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HBV PS1反式激活蛋白2基因对HepG2细胞增殖和凋亡的影响 预览
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作者 鞠蔚华 李钦 +4 位作者 韩铭 刘顺爱 吴君 成军 梁跃东 《重庆医学》 CAS 2019年第12期2001-2005,共5页
目的沉默乙型肝炎病毒(HBV)PS1反式激活蛋白2基因(PS1TP2)对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR(RT-PCR)用于检测PS1TP2基因在不同肝细胞系中基础表达水平。将PS1TP2小干扰RNA(siRNA PS1TP2)及对应的阴性对照小干扰RNA(si... 目的沉默乙型肝炎病毒(HBV)PS1反式激活蛋白2基因(PS1TP2)对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR(RT-PCR)用于检测PS1TP2基因在不同肝细胞系中基础表达水平。将PS1TP2小干扰RNA(siRNA PS1TP2)及对应的阴性对照小干扰RNA(siNC)作为干扰组和对照组分别瞬时转染至HepG2细胞中,培养48 h后,应用CCK-8试剂盒检测两组细胞的增殖活性水平;AnnexinV/7-AAD流式细胞术检测两组细胞凋亡程度;RT-PCR检测两组细胞中PS1TP2、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达水平;Western blot检测两组细胞中Bcl-2、Bax、人腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、雷帕霉素靶蛋白(m-TOR)蛋白水平并计算Bcl-2与Bax的比例。结果 PS1TP2基因在肝癌细胞HepG2中的表达水平明显高于正常肝细胞L02。干扰组HepG2细胞的增殖速率明显慢于对照组。与对照组相比,干扰组的HepG2细胞中Annexin V+细胞数明显升高( P <0.05),HepG2细胞中Bcl-2 mRNA表达量明显下降( P < 0.05 ),Bax mRNA表达量明显上升( P <0.05);同样在干扰组的HepG2细胞中Bcl-2、m-TOR蛋白水平明显下降( P < 0.05 ),而Bax、AMPK蛋白水平则明显升高( P <0.05)。结论干扰掉PS1TP2基因可经过线粒体途径促进HepG2细胞凋亡,可能是通过活化AMPK-m-TOR途径而抑制其增殖。 展开更多
关键词 PS1TP2基因 HEPG2细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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白桦脂酸对HepG2细胞的诱导凋亡作用及其机制 预览
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作者 李豪 周万怡 +1 位作者 吴嘉南 陈启和 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期47-53,共7页
为研究白桦脂酸对人的HepG2细胞的凋亡作用及其机制。采用不同质量浓度的白桦脂酸处理HepG2细胞,MTT法测定白桦脂酸对HepG2细胞增殖影响;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,PI单染法检测细胞周期,罗丹明123检测线粒体膜电... 为研究白桦脂酸对人的HepG2细胞的凋亡作用及其机制。采用不同质量浓度的白桦脂酸处理HepG2细胞,MTT法测定白桦脂酸对HepG2细胞增殖影响;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,PI单染法检测细胞周期,罗丹明123检测线粒体膜电位。MTT分析表明,白桦脂酸可抑制HepG2细胞增殖并呈剂量依赖关系。白桦脂酸对HepG2细胞24,48,72h的半抑制质量浓度IC50分别为52,26,17.5μg/mL。流式细胞仪检测结果表明,用20,30,40μg/mL的白桦脂酸分别处理48h,总凋亡率分别为49.82%,55.575%,57.46%。细胞周期结果表明,随着白桦脂酸质量浓度的增加,G1期的细胞比例下降,S期的细胞比例增加,说明出现S期的阻滞。用质量浓度分别为20,40,80μg/mL的白桦脂酸处理的各组线粒体膜电位分别为83.63,73.63,64.3,与对照组89.25相比,均明显降低,这表明白桦脂酸诱导细胞凋亡可能与线粒体途径有关。白桦脂酸可抑制肝癌HepG2细胞的增值,诱导HepG2细胞凋亡,这一机制可能与线粒体途径有关,通过将细胞阻滞在S期来实现。 展开更多
关键词 白桦脂酸 HEPG2细胞 细胞凋亡 流式细胞 MTT试验 细胞周期 线粒体膜电位
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红藤提取物联合5-氟尿嘧啶抑制肝癌细胞生长作用及机制研究
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作者 陈红 王维 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2115-2120,共6页
