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补肾壮筋汤联合盐酸氨基葡萄糖对大鼠膝软骨缺损修复机制探讨
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作者 李宇 王伟 李爽 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第17期43-49,共7页
目的:研究中药补肾壮筋汤联合西药盐酸氨基葡萄糖作用于大鼠,观察大鼠膝软骨缺损修复过程中中西医药物的联合应用是否能够更为有效的促进大鼠膝软骨缺损的修复,为膝软骨损伤能够得到更好的治疗提供新的理论依据及方法。方法:将SPF级大鼠... 目的:研究中药补肾壮筋汤联合西药盐酸氨基葡萄糖作用于大鼠,观察大鼠膝软骨缺损修复过程中中西医药物的联合应用是否能够更为有效的促进大鼠膝软骨缺损的修复,为膝软骨损伤能够得到更好的治疗提供新的理论依据及方法。方法:将SPF级大鼠(64只)随机分为5组,sham组,模型组,补肾壮筋汤组(7.5 g·kg-1·d-1),盐酸氨基葡萄糖组(7.5 g·kg-1·d-1),补肾壮筋汤联合盐酸氨基葡萄糖组[(7.5+7.5) g·kg-1·d-1]对大鼠进行药物灌胃,通过大体观察、扫描电镜观察4,8,12周鼠膝软骨缺损修复情况;实时荧光定量PCR (Real-time PCR)检测各组Ⅱ型胶原(CollagenⅡ),聚集蛋白聚糖(Aggrecan) mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CollagenⅡ蛋白表达。结果:4,8,12周与模型组比较,补肾壮筋汤联合盐酸氨基葡萄糖组软骨缺损处透明软骨填充,钻孔处软骨修复平整、光滑,与周边软骨组织融合为一体,明显优于其他各组;Real-time PCR,Western blot结果显示,与模型组比较,4,8,12周各给药组CollagenⅡ,Aggrecan mRNA和蛋白的表达显著增高(P<0.01),补肾壮筋汤联合盐酸氨基葡萄糖组与补肾壮筋汤组、盐酸氨基葡萄糖组比较增高最为显著(P<0.01);通过扫描电镜观察与模型组比较,补肾壮筋汤联合盐酸氨基葡萄糖组可见软骨缺损处虽然可见缺损边界,再生软骨组织表面平坦,基本与周边正常软骨组织融合,结构形态已趋于正常软骨组织,明显优于其他各组。结论:中西医药物联合应用能够明显促进大鼠膝软骨缺损的修复,从mRNA及蛋白表达水平及微观结构分析了中西医结合治疗软骨损伤的可能机制。 展开更多
关键词 补肾壮筋汤 盐酸氨基葡萄糖 关节软骨 型胶原 聚集蛋白聚糖
阿仑膦酸钠干预膝关节炎大鼠Wnt通路及Ⅱ型胶原蛋白的实验机制研究 预览
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作者 邓斌 王锡奕 +5 位作者 许冬青 康书鹏 张广波 庄鑫泓 王晓跃 许镇文 《中国医学创新》 CAS 2019年第21期25-30,共6页
目的:观察阿仑膦酸钠(ALN)对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞的影响,探讨ALN治疗膝关节炎的机制。方法:取4周龄SPF级SD大鼠15只关节软骨细胞原代培养并传至第3代,将第3代软骨细胞平均分为3组:空白对照组(SD CON)软骨细胞用常规D... 目的:观察阿仑膦酸钠(ALN)对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞的影响,探讨ALN治疗膝关节炎的机制。方法:取4周龄SPF级SD大鼠15只关节软骨细胞原代培养并传至第3代,将第3代软骨细胞平均分为3组:空白对照组(SD CON)软骨细胞用常规DMEM完全培养液培养5 d;IL-1β诱导组(SD IL-1β)软骨细胞用10 ng/mL重组人IL-1β培养2 d后更换为常规DMEM完全培养液培养3 d;IL-1β+ALN组(SD IL-1β+ALN)软骨细胞用10 ng/mL重组人IL-1β培养2 d后更换为浓度为1×10-6mol/L的ALN培养3 d。培养后取细胞进行比较观察,检测各组中CollagenⅡ、Wnt3a、Wnt5a及Wnt16的变化。结果:CollagenⅡ、Wnt3a、Wnt5a和Wnt16在软骨细胞中均有表达,经ALN处理后软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白增加。Wnt3a在空白对照组和IL-1β诱导组表达比较,差异无统计学意义(P>0.05),在IL-1β+ALN组中表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);Wnt5a在IL-1β诱导组中的表达量明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ALN处理后,表达量降低,但仍高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Wnt16在IL-1β诱导组中表达量明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ALN处理后表达量升高,但仍低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ALN可能通过Wnt信号通路提高Wnt3a、Wnt16的表达与降低Wnt5a的表达,间接影响RANKL/RANK/OPG信号系统,并影响下游MMP-13、β-catenin及CollagenⅡ蛋白的表达来共同调节破骨细胞和成骨细胞的动态平衡,从而保护软骨和软骨下骨。 展开更多
