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利用BiFC技术研究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原1结构域Ⅰ与棒状体颈部蛋白2互作关系 预览
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作者 严茗 黄兵 +6 位作者 赵其平 韩红玉 朱顺海 赵宗平 陈婷 吕凌 董辉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期32-38,共7页
为了验证柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1结构域Ⅰ(apical membrance antigen 1 domain I,E tAMA1-DⅠ)与棒状体颈部蛋白2(rhoptry neck protein 2,EtRON2)的互作关系,以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增出492 bp的E t... 为了验证柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1结构域Ⅰ(apical membrance antigen 1 domain I,E tAMA1-DⅠ)与棒状体颈部蛋白2(rhoptry neck protein 2,EtRON2)的互作关系,以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增出492 bp的E tAMA1-DⅠ片段和1395 bp的E tRON2片段,并与pGEM-T-easy载体连接构建相应重组质粒。获得的阳性重组质粒及双分子荧光互补技术的真核表达载体pBiFC-VN155和pBiFC-VC155用E c oRⅠ和B g I II进行双酶切,将E tAMA1-DⅠ、E tRON2分别与pBiFC-VN155、pBiFC-VC155连接,构建真核重组质粒pBiFC-VN155-E tAMA1-DⅠ和pBiFC-VC155-E tRON2。将2个真核重组质粒分别转染BHK细胞进行表达,经间接免疫荧光鉴定,可在BHK细胞中成功表达。将2个真核重组质粒共转染至BHK细胞中,同时将pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(deltaZIP)VC155、pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(delta)VC155共转染至细胞中分别作为阳性和阴性对照组。BiFC结果发现真核重组质粒共转染组和阳性对照组的BHK细胞均产生绿色荧光,而阴性对照组无荧光,表明E tAMA1-DⅠ与E tRON2蛋白之间存在互作关系。本研究结果为深入研究E tAMA1及E tRON2在球虫入侵过程中的功能与作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 顶膜抗原1 棒状体颈部蛋白2 双分子荧光互补技术 互作蛋白
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几种抗球虫药对鸡柔嫩艾美耳球虫病疗效的对比分析 预览
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作者 李星星 顾梦恬 +1 位作者 侯庆明 耿梅 《中国兽药杂志》 2019年第10期55-60,共6页
为研究目前各种球虫药的抗药性提供参考,对试验鸡群混饲给药、自由采食,采用人工感染方式进行试验,设立药物组和对照组。药物组分成5组,受试药物添加剂包括1%海南霉素钠预混剂、12%盐霉素预混剂、20%莫能菌素预混剂、25%尼卡巴嗪预混剂... 为研究目前各种球虫药的抗药性提供参考,对试验鸡群混饲给药、自由采食,采用人工感染方式进行试验,设立药物组和对照组。药物组分成5组,受试药物添加剂包括1%海南霉素钠预混剂、12%盐霉素预混剂、20%莫能菌素预混剂、25%尼卡巴嗪预混剂、0.5%地克珠利预混剂。通过显示,这五种抗球虫药对鸡柔嫩艾美耳球虫都有效,其中以海南霉素的MIC值最高,敏感性最好,其次是莫能菌素、尼卡巴嗪。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 MIC 海南霉素钠 盐霉素 莫能菌素 尼卡巴嗪 地克珠利
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常陆合剂对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫的疗效观察
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作者 图门巴雅尔 王治维 +3 位作者 胡明明 赵志超 刘畅 李磊 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第10期112-116,共5页
