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Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移侵袭的影响
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作者 陈芳 赵俊丽 夏海滨 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期520-526,共7页
目的探讨核受体Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响。方法首先采用对靶向基因进行特定DNA修饰的CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建Rev-erbβ基因敲除的HepG2细胞系。用Rev-erbβ打靶载体共转染到HepG2细胞,通过筛选、克隆... 目的探讨核受体Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响。方法首先采用对靶向基因进行特定DNA修饰的CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建Rev-erbβ基因敲除的HepG2细胞系。用Rev-erbβ打靶载体共转染到HepG2细胞,通过筛选、克隆化构建Rev-erbβ基因敲除HepG2细胞系,并采用PCR、测序和Western blot鉴定。以正常HepG2细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Rev-erbβ基因敲除对肿瘤迁移、侵袭相关基因表达的影响,采用MTT、细胞划痕、Transwell等实验检测Rev-erbβ基因敲除对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果成功构建一株Rev-erbβ基因完全敲除单克隆细胞系(经PCR、测序和Western blot鉴定),命名为HepG2 C5(Rev-erbβ^-/-)。qRT-PCR结果显示,Rev-erbβ基因敲除可以导致基质金属蛋白酶-2,-9基因(MMP2,MMP9)、细胞外基质蛋白1基因(ECM1)表达上调(P均<0.05),细胞黏附相关基因E-钙黏蛋白基因(CDH1)下降(P=0.05);MTT、细胞划痕、Transwell实验显示,并且HepG2 C5比对照细胞有更强的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05)。结论 Rev-erbβ基因敲除可以改变HepG2细胞与迁移、黏附相关基因的表达,进而影响HepG2细胞增殖、迁移与侵袭能力。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 HEPG2细胞 Rev-erbβ 基因敲除 增殖 迁移
GFP/HBxn、GFP/HBxc融合蛋白重组载体的构建和稳定表达细胞系的建立 预览
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作者 姚雪兵 杨林 +2 位作者 高珍 罗杰 孙水林 《南昌大学学报:医学版》 CAS 2017年第4期9-13,共5页
目的分别构建绿色荧光蛋白(GFP)与氨基端或羧基端缺失突变乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的重组表达载体,建立稳定表达GFP/HBxn、GFP/HBxc融合蛋白的HepG2细胞系,以进一步研究HBx缺失突变对其生物功能的影响... 目的分别构建绿色荧光蛋白(GFP)与氨基端或羧基端缺失突变乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的重组表达载体,建立稳定表达GFP/HBxn、GFP/HBxc融合蛋白的HepG2细胞系,以进一步研究HBx缺失突变对其生物功能的影响。方法 PCR法分别扩增氨基端缺失50aa的HBx及羧基端缺失50aa的HBx基因,用HindⅢ和KpnⅠ双酶切定向插入pEGFP-C1相应酶切位点并转化宿主菌DH5α,双酶切鉴定pGFP/HBxn、pGFP/HBxc;脂质体转染法转染HepG2细胞,G418筛选出抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP的表达,挑选抗性克隆细胞扩大培养并传代。RT-PCR法、Western blot法检测转染细胞HBxn、HBxc基因、蛋白的表达。结果扩增的HBxn、Hbxc基因片段琼脂糖凝胶电泳显示符合预估大小。重组质粒pGFP/HBxn、pGFP/HBxc经HindⅢ和KpnⅠ双酶切后电泳,符合预估大小;转染pGFP/HBxn及pGFP/HBxc的HepG2细胞可见抗性细胞克隆形成,并可见阳性克隆细胞均有GFP表达。RT-PCR与Western blot法检测到HBxn、HBxc的表达。结论成功构建了GFP/HBxn、GFP/HBxc真核重组表达载体pGFP/HBXn、pGFP/HBxc,获得了稳定表达GFP/HBxn、GFP/HBxc融合蛋白的HepG2细胞系,为进一步研究HBx缺失突变对其生物功能的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒X蛋白 缺失突变 重组载体 HEPG2细胞系 构建
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靶向Livin反义核酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡并提高其对卡铂、表柔比星敏感性 预览 被引量:1