关键词 阿仑膦酸钠 WNT信号通路 型胶原蛋白 骨关节炎 大鼠
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吉非替尼对骨折愈合中Ⅰ、Ⅱ及Ⅹ型胶原基因表达的影响 被引量:1
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作者 袁功武 兰生辉 +2 位作者 曾文波 刘曦明 聂宇 《中国矫形外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期939-944,共6页
[目的]观察表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂吉非替尼对大鼠股骨骨折愈合中Ⅰ、Ⅱ及Ⅹ型胶原基因表达的影响。[方法]应用大鼠股骨骨折模型,选择48只雄性4周龄SD大鼠随机分为实验组与对照组,实验组通过灌胃予以溶于0.5%甲基纤维... [目的]观察表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂吉非替尼对大鼠股骨骨折愈合中Ⅰ、Ⅱ及Ⅹ型胶原基因表达的影响。[方法]应用大鼠股骨骨折模型,选择48只雄性4周龄SD大鼠随机分为实验组与对照组,实验组通过灌胃予以溶于0.5%甲基纤维素的吉非替尼100 mg/(kg·d),对照组予以0.5%甲基纤维素。术后7、14、21、28 d取血清、骨痂组织及股骨,行ELISA检测血清PINP及CTX,实时荧光定量PCR测定Ⅰ、Ⅱ及Ⅹ型胶原mRNA的表达,同时采用改良Masson染色对骨痂组织中的胶原蛋白进行组织学观察。[结果]Ⅰ型胶原mRNA表达于术后7、14 d高于对照组,Ⅱ型胶原mRNA表达于术后14、21 d高于对照组,Ⅹ型胶原mRNA表达于术后7、14、21 d高于对照组(P〈0.05);血清PINP含量于骨7、14、21 d高于对照组,血清CTX含量在第7 d高于对照组(P〈0.05);并且改良Masson染色显示实验组第7、14、21 d基质中胶原纤维量多。[结论]通过吉非替尼抑制EGFR信号通路,增加了早期骨折部位骨痂中Ⅰ、Ⅱ及Ⅹ型胶原mRNA的含量,促进了早期骨痂中Ⅰ、Ⅱ及Ⅹ型胶原基因的表达。 展开更多
关键词 EGFR信号通路 吉非替尼 骨折愈合 Ⅰ型胶原 型胶原 Ⅹ型胶原
丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响
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作者 宋奕 朱寅 丁道芳 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2018年第9期1-4,共4页
目的:探讨不同浓度丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:提取新生SD大鼠原代软骨细胞,并通过Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光进行鉴定,取P1代细胞进行实验,共设5组,其中1组设为空白对照组,另外4组分别用6.25μmol/... 目的:探讨不同浓度丹参酮ⅡA对软骨细胞Ⅱ型胶原及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:提取新生SD大鼠原代软骨细胞,并通过Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光进行鉴定,取P1代细胞进行实验,共设5组,其中1组设为空白对照组,另外4组分别用6.25μmol/L,12.5μmol/L,25μmol/L及50μmol/L浓度丹参酮ⅡA对其进行干预,24h后通过蛋白印迹分析法(Western Blot)检测软骨细胞Ⅱ型胶原及β-catenin蛋白的表达情况。结果:随着丹参酮ⅡA浓度的增加,Ⅱ型胶原蛋白表达增加,12.5μmol/L,25μmol/L及50μmol/L丹参酮ⅡA组Ⅱ型胶原蛋白量均较对照组增高(P〈0.05),且Ⅱ型胶原蛋白量与丹参酮ⅡA浓度呈正相关(r=0.949,P〈0.001),各丹参酮ⅡA组β-catenin蛋白量均较对照组降低(P〈0.05),且β-catenin蛋白量与丹参酮ⅡA浓度呈负相关(r=-0.949,P〈0.001)。结论:丹参酮ⅡA可抑制Wnt/β-catenin信号通路,促进软骨细胞Ⅱ型胶原表达,延缓软骨细胞退变。 展开更多
关键词 丹参酮A 软骨细胞 型胶原 WNT/Β-CATENIN信号通路
加味独活寄生合剂对膝关节骨性关节炎关节液中IL-1、NO、Sox9及CollagenⅡ的影响 被引量:1
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作者 张永辉 欧梁 +1 位作者 邝高艳 卢敏 《中华中医药杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期3710-3712,共3页