为研究常陆合剂对鸡球虫病的防治效果,采用以1×10~5个/mL浓度,对14日龄蛋公雏经口感染柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊液进行模型制备,并与攻虫当天开始饮水给药,试验组按体积百分比分为常陆合剂高(1%)、中(0.75%)、低(0.5%)剂量组,地克... 为研究常陆合剂对鸡球虫病的防治效果,采用以1×10~5个/mL浓度,对14日龄蛋公雏经口感染柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊液进行模型制备,并与攻虫当天开始饮水给药,试验组按体积百分比分为常陆合剂高(1%)、中(0.75%)、低(0.5%)剂量组,地克珠利组(0.02%),不给药攻虫组及不给药不攻虫组,试验周期9 d。结果显示:与不给药攻虫组相比较,所有给药组的鸡盲肠病变形态及病变计分明显下降;所有给药组的鸡存活率均高于不给药攻虫组;所有给药组的相对增重率均高于不给药攻虫组;各组抗球虫指数(ACI)值分别为常陆合剂高剂量组177.33、常陆合剂中剂量组164.57、常陆合剂低剂量组161.14、地克珠利组178.41,均达到中等效力抗球虫药物水平;22日龄,不给药攻虫组的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)值显著高于常陆合剂各剂量组、地克珠利组及不给药不攻虫组(P<0.05),而白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)等指标均显著低于其他各组(P<0.05)。结果表明,常陆合剂作为一种纯中药抗球虫制剂具有良好的抗球虫效果,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 常陆合剂 柔嫩艾美耳球虫 人工感染
几种常见试剂对柔嫩艾美耳球虫卵囊的漂浮效果 预览
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作者 魏红梅 龚振兴 +3 位作者 刘百林 常芳 殷宏 蔡建平 《湖南农业科学》 2019年第7期78-80,共3页
为了研制经济环保的新型鸡球虫卵囊漂浮剂,试验配制了不同浓度的蔗糖溶液,对柔嫩艾美耳球虫卵囊进行漂浮试验。结果显示:0.9~1.2mol/L的蔗糖溶液对球虫卵囊的漂浮效果较好,漂浮率达92%以上,卵囊沉淀时应将蔗糖溶液稀释至0.3mol/L以下。... 为了研制经济环保的新型鸡球虫卵囊漂浮剂,试验配制了不同浓度的蔗糖溶液,对柔嫩艾美耳球虫卵囊进行漂浮试验。结果显示:0.9~1.2mol/L的蔗糖溶液对球虫卵囊的漂浮效果较好,漂浮率达92%以上,卵囊沉淀时应将蔗糖溶液稀释至0.3mol/L以下。试验还选择了几种实验室常见试剂,配制成密度在1.15~1.20g/mL之间的溶液进行柔嫩艾美耳球虫卵囊漂浮回收及孢子化试验,结果显示40%磷酸氢二钾溶液可以替代饱和食盐水和蔗糖溶液用于鸡球虫卵囊的漂浮纯化。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 卵囊 漂浮试剂 漂浮效果
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表面展示柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的侵入型乳酸菌的免疫特性研究
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作者 张赞 刘晶 +4 位作者 高兴 刘洋 姜延龙 王春凤 杨桂连 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期619-624,共6页
为了研究表达pgsA′-EtMIC2融合蛋白的侵入型乳酸菌的免疫特性,将pgsA′-EtMIC2基因片段插入到载体pSIP409-FnBPA中,得到pSIP409-FnBPA-pgsA′-EtMIC2重组质粒,并用电转化的方式转入植物乳杆菌NC8感受态细胞中,构建表面展示EtMIC2蛋白... 为了研究表达pgsA′-EtMIC2融合蛋白的侵入型乳酸菌的免疫特性,将pgsA′-EtMIC2基因片段插入到载体pSIP409-FnBPA中,得到pSIP409-FnBPA-pgsA′-EtMIC2重组质粒,并用电转化的方式转入植物乳杆菌NC8感受态细胞中,构建表面展示EtMIC2蛋白的侵入型乳酸菌。通过检测免疫雏鸡外周血淋巴细胞中CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+T淋巴细胞的发育情况,血清中EtMIC2抗体、IL-4、IL-18、IFN-γ的含量以及肠道灌洗液中IgA的分泌量来评价该侵入型乳酸菌对雏鸡的免疫特性。结果显示,成功构建出携带pSIP409-FnBPA-pgsA′-EtMIC2质粒的重组乳酸菌;雏鸡免疫后外周血淋巴细胞中CD3CD4^+、CD3^+CD8^+T淋巴细胞含量明显升高;EtMIC2抗体、IL-18、IFN-γ细胞因子及IgA产生的水平均显著上升,表明该侵入型乳酸菌具有一定的免疫效力,为后期研究抗球虫的免疫保护效果奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 EtMIC2 FnBPA 侵入型乳酸菌 免疫特性
柔嫩艾美耳球虫对藏鸡和隐性白羽鸡致病性差异分析 预览
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作者 李建梅 刘梅 +2 位作者 沈欣悦 戴亚斌 俞燕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期3058-3064,共7页