目的研究红藤提取物联合5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,以不同质量浓度的红藤提取物作用于细胞,采用MTT法检测其对细胞生长的影响,选择后续实验浓度。将HepG2细胞分为对照组... 目的研究红藤提取物联合5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,以不同质量浓度的红藤提取物作用于细胞,采用MTT法检测其对细胞生长的影响,选择后续实验浓度。将HepG2细胞分为对照组、红藤提取物(40 mg/L)组、5-氟尿嘧啶(10μmol/L)组及联合用药(红藤提取物40 mg/L+5-氟尿嘧啶10μmol/L)组,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)表达水平。结果 MTT检测结果显示,红藤提取物呈质量浓度依赖性地抑制HepG2细胞增殖,选择其质量浓度为40mg/L用于后续实验。与对照组比较,红藤提取物组和5-氟尿嘧啶组细胞增殖抑制率显著升高,G0/G1期细胞比例显著升高,S期和G2/M期细胞比例显著降低,细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白的表达显著降低(P<0.05)。与5-氟尿嘧啶组比较,联合用药能显著抑制HepG2细胞增殖,阻滞细胞周期,抑制细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白表达(P<0.05)。结论红藤提取物联合5-氟尿嘧啶能够增强对HepG2细胞生长的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4蛋白表达水平有关。 展开更多
关键词 红藤 提取物 5-氟尿嘧啶 HEPG2细胞 生长抑制 增殖细胞核抗原、细胞周期蛋白D1 细胞周期依赖性蛋白激酶4
HepaRG和HepG2细胞聚球体的生长形态、细胞色素P450酶和白蛋白表达及对药物肝毒性敏感性的比较
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作者 孟镇锴 李晓旭 +4 位作者 瞿文生 吴纯启 钟武 李云峰 王全军 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期44-53,共10页
目的对比研究人肝祖细胞HepaRG和人肝癌HepG2细胞体外3D聚球体在生长形态、功能蛋白表达和在药物肝毒性检测中敏感性的差异,为体外药物肝毒性检测模型的选择提供实验依据。方法以每孔100个细胞的密度分别将HepaRG和HepG2细胞接种于低吸... 目的对比研究人肝祖细胞HepaRG和人肝癌HepG2细胞体外3D聚球体在生长形态、功能蛋白表达和在药物肝毒性检测中敏感性的差异,为体外药物肝毒性检测模型的选择提供实验依据。方法以每孔100个细胞的密度分别将HepaRG和HepG2细胞接种于低吸附96孔板,构建体外3D肝细胞聚球体。于接种后第3,7,14和21天镜下观察各聚球体的形态,拍照并测定其平均直径;采用实时荧光PCR、免疫荧光染色和Western蛋白印迹法检测2种细胞聚球体中6种细胞色素P450(CYP450)酶和白蛋白mRNA和蛋白表达水平;分别用硫胺素、非阿尿苷、对乙酰氨基酚、苯溴马隆、环磷酰胺、异烟肼和奈法唑酮在2种细胞聚球体上单次或重复给药,采用CCK8法检测细胞存活率,并计算药物半数抑制浓度(IC50)。结果 HepaRG与HepG2细胞聚球体的体积随培养时间延长而增大,接种后第7,14和21天,HepaRG细胞聚球体平均直径分别为317.5,334.3和397.8μm,均小于同期HepG2细胞聚球体(P<0.01);实时荧光PCR结果显示,接种后第7和14天,HepaRG细胞聚球体CYP1A2,CYP2B6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2E1,CYP3A4和白蛋白mRNA表达水平分别上调261.7,55.7,277.1,9.9,44.3,280.7和3.9倍,均高于同期HepG2细胞聚球体(P<0.01);免疫荧光染色和Western蛋白印迹法结果显示,接种后第10天,HepaRG细胞聚球体中CYP1A2,CYP2B6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2E1,CYP3A4和白蛋白的蛋白表达水平分别为同期HepG2细胞聚球体的2.1,1.6,1.9,1.6,1.6,2.2和1.9倍(P<0.05,P<0.01)。重复给药,非阿尿苷、对乙酰氨基酚、苯溴马隆、环磷酰胺、异烟肼和奈法唑酮抑制HepaRG细胞聚球体细胞存活的IC50分别为3.35,2.42,0.37,7.51,3.92和1.11 mmol·L-1,对Hep G2细胞聚球体的IC50分别为36.49,>40,0.87,>20,35.74和2.57 mmol·L-1;单次给药,上述6种药物对2种细胞聚球体细胞存活的IC50均>重复给药IC50,同样对HepRG细胞聚球体的IC50<对HepG2的IC50。结论与HepG2细胞聚球体比较,HepaRG细胞聚球体体� 展开更多
关键词 3D培养 HepaRG细胞 HEPG2细胞 细胞色素P450酶 细胞毒性
抑制ERBB2基因对肝癌HepG2细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响 预览
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作者 顾清 张莉 +2 位作者 张新星 代小松 陈和平 《郑州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2019年第1期19-23,共5页
目的:探讨抑制ERBB2基因表达对肝癌HepG2细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用脂质体法将ERBB2 siRNA转染至肝癌HepG2细胞,记为实验组(ERBB2-siRNA组),以siRNA对照转染的细胞记为阴性对照组(Con-siRNA组),将不经任何处理的细胞... 目的:探讨抑制ERBB2基因表达对肝癌HepG2细胞生长及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用脂质体法将ERBB2 siRNA转染至肝癌HepG2细胞,记为实验组(ERBB2-siRNA组),以siRNA对照转染的细胞记为阴性对照组(Con-siRNA组),将不经任何处理的细胞记为空白对照组。采用qRT-PCR和Western blot法检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测HepG2细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、AKT和p-AKT蛋白表达水平。结果:在HepG2细胞中转染ERBB2siRNA能够抑制ERBB2的表达(P<0.05)。与Con-siRNA组比较,抑制ERBB2的表达后细胞生长和克隆形成能力明显被抑制,细胞周期发生G0/G1期阻滞,细胞中PCNA和p-AKT蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制ERBB2基因表达可抑制肝癌HepG2细胞的生长,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 ERBB2基因 肝癌 HEPG2细胞 细胞生长 PI3K/AKT信号通路