目的:观察加味独活寄生合剂对膝关节骨性关节炎(膝骨关节炎)关节液中自细胞介素-1(IL-1)、NO、Sox9及胶原蛋白(CollagenⅡ)的影响,探讨加味独活寄生合剂对膝骨关节炎关节软骨的保护机制。方法:选择湖南中医药大学第一附属医院... 目的:观察加味独活寄生合剂对膝关节骨性关节炎(膝骨关节炎)关节液中自细胞介素-1(IL-1)、NO、Sox9及胶原蛋白(CollagenⅡ)的影响,探讨加味独活寄生合剂对膝骨关节炎关节软骨的保护机制。方法:选择湖南中医药大学第一附属医院骨伤科门诊的膝骨关节炎患者60例,按照随机数字表法,随机对照分为两组,加味独活寄生合剂组(治疗组)和独活寄生合剂组(对照组),两组患者口服药物均为每次62.5mL,每天2次,治疗时间为6周,观察两组患者用药前后视觉模拟疼痛评分(VAS)和西安大略和麦玛斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)的改变,同时抽取治疗前后关节液,采用ELISA法检测IL-1、NO、Sox9及CollagenⅡ并进行本组治疗前后和两组间对比。结果:治疗后两组患者VAS评分和WOMAC评分均明显降低(P〈0.05),且加味独活寄生合剂组临床效果改善更佳(P〈0.05);治疗后两组关节液中IL-1、NO含量明显降低(P〈0.05),Sox9及Collagen11含量明显升高(P〈0.05),且两组组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:加味独活寄生合剂能够有效的缓解膝骨关节炎患者的临床症状,同时能够降低炎性因子IL-1、NO,增加Sox9、CollagenⅡ蛋白的含量,促进关节软骨的增殖修复,这也许是加味独活寄生合剂治疗膝骨关节炎的分子机制。 展开更多
关键词 加味独活寄生合剂 膝骨关节炎 IL-1 NO SOX9 COLLAGEN
Ⅱ型胶原蛋白联合碳酸钙和骨化三醇治疗糖皮质激素诱导的骨质疏松症的临床疗效探析 预览
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作者 张丹丹 王梦 +2 位作者 赵成军 李若松 姚颖 《中国医刊》 CAS 2018年第9期989-992,共4页
目的探讨Ⅱ型胶原蛋白治疗糖皮质激素诱导的骨质疏松症的临床疗效及可能作用机制。方法选取2015年10月至2016年6月在华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科就诊,诊断为糖皮质激素诱导的骨质疏松症的30例患者作为研究对象,随机分为... 目的探讨Ⅱ型胶原蛋白治疗糖皮质激素诱导的骨质疏松症的临床疗效及可能作用机制。方法选取2015年10月至2016年6月在华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科就诊,诊断为糖皮质激素诱导的骨质疏松症的30例患者作为研究对象,随机分为实验组和对照组,各15例。对照组给予碳酸钙和骨化三醇治疗,实验组在对照组基础上联合Ⅱ型胶原蛋白治疗。观察两组患者治疗前后骨密度及血清骨钙素等骨转化标志物的变化。结果治疗4个月后,两组患者腰椎及股骨颈骨密度值均增加,且实验组增加更为显著,两组差异有显著性(P〈0.05)。与对照组比较,实验组患者的血清骨钙素水平明显升高(P〈0.05)。两组血钙、血磷、血清碱性磷酸酶治疗前后组内及组间比较差异均无显著性(P〉0.05)。结论Ⅱ型胶原蛋白能升高血清骨钙素水平,增加骨密度,联合碳酸钙和骨化三醇可有效治疗糖皮质激素诱导的骨质疏松症,且安全性好。 展开更多
关键词 糖皮质激素 骨质疏松症 型胶原蛋白 骨钙素 骨密度
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染料木素对人骨关节炎软骨细胞增殖活性和蛋白分泌的影响 预览
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作者 胡炯 王国强 +2 位作者 刘启明 董黎强 罗统富 《实用药物与临床》 CAS 2018年第7期737-740,共4页
目的探讨染料木素在延缓骨关节炎关节软骨退变中对软骨细胞增殖活性以及分泌Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的影响。方法用白细胞介素1β(IL-1β)处理正常人软骨细胞形成骨关节炎模型,用染料木素及戊酸雌... 目的探讨染料木素在延缓骨关节炎关节软骨退变中对软骨细胞增殖活性以及分泌Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的影响。方法用白细胞介素1β(IL-1β)处理正常人软骨细胞形成骨关节炎模型,用染料木素及戊酸雌二醇处理骨关节炎软骨细胞,将细胞分为6组,A组:软骨细胞组(对照组);B组:软骨细胞+IL-1β处理组;C组:软骨细胞+IL-1β+染料木素(25μg/ml)处理组;D组:软骨细胞+IL-1β+染料木素(50μg/ml)处理组;E组:软骨细胞+IL-1β+染料木素(100μg/ml)处理组;F组:软骨细胞+IL-1β+戊酸雌二醇(100μg/ml)处理组。CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测各组collagenⅡ、MMP-13蛋白水平。结果①甲苯胺蓝染色显示,培养的软骨细胞呈异染性,证实为人软骨细胞。②正常人软骨细胞经浓度10ng/ml的IL-1β处理后,Western blot检测显示,MMP-13蛋白含量升高,collagenⅡ蛋白含量降低,差异有统计学意义(P〈0.01),证实此种骨关节炎模型造模方法可行。③染料木素能显著增强骨关节炎软骨细胞的增殖活力,且与时间呈正相关,尤其是在72 h时,浓度为100μg/ml的染料木素对关节炎软骨细胞的增殖活性促进作用最强,差异有统计学意义(P〈0.05)。④料木素能显著升高骨关节炎软骨细胞表达collagenⅡ的水平,降低MMP-13的水平。结论浓度为100μg/ml的染料木素处理关节炎软骨细胞在72 h时对细胞作用最为显著,能够增强软骨细胞活力,同时刺激collagenⅡ的合成分泌,抑制MMP-13的表达。 展开更多
关键词 染料木素 人骨关节炎软骨细胞 增殖活性 型胶原蛋白 基质金属蛋白酶-13
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CDMP-1诱导骨髓间充质干细胞分化成髓核细胞的实验研究