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作者 张帆 吕会增 +1 位作者 蒋建伟 曹明溶 《暨南大学学报:自然科学与医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期170-175,共6页
目的:探讨靶向livin反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高卡铂、表柔比星的敏感性。方法:用靶向livin基因反义寡核苷酸(ASODN),随机寡核苷酸(random oligodeoxy-nucleotide,RODN)分别... 目的:探讨靶向livin反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高卡铂、表柔比星的敏感性。方法:用靶向livin基因反义寡核苷酸(ASODN),随机寡核苷酸(random oligodeoxy-nucleotide,RODN)分别转HepG2细胞,流式细胞术碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期和凋亡情况;Hoechst 33258染色法检测靶向livin反义核酸作用于人肝癌HepG2细胞后其细胞核形态的改变;采用靶向livin反义核酸联合卡铂(CBP)、表柔比星(EPI),观察对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用。结果:PI单染检测显示靶向livin反义核酸处理组S期细胞百分率明显增加,400 nmol/L浓度组为(37.2±1.6)%,存在S期细胞阻滞;不同浓度的livinASODN均可诱导HepG2细胞凋亡,并随着其浓度的增大而凋亡率增高,100 nmol/L、200 nmol/L、400 nmol/L凋亡细胞百分率分别为(13.2±1.7)%,(13.9±2.1)%和(18.9±1.4)%;靶向livin反义核酸作用后出现细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;100 nmol/L的靶向livin反义核酸与不同质量浓度的化疗药物(CBP,EPI)联合作用于HepG2细胞48 h,可提高HepG2细胞对这些化疗药物的敏感性,增敏倍数分别为3.61和9.57倍。结论:靶向livin反义核酸可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提高HepG2细胞对CBP,EPI的敏感性。 展开更多
关键词 livin反义核酸 HEPG2细胞 细胞凋亡 敏感性
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水飞蓟宾诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高对5-FU、顺铂的敏感性 预览 被引量:6
4
作者 陈景红 张鹏 +3 位作者 陈庆 刘萍莉 王莉 蒋建伟 《暨南大学学报:自然科学与医学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 138-143,共6页
目的:探讨水飞蓟宾诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高5-FU、顺铂的敏感性。方法:采用MTT法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的水飞蓟宾对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色法检测水飞蓟宾作用于人肝癌HepG2细胞后其细胞核形... 目的:探讨水飞蓟宾诱导人肝癌HepG2细胞凋亡并提高5-FU、顺铂的敏感性。方法:采用MTT法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的水飞蓟宾对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色法检测水飞蓟宾作用于人肝癌HepG2细胞后其细胞核形态的改变;Western blotting检测凋亡相关蛋白(Caspase-3,Caspase-9)的表达;采用水飞蓟宾联合5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP),观察对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用。结果:MTT法检测显示,水飞蓟宾对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制作用,并随着水飞蓟宾浓度的增大而增强,作用于肝癌HepG2细胞48 h的IC50为195.38μmol/L;克隆形成抑制实验表明随着水飞蓟宾药物浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与对照组相比有显著差异;其细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;存在Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化和降解;150μmol/L的水飞蓟宾与不同质量浓度的化疗药物(5-FU,DDP)联合作用于HepG2细胞48h,可提高HepG2细胞对这些化疗药物的敏感性,增敏倍数分别为39.63和21.54倍。结论:水飞蓟宾通过诱导人肝癌HepG2细胞凋亡抑制细胞增殖,并提高HepG2细胞对5-FU,DDP的敏感性。 展开更多
关键词 水飞蓟宾 HEPG2细胞 细胞凋亡 敏感性
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miRNA沉默缺氧诱导因子1α基因对HepG2细胞增殖的抑制作用
