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干旱胁迫对管花肉苁蓉组织培养体系中苯乙醇苷类成分含量的影响
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作者 闫雅如 杨洪芸 +7 位作者 齐博文 徐溪平 刘雨雨 王晓晖 赵云芳 史社坡 刘晓 屠鹏飞 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2452-2460,共9页
目的建立管花肉苁蓉Cistanche tubulosa组织培养体系,并考察干旱胁迫对其中苯乙醇苷类成分含量的影响。方法通过液质联用技术分析管花肉苁蓉愈伤组织与悬浮培养体系中的主要化学成分,绘制其生长曲线,并通过渗透压调节剂(NaCl、甘露醇和P... 目的建立管花肉苁蓉Cistanche tubulosa组织培养体系,并考察干旱胁迫对其中苯乙醇苷类成分含量的影响。方法通过液质联用技术分析管花肉苁蓉愈伤组织与悬浮培养体系中的主要化学成分,绘制其生长曲线,并通过渗透压调节剂(NaCl、甘露醇和PEG6000)模拟干旱胁迫环境,考察组织培养体系中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量的变化。结果管花肉苁蓉愈伤组织与悬浮培养细胞均能生成松果菊苷和毛蕊花糖苷;绘制管花肉苁蓉愈伤组织生长曲线,确定30d为最佳继代时间;NaCl和甘露醇所诱导的干旱胁迫不利于愈伤组织细胞的生长及其苯乙醇苷类成分的积累,而6%PEG6000能显著促进悬浮细胞中苯乙醇苷类化合物的生成,诱导15d后,松果菊苷和毛蕊花糖苷的生物量分别为(1.07±0.10)g/L和(0.12±0.01)g/L,分别可达细胞干质量的20.94%和2.27%,为对照组的1.29倍和1.19倍。结论 PEG6000介导的干旱胁迫对管花肉苁蓉悬浮细胞中松果菊苷和毛蕊花糖苷的积累有明显促进作用。 展开更多
关键词 管花肉苁蓉 愈伤组织 悬浮细胞 干旱胁迫 苯乙醇苷 松果菊苷 毛蕊花糖苷
生物反应器悬浮培养Vero细胞制备水貂犬瘟热活疫苗 预览 被引量:1
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作者 冯二凯 程悦宁 +5 位作者 罗国良 易立 王振军 郭利 陈立志 程世鹏 《中国兽药杂志》 2019年第6期41-47,共7页
为实现利用生物反应器制备规模化、自动化生产水貂犬瘟热Vero活疫苗,在7 L生物反应器中悬浮培养Vero细胞,并考察培养基、细胞初始接种密度、培养方式、病毒感染复数和感染时间等参数对细胞增殖、病毒滴度以及细胞代谢的影响。结果显示,... 为实现利用生物反应器制备规模化、自动化生产水貂犬瘟热Vero活疫苗,在7 L生物反应器中悬浮培养Vero细胞,并考察培养基、细胞初始接种密度、培养方式、病毒感染复数和感染时间等参数对细胞增殖、病毒滴度以及细胞代谢的影响。结果显示,在含有5 g/L微载体的DMEM培养基中接种Vero细胞(30~40 cells/球),设定p H、温度、溶氧值和转速分别为7.2、37℃、50%和55 r/min,培养方式为批次培养(0~48 h)+灌流培养(48~96 h)组合方式,培养Vero细胞3~4 d或细胞密度达到200 cells/球以上时,按照MOI=0.0001~0.001吸附接毒,调低温度(33℃)继续培养100~120 h,即可获得高滴度病毒液(106.5~107.2TCID50/0.1 m L),经无菌检验合格后,配制水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV3-CL株,悬浮培养),疫苗符合《中国兽药典》三部(2015版)的规定。试验建立了7 L生物反应器悬浮培养Vero细胞制备水貂犬瘟热活疫苗的新工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 VERO细胞 大规模培养 微载体 悬浮培养 生物反应器
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紫苏细胞悬浮培养生产迷迭香酸的条件优化 预览
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作者 李会珍 李娜 +1 位作者 谭永兰 张志军 《中国农学通报》 2019年第28期32-37,共6页