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Trop-2基因在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖的影响 预览
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作者 张健 马海 +2 位作者 杨柳 杨红春 何振兴 《癌症进展》 2019年第16期1902-1906,共5页
目的探讨肿瘤相关钙信号转导蛋白2(Trop-2)基因对肝癌发生发展的影响及作用机制。方法收集10例肝癌患者的肝癌组织标本和癌旁正常组织标本,免疫组织化学染色法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分别检测不同组织中Trop-2蛋白和mRN... 目的探讨肿瘤相关钙信号转导蛋白2(Trop-2)基因对肝癌发生发展的影响及作用机制。方法收集10例肝癌患者的肝癌组织标本和癌旁正常组织标本,免疫组织化学染色法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分别检测不同组织中Trop-2蛋白和mRNA的表达情况;流式细胞术和蛋白质印迹法(Western blot)检测HepG2、HCCLM3、HL-7702细胞中Trop-2蛋白的表达情况;Western blot法检测不同组织和转染后HepG2细胞中Trop-2、蛋白激酶C-α(PKC-α)、磷酸化蛋白激酶C-α(p-PKC-α)和核因子-κB(NF-κB)的表达情况;CCK-8法检测转染后HepG2细胞的增殖率。结果肝癌组织中p-PKC-α、NF-κB、Trop-2蛋白及Trop-2 mRNA的相对表达量均明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01);HCCLM3细胞和HepG2细胞中Trop-2蛋白的相对表达量均明显高于HL-7702细胞(P﹤0.01);Trop-2 siRNA组HepG2细胞中Trop-2、p-PKC-α、PKC-α和NF-κB蛋白的相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05);Trop-2 siRNA组HepG2细胞的增殖率低于阴性对照组(P﹤0.05)。结论Trop-2基因在肝癌组织和肝癌细胞株中均有较高水平的表达,提示其可能是肝癌潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 Trop-2 肝癌 预后 细胞增殖 HEPG2细胞
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姜黄素联合表柔比星对HepG2细胞TIPE2及Foxp3 mRNA表达的影响 预览
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作者 孔丽 金萌 +1 位作者 武博荣 王闪闪 《现代中西医结合杂志》 CAS 2019年第9期913-916,共4页
目的探讨姜黄素联合表柔比星对HepG2肝癌细胞增殖及TIPE2和Foxp3 mRNA表达的影响。方法培养HepG2肝癌细胞,分别应用不同浓度姜黄素、表柔比星、姜黄素联合表柔比星进行干预,应用MTT法检测肝癌细胞抑制率,RT-PCR法检测TIPE2和Foxp3 mRNA... 目的探讨姜黄素联合表柔比星对HepG2肝癌细胞增殖及TIPE2和Foxp3 mRNA表达的影响。方法培养HepG2肝癌细胞,分别应用不同浓度姜黄素、表柔比星、姜黄素联合表柔比星进行干预,应用MTT法检测肝癌细胞抑制率,RT-PCR法检测TIPE2和Foxp3 mRNA表达水平。结果姜黄素和表柔比星均可抑制HepG2细胞增殖,且呈时间和剂量的依赖性;姜黄素联合表柔比星可增强对HepG2细胞的生长抑制作用;而且表柔比星可上调肝癌细胞内TIPE2 mRNA表达并且下调Foxp3 mRNA表达,将表柔比星与姜黄素联合应用后其上调TIPE2 mRNA表达及下调Foxp3 mRNA表达作用较单独应用明显增强。结论姜黄素可增强表柔比星对HepG2肝癌细胞生长的抑制作用及对TIPE2和Foxp3 mRNA的调控。 展开更多
关键词 细胞 HEPG2细胞 姜黄素 表柔比星 TIPE2 FOXP3
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姜黄素对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及相关机制
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作者 崔琦 董延娥 +1 位作者 霍云龙 刘勇 《解剖科学进展》 2019年第4期364-367,共4页