5
作者 董志珍 姚登福 +5 位作者 李姗姗 姚敏 蔚丹丹 姚宁华 钱雅洁 邱历伟 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期 281-285,共5页
目的 探讨以miRNA沉默缺氧诱导因子1 α(HIF-1 α)基因,观察其对肝癌细胞株(HepG2细胞)增殖的抑制作用.方法 构建靶向HIF-1 α基因miRNA干扰载体,转染HepG2细胞,以定量PCR和Western blot分析靶基因和蛋白的表达;构建含缺氧反应元件... 目的 探讨以miRNA沉默缺氧诱导因子1 α(HIF-1 α)基因,观察其对肝癌细胞株(HepG2细胞)增殖的抑制作用.方法 构建靶向HIF-1 α基因miRNA干扰载体,转染HepG2细胞,以定量PCR和Western blot分析靶基因和蛋白的表达;构建含缺氧反应元件双荧光素酶报告基因检测转染后相对光单位值;酶联免疫吸附法定量检测血管内皮生长因子和血管生成素2的表达;细胞凋亡及增殖周期以流式细胞仪和膜联蛋白/碘化丙啶(V-FITC/PI)双重染色法分析.采用t检验和两因素方差分析及q或q'检验分析计量资料.结果 HepG2细胞在转染HIF-1 αmiRNA后72 h,HIF-1 α在转录和翻译水平上分别下降87%和56%双荧光素酶报告基因减少46%,血管内皮生长因子和血管生成素2分别减少54%和36%;癌细胞凋亡率为22.46%±0.61%(P<0.01),G1和S期比例分别为61.49%±1.12%和22.40%±0.58%;联合阿霉素处理后,凋亡率增至36.99%±0.88%,G1、S期比例分别为65.68%±0.91%和19.47%±1.34%.结论 HIF-1 α miRNA可抑制HIF-1 α基因表达,联合阿霉素有效调控肝癌细胞周期,促进凋亡、抑制增殖. 展开更多
关键词 肝细胞 细胞凋亡 缺氧诱导因子1 Α亚基 RNA 小s分子干扰 HEPG2细胞
和厚朴酚衍生物的合成以及细胞毒性和凋亡活性评价 预览
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作者 王田恩 马良 陈俐娟 《四川化工》 CAS 2011年第4期 10-14,共5页
针对几个效果良好的和厚朴酚衍生物,在肝癌细胞(HepG2)上,应用MTT分析、细胞形态学分析、DNA碎片分析和细胞流式分析等方法,进行抗增殖和促凋亡活性评价研究。研究结果表明,化合物3a在HepG2细胞上展现了非常显著的抗增殖活性(半数抑... 针对几个效果良好的和厚朴酚衍生物,在肝癌细胞(HepG2)上,应用MTT分析、细胞形态学分析、DNA碎片分析和细胞流式分析等方法,进行抗增殖和促凋亡活性评价研究。研究结果表明,化合物3a在HepG2细胞上展现了非常显著的抗增殖活性(半数抑制浓度为21.58微摩)和促进细胞凋亡作用。 展开更多
关键词 和厚朴酚衍生物 抗增殖活性 促凋亡活性 HEPG2 细胞株
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槲皮素对HepG2细胞的抑制作用及对耐药基因和P-糖蛋白的影响 预览 被引量:5
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作者 陈华 郑军 《检验医学与临床》 CAS 2010年第9期 791-794,共4页
目的观察槲皮素(Que)在体外对肝癌细胞株HepG2细胞的抑制作用及对多药耐药基因(MDR、)和P糖蛋白(P—gP)的影响,研究其作1,1机制,对其能否改善肝癌的化疗疗效提供初步依据。方法采用体外细胞毒性试验检测Que对肝癌细胞株HepG2细... 目的观察槲皮素(Que)在体外对肝癌细胞株HepG2细胞的抑制作用及对多药耐药基因(MDR、)和P糖蛋白(P—gP)的影响,研究其作1,1机制,对其能否改善肝癌的化疗疗效提供初步依据。方法采用体外细胞毒性试验检测Que对肝癌细胞株HepG2细胞生长的抑制作用;凋亡检测法观察Que诱导肝癌细胞HepG2细胞凋亡情况;免疫组织化学法及实时荧光聚合酶链反应检测其对HepG2细胞P-gP、MDR1表达的影响。结果Que对HepG2细胞生长的抑制作用呈浓度和时间依赖性;Que可诱导HepG2细胞凋亡;Que能抑制肝癌细胞株HepG2细胞MDR1mRNA的表达,并呈浓度依赖性;Que对HepG2细胞P—gP的抑制作用呈浓度依赖性。结论Que可能通过诱导凋亡而抑制HepG2细胞生长;Que可通过抑制MDR。mRNA的表达而抑制Pgp的表达,提高细胞内抗癌药物浓度,改善化疗疗效。 展开更多
关键词 槲皮素 HEPG2细胞 凋亡 多药耐药基因 P-糖蛋白
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普鲁卡因酰胺诱导肝癌细胞启动子区甲基化的GSTP1基因重新表达 预览 被引量:2
8
作者 杨卫富 李德春 《医师进修杂志:外科版》 北大核心 2004年第9期 17-19,共3页
目的研究HepG2肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化与GSTP1基因表达的关系,并探讨普鲁卡因酰胺用于诱导因甲基化失活的GSTPI基因重新表达的可能性。方法分别用5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和普鲁卡因酰胺处理HepG2细胞后培养,甲基化... 目的研究HepG2肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化与GSTP1基因表达的关系,并探讨普鲁卡因酰胺用于诱导因甲基化失活的GSTPI基因重新表达的可能性。方法分别用5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和普鲁卡因酰胺处理HepG2细胞后培养,甲基化特异性PCR(MSP)检测细胞中GSTP1基因的甲基化状况,RT-PCR和Western blot分别检测细胞中GSIP1 mRNA和GST-π的表达。结果HepG2细胞在去甲基化药物处理前,GSIP1基因完全甲基化,GSTP1基因不表达;药物处理后,普鲁卡因酰胺组和5-Aza-CdR组GSTP1基因有表达。结论肝癌细胞GSTP1基因启动子区甲基化可抑制GSTP1基因表达,普鲁卡因酰胺与5-Aza-CAR一样能使启动子区甲基化的GbTP1基因重新表达。 展开更多