以紫苏愈伤组织为原材料,对液体悬浮培养生产迷迭香酸的培养条件进行了研究。通过单因素试验,分别考察培养时间、初始接种量、激素浓度及苯丙氨酸浓度对迷迭香酸含量的影响,并在单因素试验基础上,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面... 以紫苏愈伤组织为原材料,对液体悬浮培养生产迷迭香酸的培养条件进行了研究。通过单因素试验,分别考察培养时间、初始接种量、激素浓度及苯丙氨酸浓度对迷迭香酸含量的影响,并在单因素试验基础上,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面法对最佳培养条件进行优化,建立了二次多项式回归方程的预测模型。研究结果表明:紫苏细胞液体悬浮培养生产迷迭香酸的最佳培养条件为:6-BA浓度2.34 mg/L、NAA浓度0.96 mg/L、2,4-D浓度0.60 mg/L、苯丙氨酸浓度0.1 g/L,迷迭香酸含量可达23.61 mg/g。 展开更多
关键词 紫苏 液体悬浮培养 迷迭香酸 响应面法
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樟叶越桔愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养体系建立 预览
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作者 付羚 张訸 +3 位作者 罗旭璐 尚俊可 唐军荣 赵平 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2019年第5期119-124,130共7页
以樟叶越桔组培苗幼嫩叶片为外植体,研究了植物生长调节剂对其愈伤组织诱导和增殖的影响,建立樟叶越桔的细胞悬浮培养体系。结果表明,樟叶越桔的愈伤组织诱导的适宜培养基为WPM+2.0mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+2.0mg/L2,4-D+30%蔗糖。樟叶越... 以樟叶越桔组培苗幼嫩叶片为外植体,研究了植物生长调节剂对其愈伤组织诱导和增殖的影响,建立樟叶越桔的细胞悬浮培养体系。结果表明,樟叶越桔的愈伤组织诱导的适宜培养基为WPM+2.0mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+2.0mg/L2,4-D+30%蔗糖。樟叶越桔愈伤组织增殖的最佳植物生长调节剂组合为2.0mg/LZT+0.4mg/LNAA,得到的蓬松愈伤组织适宜进行其悬浮培养。WPM3/5有机为适宜的改良培养基,通过细胞悬浮生长曲线的测定,确定樟叶越桔细胞悬浮培养较适宜的继代周期为14d,最长不宜超过21d。 展开更多
关键词 樟叶越桔 愈伤组织 诱导 增殖 细胞悬浮培养
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前体和真菌诱导子对大豆悬浮培养细胞中异黄酮积累的影响 预览
5
作者 刘瑞 胡焕焕 +1 位作者 石晓卫 丰慧根 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第15期72-77,83共7页
以高异黄酮含量的龙野01-491大豆为材料,以下胚轴为外植体诱导愈伤组织,建立大豆细胞悬浮培养体系;并研究了前体(L-phe和NaAc)、真菌诱导子(青霉和黑曲霉诱导子)对大豆悬浮细胞异黄酮积累的影响。结果表明,在细胞培养9 d加入100μmol/L... 以高异黄酮含量的龙野01-491大豆为材料,以下胚轴为外植体诱导愈伤组织,建立大豆细胞悬浮培养体系;并研究了前体(L-phe和NaAc)、真菌诱导子(青霉和黑曲霉诱导子)对大豆悬浮细胞异黄酮积累的影响。结果表明,在细胞培养9 d加入100μmol/L的L-phe,异黄酮产量达(12.52±0.51) mg/flask,是对照组的3.23倍;在0 d加入80μmol/L NaAc,产量达(5.55±0.36) mg/flask,是对照的1.43倍;在9 d加入0.5 mL青霉诱导子,异黄酮产量达(10.20±0.17) mg/flask,是对照的2.56倍;在9 d加入0.5 mL黑曲霉诱导子,产量达(7.25±0.30) mg/flask,是对照的1.82倍。在大豆细胞悬浮培养过程中,通过添加前体(L-phe和NaAc)和真菌诱导子(青霉和黑曲霉诱导子)可以促进大豆异黄酮的积累。 展开更多
关键词 细胞悬浮培养 大豆异黄酮 真菌诱导子 前体
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剑麻悬浮细胞体系的建立