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作者 徐斌武 邵斌 +10 位作者 朱世杰 叶志炜 彭龙海 李晨 艾江波 陈伟才 程细高 殷明 周荣平 罗军 顾玉荣 《中国骨与关节损伤杂志》 2018年第11期1153-1156,共4页
目的 探讨软骨衍生形态发生蛋白-1(CDMP-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核细胞分化,并检测其诱导的细胞是否具有髓核细胞分泌细胞外基质的功能。方法 BMSCs采用0 ng/ml(对照组)以及10 ng/ml(观察组)的CDMP-1处理,将正... 目的 探讨软骨衍生形态发生蛋白-1(CDMP-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核细胞分化,并检测其诱导的细胞是否具有髓核细胞分泌细胞外基质的功能。方法 BMSCs采用0 ng/ml(对照组)以及10 ng/ml(观察组)的CDMP-1处理,将正常椎间盘髓核细胞作为阳性对照组。BMSCs诱导后采用PCR检测Ⅰ型、Ⅱ型胶原基因水平表达,用Western Blot法检测Ⅱ型胶原蛋白水平的表达。采用阿尔辛蓝染色及定量比较蛋白多糖含量的变化。结果 PCR检测结果发现,观察组和对照组中Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原均有增加,而阳性对照组中Ⅱ型胶原明显比观察组更少。基因水平检测结果发现,CDMP-1诱导BMSCs分化后Ⅱ型胶原基因表达比正常髓核细胞还高。观察组中Ⅱ型胶原的蛋白水平表达明显比阳性对照组和对照组细胞更高,对照组中Ⅱ型胶原蛋白水平表达几乎很少。阿尔辛蓝染色结果发现,观察组蛋白多糖含量稍高于阳性对照组,但差异无统计学意义(P〉0.05);阳性对照组与观察组蛋白多糖含量均高于对照组,差异有统计学意义(P 〈0.05)。结论 CDMP-1能够诱导BMSCs向髓核细胞分化,具有髓核细胞分泌细胞外基质的功能。 展开更多
关键词 软骨衍生形态发生蛋白-1 骨髓间充质干细胞 髓核细胞 型胶原 蛋白多糖
独活寄生汤对兔膝骨性关节炎关节液中白介素-1β、肿瘤坏死因子-α和Ⅱ型胶原的影响 被引量:10
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作者 冯雍 邹季 《湖北中医药大学学报》 2017年第1期15-18,共4页
目的观察独活寄生汤对兔膝骨性关节炎关节液中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)表达水平的影响,探讨其治疗骨性关节炎的机制。方法将40只实验用新西兰大白兔分五组,即空白对照组、模型组、独... 目的观察独活寄生汤对兔膝骨性关节炎关节液中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)表达水平的影响,探讨其治疗骨性关节炎的机制。方法将40只实验用新西兰大白兔分五组,即空白对照组、模型组、独活寄生汤低剂量组、高剂量组和玻璃酸钠组,每组各8只,采用改良伸直位石膏固定兔膝关节造模,造模后立即干预,独活寄生汤组浓缩液给药,每日1次;对照组关节内注射玻璃酸钠注射液,0.5m L/关节,1周1次,造模8周,采用双抗体夹心酶免疫吸附法(ELISA)和免疫组化法,分别测定兔膝关节液中的IL-1β、TNF-α表达水平以及Collagen II的表达水平。结果兔膝骨性关节炎造模后,兔的Mankin评分明显升高(P〈0.01),独活寄生汤和玻璃酸钠可降低Mankin评分(P〈0.01),且两者的比较差异无显著意义(P〉0.05)。结论独活寄生汤可以通过降低关节液中IL-1β、TNF-α的水平以及保护Collagen II以对兔膝骨性关节炎起到防治作用; 展开更多
关键词 骨性关节炎 独活寄生汤 白细胞介素-1Β 肿瘤坏死因子-A 型胶原
不同浓度TGF-β1对人髓核细胞外基质成分基因表达的调控作用比较 预览
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作者 张荣峰 孙新君 +1 位作者 张超 阮狄克 《实用医药杂志》 2017年第1期43-45,共3页
目的 研究在体外培养条件下,不同浓度转化生长因子-β1(TGF-β1)对人髓核细胞聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原及SOX-9基因表达的调控作用。方法 以传2代人髓核细胞为研究对象,分别以0.1μg/L、1.0μg/L、10μg/L、100μg/L四种浓... 目的 研究在体外培养条件下,不同浓度转化生长因子-β1(TGF-β1)对人髓核细胞聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原及SOX-9基因表达的调控作用。方法 以传2代人髓核细胞为研究对象,分别以0.1μg/L、1.0μg/L、10μg/L、100μg/L四种浓度的TGF-β1为培养液,设不含生长因子培养液为对照组,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Aggrecan、Ⅱ型胶原和SOX-9 m RNA表达情况。结果 0.1μg/L TGF-β1组与对照组相比,无显著性差异。1μg/L、10μg/L和100μg/L TGF-β1组在促进Aggrecan、Ⅱ型胶原和SOX-9基因表达方面作用显著,差异均具统计学意义。其中,10μg/L组促进细胞m RNA表达作用最明显。结论 TGF-β1能够促进髓核细胞Aggrecan、Ⅱ型胶原和SOX-9基因的表达,提示TGF-β1有可能在椎间盘退行性疾患的预防和治疗中发挥重要作用。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 髓核细胞 基因表达 聚集蛋白聚糖 型胶原 SOX-9基因