关键词 普鲁卡因酰胺 肝癌 癌细胞 GSTP1 基因表达 基因启动子区 基因甲基化 去甲基化作用
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采用HepG2细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法 预览 被引量:10
9
作者 李军 李福涛 +3 位作者 开丽 谭娅 鲁永玲 周红 《四川生理科学杂志》 2002年第2期 80-81,共2页
目的:探讨采用HepG2细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法.方法:采用皮下注射HepG2细胞(1.2×106)建立裸鼠肝癌模型,观察种植细胞后14天内裸鼠的死亡率,并在14天时活杀动物测定瘤体重量、直径及血清AFP浓度.结果:该法遣模成功率达100%.结论... 目的:探讨采用HepG2细胞株建立裸鼠肝癌模型的方法.方法:采用皮下注射HepG2细胞(1.2×106)建立裸鼠肝癌模型,观察种植细胞后14天内裸鼠的死亡率,并在14天时活杀动物测定瘤体重量、直径及血清AFP浓度.结果:该法遣模成功率达100%.结论:该方法操作简便,周期短,成功率高等可作为肝癌模型应用. 展开更多
关键词 HEPG2细胞株 裸鼠 肝癌 动物模型 甲胎蛋白
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外加极低频交变磁场照射下致吸附纳米FeOx颗粒不同类型肝癌细胞凋亡研究 被引量:1
10
作者 居会祥 戴真煜 孙明忠 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1708-1712,1819共6页
目的:观察纳米FeOx粒子在100Hz外加极低频交变磁场(extremely low frequency altering electric-magnetic field,EMF)作用下导致的Bel-7402及HepG2两种肝癌细胞凋亡现象,并探讨其分子机制。方法:采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测纳... 目的:观察纳米FeOx粒子在100Hz外加极低频交变磁场(extremely low frequency altering electric-magnetic field,EMF)作用下导致的Bel-7402及HepG2两种肝癌细胞凋亡现象,并探讨其分子机制。方法:采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测纳米粒子在EMF作用下对不同类型体外培养肝癌细胞Bel-7402及HepG2增殖的影响,流式细胞仪检测不同实验条件下细胞发生的早期凋亡及死亡,运用Western-blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl家族及热休克蛋白-27(Hsp-27)的表达以确定其对细胞影响的分子机制。结果:EMF照射纳米FeOx颗粒吸附HepG2和Bel-7402细胞增殖抑制率分别为(35.54±3.2)%、(76.31±2.3)%(P〈0.05),凋亡率分别为(18.64±6.68)%、(23.34±2.16)%(P〉0.05),两种细胞凋亡率差异不显著。Western-blot实验结果表明两种细胞的Bcl蛋白家族大量表达,细胞发生明显早期凋亡,其中Bel-7402细胞的Bcl/Bax值明显低于HepG2细胞的比值,而Hsp-27蛋白表达明显高于HepG2细胞中的表达,Bel-7402细胞的自我保护功能表现得更为显著,两种细胞的凋亡率度未出现明显差异。结论:EMF照射磁性纳米FeOx颗粒吸附得两种肝肿瘤细胞均能抑制细胞增殖并导致细胞发生大量的早期凋亡,可作为一种潜在的治疗肝脏肿瘤细胞的手段。 展开更多
关键词 纳米FeOx HEPG2 BEL-7402 凋亡 BAX蛋白 热休克蛋白-27
HBV基因组各基因真核表达载体的构建及转染 预览 被引量:3
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作者 汤玉瑜 陈永文 +1 位作者 郭晟 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 251-253,258,共4页
目的构建HBV基因组各基因真核表达载体,转染HepG2细胞,建立稳定转染的HepG2细胞系。方法采用PER方法,以HBV全基因组质粒为模板扩增HBV基因的各基因片段,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴... 目的构建HBV基因组各基因真核表达载体,转染HepG2细胞,建立稳定转染的HepG2细胞系。方法采用PER方法,以HBV全基因组质粒为模板扩增HBV基因的各基因片段,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染HepG2细胞,通过C418筛选,建立稳定转染的HepG2细胞系,用细胞流式技术及细胞免疫组化技术检测HBV各基因产物在细胞内的表达。结果成功构建了pcDNA3.1(+)/HBs、pcDNA3.1(+),HBc、pcDNA3.1(+)/HBe、pcDNA3.1(+)/HBp、pcDNA3.1(+)/HB-preS1、pcDNA3.1(+)/HB-preS2、pcDNA3.1(+)/HBx真核表达载体,并建立了稳定转染的HepG2细胞系,成功地表达目的基因。结论真核表达载体成功构建和稳定转染HepG2细胞系的建立为进一步研究各基因的功能奠定良好的实验基础。 展开更多