为进一步明确柔嫩艾美耳球虫对球虫易感性差异鸡种的致病性,本研究以1×10^5个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的剂量分别感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡,接种后观察记录各组鸡的临床表征、血便记分、死亡率、增重、盲肠病... 为进一步明确柔嫩艾美耳球虫对球虫易感性差异鸡种的致病性,本研究以1×10^5个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的剂量分别感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡,接种后观察记录各组鸡的临床表征、血便记分、死亡率、增重、盲肠病变记分、卵囊产量,并于感染前和感染后3、6和8 d每个品种分别随机选择5只鸡采集抗凝血,应用流式细胞仪(FCAS)检测外周血CD4^+T和CD8^+T淋巴细胞亚群数量。结果显示,柔嫩艾美耳球虫感染后藏鸡相对增重率高于隐性白羽鸡,死亡率、血便记分和盲肠病变记分均低于隐性白羽鸡,但卵囊产量高于隐性白羽鸡。外周血T淋巴细胞亚群变化方面,感染前,藏鸡CD4^+T淋巴细胞数及CD4^+/CD8^+比值均高于隐性白羽鸡。感染后第3天,藏鸡CD4^+、CD8^+T淋巴细胞数及CD4^+/CD8^+比值下降,隐性白羽鸡CD8^+T淋巴细胞数略有下降,CD4^+T淋巴细胞数及CD4^+/CD8^+比值上升,但CD4^+/CD8^+比值仍显著低于藏鸡(P<0.05)。感染后第6天,2个品种鸡CD4^+T淋巴细胞数及CD4^+/CD8^+比值均下降,其中藏鸡表现为显著下降(P<0.05),而隐性白羽鸡仅CD4^+/CD8^+比值显著降低(P<0.05),隐性白羽鸡CD8^+T淋巴细胞数显著升高(P<0.05)。感染后第8天,2个品种鸡CD4^+/CD8^+比值显著下降(P<0.05),藏鸡CD8^+T淋巴细胞数显著高于隐性白羽鸡(P<0.05),但CD4^+/CD8^+比值显著低于隐性白羽鸡(P<0.05)。结果表明,球虫对藏鸡和隐性白羽鸡的致病性存在差异,这种差异与T淋巴细胞介导的免疫应答反应密切相关。 展开更多
关键词 藏鸡 隐性白羽鸡 柔嫩艾美耳球虫 致病性 T淋巴细胞亚群
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柔嫩艾美耳球虫AMA1基因DNA疫苗的免疫保护效果 预览
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作者 王晔 赵其平 +6 位作者 朱顺海 董辉 姜连连 薛璞 舒凡帆 黄兵 韩红玉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第6期1-9,共9页
本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真... 本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真核表达重组质粒p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ。将重组质粒p CAGGS-Et AMA1转染进293T细胞中,经间接免疫荧光和Western blot实验鉴定,观察其在体外表达情况。将p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ于7日龄和14日龄腿部肌肉注射免疫雏鸡,21日龄人工感染1×10^4个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,第29日龄时处死试验鸡,以平均增重、卵囊产量和病变记分来评价重组质粒的免疫保护效果。结果显示,p CAGGS-Et AMA1转染的293T细胞出现明显的红色荧光;两种真核表达重组质粒免疫组鸡的平均增重与未攻虫组的平均增重差异不显著,不具有统计学意义,而未免疫攻虫组则与未攻虫组在增重方面差异具有显著统计学意义;免疫组鸡相较于未免疫攻虫组在病变记分方面显著下降;免疫组的卵囊减少率分别为67.43%和72.89%;p CAGGSEt AMA1-IFN-γ组在增重、盲肠病变记分和卵囊减少率方面都优于p CAGGS-Et AMA1组,但差异不具有统计学意义。表明构建的2种重组质粒对雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染有一定的免疫保护效果。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 AMA1基因 真核表达 免疫保护效果
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柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶特性分析
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作者 刘桂玲 朱顺海 +6 位作者 赵其平 董辉 黄兵 赵焕之 李志行 王璐 韩红玉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1315-1323,共9页