目的探讨姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及其相关机制。方法应用10、20、40、60μmol/L姜黄素处理肝癌细胞株HepG2;采用MTT检测不同浓度的姜黄素对HepG2细胞增殖的影响;运用Transwell侵袭转移实验测定不同浓度的姜黄素对H... 目的探讨姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及其相关机制。方法应用10、20、40、60μmol/L姜黄素处理肝癌细胞株HepG2;采用MTT检测不同浓度的姜黄素对HepG2细胞增殖的影响;运用Transwell侵袭转移实验测定不同浓度的姜黄素对HepG2细胞体外侵袭能力的影响。采用Westernblot方法检测经不同浓度姜黄素处理后,HepG2细胞内细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和E-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达。结果姜黄素能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和体外侵袭能力,且具有显著剂量依赖性。肝癌HepG2细胞中CyclinD1、MMP-2蛋白表达随着姜黄素的浓度的增多而明显的降低,而E-cadherin蛋白表达则随着姜黄素剂量的增多而显著升高。结论姜黄素明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和侵袭转移能力,与下调CyclinD1、MMP-2和上调E-cadherin的蛋白表达相关。 展开更多
关键词 肝癌 姜黄素 细胞周期素D1 基质金属蛋白酶2 E-钙黏素 HEPG2细胞
马齿苋多糖抑制HepG2细胞存活的作用机制 预览
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作者 胡庆娟 牛庆川 +3 位作者 宋皓 白书瑜 贺文杰 李玉萍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第3期38-44,共7页
探讨马齿苋多糖(polysaccharide of Portulaca oleracea L.,POP-A)对HepG2细胞的抑制作用及作用机制。体外培养HepG2细胞,分别用不同浓度的POP-A处理细胞,采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliu... 探讨马齿苋多糖(polysaccharide of Portulaca oleracea L.,POP-A)对HepG2细胞的抑制作用及作用机制。体外培养HepG2细胞,分别用不同浓度的POP-A处理细胞,采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法、荧光定性定量法、免疫印迹法以及反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)法等检测POP-A对HepG2细胞存活率、线粒体膜电位、细胞内钙离子以及相关凋亡蛋白与基因表达的影响。结果表明:当POP-A浓度为1.25、2.5、5 mg/mL时,POP-A能够显著抑制HepG2肝癌细胞、降低线粒体膜电位、增加细胞内的钙离子浓度、提高p53和Bax的基因及蛋白表达。说明POP-A有抑制HepG2肝癌细胞的作用,其作用机制与促进HepG2细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 马齿苋 多糖 HEPG2细胞 细胞存活率 细胞凋亡
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硼酸钠对人肝癌HepG2细胞Hedgehog信号通路蛋白表达的影响 预览
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作者 陈羊 武伦 +3 位作者 魏英 周文波 陈琴华 袁方均 《山东医药》 CAS 2019年第26期9-12,共4页
目的观察硼酸钠对人肝癌HepG2细胞Hedgehog信号通路蛋白表达的影响。方法将HepG2细胞随机分为两组,实验组用4.0 mmol/L硼酸钠处理24 h,对照组不做处理;收集细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中Hedgehog信号通路蛋白Gli2、Pt... 目的观察硼酸钠对人肝癌HepG2细胞Hedgehog信号通路蛋白表达的影响。方法将HepG2细胞随机分为两组,实验组用4.0 mmol/L硼酸钠处理24 h,对照组不做处理;收集细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中Hedgehog信号通路蛋白Gli2、Ptch1、Cyclin D1 mRNA,Western blotting法检测细胞中Hedgehog信号通路蛋白Gli2、Ptch1、Cyclin D1。结果实验组细胞中Gli2、Ptch1、Cyclin D1 mRNA相对表达量分别为0.58±0.05、0.64±0.08、0.35±0.03,相应的蛋白相对表达量分别1.14±0.03、0.93±0.02、1.86±0.02,均低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论硼酸钠可下调人肝癌HepG2细胞中Hedgehog信号通路蛋白的表达,为新型抗肿瘤药物的研发及作用靶点提供了依据。 展开更多
关键词 硼酸钠 HEDGEHOG信号通路 Gli2蛋白 Ptch1蛋白 Cyclin D1蛋白 人肝癌细胞 HEPG2细胞
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miR-21对HepG2细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响 预览
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作者 张小三 张一鸣 +3 位作者 杨树军 戚春辉 刘凯 赵燕 《实用肝脏病杂志》 CAS 2019年第1期21-24,共4页