关键词 HBV 真核表达载体 稳定转染的HepG2细胞系 基因表达
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沉默PrxⅡ基因促进5-FU诱导HepG2细胞凋亡研究 预览
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作者 毛莹莹 冯琳 +4 位作者 于楠楠 陈冬勤 刘芳美 任晨曦 金美华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第5期91-97,共7页
旨在探究Prx Ⅱ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默Prx Ⅱ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡... 旨在探究Prx Ⅱ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默Prx Ⅱ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡情况、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系构建成功;MTT检测发现在1mmol·L^-15-FU处理下,shPrx Ⅱ组细胞存活率明显低于Scramble组;荧光显微照相结果表明shPrx Ⅱ组细胞凋亡率明显高Scramble组;蛋白质免疫印迹结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞中凋亡标志物PARP、促凋亡蛋白Bad的表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平明显下降。研究表明,沉默PrxⅡ基因能提高HepG2对5-FU促凋亡作用的敏感性,导致HepG2细胞凋亡水平上升,研究结果可为提高肝癌细胞对于5-FU的敏感性提供新的潜在靶目标。 展开更多
关键词 HEPG2细胞系 Prx 慢病毒载体 5-氟尿嘧啶 SHRNA干扰
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miR-17-5p通过靶向抑制MICB表达降低肝癌细胞对NK细胞杀伤的敏感性 预览
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作者 张志波 杨兰钫 +1 位作者 李国平 姚向庆 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期858-864,共7页
目的:探讨miR-17-5p在HCC细胞系HepG2细胞对NK细胞介导的细胞毒性敏感性中的调控作用。方法:使用含野生型MICB基因3’UTR序列、突变型MICB基因3’UTR序列、miR-17-5p mimic序列、miR-17-5p-NC序列、anti-miR-17-5p序列的质粒载体分别或... 目的:探讨miR-17-5p在HCC细胞系HepG2细胞对NK细胞介导的细胞毒性敏感性中的调控作用。方法:使用含野生型MICB基因3’UTR序列、突变型MICB基因3’UTR序列、miR-17-5p mimic序列、miR-17-5p-NC序列、anti-miR-17-5p序列的质粒载体分别或共转染HCC细胞系HepG2,使用丙戊酸钠处理转染或未转染细胞。应用荧光素酶活性测定检测miR-17-5p对MICB的调控作用。应用实时荧光定量PCR检测细胞或组织中miR-17-5p及MICB mRNA表达情况,利用蛋白免疫印迹法检测MICB蛋白表达情况。对比转染质粒后各组细胞中miR-17-5p和MICB mRNA及蛋白的表达情况,分析Target Scan预测和荧光素酶活性测定结果、miR-17-5p与MICB蛋白在HCC组织中的表达及与临床病理特征的关系、miR-17-5p与MICB蛋白在HCC组织中表达的相关性,并对比各组MICB蛋白表达和NK细胞介导的细胞毒性、丙戊酸钠各组NK细胞毒性。结果:①与miR-17-5p-NC组相比,miR-17-5p-mimic组HepG2细胞中miR-17-5p表达水平较高,MICB mRNA和蛋白表达水平均较低(P <0.05);与anti-miR-17-5p-NC组相比,anti-miR-17-5p组HepG2细胞中miR-17-5p表达水平均较低,MICB mRNA和蛋白表达水平均较高(P <0.05);与miR-17-5p-NC+MICB 3’UTR-Wt组相比,miR-17-5p-mimic+MICB 3’-UTR-Wt组荧光素酶活性较低(P <0.05)。miR-17-5p-NC+MICB 3’UTR-Mut组与miR-17-mimic+MICB 3’-UTR-Mut组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P> 0.05)。②与对应癌旁非肿瘤组织相比,miR-17-5p在HCC组织中的表达水平较高,而MICB蛋白表达水平较低(P <0.05)。miR-17-5p和MICB蛋白的表达与肿瘤直径、远处转移、TNM分期、分化程度等临床病理特征有关(P <0.05)。在HCC肿瘤组织中miR-17-5p与MICB蛋白表达水平呈明显负相关(P <0.05)。③与miR-17-5p-NC组相比,miR-17-5p-mimic组NK细胞毒性、MICB蛋白表达水平均较低(P <0.05);与miR-17-5p-mimic+MICB 3’UTR-Mut组相比,miR-17-5p-mimic+MICB-3’UTR-Wt共转染组中NK细胞毒性和MICB蛋白表达� 展开更多