为了研究柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶(EtNADP-GDH)的分子特性,对该基因进行了克隆和生物信息学分析,利用间接免疫荧光定位、体外入侵抑制、实时荧光定量PCR、Western-blot和体外酶活性检测等方法分析其生物学特性。结果显示,... 为了研究柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶(EtNADP-GDH)的分子特性,对该基因进行了克隆和生物信息学分析,利用间接免疫荧光定位、体外入侵抑制、实时荧光定量PCR、Western-blot和体外酶活性检测等方法分析其生物学特性。结果显示,成功获得了EtNADP-GDH基因,该基因编码的蛋白富含包括NAD结合位点在内的多种功能位点。该蛋白主要分布在虫体的表面和细胞质中,抗rENADP-GDH多克隆抗体能抑制子孢子入侵DF-1细胞,抑制率约为45%,表明其参与了虫体入侵宿主细胞。荧光定量PCR结果显示,该基因在未孢子化卵囊阶段的转录水平最高;转录、翻译水平分析发现,与敏感株相比,2个耐药株(地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株)中EtNADP-GDH的转录水平显著提高,而翻译水平无明显差异;酶活性分析结果显示,耐药株和敏感株差异不明显。结果表明,该蛋白可能对虫体在宿主细胞内的生长发育起作用并参与了子孢子入侵宿主细胞的过程。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 NADP特异性谷氨酸脱氢酶 差异表达 耐药性
京海黄鸡白介素8基因5′调控区单核苷酸多态性及其与柔嫩艾美耳球虫抗性指标的关联性 预览
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作者 王晓慧 于海亮 +7 位作者 邹文斌 糜长浩 戴国俊 张涛 张跟喜 谢恺舟 王金玉 施会强 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1262-1269,共8页
【目的】研究白介素8(IL-8)基因5′调控区单核苷酸突变对鸡柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)抗性指标的影响。【方法】本试验利用DNA直接测序技术,检测京海黄鸡IL-8基因5′调控区单核苷酸多态性(SNPs),并对5′调控区的SNPs突变前后的转录因... 【目的】研究白介素8(IL-8)基因5′调控区单核苷酸突变对鸡柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)抗性指标的影响。【方法】本试验利用DNA直接测序技术,检测京海黄鸡IL-8基因5′调控区单核苷酸多态性(SNPs),并对5′调控区的SNPs突变前后的转录因子进行预测,然后分析SNPs与柔嫩艾美耳球虫抗性指标的关联性。【结果】测序结果表明:IL-8基因5′调控区共检测到3个突变位点(T-550C、G-398T和T-360C),均形成了3种基因型,杂合度在0.436~0.471,PIC值在0.25~0.50,均属于中度多态,且3个突变位点均处于哈代-温伯格平衡状态。生物信息学分析表明:3个突变位点均改变了其原有的转录因子结合位点。关联分析显示:T-550C突变位点的TC型个体的IL-8表达量与TT型差异显著,TC型GSH-PX、CAT、IL-2、IL-6、IFN-γ指标均高于其他2种基因型,但差异不显著。G-398T突变位点的TT型个体SOD活性和GT型个体CAT活性均显著高于GG型;TT型个体NO含量与GG型差异极显著,与GT型差异显著;TT型IL-2表达量显著高于GT型。T-360C突变位点的TT型和TC型个体SOD活性与CC型差异极显著或差异显著;TT型和TC型个体的NO含量均显著高于CC型;TT型个体的IL-2、IL-8表达量均显著高于CC型。【结论】G-398T和T-360C突变位点的TT型个体球虫抗性优于其他基因型个体,T-550C突变位点的杂合型个体球虫抗性优于纯合型个体,表明IL-8基因5′调控区的突变对球虫抗性指标有显著的调控作用,可作为球虫病抗性鸡新品种或新品系的育种参考依据。 展开更多
关键词 京海黄鸡 柔嫩艾美耳球虫 白介素8基因 5′调控区SNPs 抗性指标
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柔嫩艾美耳球虫穿孔素样蛋白基因的原核表达与亚细胞定位
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作者 王文青 蒋保余 +5 位作者 曲自刚 刘保红 肖星星 马雪婷 许笑 蔡建平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1406-1414,共9页
为了研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)穿孔素样蛋白(EtPLP)在球虫感染中与宿主相互作用关系,首次成功获得EtPLP1(1932 bp)和EtPLP2(4215 bp)2个目的基因。通过表达纯化得到2个大小分别为37和67 ku的目的蛋白,Western-blot结果显示其反应... 为了研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)穿孔素样蛋白(EtPLP)在球虫感染中与宿主相互作用关系,首次成功获得EtPLP1(1932 bp)和EtPLP2(4215 bp)2个目的基因。通过表达纯化得到2个大小分别为37和67 ku的目的蛋白,Western-blot结果显示其反应原性良好。通过免疫荧光技术,观察到EtPLP1定位在子孢子顶端。mRNA转录水平检测结果显示,EtPLP1在子孢子阶段的表达量最高,其次是第1代裂殖子阶段,EtPLP2 mRNA水平在第1代裂殖子阶段表达量最高,其次是第2代裂殖子阶段;它们在其他阶段表达量极低或不表达。结果表明EtPLP1和EtPLP2可能参与虫体入侵与逸出宿主细胞,为EtPLPs蛋白功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 穿孔素样蛋白 MRNA水平 亚细胞定位