目的研究miR-21对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能的分子机制。方法体外培养HepG2细胞,并将细胞分为增强组、抑制组和对照组,分别给予Lipofectamine 2000和Hsa-miR-21 mimics(50 nm/L)、Lipofectamine 2000和Has-miR-21 inhibito... 目的研究miR-21对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能的分子机制。方法体外培养HepG2细胞,并将细胞分为增强组、抑制组和对照组,分别给予Lipofectamine 2000和Hsa-miR-21 mimics(50 nm/L)、Lipofectamine 2000和Has-miR-21 inhibitor(100 nm/L)转染或者给予Lipofectamine 2000处理干预。采用Western blot法检测B细胞异位基因2(BTG2)蛋白表达,采用CCK-8法检测细胞增殖,使用流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡变化。结果增强组细胞BTG2蛋白表达水平最低,抑制组细胞BTG2蛋白表达水平最高,对照组细胞BTG2蛋白表达水平强于增强组而低于抑制组,组间差异比较有统计学意义(P<0.05);抑制组细胞增殖率较增强组和对照组明显降低(P<0.05),增强组较对照组明显增强(P<0.05);与增强组或对照组比,抑制组细胞周期S期明显减少(P<0.05),而G2期则明显增多(P<0.05),与对照组比,增强组S期明显增加,而G2期明显较少(P<0.05);与增强组和对照组比,抑制组细胞凋亡率显著增加(P<0.05),而与对照组比,增强组细胞凋亡率显著减少(P<0.05)。结论miR-21可能通过直接靶向调控BTG2表达而影响HepG2细胞的生长,可能成为干预肝癌生长的新途径。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 MIR-21 B细胞异位基因2蛋白 增殖 凋亡 体外
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乙肝病毒S基因Pre-S区突变的人肝癌细胞HepG2稳定株构建及其生物学行为变化 预览
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作者 郑羽飘 钱宝鑫 +4 位作者 覃琴 骆莹 朱争艳 高英堂 王凤梅 《山东医药》 CAS 2019年第2期36-39,共4页
目的构建稳定过表达乙肝病毒(HBV)S基因Pre-S区突变(Pre-S1缺失突变、Pre-S2缺失突变)的HepG2细胞株,并观察该突变对HepG2细胞生物学行为的影响。方法以NCBI中HBV JX661479.1的Pre-S/S片段序列信息为模板,设计并确定Pre-S1突变、Pre-S2... 目的构建稳定过表达乙肝病毒(HBV)S基因Pre-S区突变(Pre-S1缺失突变、Pre-S2缺失突变)的HepG2细胞株,并观察该突变对HepG2细胞生物学行为的影响。方法以NCBI中HBV JX661479.1的Pre-S/S片段序列信息为模板,设计并确定Pre-S1突变、Pre-S2突变的核苷酸序列,采用全基因合成法获得目的片段并定向导入带有FLAG标签的pLVX慢病毒质粒载体(pLenti-CMV-3FLAG-PGK-Puro),PCR、双酶切、Sanger测序技术检测重组质粒中目的片段的准确性。将HepG2细胞随机分为5组,空白对照组不处理,pLVX-vector组、野生型组、Pre-S1突变组、Pre-S2突变组分别感染pLVX-vector、pLVX-Pre-S/S、pLVX-Pre-S1 mut/S、pLVX-Pre-S2 mut/S慢病毒液;利用嘌呤霉素筛选HepG2稳定株,采用Western blotting法鉴定目的蛋白,分别采用克隆形成、细胞划痕试验观察HepG2细胞稳定株增殖、迁移能力。结果构建的pLVX-Pre-S/S、pLVX-Pre-S1 mut/S、pLVX-Pre-S2 mut/S重组表达质粒PCR电泳产物与理论值相符,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后电泳产物与理论值相符;Sanger测序结果显示,pLVX-Pre-S1 mut/S、pLVX-Pre-S2 mut/S突变型除突变序列外,其他序列与HBV S基因野生型序列完全相同。空白对照组HepG2细胞全部死亡,其余组HepG2细胞部分存活。在野生型组、Pre-S1突变组、Pre-S2突变组43 kD分子量位置检测到目的条带表达,而pLVX-vector组无法检测到相应条带。与其他组比较,Pre-S2突变组HepG2的第14天克隆形成数增多、细胞相对迁移距离增大(P均<0.05)。结论成功构建了HBV Pre-S/S基因野生型及Pre-S突变型的HepG2细胞稳定株,HBV的S基因Pre-S2缺失突变导致肝癌HepG2细胞增殖及迁移能力增强。 展开更多
关键词 乙肝病毒 S基因Pre-S突变 肝癌 HEPG2细胞 细胞增殖 细胞迁移
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预知子种子提取物对核糖体蛋白抑制HepG2肝癌细胞增殖调控作用研究
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作者 王枭宇 卢涛 +1 位作者 梁超 方肇勤 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2019年第16期1156-1162,共7页
目的预知子是临床常用抗癌中药,具体作用机制仍不明确.本研究观察预知子种子提取物干预HepG2肝癌细胞后,对核糖体蛋白mRNA、蛋白水平及Mdm2-p53信号通路关键蛋白影响,部分明确预知子抑制肿瘤细胞生长的核糖体蛋白相关作用机制.方法 HepG... 目的预知子是临床常用抗癌中药,具体作用机制仍不明确.本研究观察预知子种子提取物干预HepG2肝癌细胞后,对核糖体蛋白mRNA、蛋白水平及Mdm2-p53信号通路关键蛋白影响,部分明确预知子抑制肿瘤细胞生长的核糖体蛋白相关作用机制.方法 HepG2细胞中分别给予预知子种子提取物对照组0μg/mL、低浓度组375μg/mL和高浓度组750μg/mL,观察对细胞生长活力和周期影响,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测12个核糖体蛋白及p53 mRNA变化,蛋白质印迹法检测典型核糖体蛋白RPS26、RPSA、Mdm2、p53和细胞周期蛋白变化.