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作者 吴良 张世清 +3 位作者 陈河龙 郭永康 高建明 易克贤 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1978-1983,共6页
为了获取良好的剑麻悬浮细胞体系,以剑麻无菌幼苗嫩叶为诱导材料,对剑麻胚性愈伤组织的获得,建立细胞悬浮系和影响悬浮细胞增殖的主要影响因子进行了探讨。结果表明:幼叶在培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA上诱导的愈伤组织,经... 为了获取良好的剑麻悬浮细胞体系,以剑麻无菌幼苗嫩叶为诱导材料,对剑麻胚性愈伤组织的获得,建立细胞悬浮系和影响悬浮细胞增殖的主要影响因子进行了探讨。结果表明:幼叶在培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA上诱导的愈伤组织,经1~2次继代培养后获得了颗粒状、浅黄色的胚性愈伤组织;接种于液体培养基接种量为2 g (鲜重),继代周期为7 d,经4~5次继代震荡培养建立了细胞悬浮系,细胞生长符合"S"型曲线,细胞浓度可达6.1×105~4.6×106个/m L以上;在悬浮细胞生长前期,pH值明显下降,在细胞对数生长期,pH值略有升高,并趋于平缓;最适宜的细胞悬浮培养基为(MS+1.5 mg/L 2,4-D+4.0 mg/L6-BA+350 mg/L水解酪蛋白, 30 g/L蔗糖, pH值为5.8)。通过建立剑麻悬浮细胞培养体系的方法,为进一步应用于剑麻悬浮细胞转化体系和多倍体育种等研究。 展开更多
关键词 剑麻 愈伤组织 细胞悬浮培养 生长曲线
口蹄疫病毒细胞培养技术研究进展 预览 被引量:4
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作者 李顺琴 杨君敬 +1 位作者 何诚 王贺民 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期90-94,共5页
口蹄疫病毒可以在原代细胞和传代细胞上增殖,传统培养采用贴壁培养方式,随着微载体技术、无血清培养基研制和悬浮培养技术的发展,无血清培养法和生物反应器自动化设施提高了口蹄疫病毒含量,降低了生产成本,但直接影响了动物免疫保护效... 口蹄疫病毒可以在原代细胞和传代细胞上增殖,传统培养采用贴壁培养方式,随着微载体技术、无血清培养基研制和悬浮培养技术的发展,无血清培养法和生物反应器自动化设施提高了口蹄疫病毒含量,降低了生产成本,但直接影响了动物免疫保护效力。随着基因编辑技术的发展,病毒种子毒、细胞株和细胞微环境研究突飞猛进,这为口蹄疫疫苗制备提供了新的技术支撑。论文介绍了口蹄疫病毒在原代细胞、传代细胞的增殖方式和营养特点,以及贴壁培养和悬浮培养的优缺点,为口蹄疫疫苗的研发和生产提供技术参考。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 原代细胞 传代细胞 贴壁培养 悬浮培养
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神经干细胞提取与培养方法的比较研究 预览 被引量:2
8
作者 吴增 李媛 +2 位作者 靳晓飞 周晓红 高维娟 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2018年第5期729-734,共6页
目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方... 目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方法、不同传代方法,观察NSCs的成球率和NSCs未分化状态的稳定性。用多功能微孔板读数仪检测NSCs活性。结果①胎龄14d胎鼠较新生24h内乳鼠的大脑皮质提取NSCs的比例高,杂细胞少,形成的神经球数量多。②采用无血清培养基,NSCs可以稳定在未分化状态;而采用含血清培养基,NSCs多数分化为神经元和胶质细胞。③以1.0×109·L-1密度接种的NSCs,培养形成的神经球数量多,且状态良好。④悬浮培养法较贴壁培养法,可以形成稳定的神经球,有利于保持NSCs处于未分化的状态。⑤半量换液法和只加液不弃液法培养形成的神经球的状态优于全量换液法。⑥原代和1代的神经球用机械吹打法传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好,且较其他两种方法简便;2代及以后的神经球用Accutase酶传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好。⑦14d胎鼠Accutase酶消化组的NSCs活性高于另外3组,差异均具有显著性(P<0.05)。结论提取胎龄14d胎鼠的大脑皮质,采用无血清培养基,以1.0×109·L-1的密度接种于25cm2培养瓶,采取悬浮培养法,每2~3d加液1~1.5mL,每6~7d传代1次,所得到的NSCs增殖分裂旺盛,成球率高,神经球状态良好,可以保持稳定的未分化状态。 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞提取 悬浮培养法:无血清培养基 细胞活性 巢蛋白