关键词 肝细胞癌 HEPG2细胞系 自然杀伤细胞 miR-17-5p 主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因B
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RNA干扰下调KMT2C基因表达对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其机制 预览
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作者 袁志青 王贵阳 +2 位作者 瞿俊文 王晓鹏 李可为 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2018年第2期122-126,133共6页
目的探讨组蛋白甲基化转移酶基因KMT2C对肝癌细胞HepG2的增殖影响及其可能的机制。方法采用shRNA基因干扰技术抑制HepG2细胞中KMT2C基因的表达,采用细胞计数、CCK-8细胞增殖实验以及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测... 目的探讨组蛋白甲基化转移酶基因KMT2C对肝癌细胞HepG2的增殖影响及其可能的机制。方法采用shRNA基因干扰技术抑制HepG2细胞中KMT2C基因的表达,采用细胞计数、CCK-8细胞增殖实验以及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期变化情况;Western blotting和qRT-PCR检测KMT2C基因干扰前后HepG2细胞中EGFR的表达情况。结果甲基化转移酶KMT2C基因干扰成功后,HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.05),细胞周期阻滞在S期;同时细胞内的EGFR蛋白表达量显著下降(P<0.05)。结论干扰KMT2C基因的表达可以显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖,其作用机制可能和EGFR信号通路有关。 展开更多
关键词 KMT2C基因 肝细胞 HEPG2细胞系 RNA干扰 细胞增殖
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高迁移率族蛋白1促进原发性肝癌细胞增殖 预览
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作者 蔡惠美 曹文瑜 +2 位作者 黄玉钿 傅建英 马燕燕 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第10期1417-1421,共5页
目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)及晚期糖基化终产物受体(RAGE)在原发性肝癌中的表达,研究HMGB1促进肝癌细胞增殖的作用以及相关的分子机制。方法 取肝癌组织及癌旁组织各25例,免疫组化法观察组织样本中HMGB1及RAGE的表达;体外培... 目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)及晚期糖基化终产物受体(RAGE)在原发性肝癌中的表达,研究HMGB1促进肝癌细胞增殖的作用以及相关的分子机制。方法 取肝癌组织及癌旁组织各25例,免疫组化法观察组织样本中HMGB1及RAGE的表达;体外培养肝癌细胞系HepG2和正常肝细胞系L02,用Western blot检测细胞系中HMGB1及RAGE的表达。向HepG2肝癌细胞系中加入外源性重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1),用MTT法检测处于不同浓度rhHMGB1(0、10、50和100μg/L)以及不同处理时间(0、12、24和36 h)作用下HepG2细胞的增殖率;用Western blot检测细胞中RAGE和NF-κB的表达。结果 HMGB1和RAGE蛋白在肝癌组织的阳性表达率为64%和72%,分别高于癌旁组织的20%和28%(P〈0.05)。随着细胞培养时间的延长,HMGB1及RAGE的表达呈上升趋势;随着rhHMGB1浓度的升高或处理时间的延长,HepG2细胞的增殖率显著提高(P〈0.05),细胞中RAGE和NF-κB的表达显著上调(P〈0.05)。结论 HMGB1和RAGE蛋白在肝癌组织及肝癌细胞中高表达。HMGB1可能通过与其受体RAGE结合,进一步激活NF-κB信号通路,从而促进肝癌细胞增殖。 展开更多
关键词 原发性肝癌 高迁移率族蛋白1 晚期糖基化终产物受体 HEPG2细胞系 细胞增殖
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熊果酸对HepG2增殖和凋亡的影响及部分机制研究 预览 被引量:3
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作者 雷达 李永利 祁军安 《中国现代普通外科进展》 CAS 2017年第4期259-263,共5页