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牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响 被引量:1
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作者 陈世宣 冯伟 +4 位作者 卢远坚 李安琪 张增乔 刘益杰 曹彦俊 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2017年第10期6-10,共5页
目的:探讨牛蒡子苷元(Arctigenin,ARC-G)对软骨细胞的增殖,及对Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ,Col Ⅱ)、Y染色体性别决定相关高泳动蛋白盒基因9(SRY-related high mobility group-box gene 9,SOX9)和基质金属蛋白酶-13(Matrix Metallopr... 目的:探讨牛蒡子苷元(Arctigenin,ARC-G)对软骨细胞的增殖,及对Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ,Col Ⅱ)、Y染色体性别决定相关高泳动蛋白盒基因9(SRY-related high mobility group-box gene 9,SOX9)和基质金属蛋白酶-13(Matrix Metalloproteinase-13,MMP-13)表达的影响。方法:体外分离培养软骨细胞,取第1代细胞进行实验干预。实验分为空白组(ARC-0组)、低浓度牛蒡子苷元组(ARC-L组)和高浓度牛蒡子苷元组(ARC-H组)。各组分别予相应干预措施处理48h后,以SABC免疫细胞化学染色法观察Col Ⅱ的表达情况;以CCK-8法检测软骨细胞的增殖情况;以Real-time quantitative PCR检测Col Ⅱ,SOX9及MMP-13 mRNA的表达情况;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中Col Ⅱ的含量。结果:1)ARC-L组和ARC-H组的Col Ⅱ阳性染色强度均强于ARC-0组,其中ARC-H组染色最强;2)与ARC-0组相比,在不同时间点ARC-L组和ARC-H组均可促进软骨细胞的增殖,且ARC-H组促增殖作用更显著,除24h和96h的ARC-L组外其余各时间点差异均有统计学意义(P〈0.05);3)与ARC-0组相比,ARC-L组和ARC-H组均可上调ColⅡ和SOX9 mRNA的表达,下调MMP-13 mRNA的表达,且ARC-H组作用更为显著,除ARC-L组Col Ⅱ及MMP-13 mRNA外,差异均有统计学意义(P〈0.05);4)与ARC-0组相比,ARC-L组和ARC-H组均可促进Col Ⅱ蛋白的表达,且ARC-H组作用更为显著,除ARC-0组和ARC-L组外,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论:牛蒡子苷元可通过上调SOX9和Col Ⅱ mRNA的表达,下调MMP-13 mRNA的表达以促进Col Ⅱ蛋白的合成。 展开更多
关键词 膝骨性关节炎 软骨细胞 牛蒡子苷元 型胶原 基质金属蛋白酶-13
六味地黄汤含药血清对兔软骨细胞表型的影响 预览
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作者 庞佳佳 黄正 金昊雷 《西部中医药》 2017年第3期16-18,共3页
目的:探讨六味地黄汤含药血清对关节软骨细胞增殖及表型的影响。方法:无菌条件分离新生24小时胎兔长骨干骺端透明软骨,用酶消化法分离原代关节软骨细胞,取P_2代软骨细胞分别种于96孔板(用于细胞增殖实验)和6孔板(用于细胞分泌性蛋... 目的:探讨六味地黄汤含药血清对关节软骨细胞增殖及表型的影响。方法:无菌条件分离新生24小时胎兔长骨干骺端透明软骨,用酶消化法分离原代关节软骨细胞,取P_2代软骨细胞分别种于96孔板(用于细胞增殖实验)和6孔板(用于细胞分泌性蛋白检测),设置空白对照组、正常兔血清组和六味地黄汤含药血清组,每组4个复孔。连续干预96小时后,CCK8法测定细胞增殖情况,ELISA法测定各组培养上清中Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,colⅡ)、糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量。结果:干预结束后,CCK8法测定正常兔血清组和六味地黄汤含药血清组OD值均高于空白对照组,六味地黄汤含药血清组OD值高于正常兔血清组,差异均具有统计学意义(P〈0.05);ELISA法检测六味地黄汤含药血清组colⅡ、GAG含量均高于空白对照组,差异均具有统计学意义(P〈0.05);与正常兔血清组比较,六味地黄汤含药血清组GAG含量高于正常兔血清组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论:六味地黄汤含药血清可以促进体外培养兔关节软骨细胞的增殖,促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原和GAG,从而更好地维持软骨细胞表型。 展开更多
关键词 软骨细胞 型胶原 糖胺聚糖 六味地黄汤含药血清