柔嫩艾美耳球虫SSADH基因的克隆原核表达与序列分析 被引量:1
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作者 霍晨阳 廖申权 +7 位作者 戚南山 李娟 吴彩艳 吕敏娜 林栩慧 胡俊菁 孙铭飞 李国清 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第9期1131-1138,共8页
为研究柔嫩艾美耳球虫琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)的生物学功能,参考已公布的柔嫩艾美耳球虫SSADH(EtSSADH)的基因序列设计特异性引物,运用RT—PCR方法扩增EtSSADH基因序列,将扩增产物克隆入pGEX-4T-1载体进行诱导表达。同时,利用... 为研究柔嫩艾美耳球虫琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)的生物学功能,参考已公布的柔嫩艾美耳球虫SSADH(EtSSADH)的基因序列设计特异性引物,运用RT—PCR方法扩增EtSSADH基因序列,将扩增产物克隆入pGEX-4T-1载体进行诱导表达。同时,利用在线软件对该基因编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,EtSSADH基因的ORF序列长1896bp,编码631个氨基酸;该编码蛋白主要定位于线粒体,不含信号肽,无跨膜结构域;将EtSSADH与不同物种SSADH氨基酸序列进行比对,发现该蛋白的氨基酸序列之间具有较强的保守性。诱导表达后获得分子质量约91.18ku的重组蛋白。EtSSADH基因的成功克隆与表达为该酶的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 琥珀酸半醛脱氢酶 基因克隆 原核表达 序列分析
青蒿散抗鸡球虫药效研究 预览 被引量:2
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作者 牛彪 秦文文 +5 位作者 郭文柱 张璞俊 马莉平 黄鑫 刘宇 梁剑平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第6期1683-1691,共9页
为探讨青蒿散对鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的防治效果,本试验选取90只健康黄羽肉鸡,分为6组,除空白对照组外,其余各组(感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组)试验鸡均经口感染6×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,... 为探讨青蒿散对鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的防治效果,本试验选取90只健康黄羽肉鸡,分为6组,除空白对照组外,其余各组(感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组)试验鸡均经口感染6×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,各试验组在接种前一天开始用药至试验结束。记录各组试验鸡的眼观病变、组织病理学检查、相对增重率、盲肠病变记分、血便记分、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊值及抗球虫指数(ACI)指标,评价青蒿散不同给药浓度的抗球虫效果。结果显示,空白对照组、感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组的抗球虫指数分别为200.00、72.23、157.19、82.89、125.32和137.06,与感染对照组相比,药物对照组和青蒿散各剂量组的眼观病变、组织病理学检查均有所缓解,青蒿散能减轻病鸡盲肠的肿胀和出血等症状,且病鸡精神状态较感染对照组好;与感染对照组相比,各给药组的平均增重均有所升高,盲肠病变、卵囊值及血便情况减少。综上所述,青蒿散能缓解柔嫩艾美耳球虫侵染鸡盲肠所致的病理症状和组织病变,减少粪便中卵囊的排出数量,有一定的抗球虫效果,且给药浓度越高抗球虫效果越好,具有剂量依赖性。 展开更多
关键词 青蒿散 柔嫩艾美耳球虫 抗鸡球虫 抗球虫指数
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E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗的构建及保护力分析 被引量:2
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作者 张召兴 张香斋 +6 位作者 李蕴玉 丁咚 张志强 吴同垒 贾青辉 张艳英 李佩国 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期77-81,共5页