目的:观察熊果酸对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其部分机制的研究。方法:将不同浓度熊果酸体外培养人肝癌HepG2细胞,通过M1-r法检测熊果酸对细胞增殖抑制的情况,利用流式细胞检测术观察熊果酸对细胞凋亡及细胞周期的影响。... 目的:观察熊果酸对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其部分机制的研究。方法:将不同浓度熊果酸体外培养人肝癌HepG2细胞,通过M1-r法检测熊果酸对细胞增殖抑制的情况,利用流式细胞检测术观察熊果酸对细胞凋亡及细胞周期的影响。同时利用Westernbtot法检测不同浓度熊果酸干预后人肝癌HepG2细胞pERKl/2蛋白、CyclinD1蛋白的表达情况。结果:不同浓度熊果酸对人肝癌HepG2细胞的增殖均有抑制效应,并呈剂量、时间依赖性(P〈0.05);60umol/L熊果酸作用于人肝癌细胞株HepG272h后达到最大细胞凋亡率(78.723±3.623)%。熊果酸可明显增加GJG,期的细胞含量,诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡。熊果酸可抑制pERKl/2蛋白、CyclinD1蛋白的表达,并随着浓良、时间逐渐上调抑制作用更加明显。结论:熊果酸可抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,阻滞细胞期于Go/G,期,促进癌细胞凋亡,这一过程可能与下调细胞pERKl/2蛋白、CyclinD1蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 熊果酸·HepG2细胞株·增殖·凋亡·pERKl/2蛋白·Cyciin D1蛋白
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羁糖脂对HepG2胰岛素抵抗细胞葡萄糖代谢及相关蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 尹忞强 刘溪 +2 位作者 吴婷婷 张胜来 丁玉勇 《药物评价研究》 CAS 2017年第6期783-787,共5页
目的通过体外实验探讨羁糖脂改善2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)的作用,并初步探明其作用机制。方法采用1×10-7 mol/L胰岛素诱导Hep G2细胞,建立IR细胞模型;MTT法检测羁糖脂对Hep G2细胞的增殖抑制率;葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-PO... 目的通过体外实验探讨羁糖脂改善2型糖尿病胰岛素抵抗(IR)的作用,并初步探明其作用机制。方法采用1×10-7 mol/L胰岛素诱导Hep G2细胞,建立IR细胞模型;MTT法检测羁糖脂对Hep G2细胞的增殖抑制率;葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法检测羁糖脂对Hep G2 IR细胞葡萄糖吸收的影响;Western blotting法检测胰岛素受体底物1磷酸化丝氨酸p-IRS-1(Ser307)、磷酸酰肌醇-3-激酶(PI3K)、葡萄糖转运体-4(GLUT-4)的表达。结果 Hep G2细胞置于含10-7胰岛素培养液孵育24 h,与对照组比较,葡萄糖吸收水平下降,表明建模成功;30~120μg/m L羁糖脂均能显著增加IR细胞葡萄糖吸收率,显著上调GLUT-4、PI3K蛋白表达水平,显著下调IRS-1 Ser307磷酸化水平。结论羁糖脂能有效增强Hep G2 IR细胞对葡萄糖的消耗能力,推测与上调GLUT-4、PI3K蛋白表达,抑制IRS-1丝氨酸磷酸化相关。 展开更多
关键词 羁糖脂 胰岛素抵抗 HepG2细胞 胰岛素受体底物1磷酸化丝氨酸p-IRS-1(Ser307) 磷酸酰肌醇-3-激酶(PI3K) 葡萄糖转运体-4(GLUT-4)
沙利度胺联合表阿霉素抗人肝癌细胞HepG2体外增殖的影响 被引量:1
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作者 敖曼 肖旭 李青山 《中国肿瘤临床与康复》 2017年第5期545-548,共4页
目的探讨沙利度胺联合表阿霉素抗人肝癌细胞HepG2体外增殖的影响,为肝癌治疗提供依据。方法采用人肝癌细胞株HepG2作为研究对象,共设4组:空白对照组、表阿霉素组(1.0 mg/L)、沙利度胺梯度组(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg... 目的探讨沙利度胺联合表阿霉素抗人肝癌细胞HepG2体外增殖的影响,为肝癌治疗提供依据。方法采用人肝癌细胞株HepG2作为研究对象,共设4组:空白对照组、表阿霉素组(1.0 mg/L)、沙利度胺梯度组(50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml)和联合组(沙利度胺200μg/ml+表阿霉素1.0 mg/L),观察4组用药方案12h、24h、48h和72h时对HepG2细胞的影响,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖抑制效果,采用流式细胞术检查细胞凋亡情况。结果 MTT结果显示,沙利度胺能够有效的抑制HepG2细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性。作用时间为12h,24h和48h时,沙利度胺浓度为200μg/ml的抑制率最高,与其他各浓度比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。作用时间为48h时,除50μg/ml外的其他浓度的沙利度胺的抑制率最高,与其他各时间比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。沙利度胺200μg/ml浓度组和联合组各时间点对HepG2细胞的抑制率比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。