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神经干细胞提取及培养方法的体会 预览
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作者 吴增 董贤慧 +3 位作者 李媛 靳晓飞 周晓红 高维娟 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第8期881-885,共5页
神经干细胞提取及体外培养的方法有多种,但采用不同方法所得到的神经干细胞的活力与稳定性均不同。通过对提取和体外培养SD胎鼠大脑皮质神经干细胞的过程进行思考,总结出神经干细胞的提取步骤、提取要点、培养基的选择依据、接种密度的... 神经干细胞提取及体外培养的方法有多种,但采用不同方法所得到的神经干细胞的活力与稳定性均不同。通过对提取和体外培养SD胎鼠大脑皮质神经干细胞的过程进行思考,总结出神经干细胞的提取步骤、提取要点、培养基的选择依据、接种密度的选择、培养方法、换液方法、传代时机、传代方法,最终获得大量活力和稳定性均较高的神经干细胞,并将其应用于相关方面的基础研究。 展开更多
关键词 干细胞 神经元 培养基 连续传代 细胞提取 悬浮培养法
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CTC clusters induced by heparanase enhance breast cancer metastasis
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作者 Rong-rui WEI Dan-ni SUN +7 位作者 Hong YANG Juan YAN Xiong ZHANG Xing-ling ZHENG Xu-hong FU Mei-yu GENG Xun HUANG Jian DING 《中国药理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第8期1326-1337,共12页
聚集的变形癌症房间,当传播肿瘤房间(CTC ) 聚类,指了,在癌症病人的血是在场的并且贡献癌症转移。然而, CTC 的起源聚类,特别 intravascular 总数,未知的遗体。这里,我们采用暂停文化方法在乳癌病人的循环模仿 CTC 簇形成。用这... 聚集的变形癌症房间,当传播肿瘤房间(CTC ) 聚类,指了,在癌症病人的血是在场的并且贡献癌症转移。然而, CTC 的起源聚类,特别 intravascular 总数,未知的遗体。这里,我们采用暂停文化方法在乳癌病人的循环模仿 CTC 簇形成。用这些方法产生的 CTC 簇展出了被 heparanase (HPSE ) 的 overexpression 定义的一个增加的变形潜力。Heparanase 导致了 FAK-1-dependent 和 ICAM-1-dependent 房间粘附,它支持了 intravascular 房间聚集。而且,它有 JG6 的活动的 heparanase 或抑制击倒,一个 heparanase 禁止者,是足够的堵住房间簇的形成并且压制乳癌转移。我们的数据表明那调停 heparanase 的房间粘附是批评的因为转移由 intravascular CTC 簇调停了。我们也建议在癌症房间传播指向 heparanase 的功能可能限制变形前进。 展开更多
关键词 癌症病人 CTC 制乳 房间 变形 发行量 数据表
应用新型CephodexD微载体培养ST细胞增殖CSFV
11
作者 梅建国 庄金秋 +9 位作者 吴信明 苗立中 庄夕栋 谢金文 张颖 李峰 刘吉山 王金良 丁壮 沈志强 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期165-170,共6页