为了构建E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗,并确定其抗球虫效力。采用RT-PCR方法分别克隆出鸡IL-2和E.tenella河北株EtMIC-2基因,并连接到pMD18-T载体上进行测序;将目的基因克隆到pcDNA3.0载体,构建重组质粒peDNA3.0-IL-... 为了构建E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗,并确定其抗球虫效力。采用RT-PCR方法分别克隆出鸡IL-2和E.tenella河北株EtMIC-2基因,并连接到pMD18-T载体上进行测序;将目的基因克隆到pcDNA3.0载体,构建重组质粒peDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,并转染293T细胞,用Westernblot方法验证表达。将构建的重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗以50,100,150ug/只的剂量分别在14,21日龄胸肌注射免疫试验鸡,除阴性对照组外,28日龄时经口灌服孢子化E.tenella卵囊4×10 4个,研究其对E.tenella感染后的免疫保护效果。结果表明:成功构建了重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,且能在293T细胞中表达出融合蛋白;3个免疫组的ACI比阳性对照组分别提高了97.63%,127.02%和129.81%,其中免疫剂量为100,150ug时,ACI均达160以上,具有良好的免疫保护效果。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 EtMIC-2基因 IL-2基因 DNA疫苗
柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1与微线蛋白-2相互作用的鉴定
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作者 王旭 宫鹏涛 +2 位作者 李建华 杨举 张西臣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期267-273,共7页
目的研究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1(EtAMA1)与微线蛋白-2(EtMIC2)之间的相互作用。方法以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增EtAMA1和EtMIC2基因,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-EtAMA1及捕获载体pGADT7-EtMIC2并转化Y2HGold酵... 目的研究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1(EtAMA1)与微线蛋白-2(EtMIC2)之间的相互作用。方法以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增EtAMA1和EtMIC2基因,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-EtAMA1及捕获载体pGADT7-EtMIC2并转化Y2HGold酵母菌中,观察酵母在营养缺陷选择培养基上的生长情况。原核表达GST-EtAMA1和His-EtMIC2融合蛋白,纯化后进行GST-Pulldown试验。同时构建真核表达载体pcDNA3.1-HisEtAMA1和pcDNA3.1-HA-EtMIC2并转染HEK-293T细胞,收集细胞裂解液,进行免疫共沉淀试验。在此基础上构建双分子荧光互补载体pEtAMA1-Myc-LC151和pEtMIC2-HA-KN151并转染HEK-293T细胞,激光共聚焦观察转染细胞荧光发生情况。结果诱饵基因和捕获基因均对酵母双杂交系统无自激活和毒性作用,pGBKT7-EtAMA1/pGADT7-EtMIC2共转化菌能激活酵母双杂交报告系统;原核表达并纯化GST-EtAMA1和His-EtMIC2融合蛋白进行GST-Pulldown试验,二者可在体外相互作用;EtAMA1和EtMIC2可在HEK-293T细胞中共表达,免疫共沉淀试验进一步证实二者间的相互作用;双分子荧光互补技术验证EtAMA1和EtMIC2在细胞内存在相互作用。结论通过酵母双杂交、GST-Pulldown、免疫共沉淀及双分子荧光互补技术验证柔嫩艾美耳球虫顶膜抗-1(EtAMA1)与微线蛋白-2(EtMIC2)之间存在相互作用,这为揭示微线蛋白在鸡球虫入侵宿主细胞过程中的分子机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 顶膜抗原-1 微线蛋白-2 柔嫩艾美耳球虫 蛋白相互作用 免疫共沉淀
E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗免疫原性及抗氧化能力 被引量:2
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作者 李蕴玉 张召兴 +4 位作者 李佩国 张香斋 丁咚 贾青辉 张艳英 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期911-916,共6页