各时间点时,联合组的抑制率高于沙利度胺200μg/ml浓度组和表阿霉素组,差异有统计学意义(P〈0.05)。沙利度胺200μg/ml浓度组和联合组的抑制率,48h时最高,与其他各时间点比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。流式细胞术检验结果显示,作用时间为12h和24h时,沙利度胺梯度组对HepG2细胞凋亡指数(AI)影响的比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。沙利度胺浓度为50μg/ml、100μg/ml和200μg/ml时,HepG2细胞凋亡指数比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。各时间点,表阿霉素组、沙利度胺梯度组和联合组对HepG2细胞AI的比较,且联合组的抑制率显著高于其他各组,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。结论沙利度胺具有体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖和促凋亡作用,具有剂量和时间依赖性,可使用沙利度胺联合表阿霉素治疗肝癌。 展开更多
关键词 肝肿瘤 HEPG2细胞株 沙利度胺 表阿霉素 增殖
β干扰素联合全反式维甲酸通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制HepG2人肝癌细胞增殖并促进其凋亡 被引量:9
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作者 赵冀安 聂文佳 +5 位作者 李卫 周小慧 孙会凤 朱俊青 陈进军 彭军路 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期901-905,共5页
目的研究β干扰素(IFN-β)和全反式维甲酸(ATRA)联合应用对HepG2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3(JAK2/STAT3)通路在其中可能的机制。方法分别用1000U/mLIFN-β、10p,mol/LATRA及1000U... 目的研究β干扰素(IFN-β)和全反式维甲酸(ATRA)联合应用对HepG2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3(JAK2/STAT3)通路在其中可能的机制。方法分别用1000U/mLIFN-β、10p,mol/LATRA及1000U/mLIFN-β联合10μmol/LATRA处理HepG2细胞24h,采用MTr法检测HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡。Westernblot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)和磷酸化的信号转导子与转录激活子3(P-STAT3)、维甲酸-干扰索诱导死亡相关基因19(GRIM-19)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax蛋白的表达。结果IFN-β、ATRA作用于细胞后,HepG2细胞增殖受到抑制,同时诱导细胞发生凋亡,IFN-β联合ATRA联合处理作用更强;HepG2细胞中p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达在IFN-β或ATRA作用下减弱,GRIM-19和Bax蛋白表达升高。IFN-β联合ATRA处理作用更强。结论IFN-β联合ATRA通过抑制JAK2/STAT3信号通路抑制HepG2人肝癌细胞的增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 JAK2/STAT3信号通路 Β干扰素 全反式维甲酸 HepG2细胞
一种新型马鹿茸多肽纯化、鉴定及体外降血糖活性 预览 被引量:2
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作者 姜宁 张双健 +2 位作者 朱静 尚靖 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期363-367,共5页
从马鹿茸干品中分离具有降血糖活性的多肽。以新疆塔里木马鹿茸干品为原料,粉碎后经醋酸-醋酸钠(pH 3.5)缓冲液浸提,再经醇沉、超滤、离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相色谱纯化多肽,并对该多肽进行MALDI TOF/MS相对分子质量检测和... 从马鹿茸干品中分离具有降血糖活性的多肽。以新疆塔里木马鹿茸干品为原料,粉碎后经醋酸-醋酸钠(pH 3.5)缓冲液浸提,再经醇沉、超滤、离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相色谱纯化多肽,并对该多肽进行MALDI TOF/MS相对分子质量检测和LC-MS/MS鉴定。MTT法检测促胰岛β细胞增殖和STZ损伤后修复能力以及建立肝细胞胰岛素耐受模型检测该多肽促肝细胞葡萄糖消耗量活性。结果表明,分离纯化得到的多肽CAP经MALDI-TOF/MS检测,其相对分子质量为6 804,LC-MS/MS及相关数据库比对发现,CAP为一种新的肽。CAP能显著促胰岛β细胞的增殖和STZ损伤后的修复,并能显著增加肝细胞的葡萄糖摄入量。 展开更多
关键词 马鹿茸 多肽 胰岛Β细胞 HepG2肝细胞株 降血糖活性
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