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一株小麦内生链格孢霉代谢产物对兔膝软骨细胞的影响 被引量:1
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作者 赵玉濛 谢晓燕 +5 位作者 贺兵 胡锦涛 成博伦 张枫 张燕 殷红 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期924-930,共7页
本研究选择分离自青海大骨节病区小麦麦穗中的一株优势内生链格孢霉,探究其代谢产物对兔软骨细胞的影响。通过显微形态学观察和ITS序列分析鉴定菌种;其代谢产物采用75%乙醇提取,然后依次用石油醚、乙酸乙酯、乙醚萃取;methylthiazolyldi... 本研究选择分离自青海大骨节病区小麦麦穗中的一株优势内生链格孢霉,探究其代谢产物对兔软骨细胞的影响。通过显微形态学观察和ITS序列分析鉴定菌种;其代谢产物采用75%乙醇提取,然后依次用石油醚、乙酸乙酯、乙醚萃取;methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide(MTT)法检测兔软骨细胞存活率;反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription and polymerase chain reaction)检测软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的mRNA表达量;甲苯胺蓝染色法(toluidine blue,TB)和免疫组化染色法(immunological histological chemistry,IHC)分别检测蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的表达。经鉴定实验菌株(编号13-8-A)为互隔链孢霉(Alternaria alternate)。与对照组相比,实验组中的乙醇粗提物能抑制软骨细胞生长,对蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的表达及其mRNA的表达量均有抑制作用;其他萃取分部提取物都能不同程度地损伤软骨细胞,但它们对这两种蛋白的表达及其mRNA表达量的抑制均弱于相同浓度下乙醇粗提物的处理。互隔链孢霉13-8-A代谢产物中应该存在多种可以损伤软骨细胞且可能具有协同作用的物质。 展开更多
关键词 大骨节病 内生真菌 代谢产物 软骨细胞 型胶原蛋白 蛋白聚糖
大鼠尾椎间盘髓核细胞的分离、培养与鉴定 预览 被引量:2
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作者 朱厚毅 王运涛 +3 位作者 王锋 时睿 康新桂 崔佳瞿 《东南大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2016年第1期1-6,共6页
目的:利用单纯Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠尾椎间盘获取髓核细胞,拓展组织工程髓核细胞的获取途径。方法:单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离培养大鼠尾椎间盘髓核细胞,镜下观察细胞形态,行HE、甲苯胺蓝、免疫组化及免疫荧光染色鉴定观察;取原代和... 目的:利用单纯Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠尾椎间盘获取髓核细胞,拓展组织工程髓核细胞的获取途径。方法:单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离培养大鼠尾椎间盘髓核细胞,镜下观察细胞形态,行HE、甲苯胺蓝、免疫组化及免疫荧光染色鉴定观察;取原代和传代细胞行细胞活性检测;取P1代细胞检测,绘制生长曲线并行细胞周期分析。结果:成功分离出大鼠尾椎间盘髓核细胞。P0代细胞中包含多角形类软骨样细胞、体积大且胞浆中含有大量空泡的脊索样细胞;经传代纯化后最终得到较高纯度的软骨样髓核细胞。台盼蓝细胞活力测定P0代活力高达99%,到P3代细胞活力稍下降,为95%~97%。细胞生长曲线及周期测定示P1代细胞有较强增殖潜能,活力旺盛。胞浆内蛋白聚糖被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫组化呈阳性,表现为黄褐色沉淀;Ⅱ型胶原免疫荧光染色示强阳性表达。结论:大鼠尾椎髓核组织可以提供代谢旺盛、维持类软骨表型的髓核细胞。 展开更多
关键词 尾椎间盘 髓核细胞 型胶原 组织工程
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软骨脱细胞基质-Ⅱ型胶原纳米支架复合BMSC修复兔关节软骨缺损的实验研究 预览 被引量:2
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作者 蒋婷 杨泽龙 李小兵 《组织工程与重建外科》 2016年第5期281-284,共4页