为了确定柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗的免疫原性与抗氧化能力,将240只14日龄雏鸡随机分成8组,每组30只,Ⅰ、Ⅱ组分别为阳性对照组和阴性对照组,Ⅲ、Ⅳ组在14、21日龄分别肌肉注射100μg的pcDNA3.0-... 为了确定柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗的免疫原性与抗氧化能力,将240只14日龄雏鸡随机分成8组,每组30只,Ⅰ、Ⅱ组分别为阳性对照组和阴性对照组,Ⅲ、Ⅳ组在14、21日龄分别肌肉注射100μg的pcDNA3.0-IL-2、pcDNA3.0-EtMIC-2,V、Ⅵ、Ⅶ组在14、21日龄分别肌肉注射50,100,150μg的pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,Ⅷ组在21日龄免疫鸡球虫活疫苗;28日龄时,除Ⅱ组外,每只鸡接种4×10 4个E.tenella卵囊。结果显示:各免疫组鸡的外周血T淋巴细胞转化率、血清EtMIc-2抗体水平以及血清T-SOD、GSH—Px和T-AOC活性较Ⅰ、Ⅱ组均呈现升高趋势,其中当pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2重组质粒的免疫剂量达100μg/只时,使试验21d的外周血T淋巴细胞转化率、14,21,28d的血清EtMID2抗体水平和T—AOC活性,14,21d的血清GSH-Px活性以及14d的血清T-SOD活性均显著高于阴性对照组、阳性对照组、单独免疫pcDNA3.0—IL-2和pcDNA3.0-Et—MIC-2组(P〈0.05)。结果表明:IL-2可增强EtMIC-2基因的免疫原性和抗氧化能力,适量的pcDNA3.0-IL-2-Et—MIC-2重组质粒可显著提高机体的细胞与体液免疫水平以及抗氧化能力,达到抗球虫的效果。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 重组DNA疫苗 免疫原性 抗氧化能力
感染柔嫩艾美耳球虫藏鸡和隐性白羽鸡血清生化指标变化比较
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作者 李建梅 刘梅 +2 位作者 沈欣悦 程旭 戴亚斌 《中国家禽》 北大核心 2018年第2期15-19,共5页
为从病理生理角度探究宿主抗球虫感染的机制,对藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)后的血清生化指标变化进行了比较分析。26日龄藏鸡和隐性白羽鸡均设感染组和非感染对照组,每组40只。感染组每只鸡经嗉囊接种1mL... 为从病理生理角度探究宿主抗球虫感染的机制,对藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)后的血清生化指标变化进行了比较分析。26日龄藏鸡和隐性白羽鸡均设感染组和非感染对照组,每组40只。感染组每只鸡经嗉囊接种1mL含1×10 5个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊悬液。感染后第0、3、6、8天,分别测定感染组和对照组鸡的14项血清生化指标。结果表明:藏鸡血清球蛋白含量于感染后第3天升高,而隐性白羽鸡则显著下降(P〈0.05);藏鸡血清白蛋白含量于感染后第6天起显著降低(P〈0.05),隐性白羽鸡则在感染后第3天显著升高(P〈0.05);2个品种鸡血清碱性磷酸酶含量于感染后第6天起明显下降,其中隐性白羽鸡显著下降(P〈0.05)。藏鸡血清叫一谷氨酰基转移酶含量于感染后第6天显著下降(P〈0.05),而隐性白羽鸡则表现为升高趋势;两个品种鸡血清甘油三酯含量于感染后第6天明显下降,其中藏鸡显著下降(P〈0.05);藏鸡血清尿酸含量在感染后第3天显著上升,隐性白羽鸡则在感染后第8天显著下降(P〈0.05);藏鸡和隐性白羽鸡血清P 3+浓度分别于感染后第3和6天显著升高(P〈0.05);其余指标亦有升高或降低,但与对照组间无显著差异。提示鸡感染柔嫩艾美耳球虫后心、肝未受到严重损害,肾功能受到一定程度的影响,肠道受损较为严重,且隐性白羽鸡肠道受损程度较藏鸡严重。 展开更多
关键词 藏鸡 隐性白羽鸡 柔嫩艾美耳球虫 血清生化指标
青蒿琥酯对鸡柔嫩艾美尔球虫子孢子侵入DF-1细胞的影响 预览 被引量:1
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作者 焦金英 赵昕 +3 位作者 承南 刘明江 李金贵 夏前贤 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期147-151,共5页
为研究青蒿琥酯(ARS)对柔嫩艾美耳球虫子孢子(SP)侵入DF-1细胞的影响,本实验利用ARS分别处理SP和DF-1细胞,前者经特定荧光标记后,流式细胞仪检测细胞凋亡、SP线粒体膜电位和侵入率。结果显示,ARS(2.5μmol/L)处理DF-1细胞12... 为研究青蒿琥酯(ARS)对柔嫩艾美耳球虫子孢子(SP)侵入DF-1细胞的影响,本实验利用ARS分别处理SP和DF-1细胞,前者经特定荧光标记后,流式细胞仪检测细胞凋亡、SP线粒体膜电位和侵入率。结果显示,ARS(2.5μmol/L)处理DF-1细胞12h与未处理组相比,细胞凋亡率无明显差异。与空白对照组相比,ARS直接处理sP2h,可使sP线粒体膜电位下降33.97±8.40%,并使其对细胞的侵入率下降4.13±3.97%。ARS直接处理细胞2h和12h后,再加入SP,则其侵入率分别下降7.23±2.74%和53.67±0.74%。细胞和SP混合后用ARS处理12h,其侵入率下降56.30±1.81%。若在ARS处理的同时加入凋亡抑制剂米酵菌酸,可以使SP的侵入率提高9.70±0.60%(p〈0.01)。这表明ARS作用于细胞后对SP侵入的抑制作用更为明显,并具有显著的时间效应。本研究为青蒿素类药物抗球虫作用机理研究提供实验依据。 展开更多
关键词 青蒿琥酯 柔嫩艾美尔球虫 子孢子 侵入率