应用新型CephodexD微栽体悬浮培养ST细胞增殖猪瘟病毒(CSFV),并与常规单层静置培养法进行比较。新型微栽体悬浮培养的ST细胞密度72h可达18.9×10 5cells/mL,是单层静置培养工艺的2倍以上;病毒滴度最高可达7.5×10 5RID... 应用新型CephodexD微栽体悬浮培养ST细胞增殖猪瘟病毒(CSFV),并与常规单层静置培养法进行比较。新型微栽体悬浮培养的ST细胞密度72h可达18.9×10 5cells/mL,是单层静置培养工艺的2倍以上;病毒滴度最高可达7.5×10 5RID/mL,较单层静置培养法提高了50%;在一个生产流程中,能比传统培养工艺多收获2次合格病毒液。而且,采用新型微载体悬浮培养工艺生产的CSFV,能够刺激猪体产生特异性的中和抗体,对猪的保护率达100%,具有很好的免疫原性。因此,新型微栽体悬浮培养工艺较单层静置培养法更有技术优势,在CSFV大规模生产领域具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 ST细胞 猪瘟病毒 细胞微载体 悬浮培养
辣木资源利用中的悬浮细胞培养体系研究 预览 被引量:1
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作者 岳涵 覃瑞 +4 位作者 龚汉雨 宋雪杨 熊海容 刘虹 余光辉 《生物资源》 CAS 2018年第1期31-35,共5页
辣木富含多种营养成分,在食品和药物开发方面有巨大的潜在开发价值。本文提供了一种可行的辣木细胞悬浮培养技术。由辣木的根诱导形成愈伤组织和叶诱导形成愈伤组织的合适细胞悬浮培养条件分别为MS培养基(MS)+1.0mg/L 2,4-二氯苯氧... 辣木富含多种营养成分,在食品和药物开发方面有巨大的潜在开发价值。本文提供了一种可行的辣木细胞悬浮培养技术。由辣木的根诱导形成愈伤组织和叶诱导形成愈伤组织的合适细胞悬浮培养条件分别为MS培养基(MS)+1.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+1.0mg/L激动素(KT)和MS+0.5mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT,摇床转速均为50~100r/min,将愈伤组织添加到液体悬浮培养基中20d左右可得到大量悬浮细胞。本研究为辣木细胞水平的培养和研究提供了一条途径,为辣木潜在价值的开发利用提供新的思路。 展开更多
关键词 辣木 愈伤组织 细胞悬浮培养
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基于转录组测序的枇杷五环三萜合成途径差异基因的分析 被引量:1
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作者 李惠华 常强 +3 位作者 王伟 曾碧玉 徐剑 苏明华 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期222-233,共12页
枇杷(Eriobotrya japonica)叶是中国传统药用植物资源,五环三萜类化合物(pentacyclic triterpenoids)作为枇杷的主要活性成份具有广泛的药理作用和重要的生物活性,同时也是枇杷三萜类物质的主要组成。经细胞悬浮培养产生的五环三萜... 枇杷(Eriobotrya japonica)叶是中国传统药用植物资源,五环三萜类化合物(pentacyclic triterpenoids)作为枇杷的主要活性成份具有广泛的药理作用和重要的生物活性,同时也是枇杷三萜类物质的主要组成。经细胞悬浮培养产生的五环三萜类化合物含量远高于原植株。本研究以原植株枇杷叶片、愈伤组织(悬浮培养的必经阶段)、2个富含五环三萜类化合物的调控,共4个样品进行了转录组测序,用生物信息学方法进行Unigene的从头测序拼接,蛋白质功能注释,代谢通路分析。结果共获得123 685个Unigene,平均长度为804.44 bp。三萜合成相关途径中,叶片(样本Ⅰ)分别与培养细胞(样本Ⅱ,样本Ⅲ,样本Ⅳ)的基因表达差异较大,愈伤组织阶段(样本Ⅱ)与富含五环三萜类目标产物的不同调控(样本Ⅲ,样本Ⅳ)之间的基因表达模式相近。在三萜骨架形成和修饰代谢途径中,以样本之间差异基因的交集结合已报道的重要基因进行筛选,从整体上分析了枇杷五环三萜类化合物代谢途径中的关键性酶为乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-CoA acetyltransferase,AACT),鲨烯合成酶(squalene synthase,SQS),鲨烯环氧酶(squalene monooxygenase,SQE),香树素合酶(amyrin synthase,AS),细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450),糖基化转移酶(UDP-glycosyltransferase,UGT),这些酶相关基因或不同家族基因成员的表达水平与目标产物的含量有一定相关性,为进一步深入研究此物种三萜合成途径提供理论依据。