集腹水,葡萄球菌蛋白A亲和层析柱纯化腹水中的单克隆抗体(单抗),完成抗体亚类鉴定,用间接ELISA鉴定其活性,初步应用于免疫细胞化学检测。结果 获得了3株特异性抗人和肽素单抗2h7、5b10及5e7,均属于IgG1亚类,2h7针对的抗原表位在和肽素C端,而5b10及5e7针对的抗原表位在和肽素N端。间接ELISA检测证实3株单抗均特异性识别人和肽素,其中2h7和5b10可应用于免疫细胞化学分析。结论 成功制备出抗人和肽素单抗,能特异识别和肽素C端和N端,可应用于细胞免疫化学检测,为人和肽素的进一步研究提供依据。 展开更多
关键词 和肽素 单克隆抗体 杂交瘤细胞
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基于HTS-ELISA的单克隆抗体分泌杂交瘤细胞筛选技术进展 被引量:2
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作者 甄玉萍 裴世春 高建伟 《食品安全质量检测学报》 2014年第7期1960-1964,共5页
基于单克隆抗体的各类免疫分析技术是现代食品安全快速检测技术发展的主要方向之一,因此,高活性单克隆抗体的制备方法自然为众多研究者所关注。通常单克隆抗体的制备过程涉及到很多技术环节,包括抗原制备、免疫剂量设计、细胞融合、活... 基于单克隆抗体的各类免疫分析技术是现代食品安全快速检测技术发展的主要方向之一,因此,高活性单克隆抗体的制备方法自然为众多研究者所关注。通常单克隆抗体的制备过程涉及到很多技术环节,包括抗原制备、免疫剂量设计、细胞融合、活性杂交瘤细胞筛选以及抗体纯化等,其中分泌单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选环节是单克隆抗体制备的关键一环。为此,本文主要介绍了一种基于HTS-ELISA的高活性单克隆抗体分泌杂交瘤细胞的筛选技术,重点是对融合细胞的低密度培养、特殊仪器设备和在筛选过程中如何依据拖孔数(Trailing)来判断杂交瘤细胞的活性等相关的原理和技术,旨在为我国高活性单克隆抗体制备技术的发展及加快食品安全快速检测技术的发展提供一个参考方法。 展开更多
关键词 高通量-酶联免疫分析 杂交瘤细胞 筛选 单克隆抗体
S100A9蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定 被引量:2
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作者 刘洋洋 李晓玲 +5 位作者 左威 迟健 柳刚 孙龙钦 姜俊义 刘莹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期956-959,共4页
目的制备S100A9重组蛋白及其单克隆抗体(mAb),并对抗体进行特异性鉴定。方法以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-S100A9和pET-32a-S100A9。融合蛋白在大肠杆菌中表达,纯化后以His-S100A9作为免疫原制备鼠mAb。采用... 目的制备S100A9重组蛋白及其单克隆抗体(mAb),并对抗体进行特异性鉴定。方法以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-S100A9和pET-32a-S100A9。融合蛋白在大肠杆菌中表达,纯化后以His-S100A9作为免疫原制备鼠mAb。采用ELISA和Western blot法鉴定筛选抗体。挑取杂交瘤细胞株制备腹水并纯化,采用Western blot法和间接免疫荧光染色鉴定mAb的特异性。结果 GST-S100A9和His-S100A9融合蛋白均成功构建表达。共筛选到抗S100A9杂交瘤细胞18株,其中15株在Western blot检测中与重组蛋白呈强阳性反应,3株呈弱阳性反应。2株可识别肝癌组织间隙液中的S100A9天然蛋白。结论成功地制备出多株抗S100A9的mAb。 展开更多
关键词 S100A9 单克隆抗体 杂交瘤 细胞融合
β_2糖蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定 预览 被引量:4
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作者 胥亚 许国莹 +4 位作者 周红 解鸿翔 夏龙飞 刘敬敬 张晓蕾 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期649-652,共4页
目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔... 目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,经硫酸铵沉淀及Protein G纯化MAbs。秋水仙素阻抑法鉴定杂交瘤细胞株染色体数目,ELISA测定滴度,Ig亚类试剂盒鉴定Ig亚类,Western blot鉴定特异性。结果:获得1株稳定分泌MAbs的杂交瘤细胞株β2,该杂交瘤细胞株的染色体数为99~108。进一步研究发现,其培养液和腹水滴度为1∶29和1∶215,其MAbs分类为IgG1/κ,Western blot显示纯化的MAbs及标准anti-β2GPⅠ与β2GPⅠ均有反应条带,具有较好的特异性。结论:成功获得并纯化β2GPⅠ单克隆抗体,为进一步研究β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ复合物在抗磷脂综合征中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 β2GPⅠ 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 抗磷脂综合征
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抗人肺鳞癌单克隆抗体的制备和纯化 预览