结果预知子种子提取物干预后,对照组、低浓度组和高浓度组HepG2细胞活力分别为(100.000±1.509、105.060±1.000和61.130±0.700),差异有统计学意义,F=425.760,P<0.001.PCR法检测结果显示,高浓度组RPSA(F=4959.917,P<0.001)、RPS3A(F=725.900,P<0.001)、RPS8(F=350.515,P<0.001)、RPS13(F=198.316,P<0.001)、RPS16(F=41.693,P<0.001)、RPS29(F=536.835,P<0.001)、RPL6(F=119.226,P<0.001)、RPL10(F=49.339,P<0.001)、RPL15(F=35.603,P<0.001)、RPL17(F=188.221,P<0.001)和RPLP0(F=221.837,P<0.001)等11个核糖体蛋白mRNA表达下调,RPS26(F=330.023,P<0.001)mRNA表达上调.蛋白质印迹法结果显示,RPS26(t=7.365,P=0.002)、RPSA(t=4.654,P=0.010)和Mdm2(t=4.048,P=0.016)表达下调,p53蛋白水平(t=3.185,P=0.033)和mRNA水平(t=16.110,P<0.001)表达上调.干预后HepG2细胞S期比例增多,G0/G1期和G2/M期比例减少,细胞进入S期停滞.细胞周期蛋白CCND2(t=6.069,P=0.004)和CCNB1(t=5.481,P=0.005)大幅度下调,CCNE1小幅度下调(t=2.905,P=0.044).结论预知子可能通过上调或下调核糖体蛋白mRNA或蛋白表达,抑制Mdm2并激活p53,诱导HepG2细胞进入S期停滞,抑制HepG2细胞增殖. 展开更多
关键词 预知子 肝癌 HEPG2细胞 核糖体蛋白 Mdm2-p53信号通路
D-松醇复配Mn^2+对HepG2细胞胰岛素抵抗的调节及其作用机制 预览 被引量:1
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作者 王梦 张泽生 +2 位作者 李雨蒙 刘亚萍 张文菱子 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第10期139-144,共6页
采用胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型(IR),研究D-松醇复配Mn^2+对细胞葡萄糖消耗量和糖原合成量的影响。实时荧光全定量分析(RT-PCR)实验检测AMPK信号通路相关基因mRNA表达水平。结果表明当胰岛素浓度为1×10^-3mmol/L,作用... 采用胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型(IR),研究D-松醇复配Mn^2+对细胞葡萄糖消耗量和糖原合成量的影响。实时荧光全定量分析(RT-PCR)实验检测AMPK信号通路相关基因mRNA表达水平。结果表明当胰岛素浓度为1×10^-3mmol/L,作用时间为36 h时,细胞葡萄糖消耗量达到最低,产生最大的胰岛素抵抗效应。与模型对照组相比,当D-松醇浓度为100 mg/L,复配MnSO4为10 mg/L时,葡萄糖消耗量和糖原含量均极显著升高(p<0.01)。此外,复配组AMPKα-1、AMPKα-2和GLUT4基因表达水平均显著上调(p<0.05),G6Pase基因mRNA表达水平显著下调(p<0.05)。D松醇复配Mn^2+可显著促进胰岛素抵抗细胞葡萄糖的利用,增加糖原合成,其作用机制可能涉及AMPK参与的抑制糖异生等生化调控过程起到降血糖作用。 展开更多
关键词 D-松醇 复配 MN^2+ HEPG2细胞 AMPK
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骨髓间充质干细胞条件培养液对H2O2损伤HepG2细胞保护作用的研究 预览
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作者 王东明 邢晓伟 +4 位作者 叶晓梅 陈稚 李宝红 苟占平 吴都督 《广东医科大学学报》 2019年第3期234-239,共6页
目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养液(BMCs-CM)对H2O2损伤HepG2细胞的保护作用。方法用200μmol/LH2O2处理HepG2细胞,构建氧化损伤细胞模型,再用不同含量BMCs-CM处理,检测细胞增殖、乳酸脱氢酶、丙二醛、超氧化物歧化酶、Nrf-2水平。结... 目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养液(BMCs-CM)对H2O2损伤HepG2细胞的保护作用。方法用200μmol/LH2O2处理HepG2细胞,构建氧化损伤细胞模型,再用不同含量BMCs-CM处理,检测细胞增殖、乳酸脱氢酶、丙二醛、超氧化物歧化酶、Nrf-2水平。结果BMCs-CM提高氧化损伤HepG2细胞存活率、超氧化物歧化酶水平(P<0.01),降低乳酸脱氢酶、丙二醛含量(P<0.01);高含量BMCs-CM上调氧化损伤HepG2细胞中Nrf-2蛋白表达(P<0.01)。结论BMCs-CM对H2O2诱导的氧化损伤HepG2细胞有保护作用,其机制可能与Nrf-2蛋白表达有关。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 条件培养液 氧化损伤 HEPG2细胞
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夏枯草醇提物抑制肿瘤细胞的研究 预览
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作者 杨亚冬 罗涛 +2 位作者 杨耿 徐怡朦 张文元 《医学研究杂志》 2019年第1期62-68,共7页