同时,枇杷愈伤组织阶段五环三萜类化合物合成途径已经大量开启,是枇杷细胞悬浮培养的重要中间阶段。本研究通过Illumina HiSeq 4000平台,首次利用转录组测序技术对枇杷细胞悬浮培养后五环三萜类活性成分富集的遗传基础进行分析,为进一步完善植物体五环三萜类化合物的合成机制提供理论依据,同时也为枇杷细胞悬浮� 展开更多
关键词 枇杷 细胞悬浮培养 五环三萜 转录组
豆瓣绿胚性愈伤悬浮培养条件优化及体细胞胚发生 被引量:1
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作者 宋婷 周佐葡 +2 位作者 刘洁 刘春 张黎 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第5期1626-1631,共6页
本研究以豆瓣绿无菌苗叶片为外植体诱导获得质地疏松、稳定性高的颗粒状胚性愈伤组织,开展胚性细胞悬浮培养研究。结果表明:豆瓣绿胚性愈伤组织最适继代培养基为MS+0.6%琼脂+3%蔗糖+2,4 D1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,继代间隔14 d;体... 本研究以豆瓣绿无菌苗叶片为外植体诱导获得质地疏松、稳定性高的颗粒状胚性愈伤组织,开展胚性细胞悬浮培养研究。结果表明:豆瓣绿胚性愈伤组织最适继代培养基为MS+0.6%琼脂+3%蔗糖+2,4 D1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,继代间隔14 d;体细胞悬浮最佳培养基为MS+3%蔗糖+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,继代间隔7 d;体细胞悬浮最佳碳源为蔗糖,蔗糖最佳浓度为30 g/L;体细胞悬浮摇床最佳转速为110 r/min。本研究考察激素种类、激素浓度、碳源种类、糖浓度、摇床转速对体细胞胚悬浮体系的影响,并采用解剖镜进行形态学观察,为后期研究体细胞胚胎形态结构提供基础数据。 展开更多
关键词 豆瓣绿 愈伤组织 体细胞悬浮培养 体细胞胚胎
小鼠肌源性干细胞悬浮培养的可行性 预览
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作者 于璐 徐筑秋 +5 位作者 冯蔚枫 陆海滨 周经 黄慜璐 杨晓楠 祁佐良 《山东医药》 2018年第36期32-35,49共5页
目的 探讨悬浮培养获取小鼠肌源性干细胞(MDSC)的可行性。方法 分离2周龄C57BL/6小鼠肌肉组织,采用悬浮培养法培养MDSC。分别于培养前(pp0)、培养2h(pp1)及之后每24h(共5次,分别标记为pp2、pp3、pp4、pp5和pp6)显微镜下观察悬浮细胞形... 目的 探讨悬浮培养获取小鼠肌源性干细胞(MDSC)的可行性。方法 分离2周龄C57BL/6小鼠肌肉组织,采用悬浮培养法培养MDSC。分别于培养前(pp0)、培养2h(pp1)及之后每24h(共5次,分别标记为pp2、pp3、pp4、pp5和pp6)显微镜下观察悬浮细胞形态并计数。收集pp2~pp6时段含悬浮细胞的培养上清液,流式细胞仪检测CD34、抗干细胞抗原1(Sca1)表达并计算其阳性细胞所占比例。取pp6时段MDSC,采用施万细胞诱导7天,观察细胞形态变化,免疫荧光检测细胞p75NGF表达;另取pp6时段MDSC,进行成骨细胞诱导,观察细胞形态变化,并行茜素红染色。结果 镜下观察显示,随培养时间延长,悬浮细胞数量逐渐增多,细胞呈小球形,单个或成团,表面光滑,折光率高。pp2、pp3、pp4、pp5和pp6时段悬浮细胞数量分别为(2.64±0.20)×10^5、(3.08±0.19)×10^5、(3.63±0.13)×10^5、(4.64±0.15)×10^5、(6.06±0.26)×10^5个,各时段悬浮细胞数量两两比较P均<0.05。CD34+、Sca1+、CD34++Sca1+细胞所占比例随培养时间延长均逐渐增加(P均<0.05)。施万细胞诱导培养7天,光镜下可见小球形、高折光率细胞逐渐分化为长条形、串珠样类施万细胞,部分细胞死亡,部分仍保持小球形;免疫荧光显示,约90%诱导细胞p75NGF受体反应阳性。成骨诱导培养21天,光镜下可见小球形折光率高的细胞大量分化为长条形细胞,部分显示片状,有晶体形成。茜素红染色大部分红染,并可见棕褐色结晶状矿化结节形成。结论 悬浮培养法可获取初始细胞量约3倍的小鼠MDSC,且培养获得细胞具有良好的成神经、成骨分化能力。 展开更多