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碳离子束辐照处理对牛至精油微胶囊的缓释特性及抗鸡球虫病活性的影响
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作者 陶蕾 梁妍 +8 位作者 周翔 姜婷婷 李雪虎 衣云鹏 辛志君 陆锡宏 赵凤舞 崔燕 梁剑平 《原子核物理评论》 CSCD 北大核心 2018年第2期179-188,共10页
利用不同剂量的碳离子束辐照处理牛至精油微胶囊,研究对其缓释特性及抗鸡球虫病活性的影响。研究结果表明,通过碳离子束处理的牛至精油微胶囊,其主要活性成分百里香酚和香芹酚含量未发生变化,辐照处理后反应收率及产品的生物活性均提高... 利用不同剂量的碳离子束辐照处理牛至精油微胶囊,研究对其缓释特性及抗鸡球虫病活性的影响。研究结果表明,通过碳离子束处理的牛至精油微胶囊,其主要活性成分百里香酚和香芹酚含量未发生变化,辐照处理后反应收率及产品的生物活性均提高,其中400 Gy剂量处理的牛至精油微囊的收率和生物活性均最高,收率达68.44%。通过对感染柔嫩艾美耳球虫的小鸡喂食后,其盲肠和十二指肠肿胀明显减轻,血液性内容物明显减少,血便指数在感染的第七天已降为0,抗球虫指数(ACI)达到179.39。 展开更多
关键词 碳离子 牛至精油 微胶囊 柔嫩艾美耳球虫
复方苦参对鸡球虫病疗效研究 被引量:2
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作者 王婕然 姜晓文 +2 位作者 于文会 王娜 黄京爱 《中兽医医药杂志》 2018年第2期53-57,共5页
通过人工感染柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,制备鸡球虫病模型,考察复方苦参的临床疗效。将90只15日龄试验鸡随机分为6组,分别为中药治疗组(高、中、低)、西药治疗组、感染组和空白组。攻虫后第4天开始给药,中药组给予相应浓度的苦参药液1... 通过人工感染柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊,制备鸡球虫病模型,考察复方苦参的临床疗效。将90只15日龄试验鸡随机分为6组,分别为中药治疗组(高、中、低)、西药治疗组、感染组和空白组。攻虫后第4天开始给药,中药组给予相应浓度的苦参药液1 mL,西药组用百球清,按说明书给予相应剂量,连续3 d,1次/d。对试验鸡肠道病变记分、血便记分、免疫器官指数、抗球虫指数、氧化及抗氧化指标进行测定,评价其治疗效果。结果显示,中剂量组复方中药治疗效果最好,存活率达到100%,相对增重率为92%,抗球虫指数为186,肠道病变记分结果和血便记分结果最低。复方苦参能够提高感染柔嫩艾美耳球虫病雏鸡抗氧化能力,使雏鸡血清和组织中的CAT、NOS、SOD、GSH-Px活性增强,NO、MDA含量降低。提示复方苦参对鸡柔嫩艾美耳球虫病疗效确实,优于百球清,连续用药3 d可有效治疗鸡球虫病,中药生药浓度为0.75 g/mL时治疗效果最佳。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 复方苦参 治疗
柔嫩艾美耳球虫伴侣蛋白TCP-1亚基α的特性和功能初步分析 预览 被引量:1
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作者 陈婷 黄兵 +6 位作者 赵其平 董辉 朱顺海 赵宗平 吕凌 严茗 韩红玉 《中国动物传染病学报》 北大核心 2018年第2期40-48,共9页
柔嫩艾美耳球虫是一种重要的寄生于鸡盲肠细胞内的寄生原虫,可引起危害严重的鸡球虫病。目前,对鸡球虫病的预防和治疗主要依靠抗球虫药,而药物的广泛使用使球虫产生了严重的耐药性。为研究球虫耐药性产生的机制,本实验室前期对诱导的地... 柔嫩艾美耳球虫是一种重要的寄生于鸡盲肠细胞内的寄生原虫,可引起危害严重的鸡球虫病。目前,对鸡球虫病的预防和治疗主要依靠抗球虫药,而药物的广泛使用使球虫产生了严重的耐药性。为研究球虫耐药性产生的机制,本实验室前期对诱导的地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株和亲本敏感株进行转录组测序,经分析发现TCP-1亚基α为耐药株和敏感株的差异表达基因且在耐药株上调表达。本文以柔嫩艾美耳球虫敏感株为模板,成功克隆出TCP-1亚基α基因,构建了原核表达重组质粒pET-EtTCP-1α,并成功诱导表达了重组蛋白rEtTCP-1α,用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔和BALB/C小鼠获得多克隆抗体。用荧光定量PCR和Westernblot方法检测柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株TCP-1亚基α基因的mRNA转录和翻译水平,同时检测了该基因在球虫不同发育阶段的转录水平和翻译水平。结果显示,EtTCP-1α在2个耐药株的mRNA转录和蛋白翻译水平明显高于敏感株,而且该蛋白在第二代裂殖子的表达最高;间接免疫荧光实验显示该蛋白主要位于子孢子和第二代裂殖子表面,当虫体入侵DF-1细胞进行裂殖生殖后,该蛋白分布于整个虫体,且表达量明显升高。因此,推测EtTCP-1α在柔嫩艾美耳球虫细胞内的生长发育和耐药性的产生过程中发挥了一定的作用。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 TCP-1亚基α 耐药性
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