目的观察软骨脱细胞基质(Cartilage acellular extracellular matrix,CAEM)一1I型胶原(C0llagen Ⅱ,COLⅡ)纳米支架,复合骨髓基质干细胞(Bonemarrow stem cells,BMSCs)修复兔关节软骨缺损的效果。方法CAEM和COLⅡ按质量比l:... 目的观察软骨脱细胞基质(Cartilage acellular extracellular matrix,CAEM)一1I型胶原(C0llagen Ⅱ,COLⅡ)纳米支架,复合骨髓基质干细胞(Bonemarrow stem cells,BMSCs)修复兔关节软骨缺损的效果。方法CAEM和COLⅡ按质量比l:l混合,通过静电纺丝技术制备组织工程纳米支架。将第二代BMSCs种植到该支架上,培养箱内静置2h。12只日本大耳白兔随机分为实验组和对照组.将细胞支架复合物植入实验组兔膝关节软骨缺损处.对照组仅行膝关节软骨缺损建模。12周后实验动物取材,大体观察修复效果.并行HE染色、Ⅱ型胶原染色观察。结果大体观察见实验组软骨缺损修复良好,对照组软骨缺损处由肉芽样组织充填。HE染色显示,实验组关节软骨缺损处可见软骨陷窝形成.对照组关节软骨缺损处仅有纤维组织充填。实验组修复区Ⅱ型胶原染色为阳性,对照组为阴性。结论CAEM-COLⅡ纳米支架复合BMSC.对兔关节软骨缺损具有较好的修复能力.具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 组织工程 型胶原 软骨脱细胞基质 软骨缺损 骨髓基质干细胞
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软骨脱细胞基质-Ⅱ型胶原制备组织工程软骨纳米支架的实验研究 预览 被引量:3
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作者 蒋婷 杨泽龙 +1 位作者 李小兵 冯刚 《西部医学》 2016年第8期1056-1059,1064共5页
目的探索软骨脱细胞基质CAEMⅡ型胶原(COLⅡ)通过静电纺丝法制备组织工程纳米支架的可行性。方法将兔肋软骨脱细胞、脱脂、酶解后干燥获得CAEM,再将CAEM和COLⅡ按质量比1:2的比例混合,通过静电纺丝技术制备组织工程纳米支架,通过... 目的探索软骨脱细胞基质CAEMⅡ型胶原(COLⅡ)通过静电纺丝法制备组织工程纳米支架的可行性。方法将兔肋软骨脱细胞、脱脂、酶解后干燥获得CAEM,再将CAEM和COLⅡ按质量比1:2的比例混合,通过静电纺丝技术制备组织工程纳米支架,通过测定其吸水率、降解率等检测支架的理化性能,用CCK8法评价其细胞毒性及粘附性情况。结果CAEM—COLⅡ纳米支架纤维直径为(627±165.4)nm,吸水率为(623.0±27.4)%,35天降解率为(45.6±5.8)%,CCK8法检测结果显示cAEMCOLⅡ复合支架对软骨细胞具有良好的粘附性,生物学性能良好。结论CAEM—COLⅡ纳米支架能为软骨细胞的生长和增殖提供优良的微环境,在组织工程软骨重建中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 组织工程纳米支架 型胶原 软骨脱细胞基质 静电纺丝
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低频脉冲电磁场影响超顺磁性氧化铁纳米颗粒标记BMSCs的增殖和成软骨分化
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作者 方楚玲 龚望球 +3 位作者 黄婉静 周彬 栗园 田京 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第6期662-666,共5页
目的:探讨外加低频脉冲电磁场(low frequency pulsed electromagnetic fields,LFPEMFs)对超顺磁性氧化铁纳米颗粒(superparamagnetic iron oxide nanoparticle,SPIO)标记的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells... 目的:探讨外加低频脉冲电磁场(low frequency pulsed electromagnetic fields,LFPEMFs)对超顺磁性氧化铁纳米颗粒(superparamagnetic iron oxide nanoparticle,SPIO)标记的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和成软骨分化的影响。方法体外培养BMSCs并进行SPIO标记。将SPIO标记的细胞分为4组并给予不同干预:LFPEMFs组,成软骨诱导组,LFPEMFs+成软骨诱导组,对照组。采用CCK8检测各组细胞的增殖情况,PCR及免疫荧光染色检测BMSCs成软骨分化水平。结果 CCK8检测表明,LFPEMFs刺激促进细胞增殖;分化培养21 d时,LFPEMFs+成软骨诱导组细胞的Aggrecan和CollagenⅡ表达量明显高于对照组(P〈0.05)。结论 LFPEMFs刺激可以促进SPIO标记的BMSCs的增殖和成软骨分化。 展开更多
关键词 LFPEMFs BMSCS 增殖 AGGRECAN Collagen
“三步五法”对椎间盘胞外基质系统的调控作用 被引量:2
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作者 林建平 陈少清 +4 位作者 林先钊 陈艺敏 郑其开 陈乐春 王诗忠 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期4087-4090,共4页