目的采用水提醇沉法将夏枯草成分分成醇溶出部分和醇沉淀部分,并就这两部分药物对肺癌A549细胞和人肝癌HepG2细胞的增殖、迁移作用进行研究。方法采用80%以上的乙醇浓度对夏枯草水煎液进行醇沉法提取,不同生药浓度的夏枯草醇溶物和醇沉... 目的采用水提醇沉法将夏枯草成分分成醇溶出部分和醇沉淀部分,并就这两部分药物对肺癌A549细胞和人肝癌HepG2细胞的增殖、迁移作用进行研究。方法采用80%以上的乙醇浓度对夏枯草水煎液进行醇沉法提取,不同生药浓度的夏枯草醇溶物和醇沉物处理A549细胞和HepG2细胞,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,MTT法检测药物对肿瘤细胞增殖影响,细胞划痕实验检测对细胞迁移的影响。结果MTT检测发现醇沉淀物各浓度抗肿瘤效果呈浓度依赖性,浓度越高,抑制肿瘤细胞增殖的效果越强,浓度<0.25g/ml后基本无抑制作用。醇溶解物组在0.05~1.0g/ml浓度范围内呈“V”字型的抑制作用,在浓度为0.1g/ml时抑制作用最强,<0.05g/ml后基本无抑制作用。细胞形态观察与MTT结果一致,抑制作用越强,细胞圆缩,状态较差,数量少。细胞划痕实验结果发现醇溶物与醇沉物抑制细胞迁移效果呈浓度依赖性,浓度高,抑制迁移效果越强,该结果与MTT检测出现中间某浓度抑制细胞增殖效果最强的结果不一致,且醇溶物对HepG2细胞的抑制迁移效果较A549更强。结论夏枯草各种提取物均可抑制A549细胞和HepG2细胞的增殖和迁移,醇溶物MTT结果显示在一定范围内对A549细胞和HepG2细胞的增殖呈“V”字型的抑制作用。 展开更多
关键词 夏枯草 醇沉法 A549细胞 HEPG2细胞 增殖
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携带AFP启动子凋亡诱导配体基因的间充质干细胞与5-FU联用对HepG2细胞移植瘤的抑制作用
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作者 范冬梅 杨圆圆 +3 位作者 杨铭 颜次慧 熊冬生 苑庆华 《药物生物技术》 CAS 2019年第3期194-198,共5页
利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对Hep G2肝癌原位移植瘤的抑制作用。以克隆载体pUp-AFP、报告基因载体... 利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对Hep G2肝癌原位移植瘤的抑制作用。以克隆载体pUp-AFP、报告基因载体pGL3-basic及慢病毒表达载体pLentiR. ILZ-sTRAIL、pLentiR. Cop GFP为基础,采用PCR、酶切、连接的方法构建AFP启动子特异性驱动TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的载体pLentiR. AFPILZ-sTRAIL及其对照载体p LentiR. AFPCop GFP。利用双荧光素酶法检测Hep G2、MCF-7和3T3细胞中AFP启动子的特异性活性;利用慢病毒感染的方法将HUMSCs标记AFP启动子驱动的Luc(MSC. AFPILZ-sTRAIL),建立Balb/c裸鼠的Hep G2肝癌原位移植瘤模型。应用MSC. AFPILZ-sTRAIL与5-FU联合进行治疗,利用Western blot检测ILZ-sTRAIL蛋白于肿瘤部位的表达,并于治疗后对肝脏中的肿瘤进行测量,同时眼眶取血检测血浆中谷氨酸转氨酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的表达水平。结果表明,成功构建了报告基因载体p GL3-AFP、慢病毒表达载体p LentiR. AFPILZ-sTRAIL及pLentiR. AFPCop GFP,测序正确。AFP启动子在Hep G2细胞中的相对活性为49. 05%±5. 47%,由AFP启动子调控表达ILZ-sTRAIL基因的慢病毒可有效的感染HUMSCs。成功建立了Balb/c裸鼠的Hep G2肝癌原位移植瘤模型,ILZ-sTRAIL蛋白能特异的表达于肿瘤部位。MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组的肿瘤体积明显小于PBS组(P<0. 01),并且效果强于MSC. AFPILZs TRAIL单独治疗组;MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组可见肿瘤细胞固缩、坏死,并有不同程度的淋巴细胞浸润。MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组裸鼠血浆中ALT和AST的表达水平较对照组显著下降,其中ALT下降的更为明显(ALT,P<0. 01;AST,P <0. 05)。这一调控性治疗模式与5-FU联合应用在肝癌原位治疗中取得了良好的治疗效果,为肝癌的基因治疗和临床化疗提供了新思路。 展开更多
关键词 间充质干细胞 TRAIL 5-氟尿嘧啶 HepG2细胞 移植瘤 原位
脂肪细胞共培养对HepG2细胞表达水通道蛋白9的影响及其机制
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作者 黄天洪 李传飞 +2 位作者 邱烈旺 廖盛涛 梅浙川 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期450-456,共7页
目的观察促分化成熟脂肪细胞对肝细胞脂肪变及水通道蛋白9(AQP9)表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法培养人前体脂肪细胞并促分化至完全成熟,将HepG2细胞分别与未促分化脂肪细胞及促分化成熟脂肪细胞共培养48 h,分别标记为对照组... 目的观察促分化成熟脂肪细胞对肝细胞脂肪变及水通道蛋白9(AQP9)表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法培养人前体脂肪细胞并促分化至完全成熟,将HepG2细胞分别与未促分化脂肪细胞及促分化成熟脂肪细胞共培养48 h,分别标记为对照组及实验组。对共培养的HepG2细胞进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量检测,同时检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路变化及AQP9 mRNA和蛋白水平变化情况。