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作者 王红明 唐睿珠 +1 位作者 马丽菊 郝萍 《昆明医科大学学报》 2013年第7期共3页
目的制备并纯化前期工作建立的杂交瘤细胞株C5所分泌的抗人肺鳞癌单克隆抗体,为研究该单抗对应肺癌相关抗原的生物学功能奠定基础.方法常规培养前期工作建立的C5杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化培养,ELISA法检测培养上清,挑选检测阳性... 目的制备并纯化前期工作建立的杂交瘤细胞株C5所分泌的抗人肺鳞癌单克隆抗体,为研究该单抗对应肺癌相关抗原的生物学功能奠定基础.方法常规培养前期工作建立的C5杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化培养,ELISA法检测培养上清,挑选检测阳性细胞继续克隆化培养,直至3次检测亚克隆均呈阳性.收集阳性培养上清,利用Protein A-sepharoseCL-4B亲和层析法纯化抗体,Western-Blot法对纯化后的抗体进行鉴定.结果得到了来源相同的亚克隆杂交瘤细胞株,克隆阳性率达100%.成功纯化出了目的单克隆抗体,并证实纯化产物系目的单抗,纯化后的C5杂交瘤细胞单克隆抗体重链分子量约为75 kDa.结论成功纯化出抗人肺鳞癌单克隆抗体,该单抗可能在肺癌的早期诊断、靶向治疗和肿瘤疫苗的研制等方面具有重要意义和潜在应用价值. 展开更多
关键词 单克隆抗体 抗体纯化 杂交瘤细胞 有限稀释
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阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立 预览 被引量:5
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作者 汪琳 李勐伟 +8 位作者 刑佑尚 柏亚铎 尹羿 蒲静 乔彩霞 高志强 魏学良 李朝明 李琴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期52-55,共4页
试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞... 试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D450 nm值及P/N值选择1:20000稀释的5C10作为包被抗体,1:40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 单克隆抗体 杂交瘤细胞 ELISA检测
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整合素阻断剂AP25单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 李永兵 徐寒梅 +1 位作者 张奉国 胡家亮 《江苏医药》 CAS 北大核心 2013年第6期636-638,共3页
目的制备整合素阻断剂AP25的单克隆抗体,鉴定其效价和特异性。方法从抗原免疫BALB/c小鼠分离免疫脾细胞,通过杂交瘤技术将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选杂交瘤细胞株并进行扩大培养。采用小鼠体内诱生法制备腹水,进行纯化... 目的制备整合素阻断剂AP25的单克隆抗体,鉴定其效价和特异性。方法从抗原免疫BALB/c小鼠分离免疫脾细胞,通过杂交瘤技术将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选杂交瘤细胞株并进行扩大培养。采用小鼠体内诱生法制备腹水,进行纯化后得到抗AP25单克隆抗体,用ELISA和Western blot鉴定其效价和特异性。结果 ELISA检测抗AP25单克隆抗体效价可达1∶2×10^6,Western blot鉴定抗体特异性良好。结论获得了能够高表达抗AP25单克隆抗体的杂交瘤细胞株;腹水制备抗体,纯化后得到效价高、特异性良好的AP25单克隆抗体。 展开更多
关键词 整合素阻断剂 AP25 杂交瘤细胞 单克隆抗体
抗猫杯状病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定 预览 被引量:1
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作者 艾纯旭 樊小烨 +5 位作者 孟令伟 高巍 袁宝 陈建 胡进平 任文陟 《中国农学通报》 CSCD 2012年第29期71-74,共4页
为了制备抗猫杯状病毒的单克隆抗体,并对其基本生物学特性进行鉴定。分别采用饱和硫酸铵方法、差速离心、氯化铯密度梯度离心方法对猫杯状病毒(FCV)进行纯化,将纯化的猫杯状病毒作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,通过细胞融合和杂交瘤筛... 为了制备抗猫杯状病毒的单克隆抗体,并对其基本生物学特性进行鉴定。分别采用饱和硫酸铵方法、差速离心、氯化铯密度梯度离心方法对猫杯状病毒(FCV)进行纯化,将纯化的猫杯状病毒作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立抗猫杯状病毒单克隆抗体的杂交瘤系,鉴定单克隆抗体的亚型。结果表明:本实验获得了2株稳定分泌特异性抗猫杯状病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D8、E5,其亚型均为IgM。获得的单克隆抗体与犬细小病毒(CPV)、猫细小病毒(FPV)、犬瘟热病毒(CDV)均无交叉反应。成功制备了抗猫杯状病毒单克隆抗体,为建立相关诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 杂交瘤细胞 单克隆抗体 细胞融合
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