目的:观察"三步五法"对大鼠腰椎间盘组织collagenⅡ、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)与金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达的影响。方法:将45只SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组。纤维环穿刺法建立椎间盘退变模型,正常组、... 目的:观察"三步五法"对大鼠腰椎间盘组织collagenⅡ、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)与金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达的影响。方法:将45只SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组。纤维环穿刺法建立椎间盘退变模型,正常组、模型组不予干预,治疗组予"三步五法"干预。疗程结束后,取出椎间盘组织,在光镜下观察椎间盘组织的形态学结构,并运用Western blot技术检测collagenⅡ、MMP-1、TIMP-1的蛋白表达。结果:光镜下观察椎间盘组织形态学结构,发现退变程度由轻至重依次为正常组、治疗组、模型组。collagenⅡ、TIMP-1蛋白表达的组间比较,模型组、治疗组较正常组明显减少(P〈0.05),治疗组较模型组明显增多(P〈0.05);MMP-1蛋白表达的组间比较,模型组、治疗组较正常组明显增多(P〈0.05),治疗组较模型组明显减少(P〈0.05)。结论:"三步五法"通过调控椎间盘细胞外基质系统延缓了椎间盘退变。 展开更多
关键词 三步五法 椎间盘 细胞外基质 Collagen 基质金属蛋白酶-1 金属蛋白酶组织抑制剂-1
青海大骨节病区小麦内生镰刀菌和硒对兔膝软骨细胞的影响 被引量:4
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作者 张燕 张枫 +4 位作者 谢晓燕 贺兵 赵玉濛 胡锦涛 殷红 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期2067-2074,共8页
小麦内生镰刀菌5-5-1菌株是从青海大骨节病区穗期小麦籽粒中分离的一株优势内生镰刀菌,本试验通过采用干重法测定菌丝体生长量;MTT(methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide)法检测软骨细胞存活率;甲苯胺蓝染色法和免疫组化染色法... 小麦内生镰刀菌5-5-1菌株是从青海大骨节病区穗期小麦籽粒中分离的一株优势内生镰刀菌,本试验通过采用干重法测定菌丝体生长量;MTT(methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide)法检测软骨细胞存活率;甲苯胺蓝染色法和免疫组化染色法分别检测兔膝软骨细胞内蛋白聚糖(aggrecan)和Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ)的表达;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测软骨细胞内蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白m RNA的表达水平,探讨了硒对5-5-1菌株生长的影响及不同硒水平下培养该菌株获得的发酵产物对兔膝软骨细胞有关指标的影响。结果表明,硒浓度在0.05~0.5 mg/L的范围内,对5-5-1菌株生长有促进作用,且呈浓度效应;低浓度硒条件下培养的该菌株发酵产物对软骨细胞蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的合成及其m RNA表达的抑制作用相对较小。由此推断适宜浓度硒具有促进镰刀菌生长的作用,但同时能够减轻其发酵产物对软骨细胞的损伤。 展开更多
关键词 镰刀菌 大骨节病 蛋白聚糖 型胶原蛋白 软骨细胞
TGF-β1和 EGFP 体外电转染兔骨髓间充质干细胞的实验研究 预览
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作者 文剑明 王锐英 +3 位作者 高燕 胡译文 陶波 周文静 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第5期581-584,共4页
目的:通过电转染介导转化生长因子β1(TGF-β1)转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察Ⅱ型胶原表达的情况。方法用全骨髓细胞贴壁培养法分离、培养兔 BMSCs;诱导14 d 后,免疫组化和 Western blot 法检测Ⅱ型胶原表达。结果 BMSCs C... 目的:通过电转染介导转化生长因子β1(TGF-β1)转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察Ⅱ型胶原表达的情况。方法用全骨髓细胞贴壁培养法分离、培养兔 BMSCs;诱导14 d 后,免疫组化和 Western blot 法检测Ⅱ型胶原表达。结果 BMSCs CD90表达阳性,CD31表达阴性;成功转染 TGF-β1至 BMSCs;通过免疫组化及 Western blot 法检测TGF-β1组细胞内Ⅱ型胶原有较强的表达,与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组和空白对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05)。结论电转 TGF-β1质粒至兔 BMSCs,可以促进Ⅱ型胶原表达。 展开更多
关键词 TGF-Β1 骨髓间充质干细胞 电转染 型胶原
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