实验组在共培养的同时加入100 ng/ml PI3K-Akt通路激动剂重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1),标记为实验组+IGF-1组,蛋白质印迹法(WB)验证PI3K-Akt通路的激活,同时RT-qPCR和WB检测AQP9的表达变化。通过重组慢病毒转染技术将HepG2细胞进行重组慢病毒LV-AQP9或空载体LV-PWPI转染,分别标记为HepG2-AQP9组和HepG2-PWPI组,激光共聚焦检测转染效率,RT-qPCR和WB检测病毒转染后AQP9表达水平的变化,随后将稳定过表达的HepG2-AQP9细胞和空载HepG2-PWPI细胞分别与促分化成熟脂肪细胞共培养48 h,分别标记为HepG2-AQP9共培养组和HepG2-PWPI共培养组,再进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量的检测。最后,向HepG2-AQP9共培养组中加入IGF-1,记为HepG2-AQP9共培养+IGF-1组,进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量的检测,同时验证PI3K-Akt信号通路激活及AQP9 mRNA和蛋白水平变化。两独立样本间的比较用t检验。结果与对照组相比,实验组中胞内脂滴明显增多,且胞内甘油三酯含量(0.052±0.005)显著高于对照组(0.033±0.003)(t=5.225,P=0.006),提示脂肪细胞共培养能够诱导HepG2细胞发生脂肪变性。RT-qPCR和WB结果分别提示实验组中AQP9 mRNA(3.615±0.330)和蛋白(0.072±0.005)的表达水平均显著高于对照组(t值分别为13.708、11.225,P值分别为0.005、<0.001),而WB结果显示实验组中磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达水平(0.116±0.003)明显低于对照组(0.202±0.003 展开更多
关键词 脂肪细胞 HepG2细胞 共培养 水通道蛋白9 胰岛素样生长因子-1
过氧化物酶V在顺铂诱导HepG2肝癌细胞凋亡过程中的调控作用
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作者 宫伊希 谢丹萍 +3 位作者 王闯 刘悦 崔玉东 孙虎男 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第1期95-102,共8页
过氧化物酶V(peroxiredoxin V, Prx V)是过氧化物酶家族(peroxiredoxins, Prxs)中的一员,具有清除细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)的功能。该文主要阐明了Prx V在顺铂(cisplatin, CDDP)诱导Hep G2人肝癌细胞凋亡过程中的调... 过氧化物酶V(peroxiredoxin V, Prx V)是过氧化物酶家族(peroxiredoxins, Prxs)中的一员,具有清除细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)的功能。该文主要阐明了Prx V在顺铂(cisplatin, CDDP)诱导Hep G2人肝癌细胞凋亡过程中的调控作用。该研究利用顺铂处理Hep G2肝癌细胞,通过荧光显微照相、流式细胞术、蛋白质免疫印迹分析等方法检测细胞内活性氧(ROS)水平、细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白水平。研究结果表明,顺铂可引起细胞内的ROS水平升高导致细胞凋亡,同时造成细胞内Prx V蛋白质表达水平下降。利用慢病毒载体过量表达Prx V基因后,顺铂诱导的Prx V过量表达型HepG2细胞凋亡率明显低于Mock组,同时促凋亡蛋白cleavage-Caspase-3、Bad、cleavage-PARP表达水平也明显被下调,说明Prx V在顺铂诱导HepG2细胞凋亡过程中具有一定的抑制作用。该研究初步探究了Prx V在顺铂诱导的HepG2肝癌细胞凋亡过程中的调控作用,为肝癌的治疗研究提供了新的思路和治疗靶点。 展开更多
关键词 过氧化物酶V 顺铂 活性氧 HEPG2细胞 细胞凋亡
HepG2细胞外泌体冲击树突状细胞介导的抗肿瘤作用 预览
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作者 章菊 叶书来 +1 位作者 张昌龙 周倩 《癌变.畸变.突变》 CAS 2019年第1期29-34,共6页
目的:分析来源于肝癌HepG2细胞外泌体的免疫原性物质,为基于树突状细胞(DCs)的肝癌免疫治疗寻找合适的肿瘤抗原提供思路。方法:用透射电镜和Western blot方法鉴定肝癌HepG2细胞外泌体的形态和蛋白表达;用终浓度为8μg/mL的外泌体冲击DCs... 目的:分析来源于肝癌HepG2细胞外泌体的免疫原性物质,为基于树突状细胞(DCs)的肝癌免疫治疗寻找合适的肿瘤抗原提供思路。方法:用透射电镜和Western blot方法鉴定肝癌HepG2细胞外泌体的形态和蛋白表达;用终浓度为8μg/mL的外泌体冲击DCs,流式细胞术检测DCs表面分子的变化;将外泌体冲击的DCs与T淋巴细胞共培养5 d,采用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)荧光染色法检测淋巴细胞增殖,Annexin-V/PI双染法检测淋巴细胞对肿瘤的杀伤效应。结果:肝癌HepG2细胞的外泌体表达CD63、CD81标志性蛋白,同时携带大量的肿瘤抗原甲胎蛋白(AFP)和热休克蛋白HSP70、HSP90,不表达细胞蛋白calnexin。与未成熟DCs组比较,外泌体冲击DCs后上调其表面分子如CD83、CD80、CD86的表达(P<0.01);且可促进T淋巴细胞增殖(P<0.01),增加T细胞介导的肿瘤特异性和非特异性杀伤效应(P<0.01)。结论:肝癌HepG2细胞外泌体可能携带大量肿瘤抗原,刺激DCs成熟,可能是基于DCs的肝癌或其他肿瘤免疫治疗潜在的抗原谱。 展开更多
关键词 外泌体 肝癌 树突状细胞 HEPG2细胞
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