关键词 骨骼肌 肌源性干细胞 细胞悬浮培养 小鼠
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MDCK细胞悬浮培养技术在流感疫苗中的应用 预览 被引量:1
16
作者 杨思思 汪一名 李媛媛 《科技创新与生产力》 2017年第10期44-48,共5页
介绍了国内外MDCK细胞悬浮培养技术的工业化发展现状,通过对比,总结了MDCK细胞生产流感疫苗的优点,详细阐述了流感疫苗MDCK细胞悬浮培养的关键技术,分析了流感疫苗生产用MDCK细胞的致瘤性;随着现代生物技术的发展,利用细胞悬浮培养技术... 介绍了国内外MDCK细胞悬浮培养技术的工业化发展现状,通过对比,总结了MDCK细胞生产流感疫苗的优点,详细阐述了流感疫苗MDCK细胞悬浮培养的关键技术,分析了流感疫苗生产用MDCK细胞的致瘤性;随着现代生物技术的发展,利用细胞悬浮培养技术进行疫苗生产是生物制药行业发展的必然趋势,流感疫苗MDCK细胞无血清悬浮培养技术的研究具有跨时代的意义。 展开更多
关键词 生物反应器 细胞悬浮培养 微载体培养 MDCK细胞 流感疫苗
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玉竹愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养体系的建立 预览 被引量:2
17
作者 王争艳 王霞 王欢 《福建农业学报》 北大核心 2017年第9期963-968,共6页
以玉竹叶片和根状茎为外植体,研究植物生长调节剂、碳源和pH对玉竹愈伤组织诱导的影响以及植物生长调节剂对愈伤组织增殖的影响,通过正交试验初步建立并优化玉竹愈伤细胞的悬浮培养体系。结果表明,叶片和根状茎愈伤组织诱导的最佳培养... 以玉竹叶片和根状茎为外植体,研究植物生长调节剂、碳源和pH对玉竹愈伤组织诱导的影响以及植物生长调节剂对愈伤组织增殖的影响,通过正交试验初步建立并优化玉竹愈伤细胞的悬浮培养体系。结果表明,叶片和根状茎愈伤组织诱导的最佳培养基均为MS+1.0mg·L~(-1)?6-BA+0.5mg·L~(-1)?NAA+30%蔗糖,培养基最佳pH5.6,叶片和根状茎愈伤组织增殖的最佳植物生长调节剂组合均为2.0mg·L~(-1)?6-BA+0.8mg·L~(-1)NAA,且根状茎愈伤组织的诱导率和增殖倍数均明显高于叶片。根状茎愈伤细胞悬浮培养的最佳接种量80g·L-1,最佳植物生长调节剂组合1.5mg·L~(-1)6-BA+0.6mg·L~(-1)?NAA,细胞生长曲线与多糖含量变化曲线均呈"S"形,细胞最佳继代周期16d,多糖含量在培养14d时最高,培养基pH呈先下降后上升然后趋于稳定趋势。 展开更多
关键词 玉竹愈伤组织 诱导 增殖 细胞悬浮培养
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不同诱导子对怀牛膝细胞生长及多糖含量的影响 被引量:1
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作者 李萍 许言 +3 位作者 张晓丽 李炯 赵喜亭 李明军 《植物学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期615-621,共7页
为提高怀牛膝(Achyranthes bidentata)悬浮培养细胞中牛膝多糖的含量,以酵母提取物、榆黄蘑(Pleurotus citrinopileatus)及水杨酸作为诱导子,分别在同一时期以不同浓度或在不同时期以相同浓度添加至细胞培养物中,收获时测定细胞生... 为提高怀牛膝(Achyranthes bidentata)悬浮培养细胞中牛膝多糖的含量,以酵母提取物、榆黄蘑(Pleurotus citrinopileatus)及水杨酸作为诱导子,分别在同一时期以不同浓度或在不同时期以相同浓度添加至细胞培养物中,收获时测定细胞生长量和牛膝多糖含量。结果显示,在培养12天时添加2.5%(v/v)酵母诱导子,细胞干重最大,可达46.75 g·L^-1,多糖含量为5.76 mg·g^-1;在培养9天时添加5 mg GE·L^-1榆黄蘑诱导子,收获时细胞中多糖含量可达6.56 mg·g^-1,细胞干重达28.3g·L–1;1 mg·g^-1水杨酸对牛膝多糖的诱导效果不如以上2种诱导子明显。 展开更多
关键词 怀牛膝 细胞悬浮培养 诱导子 多糖
烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸对雷公藤悬浮细胞生长及次生代谢产物含量的影响 预览
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作者 祝传书 陈蒙蒙 +2 位作者 蒲时 刘艳 冯俊涛 《新疆农业大学学报》 北大核心 2017年第6期403-408,共6页
为明确烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸对雷公藤次生代谢产物含量的影响,通过添加烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸来分析雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)悬浮细胞中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱和雷公藤次碱产物的含量。采用HPLC检测分析烟... 为明确烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸对雷公藤次生代谢产物含量的影响,通过添加烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸来分析雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)悬浮细胞中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱和雷公藤次碱产物的含量。采用HPLC检测分析烟酸、天冬氨酸和异亮氨酸3种物质添加后雷公藤茎悬浮细胞中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱、雷公藤次碱的含量,结果表明,低浓度(0.5mmol/L)烟酸处理能显著促进细胞的生长,其生长速率为对照的1.15倍,但对细胞干重增加影响不大;不同浓度的异亮氨酸处理能极大促进细胞中雷公藤内酯醇、雷公藤吉碱和雷公藤次碱的产生,并分别在0.1、1.5、0.1mmol/L浓度下达到最大值,为4.65、30.24、166.41μg/g,但培养液中次级代谢产物的分泌则相对减少;异亮氨酸对总的雷公藤吉碱和雷公藤次碱含量的增加有促进作用;天冬氨酸处理则主要促进细胞中雷公藤吉碱的产生和培养液中次碱的分泌,并在0.5 mmol/L浓度下其含量达到110.09μg/g、4.06μg/瓶;烟酸处理则相对抑制次级代谢产物的产生和分泌。异亮氨酸处理悬浮细胞可以很大程度上增加雷公藤吉碱,雷公藤次碱的产量,推测异亮氨酸可能参与了雷公藤生物碱的生物合成,该结果的应用对雷公藤细胞培育生产次级代谢产物有重要意义。 展开更多
关键词 雷公藤 悬浮细胞培养 天冬氨酸 雷公藤次碱
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Hi5-SF悬浮细胞系的建立及鉴定 预览
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作者 马伟 王家敏 +5 位作者 马桂兰 马祺 马花 乔自林 马忠仁 冯玉萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期173-178,共6页
摘要从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)引进HighFive细胞并对其进行驯化,获得无血清悬浮驯化株(Hi5-SF)。依据《中华人民共和国药典(2010年版三部)》对其进行细胞生物学特性研究、微生物污染、病毒外源因子及细胞致瘤性检测。结... 摘要从中国典型培养物保藏中心(CCTCC)引进HighFive细胞并对其进行驯化,获得无血清悬浮驯化株(Hi5-SF)。依据《中华人民共和国药典(2010年版三部)》对其进行细胞生物学特性研究、微生物污染、病毒外源因子及细胞致瘤性检测。结果发现,Hi5-SF细胞复苏活力76.3%,生长曲线呈“s”型,最大增殖密度可达3.50×10^6mL^-1,群体倍增时间为26.2h;细菌、真菌及支原体检查均为阴性;血细胞吸附试验、致细胞病变试验和特异性病毒荧光抗体结合物检查结果均为阴性;致瘤性检查结果也为阴性。说明该细胞株符合兽用疫苗生产用细胞质量要求,可以在疫苗研究与生产中应用。 展开更多
关键词 HIGH five细胞 悬浮培养 质量评价
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